CN102058871A - 一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物及其制备方法，具体地说是从白花蛇舌草、黄芪和天龙中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属中药领域。该中药组合物以从白花蛇舌草、黄芪和天龙中所提取有效部位作为药物的主要成分，加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、注射剂或粉针剂，用于抑制肿瘤生长、缩小瘤体，调节免疫功能、提高人体免疫力，延长肿瘤患者生命及有效缓解肿瘤患者因手术、放疗或化疗所致白细胞减少、头晕、倦怠乏力、消瘦、胃纳欠佳、恶心呕吐等不良反应，其有效成分明确，药效显著，服用剂量小，剂型多样化，而且使用方便，符合中药现代化的要求，具有较好的发展前景。

Description

一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物及其制备方法，具体地说是从白花蛇舌草、黄芪和天龙中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属中药领域。

背景技术

癌症是造成人类死亡的第二号杀手，也是所有疾病中人类的恐惧心理最强的，人们几乎谈癌色变。本质上，癌症是一种由基因突变诱发的疾病，随着人类平均寿命的延长及工业化生产引起环境污染的加重，以致突变累加的时间变长，诱发突变的因素增多，因此导致肿瘤的发病率明显增高。据预测，癌症将很快在今后几年内取代心血管疾病，成为人类最主要的致死病因。

目前，对恶性肿瘤的治疗常采用外科手术、放射治疗、化学药物治疗和生物疗法。其中，外科手术最简单，但只针对早期癌症有较彻底的治疗效果；放射治疗是辅助疗法，其准确性差，副作用大；生物疗法是近十年来刚刚兴起的一种新的肿瘤治疗方法，尚在研究发展中，临床上仅对少数肿瘤有效，多数作用不明显；化学药物治疗(又称化疗)是目前癌症临床治疗最主要的治疗手段，但仍存在毒副作用大、肿瘤细胞耐药性等问题，使化疗的临床应用受到大大的限制。因此，从不同途径寻找高效低毒的抗肿瘤药物仍是当务之急！

中医学对肿瘤的认识很早，殷周时代，甲骨文上就有了“瘤”的病名记载。在《黄帝内经》中对瘤进行了详细的分类，提出了筋瘤、积聚等，并对这些疾病症状进行了系统描述，并提出许多行之有效的治疗方法。宋元两代医家将之命名为“岩”、“癌”。“癌”这一病名最早出现在《卫济宝书·痈疽五发篇》中，《仁斋直指附遗方论》对其描述为：“癌者，上高下低，岩穴之状，颗颗累垂，毒根深藏”，这与现代医学对恶性肿瘤的描述非常相似。近年来，传统中医药对肿瘤的治疗作用逐渐成为抗肿瘤研究的热点，尤其是在稳定瘤体、减少复发转移，减轻毒副反应，提高患者生活质量等方面取得了显著疗效。而从我国传统中草药(中药复方或单味药)中提取得到抗肿瘤药物已经成为当前国内中医药现代化研究的重要组成部分，中草药来源广泛，品种繁多，为新的抗肿瘤药物的研制开发提供了良好的基础。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物；

本发明的另一个目的在于提供上述组合物的制备方法。

本发明的第一目的是这样实现的：以白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖、天龙小肽为入药成分，加入适当药用辅料，制备成适宜的剂型。

本发明药物组合物的原料药优选的组成及配比为：白花蛇舌草黄芪总黄酮1～10重量份、白花蛇舌草黄芪总多糖1～10重量份、天龙小肽1～10重量份。

本发明药物组合物的原料药优选的组成及配比为：白花蛇舌草黄芪总黄酮7重量份、白花蛇舌草黄芪总多糖6重量份、天龙小肽3重量份。

上述总黄酮有效部位中总黄酮的含量不低于提取物的50％(w/w)，总多糖有效部位中总多糖的含量不低于提取物的50％(w/w)，天龙小肽有效部位中小肽的含量不低于提取物的50％(w/w)。

该药物组合物可以加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、注射剂或粉针剂中的任一种；还可以加入其它具有抗肿瘤作用的有效成分、有效部位、化学合成品或半合成品，然后加入相应辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、注射剂或粉针剂中的任一种。

本发明中药组合物的制备方法为包括以下步骤：

①白花蛇舌草黄芪总黄酮制备方法：取白花蛇舌草和黄芪(3∶1，w/w)，加8～20倍量40％～95％乙醇回流提取1～3次，每次1.5h，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量为1∶1通过大孔树脂柱，先以5～10倍量去离子水洗脱，再以5～10倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总黄酮；最后采用50～60℃热碱液和95％乙醇再生树脂柱，进行下一轮纯化。

②白花蛇舌草黄芪总多糖制备方法：取经乙醇提取后的白花蛇舌草和黄芪药渣，加8～20倍量水提取1～3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加5～20倍量水使充分溶解，加入0.5％～5％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入0.5％～5％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总多糖。

③天龙小肽制备方法：取天龙，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15min，加热煮沸5～30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量0.5％～10％的胃蛋白酶，在30℃～45℃条件下酶解1～6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，加入底物量0.5％～10％的胰蛋白酶，在45℃～55℃条件下酶解1～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5～15min，放冷，离心，减压浓缩至20∶1～5∶1(ml/g)的清膏，加入药材量5％～40％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得天龙小肽。

④取上述总黄酮、总多糖和小肽有效部位，不加入或加入药学上可接受的辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、注射剂或粉针剂中的任意一种。

经过发明人的对比优选后，选择了白花蛇舌草黄芪总黄酮7重量份、白花蛇舌草黄芪总多糖6重量份、天龙小肽3重量份为最优配比，并将其制成胶囊剂或片剂，过程如下：

①白花蛇舌草黄芪总黄酮制备方法：取白花蛇舌草和黄芪(3∶1，w/w)，加15倍量60％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量为1∶1通过大孔树脂柱，先以6倍量去离子水洗脱，再以8倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总黄酮。

②白花蛇舌草黄芪总多糖制备方法：取经乙醇提取后的白花蛇舌草和黄芪，加12倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加20倍量水使充分溶解，加入3％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入1％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总多糖。

③天龙小肽制备方法：取天龙，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量2％的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量2％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，减压浓缩至0.5g生药/ml的清膏，加入药材量20％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得天龙小肽。

④取上述总黄酮7重量份、总多糖6重量份和小肽有效部位3重量份，混匀，加入常规制剂辅料，制颗粒，按胶囊剂的常规填充方法，制成胶囊剂；或取上述总黄酮7重量份、总多糖6重量份和小肽有效部位3重量份，混匀，加入常规制剂辅料，制颗粒，按片剂的常规压制方法，制成片剂。

上述所用白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草Oldenlandia diffusa(Willd.)Roxb.的干燥全草，性微寒，味微苦、微甘，归心、肝、脾经，具有清热解毒、消痈散结、利水消肿等功效，与半枝莲性、味及功效均相似，均常用于咽喉肿痛、肺热喘咳、热淋涩痛、湿热黄疸、毒蛇咬伤及疮肿热痈等，因此方中白花蛇舌草可以同量半枝莲代替。所用天龙别名守宫、壁虎，为壁虎科动物无蹼壁虎Gekko swinhoana Gunther或多疣壁虎Gekko japonicus (DumeriletBibron)的干燥全体，性寒，味咸，具有祛风定惊、散结解毒等功效，与蜈蚣或全蝎的性、味及功效均相似，均常用于瘰疬恶疮、中风瘫痪、风瘫惊痫、蛇虫咬伤等，因此方中天龙可以同量全蝎或同量蜈蚣代替。

以上所说的制剂常规辅料包括润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶和聚乙二醇；崩解剂，如羧甲淀粉钠、低取代羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醉、十二烷基硫酸钠；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；赋形剂，如乳糖、淀粉、蔗糖、糊精、碳酸钙、硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、羊毛脂、凡士林、微晶纤维素、蜂腊、木腊、液体石蜡、树脂、高级蜡、压敏胶、半合成脂肪酸脂等。

有益效果

本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。

恶性肿瘤(癌症)发生的机理上有4种假说：基因突变说、免疫监视说、细胞反分化说及根据α·β态理论的幼稚细胞分化受阻说。目前比较公认的是基因突变致使细胞反分化说。传统中医认为，肿瘤的发生归结于癌毒致病，正气万虚。由于外感四时不正之气，饮食不节，情志因素，先天脏腑亏虚等各种因素的综合作用，酿成癌毒，侵袭人体，耗伤脏腑、气血、津液的功能与结构，导致气滞、血淤、痰凝、水饮等各种病理因素，胶结于局部，形成癌肿。本病的形成以正虚为基础，癌毒侵袭为必要条件。一方面癌毒性质与其诱发原因、所侵袭的部位、患者的体质基础直接相关；另一方面，正虚则表现各脏器气血、津液、阴阳的亏虚。而且本病的形成和发展有一定的特异性，一旦癌毒袭人，无论正虚的程度如何，均表现出邪毒嚣张，难以消除，易于传变，病情笃重，病势凶险，正气更虚，预后极差。肿瘤发生及演变的主要病机可以虚、毒、瘀以括之。因此，目前中医治疗肿瘤的主要方法有扶正补虚法、清热解毒法、活血化瘀法和渗湿利水法等。

本发明组方以传统中医药理论为指导，同时结合国外医药的相关研究成果，从整体考虑、辩证施治，应用扶正祛邪、清热解毒和活血化瘀等治则组成方剂，其中白花蛇舌草，性微寒，味微苦、干，归心、肝、脾经，具有清热解毒、消痈散结、利水消肿之功效；黄芪，性微温，味甘，归肺、脾经，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效；天龙，性寒，味咸，有小毒，具有祛风定惊、散结解毒之功效，三者合用，共奏扶正祛邪、清热解毒和散结消瘀之功效，且寒温平调、祛邪而不伤正，“扶正培本”与“祛邪抗癌”并重，抑制肿瘤、祛邪抗癌的同时给予扶正补虚以达到攻补兼施，提高免疫，增强体质，强化耐力，缓解毒性，从而增强疗效，扩展了肿瘤治疗内涵，针对肿瘤患者因手术、放疗或化疗所致白细胞减少、头晕、倦怠乏力、消瘦、胃纳欠佳、恶心呕吐等不良反应具有较好治疗效果。

本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，不仅符合传统中医药治疗肿瘤的组方原则，而且符合中药现代化的发展要求，对推动医药产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和专利，未检索到以白花蛇舌草、黄芪和天龙的有效部位为原料，生产加工并制成适宜药物制剂用于恶性肿瘤的治疗或辅助治疗的报道。

为进一步验证本发明的药理作用，用本发明胶囊剂的内容物进行了动物对比药效学实验：

实验例1：对荷瘤小鼠抑瘤作用及对免疫器官重量的影响

1试剂、样品和动物

1.1试剂

平消片：批号：20080403，辽宁东方人药业有限公司生产。

注射用环磷酰胺：批号：08122621，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

1.2供试样品

①取白花蛇舌草和黄芪(3∶1，w/w)，加15倍量80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，药渣备用，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量1∶1通过大孔树脂柱，先以6倍量去离子水洗脱，再以8倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，减压干燥(-0.08MPa，65℃)，得白花蛇舌草黄芪总黄酮；取上述药渣，加12倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加20倍量水使充分溶解，加入3％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入1％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，冷冻干燥，得白花蛇舌草黄芪总多糖；取天龙，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量2％的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解2h，然后采用、氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量2％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，离心液减压浓缩至0.5g生药/ml的清膏，加入药材量20％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得天龙小肽。取上述总黄酮7重量份、总多糖6重量份和小肽有效部位3重量份，加入适量微晶纤维素和微粉硅胶，制颗粒，按胶囊剂的常规填充方法，制成胶囊剂。

②取半枝莲和黄芪(3∶1，w/w)，加15倍量80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，药渣备用，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量1∶1通过大孔树脂柱，先以6倍量去离子水洗脱，再以8倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，减压干燥(-0.08MPa，65℃)，得半枝莲黄芪总黄酮；取上述药渣，加12倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加20倍量水使充分溶解，加入3％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入1％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，冷冻干燥，得半枝莲黄芪总多糖；另取全蝎和蜈蚣(1∶1，w/w)，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量2％的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解2h，然后采用、氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量2％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，离心液减压浓缩至0.5g生药/ml的清膏，加入药材量20％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得全蝎蜈蚣小肽。取上述总黄酮7重量份、总多糖6重量份和小肽有效部位3重量份，加入适量微晶纤维素和微粉硅胶，制颗粒，按胶囊剂的常规填充方法，制成胶囊剂。

③取白花蛇舌草黄芪总黄酮7重量份、白花蛇舌草黄芪总多糖6重量份和全蝎蜈蚣小肽有效部位3重量份，加入适量微晶纤维素和微粉硅胶，制颗粒，按胶囊剂的常规填充方法，制成胶囊剂。

给药前，取胶囊内容物，研细，采用0.5％CMC-Na溶液配制成所需药物浓度。

1.3实验动物

昆明种小鼠，SPF级，动物许可证号为：SCXK(鲁)20050015，由山东中医药大学试验动物中心提供。S180腹水小鼠由山东省医学科学院提供。

2实验方法

取健康昆明种小鼠90只，体重20±2g，雄性，从S180传代第七天小鼠抽取腹水液，用生理盐水配成瘤细胞悬液，细胞数为(1～2)×10⁷/ml，每鼠右腋皮下接种0.2ml，随后随机分成6组，分别为生理盐水组、本发明组(①②③)、平消片组及环磷酰胺组，前5组灌胃给药，容积皆为0.2ml/10g，环磷酰胺组连续腹腔注射4天，其他各组均灌胃给药，连续10天。于第11天所有动物脱颈椎处死，剥离瘤体，称重，计算抑瘤率，抑瘤率％＝(模型组瘤重均值-样品组瘤重均值)/模型组瘤重均值×100％，剥离胸腺及脾脏，称重，以脏器重量mg/g体重作为内脏指数，结果见表1、2。

3实验结果

本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下的抑瘤率达到45％以上，与对照平消片组比较有较显著差异(P＜0.05)，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表1。本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下对实验动物免疫免疫指数有一定的增加趋势，见表2。

表1对荷瘤S180小鼠移植肉瘤的抑制作用

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

表2对荷瘤S180小鼠免疫器官重量的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

实验例2：对正常幼年小鼠以及免疫低下小鼠吞噬功能的影响

1试剂、样品和动物

1.1试剂  同实验例1

1.2供试样品  同实验例1

1.3实验动物

幼年昆明种小鼠，SPF级，动物许可证号为：SCXK(鲁)20050015，由山东中医药大学试验动物中心提供。

2实验方法

取幼年昆明种小鼠60只，体重20±2g，雌雄各半，随机分成生理盐水组、本发明组(①②③)、平消片组及环磷酰胺组，每组10只，灌胃给药，给药容积皆为0.2ml/10g，连续10天，于末次给药后30min尾静脉注射印度墨水0.1ml/10g，分别在注射1min、5min后从眼眶后静脉丛取血20μl，溶于2ml0.1％Na₂CO₃溶液中摇匀，采用UV1100型紫外分光光度计，在650nm波长处比色，测定光密度(OD)。最后将小鼠脱颈椎处死，分别称取肝、脾重量，计算廓清指数，结果见表3，另取幼年昆明种小鼠60只，随机分成生理盐水组、本发明组(①②③)、平消片组及正常对照组，每组10只，除正常对照组外，其余各组给药同上，每只小鼠在灌胃给药的同时皮下注射环磷酰胺20ml/kg/天，造成免疫功能低下，观察药物对免疫低下小鼠的吞噬功能试验，结果见表4。

3实验结果

本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下对正常小鼠吞噬功能有一定的增强，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表3。对免疫低下小鼠的吞噬功能有一定的增强，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表4。

表3对正常小鼠吞噬功能的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

表4对免疫低下小鼠吞噬功能的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

实验例3：对鸡红细胞吞噬功能的影响

1试剂、样品和动物  同实验例1

2实验方法

取健康昆明种小鼠90只，体重20±2g，雌雄各半，随机分成生理盐水组、本发明组(①②③)、环磷酰胺组、平消片组，每组15只，灌胃给药，给药容积皆为0.2ml/10g，连续7天，于末次给药后腹腔注射与5％鸡红细胞0.2ml，注射后4h脱颈椎处死小鼠，剪开腹腔皮肤，腹腔注射生理盐水2ml，轻柔小鼠腹部，吸取腹腔冲液滴片，放入垫有湿纱布的搪瓷盘中，移置37℃孵浴箱中温育30min。生理盐水漂洗，以除去未粘片的细胞，晾干，用Giemsa-染色3min，用流水冲洗，晾干。油镜下计数巨噬细胞，每片200个巨噬细胞吞噬鸡红细胞数，并计算吞噬百分率及吞噬程度。吞噬程度分级见下，结果见表5。另取昆明种小鼠90只，随机分成生理盐水组、本发明组(①②③)、正常对照组、平消片组，每组15只，除正常对照组外，其余各组在给药当天均皮下注射环磷酰胺20mg/kg造成免疫功能低下，其它同上，结果见表6。

Ⅰ级：未消化。被吞噬的鸡红细胞完整，胞质浅红或浅黄带绿，胞核浅紫红色。

Ⅱ级：轻度消化。胞质浅黄绿色，胞核固缩呈蓝紫色。

Ⅲ级：重度消化。胞质淡浅色，胞核呈浅灰黄色。

Ⅳ级：完全消化。巨噬细胞内仅见形态类似鸡红细胞大小的空泡，边缘整齐，胞核隐约可见。

3实验结果

本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下对正常小鼠鸡红细胞吞噬功能有一定的增加，与生理盐水组相比有差异(P＜0.05)，见表5。对免疫低下小鼠的鸡红细胞吞噬功能有一定的增加，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表6。

表5对正常小鼠鸡红细胞吞噬功能的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

表6对免疫低下小鼠鸡红细胞吞噬功能的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

实验例4：对小鼠体液免疫的影响

1试剂、样品和动物  同实验例1

2实验方法

取健康昆明种小鼠60只，体重20±2g，雌雄各半，随机分成本发明组(①②③)、平消片组、环磷酰胺组及生理盐水对照组，每组10只，每只腹腔注射5％的鸡红细胞混悬液0.2ml进行免疫，于免疫当天灌胃给药，给药容积皆为0.2ml/10g，连续免疫7天后摘眼球取血，离心，分离血清，取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1ml，与5％鸡红细胞0.5ml、10％补体0.5ml混合，在37℃恒温箱中保温30min后，0℃冰箱终止反应，离心，取上清液采用UV1100型紫外分光光度计，在540nm波长处比色，测定光密度(OD)，结果见表7。另取小鼠60只，随机分成生理盐水组、本发明组(①②③)、正常对照组、平消片组，每组10只，除正常对照组外，其余各组在给药当天所有小鼠均皮下注射环磷酰胺20mg/kg造成免疫功能低下，其它同上，结果见表8。

3实验结果

本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下对正常小鼠体液免疫功能具有较强的增强，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表7。对免疫低下小鼠的体液免疫功能有一定的增强趋势，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表8。

表7对正常小鼠体液免疫的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

表8对免疫低下小鼠体液免疫的影响

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01

实验例5：对淋巴细胞增殖反应的影响

1试剂、样品和动物  同实验例1

2实验方法

取健康昆明种小鼠100只，体重20±2g，雌雄各半，随机分成本发明组(①②③)、平消片组及生理盐水对照组，每组20只，灌胃给药，给药容积皆为0.2ml/10g，连续7天，将所有动物放血处死，取脾脏，称重，放入冷的5～10mlHBSS平皿中的100目不锈钢丝网上，剔取脂肪组织和结缔组织。将脾剪成两块，用结核菌素注射器的针芯轻轻捻碎脾组织，使单个细胞经网进入溶液中，再经不锈钢网进入试管中，离心后弃上清液，用冷HBSS洗涤细胞2～3次，最后用10％的RPMI-1640悬浮脾细胞，使脾细胞浓度为1×10⁷/ml，加入96空细胞培养板，每空100μl，再加入含有5μg/mlRPMI-1640培养液100μl，于5％CO₂、37℃条件下培养48h。轻轻吸弃上清液100μl。加入MTT溶液(MTT溶液浓度为5mg/ml)10μl，于振荡器上振荡1min。于5％CO₂、37℃条件下培养2h。取出反应物，离心(2000转/min，5min)，弃上清液，每孔加入酸化异丙醇120μl，于振荡器上振荡30s，在酶标光度计570nm测定A值。结果见表9。

3实验结果

本发明组(①②③)在9g(生药)/kg剂量下对淋巴细胞增殖有一定的增加，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01)，见表9。

表9对淋巴细胞增殖反应的影响(X±SD)

注：与生理盐水组比较^※P＜0.05，^※※P＜0.01，与平消片组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01。

药理实验结果综述：试验结果表明，本发明药物对小鼠S180移植肉瘤具有一定移植作用，对正常和免疫低下小鼠的吞噬功能和体液免疫功能均有一定的增强趋势，对淋巴细胞增殖有一定的增加，提示本发明药物具有较好的抗肿瘤作用，同时具有较强的免疫增强作用。

总之，本发明产品是由经创新的动物酶解工艺及现代中药的提取精制工艺加工而成的有效部位制成的，成分明确，药效显著，服用剂量小，剂型多样化，使用方便，既保证了对肿瘤疾病的治疗作用，又充分发挥了“扶正固本、免疫调节”的自身优势，符合中药现代化的要求，充分体现了新世纪中药发展的趋势和要求，具有较好的发展前景。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐述本发明的技术方案，但本发明申请所要保护的内容并不仅限于此。实际生产中原料药的用量也不仅限于实施例用量，可以以吨、公斤、克等为单位，但各原料药的用量配比仍依据本发明的技术方案。

实施例1：

白花蛇舌草黄芪总黄酮与白花蛇舌草黄芪总多糖的制备

制法：取白花蛇舌草和黄芪(3∶1，w/w)，加12倍量80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，药渣备用；滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量1∶1通过大孔树脂柱，先以6倍量去离子水洗脱，再以8倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得总黄酮有效部位。取上述药渣，加15倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加10倍量水使充分溶解，加入3％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入1％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得总多糖有效部位。

实施例2：

天龙小肽的制备

制法：取天龙，适当粉碎，过50目筛，加10倍量水匀浆10min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量3％的胃蛋白酶，在45℃条件下酶解3h，然后采用20％氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量1％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5min，放冷，离心，减压浓缩至4∶1(ml/g)的清膏，加入药材量40％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，即得。

实施例3：

半枝莲黄芪总黄酮与半枝莲黄芪总多糖的制备

制法：取半枝莲和黄芪(3∶1，w/w)，加10倍量60％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，药渣备用；滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量1∶1通过大孔树脂柱，先以8倍量去离子水洗脱，再以10倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得总黄酮有效部位。取上述药渣，加20倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至1g生药/ml，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加20倍量水使充分溶解，加入1％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入0.5％活性炭，于80℃保温脱色3次，0.5h/次，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得总多糖有效部位。

实施例4：

蜈蚣小肽的制备

制法：取蜈蚣，适当粉碎，过24目筛，加10倍量水匀浆5min，加热煮沸10min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量1％的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解2h，然后采用10％氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量6％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解5h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，减压浓缩至2∶1(ml/g)的清膏，加入药材量25％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷减过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，即得。

实施例5：

全蝎小肽的制备

制法：取全蝎，适当粉碎，过80目筛，加5倍量水匀浆5min，加热煮沸15min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2，然后加入底物量8％的胃蛋白酶，在37℃条件下酶解6h，然后采用5％氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量10％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解2h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，减压浓缩至1∶1(ml/g)的清膏，加入药材量5％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，即得。

实施例6：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮100g 白花蛇舌草黄芪总多糖100g 天龙小肽100g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，加入10％淀粉，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例7：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮15g 白花蛇舌草黄芪总多糖150g 天龙小肽15g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，加聚乙二醇400至总量500g，混匀，压制软胶囊，制成1000粒，即得。

实施例8：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮150g 白花蛇舌草黄芪总多糖200g 天龙小肽250g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，加入羧甲淀粉钠50g，再加微晶纤维素至总量1000g，混匀，以水为黏合剂，制丸条，压制成丸，干燥，即得。

实施例9：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮210g 白花蛇舌草黄芪总多糖150g 天龙小肽90g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，混匀，加入到550g熔融的半合成脂肪酸脂中搅匀，灌入栓模中，制成1000枚，即得。

实施例10：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮20g 白花蛇舌草黄芪总多糖30g 天龙小肽50g

制法：分别聚乙二醇4000 300g和聚乙二醇6000 100g，熔融，加入白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，混匀，滴入四甲基硅油中，制成滴丸，即得。

实施例11：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮20g 白花蛇舌草黄芪总多糖200g 天龙小肽200g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，混匀，加入20％微晶纤维素和1％羧甲淀粉钠，混匀，制粒，压片，包薄膜衣，制成1000片，即得。

实施例12：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮140g 白花蛇舌草黄芪总多糖120g 天龙小肽60g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和天龙小肽，加入20％淀粉，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例13：

处方：半枝莲黄芪总黄酮140g 半枝莲黄芪总多糖120g 天龙小肽60g

制法：取半枝莲黄芪总黄酮、半枝莲黄芪总多糖和天龙小肽，加入15％糊精，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例14：

处方：白花蛇舌草黄芪总黄酮140g 白花蛇舌草黄芪总多糖120g 蜈蚣小肽60g

制法：取白花蛇舌草黄芪总黄酮、白花蛇舌草黄芪总多糖和蜈蚣小肽，加入5％微粉硅胶和5％β-环糊精，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得

实施例15：

处方：半枝莲黄芪总黄酮140g  半枝莲黄芪总多糖120g  全蝎小肽60g

制法：取半枝莲黄芪总黄酮、半枝莲黄芪总多糖和全蝎小肽，加入10％淀粉，混匀，制粒，压片，包薄膜衣，制成1000片，即得。

实施例16：

处方：半枝莲黄芪总黄酮100g 半枝莲黄芪总多糖80g 天龙小肽20g

制法：取半枝莲黄芪总黄酮、半枝莲黄芪总多糖和天龙小肽，加糊精及甜菊素适量，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。

实施例17：

处方：半枝莲黄芪总黄酮40g 半枝莲黄芪总多糖40g 天龙小肽60g

制法：取半枝莲黄芪总黄酮、半枝莲黄芪总多糖和天龙小肽，加注射用水适量及氯化钠8g，溶解后再加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例18：泡腾片剂

处方：半枝莲黄芪总黄酮60g 半枝莲黄芪总多糖80g 天龙小肽50g

制法：取β-环糊精200g，加6倍量水研磨成糊状，加入半枝莲黄芪总黄酮、半枝莲黄芪总多糖和天龙小肽，胶体磨研磨60min，包合物40～50℃烘干，粉碎，备用；另取枸橼酸40g、富马酸20g与上述半量β-环糊精包合物混匀，喷入70％乙醇制软材，过20目筛制粒，50℃干燥，整粒，备用；取碳酸氢钠50g与剩余的β-环糊精包合物混匀，喷入70％乙醇制软材，过20目筛制粒，50℃干燥，整粒，备用；将上述两种颗粒混和，加硬脂酸镁2g，混匀，压制成1000片，即得。

Claims (10)

1.一种具有抗肿瘤作用的中药有效部位组合物，其特征在于由从白花蛇舌草和黄芪中提取的总黄酮、总多糖和从天龙中提取的天龙小肽为原料制备而成，其中，原料药的重量配比为：

白花蛇舌草黄芪总黄酮    1～10重量份

白花蛇舌草黄芪总多糖    1～10重量份

天龙小肽                1～10重量份。

2.如权利要求1所述的中药有效部位组合物，其特征在于各原料药的配比为：白花蛇舌草黄芪总黄酮7重量份、白花蛇舌草黄芪总多糖6重量份、天龙小肽3重量份。

3.如权利要求1或2所述的中药有效部位组合物，其特征在于不加入或加入药学上可接受的辅料，制成丸剂、片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、合剂、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾片剂、注射剂或粉针剂中的任一种。

4.如权利要求1或2所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

①白花蛇舌草黄芪总黄酮的制备：取白花蛇舌草3重量份和黄芪1重量份，加8～20倍量40％～95％乙醇回流提取1～3次，每次1.5h，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量为1∶1通过大孔树脂柱，先以5～10倍量去离子水洗脱，再以5～10倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总黄酮；最后采用50～60℃热碱液和95％乙醇再生树脂柱，进行下一轮纯化；其中总黄酮含量不低于提取物的50％；

②白花蛇舌草黄芪总多糖的制备：取经乙醇提取后的白花蛇舌草和黄芪药渣，加8～20倍量水提取1～3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加5～20倍量水使充分溶解，加入0.5％～5％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入0.5％～5％活性炭，于80℃保温脱色3次，每次0.5h，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总多糖，其中总多糖含量不低于提取物的50％；

③天龙小肽的制备：取天龙，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15min，加热煮沸5～30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5％～10％的胃蛋白酶，在30℃～45℃条件下酶解1～6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，加入底物量0.5％～10％的胰蛋白酶，在45℃～55℃条件下酶解1～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解完毕后继续升温煮沸5～15min，放冷，离心，离心液减压浓缩至每1ml含0.05～1g生药的清膏，加入药材量5％～40％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得天龙小肽，其中小肽含量不低于提取物的50％；

④按比例取上述总黄酮、总多糖和小肽有效部位，不加入或加入辅料，制成药学上可接 受的剂型。

5.如权利要求4所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

①白花蛇舌草黄芪总黄酮的制备：取白花蛇舌草3重量份和黄芪1重量份，加15倍量60％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，滤液合并，减压回收乙醇，加水稀释浓缩液，按照树脂量∶药材量为1∶1通过大孔树脂柱，先以6倍量去离子水洗脱，再以8倍量70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总黄酮；最后采用55℃热碱液和95％乙醇再生树脂柱，进行下一轮纯化；

②白花蛇舌草黄芪总多糖的制备：取经乙醇提取后的白花蛇舌草和黄芪药渣，加12倍量水提取3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40％，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80％，收集沉淀，反复纯化沉淀，加20倍量水使充分溶解，加入3％鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液加入1％活性炭，于80℃保温脱色3次，每次0.5h，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得白花蛇舌草黄芪总多糖；

③天龙小肽的制备：取天龙，适当粉碎，加10倍量水匀浆15min，加热煮沸30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量2％的胃蛋白酶，在40℃条件下酶解2h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量2％的胰蛋白酶，在50℃条件下酶解4h，时时搅拌并调节pH在8～8.5范围内，酶解完毕后继续升温煮沸10min，放冷，离心，离心液减压浓缩至每1ml含0.5g生药的清膏，加入药材量20％的固体石蜡，加热熔融，并搅拌均匀，冷藏过夜，取出石蜡层，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得天龙小肽；

④按比例取上述总黄酮、总多糖和小肽有效部位，不加入或加入辅料，制成药学上可接受的剂型。

6.如权利要求1或2所述的中药有效部位组合物，其特征在于原料药中的白花蛇舌草黄芪总黄酮用等量的半枝莲黄芪总黄酮代替；白花蛇舌草黄芪总多糖用等量的半枝莲黄芪总多糖代替；天龙小肽可以用蜈蚣小肽或全蝎小肽代替。

7.如权利要求4所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于原料药中的白花蛇舌草黄芪总黄酮用等量的半枝莲黄芪总黄酮代替；白花蛇舌草黄芪总多糖用等量的半枝莲黄芪总多糖代替；天龙小肽可以用蜈蚣小肽或全蝎小肽代替。

8.如权利要求5所述的中药有效部位组合物的制备方法，其特征在于原料药中的白花蛇舌草黄芪总黄酮用等量的半枝莲黄芪总黄酮代替；白花蛇舌草黄芪总多糖用等量的半枝莲黄芪总多糖代替；天龙小肽可以用蜈蚣小肽或全蝎小肽代替。

9.如权利要求1或2所述的中药有效部位组合物在制备用于抗肿瘤、提高免疫力和/或肿瘤辅助治疗的药物中的应用。 

10.权利要求6所述的中药有效部位组合物在制备用于抗肿瘤、提高免疫力和/或肿瘤辅助治疗的药物中的应用。