CN105250989A - 一种用于抗疲劳的阿胶小肽组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗疲劳作用的中药有效部位组合物及其制备方法和用途，属中药领域。该中药组合物以从阿胶、党参、黄芪、百合、红景天和肉苁蓉中所提取有效部位作为药物的主要成分，并制成适宜的剂型，该组合物在抗疲劳方面具有较好疗效。而且，本发明的抗疲劳组合物无任何毒副反应，动物长期服用未见致突变和致畸作用。因此，本发明的抗疲劳组合物是安全有效的，适合于工作节奏快、用脑过度等易疲劳者以及中老年人等高端人群长期服用。

Description

一种用于抗疲劳的阿胶小肽组合物

技术领域

本发明涉及一种具有抗疲劳作用的中药有效部位组合物及其制备方法，具体地说从阿胶、党参、黄芪、百合、红景天和肉苁蓉中提取的中药有效部位组合物及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

疲劳是一个涉及许多生理生化因素的综合性的生理过程，是人体脑力或体力活动到一定阶段时必然出现的一种正常的生理现象。它既标志着机体原有工作能力的暂时下降，又可能是机体发展到伤病状态的一个先兆。1982年在第五届国际运动生化学术会议上，将疲劳定义为：机体生理过程不能持续其机能的特定水平上或不能维持预定的运动强度。

疲劳是21世纪危害人类健康的主要因素。在当今社会，由于生活节奏加快，长期承受较大心理压力，一些经常处于“高压”下工作、生活饮食不规律、睡眠质量低下的人群，容易出现疲劳状况。据调查,中国约有45%的人群处于亚健康状态。如：职业经理人，广告媒体工作者，IT人士、日常工作繁忙者、学习压力较重者、出租车司机、倒班工作者、需经常出差者。据报道上海市处于亚健康状态的中高级知识分子高达75.3%。而在现代企业管理者中,高达85%以上。根据WHO发布的消息,全世界有10%的成年人处于亚健康状态。这部分人群如若身心得不到合理休息和调节，长此以往，身体的重要器官，尤其是大脑皮质的中枢神经系统功能就会失调，造成氧自由基积聚、免疫功能低下，从而导致倦怠、头昏、头痛、记忆力减退等一系列疲劳症状的产生。要消除这种症状，除了加强身体锻炼、放松紧张情绪、合理安排休息外，还需用药物滋补调剂，以兹调节生理，保障人们的身心健康，以充沛的精力投入到工作或学习中。传统的中药由于其副作用少，不含对人体有害的兴奋剂成分而成为近年来抗疲劳研究的热点。

现代中医认为，疲劳为一个病名，有其病因病机，是临床上常见病、多发病，是必须重视的新病种，归于亚健康范畴，涉及五脏六腑，主要以脾、肝、肾为主。中医理论称，肾元之阳气和肾藏之精气亏损、虚少,五脏气血津液生化无源可导致诸多衰老病态和加速衰老过程。脾气虚、血虚血瘀等也是衰老过程的因素。因此，中医对抗衰老、疲劳、早衰的药物，主要以健脾益气、补肾填精、养阴补血者为多。由于疲劳为元气耗伤之虚证与心理变化(或不畅)双重因素所致，因此治疗上不仅要补虚扶正，也应祛疲安神。一方面，补虚固元，滋养机体，虚得补，正则旺，疲劳自除；另一方面，调畅心志，舒心畅意，神得安，心则宁，疲劳可消。

本发明是一种用于抗疲劳的阿胶小肽有效部位组合物。阿胶为马科动物驴的皮，经煎煮、浓缩制成的固体胶，原产自山东省东阿县，至今已有近三千年历史。阿胶是传统的滋补上品、补血圣药，味甘平，入肺、肝、肾经，具有补血止血、滋阴润燥等功效，药食两用，长期服用可补血养血、美白养颜、抗衰老、抗疲劳、提高免疫力，适用人群广泛。李时珍著《本草纲目》载：“阿胶《本经》上品。弘景曰：‘出东阿，故名阿胶’”。小肽又叫纳米胶原蛋白（NanoOligopeptideCollagen，简写OCO，即纳米活性寡肽胶原，或简称纳米胶原），也称寡肽、微肽、短肽。一般是指由2－3个氨基酸组成的寡肽，平均分子量约300道尔顿。蛋白质（胶原蛋白）在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸，小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环，小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。动物为了达到最佳生产性能，必须需要一定数量的小肽，随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入，人们已逐渐认识到肽营养的重要性。小肽和氨基酸的混合物在人体的吸收率和吸收速度都比单纯氨基酸佳，不仅如此，小肽还能在肠道内保护易被破坏的氨基酸。此外，单纯的氨基酸在体内根据需要新组成肽和蛋白质，而小肽和氨基酸的混合物可省去一部分重新组合的过程，因此，它的生物效价更高。

抗疲劳肽不仅可以提供人体所需的氨基酸，同时又是人体活动需要的能源物质，能增强机体的抗氧化能力、维持内环境稳定及酶活性，还具有防止神经递质失衡等功能，这是其他抗疲劳因子所无法比拟的。随着人们现在生活节奏的加快，饮食不规律、睡眠不足导致很多人都处于亚健康状态，一些具有缓解疲劳、增强免疫力等作用的产品越来越受到人们的重视，而抗疲劳肽作为一种很好的生物活性肽，无论是从吸收速率还是生物学功能上，开发潜力都很大。

现如今，中药复方成分低，服用量大，药效差。而有效部位中药安全可靠、疗效确切、标准明确、质量可控，体现中药多成分、多靶点产生作用的特点，有效部位中药中的有效部位含量应占提取物的50%以上，是各药材主要成分的体现，或是药材精华的结合，其中的各类成分量大，其血药浓度也大，所以药效得到提高。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种具有抗疲劳作用的中药有效部位组合物；

本发明的另一个目的在于提供上述中药组合物的制备方法和用途。

本发明的第一目的：以阿胶小肽、党参黄芪百合多糖、红景天总苷和肉苁蓉苯乙醇苷类为原料，加入适当药用辅料，制成相关的剂型。

本发明药物的组合物的原料药的组成及配比为：阿胶小肽2～8重量份、党参黄芪百合总多糖9～15重量份、红景天总苷3～9重量份、肉苁蓉苯乙醇苷类3～9重量份重量份。

本发明中药药物组合物优选的组成及配比为：阿胶小肽6重量份、党参黄芪百合总多糖12重量份、红景天总苷7重量份、肉苁蓉苯乙醇苷类7重量份。

上述总多糖有效部位中党参黄芪百合总多糖含量为40%～80%，阿胶小肽的含量40%～80%，红景天总苷的含量为40～60%，肉苁蓉苯乙醇苷类的含量为30～60%。

该药物组合物可以加入相应辅料，制成口服制剂或注射剂。然后可以再加入其他具有抗疲劳作用的有效部位、有效成分、化学合成品或者半合成品，然后再加入相应辅料，制成片剂、胶囊剂、口服制剂或注射剂。

本发明中药组合物的制备方法包括以下步骤：

①阿胶小肽的制备：取阿胶，适当粉碎，过60目筛，加20倍量水，于60℃炖化，冷却至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，于42℃水浴下酶解1.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。冷却后，采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量1%的胰蛋白酶，于42℃水浴下酶解2.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。然后将灭活后的酶解液于40℃水浴保温，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入2%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得阿胶小肽，其中阿胶小肽的含量为65.8%。

②党参黄芪百合总多糖的制备：取党参、黄芪、百合药材，粉碎，加8～15倍量水提取1～3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40%，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80%，收集沉淀，反复纯化沉淀，加5～20倍量水使充分溶解，加入0.5%～5%鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得党参黄芪百合总多糖有效部位；其中总多糖的含量为62.5%；

③红景天总苷的制备：取红景天药材，用5～12倍量的70%乙醇回流提取2～4次，每次1～2小时，浓缩至无醇味,过AB-8大孔吸附树脂,先以水洗脱，再用10%～30%的乙醇洗脱，洗脱速度1～15mL/min,并收集10～30倍量的洗脱液，得到红景天总苷有效部位,其中红景天苷的含量为49.5%；

④肉苁蓉苯乙醇苷的制备：取肉苁蓉，用5～15倍量水回流提取1～3次，每次0.5～1.5h，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15g/ml（25℃），加3～5倍量乙醇沉淀，抽滤，乙醇液保留，减压回收乙醇，滤过，滤液经AB-8大孔吸附树脂处理，先以水洗脱，然后用30%～60%的乙醇洗脱，洗脱速度1～15mL/min,洗脱至近无色，并收集10～30倍量的洗脱液，回收乙醇，减压浓缩，干燥，粉碎，得肉苁蓉苯乙醇苷，其中肉苁蓉苯乙醇苷的含量为54.2%；

④按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

各树脂的型号可以是D941、AB-8。

党参黄芪百合总多糖的含量测定方法为：对照品溶液的制备在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g.精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密量取本品50m（如有沉淀，需先加热试溶解，放冷），置250ml量瓶中，加30%硫酸锌溶液5ml，在水浴中加热5分钟后，在振摇下立即加亚铁氰化钾试液5ml，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液25ml，置500ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得测定法精密量取对照品溶液浴供试品溶液各2ml，分别置10ml量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5ml，硫酸5ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录16页），在490nm波长处分别测定吸收度，计算，即得；

阿胶总肽的含量测定方法为：取比伐芦定对照品适量，精密称定，加水溶解并制成每1mL含15.08mg的溶液，精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL，分别置具塞试管中，各加水至1.0mL，再分别加入双缩脲试剂4.0mL，立即混匀，室温放置30min，照紫外-可见分光光度法，在540nm的波长处测定吸光度(A);同时以0号管为空白。另精密取阿胶总肽0.4g，精密加水40mL，超声处理(功率250W，频率40Hz)30min，滤过，精密量取续滤液1.0mL，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中蛋白浓度，并乘以稀释倍数，计算，即得。

红景天总苷的含量测定方法为：照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15：85)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按红景天总苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：取红景天总苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含红景天总苷含量不得少于90％；

肉苁蓉苯乙醇苷类的含量测定方法为：对照品溶液的制备：精密称取松果菊苷对照品适量,置棕色量瓶中,用甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液,即得。供试品溶液的制备：取本品粉末约1g，精密称定,精密加入体积分数50%乙醇50mL，密塞,称定质量;回流提取5h取出,放冷,再次称定质量,用体积分数50%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过;精密量取续滤液25mL置水浴上蒸至近干,残渣加水10mL使溶解,放冷,通过D-101型大孔树脂柱(柱长20cm,内径2cm),以水50mL洗脱,弃去水液,再用体积分数20%乙醇50mL洗脱,弃去洗脱液,继用体积分数70%乙醇80mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,精密量取0.5mL置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。测定法：选用测定波长333nm,以松果菊苷为对照品,采用大孔树脂-紫外分光光度法对肉苁蓉中苯乙醇苷的含量进行测定。

经过发明人的对比优选后，确定了上述有效部位的最佳重量配比为：阿胶小肽6重量份、党参黄芪百合总多糖12重量份、红景天总苷7重量份、肉苁蓉苯乙醇苷类7重量份。按照比例取上述阿胶小肽、党参黄芪百合总多糖、红景天总苷和肉苁蓉苯乙醇苷类，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

本发明药物组合物可制成的剂型为片剂、胶囊剂、口服制剂或注射剂。

以上所说的药剂学常规辅料包括但不限于润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶、聚乙二醇和月桂醇硫酸镁；崩解剂，如干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙甲纤维素、交联羧甲基纤维素钠；润湿剂：如蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）；填充剂，如淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素（MCC）、硫酸钙、甘露醇；pH调节剂，如盐酸、氢氧化钠、碳酸氢钠；稀释剂与吸收剂，如淀粉、氧化镁、碳酸镁、磷酸氢钙；表面活性剂，如聚山梨酯类、卵磷脂；黏合剂，如水、乙醇、淀粉浆、糖浆、液体石蜡；助悬剂，如明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；抗氧剂，如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠；等渗调节剂，如氯化钠、葡萄糖；局部止痛剂，苯甲醇、三氯叔丁醇、盐酸普鲁卡因、利多卡因。

本发明有效部位组合物用于抗疲劳。

有益效果

本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。

疲劳发生时存在四个基本过程：①代谢基质疲劳产物的积累（积累假说，Accumulationhypothesis）；②活动所需基质耗竭（衰竭学说，Exhaustionhypothesis）；③基质的生理化学状态改变（Physiologicalalteration）；调节和协调机能失调（Imbalancehypothesis）。中医药在消除疲劳和增强运动能力方面有其独特的优势。现已证实，中医中药不仅可以增加运动员体内的能量物质，而且有调节神经内分泌系统、加强代谢等作用，并可刺激体内激素的分泌与释放，增强心血管系统、消化系统以及造血系统、骨骼系统等功能，延缓过度疲劳的产生。目前中医药抗疲劳的研究主要从“补益”和“调理”两个方面进行，前者主要包括补气、补血、补阴与补阳，以及补脾、补肾等等；后者主要有理气（如健脾理气、疏肝理气）与理血（如活血化瘀、补脾活血）。

本发明以传统中医理论为指导思想，同时结合国内外的相关研究成果，在抗疲劳的方面效果显著。方中阿胶性甘、平，功效为补血止血、滋阴润燥。现代药理学研究证明，阿胶具有补血、抗休克、改善钙代谢平衡、调节免疫、止血、促进淋巴细胞转化率等功效。党参是我国传统补益药，味甘性平，功能健脾益肺，养血生津。有补中益气、健肺益脾、生津、调节血糖、促进造血机能、降压、抗缺氧、耐疲劳、增强机体免疫力、调节胃收缩及抗溃疡等多种作用。其主要活性成分之一党参多糖具有抗肿瘤、增强免疫功能、增强抗应激能力及抗氧化等多种药理活性。黄芪属豆科黄芪属植物，是一种多年生深根性草本药用植物，以根入药，味甘性微温，归肺、脾经。具有补气升阳、益胃固表、利水消肿、脱毒生肌等功效，是我国传统的补益药。现代药理研究表明，黄芪具有耐缺氧、抗疲劳、抗衰老、调节免疫功能、解毒等作用，对血压、血糖具有双向调节作用；还具有镇静、抗微波辐射、促进体内蛋白代谢、抗炎、强心、抗肿瘤等功能。红景天是近年发现的一种有抗疲劳作用的药物，属于景天科植物，是天然配方的珍贵药用植物，素有“高原人参”和“雪山仙草”之称。味甘、苦性平，归肺、心经。功能益气活血，通脉平喘。对人体具有调动肌体内一切积极因素，补不足、减多余的双向调节作用，还可有效地消除人的紧张情绪，均衡调节中枢神经、改善睡眠及烦躁亢奋或抑郁状态；抗疲劳、抗辐射、抗肿瘤，抗缺氧，且可驱风、抗寒、消除疼痛，延缓细胞衰老，提高体内SOD的活性，抑制细胞内脂褐素和活性氧的形成，增强细胞的代谢与合成，提高细胞的活力；现代药理研究发现，红景天能够增强血清LDH活力，降低血乳酸含量，增加肝糖原、肌糖原的储备，具有明显的抗疲劳作用。肉苁蓉是我国宝贵的药用中药之一，在古代增力方剂中出现率达60%，且在滋补配方中仅次于人参居第二位，有沙漠“人参”的美誉。味甘、咸性温，归肾、大肠经，功能补肾阳，益精血，润肠通便。百合是一种多年生草本植物，在全国各地都有出产。入药用百合最早载于《神农本草经》，药用部位为肉质鳞茎的鳞片，性味甘寒，具有止血、活血、养阴清肺、清心安神之功，还可以增加肺脏内血液的灌流量，改善肺部功能。

本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，不仅符合传统中医药抗疲劳的组方原则，而且符合中药现代化的发展要求，对推动医药产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和专利，未检索到以阿胶小肽、党参多糖、黄芪多糖、百合多糖、红景天总苷和肉苁蓉苯乙醇苷类做为原料，生产加工并制成适宜药物制剂用于抗疲劳的治疗或辅助治疗的报道。

为进一步验证本发明的药理作用，用本发明片剂进行动物药效学实验。

试验内容：本发明对小鼠的抗疲劳试验。

1样品和动物

1.1供试样品

样品1：（本发明片剂）

取阿胶50kg，适当粉碎，过60目筛，加20倍量水，于60℃炖化，冷却至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，于42℃水浴下酶解1.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。冷却后，采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量1%的胰蛋白酶，于42℃水浴下酶解2.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。然后将灭活后的酶解液于40℃水浴保温，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入2%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得阿胶小肽（含量为60.5）；

党参黄芪百合总多糖的制备：取党参、黄芪、百合药材各80kg，粉碎，加10倍量水提取2次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40%，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80%，收集沉淀，反复纯化沉淀，加10倍量水使充分溶解，加入1.5%鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得党参黄芪百合总多糖有效部位；其中总多糖的含量为65.2%.

取红景天100kg，取红景天药材，用8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2小时，浓缩至无醇味,过AB-8大孔吸附树脂,先以水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，洗脱速度5mL/min,并收集20倍量的洗脱液，得到红景天总苷有效部位（含量为56.4%）；

取肉苁蓉100kg，用10倍量水回流提取2次，每次1h，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15g/ml（25℃），加4倍量乙醇沉淀，抽滤，乙醇液保留，减压回收乙醇，滤过，滤液经AB-8大孔吸附树脂处理，先以水洗脱，然后用50%的乙醇洗脱，洗脱速度5mL/min,洗脱至近无色，并收集20倍量的洗脱液，回收乙醇，减压浓缩，干燥，粉碎，得肉苁蓉苯乙醇苷，其中肉苁蓉苯乙醇苷的含量为52.8%。

取阿胶小肽60g、党参黄芪百合多糖120g、红景天总苷70克、肉苁蓉苯乙醇苷类70克，加糊精、羧丙基甲基纤维素、硬脂酸镁至总量400g，制成片剂，规格每片400mg。

样品2：（本发明胶囊剂）

采用样品1制备的有效部位原料。

取阿胶小肽30g、党参黄芪百合多糖90g、红景天总苷35g、肉苁蓉苯乙醇苷类35g，加淀粉至260g，制成胶囊剂1000粒。

样品3：（本发明颗粒剂）

采用样品1制备的有效部位原料。

取阿胶小肽120g、党参黄芪百合多糖300g、红景天总苷140g、肉苁蓉苯乙醇苷类140g，加入糊精至总量800g，干压制粒，即得。

样品4：

采用样品1制备的有效部位原料。

取阿胶小肽60g、党参多糖180g、黄芪多糖180g、百合多糖180g、红景天总苷120g、肉苁蓉苯乙醇苷类120g，加入84g的糊精与84g的淀粉浆、16.8g的羧丙基甲基纤维素、126g的干燥淀粉、8.4g的硬脂酸镁，制成片剂，规格200mg。

样品5：

采用所需要的有效部位原料。

取鹿茸多肽120g、枸杞多糖160g、杜仲叶黄酮苷160g、苦荞麦蛋白质160g、辣椒素140g、玛咖140g，加入88g的糊精与88g的淀粉浆、17.6g的羧丙基甲基纤维素、132g的干燥淀粉、8.8g的硬脂酸镁，制成片剂，规格20mg。

给药前，取上述相应制剂，研细，采用纯水配制成所需要的药物浓度。

2　实验方法

2.1实验动物

健康雄性ICR小鼠80只，由山东中医药大学试验动物中心提供。

2.1.1负重游泳试验

　取成年雄性小鼠80只,体重18～22g,随机分为8组:空白组、模型组、6个样品组。除空白组外，其他组每天1.0g/10g灌胃，连续21d,一日1次。末次给药2h后,置小鼠在游泳箱中游泳,水深30cm,水温(25±0.5)°C,鼠尾根部负荷10%体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的时间作为小鼠游泳时间，实验结果见表1。

2.1.2　爬杆试验

动物选用、剂量设计、给药途径及给药期限同前。末次给药后2h后,将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒上,使其肌肉处于紧张状态,记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃上跌落下来的时间。第3次跌落时终止实验,累计3次的时间作为爬杆时间，实验结果见表1。

2.1.3　肝糖原测定

动物选用、剂量设计,给药途径及给药期限同前。末次给药后2h,立即处死,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸净水分,精确称取肝脏100mg,测量计算肝糖原含量，实验结果见表1。

　实验结果均以x±s表示,组间差异采用t检验分析,以P<0.05作为显著性差异的标准。

2.2　实验结果

2.2.1　本发明对小鼠负重游泳时间、爬杆时间和肝糖原储备量的影响

　由表可见,小鼠负重游泳时间在样品1～4组与空白组间比较,差异有显著性意义；本发明权利要求以外的比例组及以外的有效部位组合物组与空白组比较，差异无显著性。由此说明本发明比例疗效好。

表1本发明对小鼠负重游泳时间、爬杆时间和肝糖原储备量的影响

注:与空白组比较,*P<0.001；与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01。

用药1～3组与空白组相比,差异均有显著性意义,说明本发明比例的用药均可使小白鼠爬杆时间延长。小鼠肝糖原的储备量在样品1～3组与空白组间比较,差异有显著性；在样品4、5组与空白组间比较差异无显著性,即本发明比例的用药均能增加小鼠肝糖原的储备量。由此说明本发明比例组对于小鼠抗疲劳具有治疗作用。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐明本发明的技术方案，但是本发明申请所要保护的内容不仅仅如此。实际生产中的用量不仅限于实例中的药物用量，可以用吨、千克、克等计量单位，但是各原料药物的用量配比仍依据本方明的技术方案。

实施例1：

处方：阿胶小肽60g党参黄芪百合总多糖120g红景天总苷70g肉苁蓉苯乙醇苷类70g

制法：阿胶小肽的制备：取阿胶50kg，适当粉碎，过60目筛，加20倍量水，于60℃炖化，冷却至室温，采用盐酸调pH至2.0，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，于42℃水浴下酶解1.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。冷却后，采用氢氧化钠溶液调节pH至8，加入底物量1%的胰蛋白酶，于42℃水浴下酶解2.5h，之后于85℃水浴中灭活15min。然后将灭活后的酶解液于40℃水浴保温，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%～3%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得阿胶小肽（阿胶小肽含量60.5%）；

党参黄芪百合总多糖的制备：取党参、黄芪、百合药材各80kg，粉碎，加10倍量水提取2次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40%，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80%，收集沉淀，反复纯化沉淀，加10倍量水使充分溶解，加入1.5%鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得党参黄芪百合总多糖有效部位；其中总多糖的含量为65.2%.

取红景天100kg，取红景天药材，用8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次2小时，浓缩至无醇味,过AB-8大孔吸附树脂,先以水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，洗脱速度5mL/min,并收集20倍量的洗脱液，得到红景天总苷有效部位（含量为56.4%）；

取肉苁蓉100kg，用10倍量水回流提取2次，每次1h，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15g/ml（25℃），加4倍量乙醇沉淀，抽滤，乙醇液保留，减压回收乙醇，滤过，滤液经AB-8大孔吸附树脂处理，先以水洗脱，然后用50%的乙醇洗脱，洗脱速度5mL/min,洗脱至近无色，并收集20倍量的洗脱液，回收乙醇，减压浓缩，干燥，粉碎，得肉苁蓉苯乙醇苷，其中肉苁蓉苯乙醇苷的含量为52.8%。

取阿胶小肽3000g、党参黄芪百合多糖6000g、红景天总苷3500克、肉苁蓉苯乙醇苷类3500克，加糊精、羧丙基甲基纤维素、硬脂酸镁至总量20000g，制成片剂，规格每片400mg。

实施例2：

采用实施例1制备的有效部位原料。

取阿胶小肽300g、党参黄芪百合多糖900g、红景天总苷350g、肉苁蓉苯乙醇苷类350g，加淀粉至2600g，制成胶囊剂10000粒。

实施例3：

采用实施例1制备的有效部位原料。

取阿胶小肽120g、党参黄芪百合多糖300g、红景天总苷140g、肉苁蓉苯乙醇苷类140g，加入糊精至总量800g，干压制粒，即得。

实施例4：

取实施例1所制片剂治疗64例疲劳患者。治疗方案：口服，一次2片，一日3次，4周为一个疗程。2个疗程后观察治疗前后临床症状、体征、肝糖原储备量、血清尿素氮水平、乳酸水平等。

结果：治愈33例，好转19例，显效7例，无效5例，总有效率为92.2%。

Claims (4)

1.一种用于抗疲劳的阿胶小肽有效部位组合物，其特征在于是由从阿胶中提取的阿胶小肽，从党参、黄芪、百合中提取的党参黄芪百合总多糖，从红景天中提取的红景天总苷和从肉苁蓉中提取的苯乙醇苷类组成的，其中，各有效部位的重量配比为：

阿胶小肽2～8重量份

党参黄芪百合总多糖9～15重量份

红景天总苷3～9重量份

肉苁蓉苯乙醇苷类3～9重量份。

2.如权利要求1所述的阿胶小肽有效部位组合物，其特征在于各有效部位的重量配比为：阿胶小肽6重量份、党参黄芪百合总多糖12重量份、红景天总苷7重量份、肉苁蓉苯乙醇苷类7重量份。

3.如权利要求1或2所述的阿胶小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以下步骤：

①阿胶小肽的制备：取阿胶，适当粉碎，加5～20倍量水，于55℃～65℃炖化，冷却至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5%～10%的胃蛋白酶，于35℃～50℃水浴下酶解1～3h，之后于85℃水浴中灭活10～20分钟，冷却后，采用氢氧化钠溶液调节pH至7～9加入底物量0.5%～10%的胰蛋白酶，于35℃～50℃水浴下酶解2～5h，之后于85℃水浴中灭活10～20分钟，然后将灭活后的酶解液于35℃～45℃水浴保温，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%～3%的活性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干燥，得阿胶小肽有效部位；其中阿胶小肽的含量为40%～80%；

②党参黄芪百合总多糖的制备：取党参、黄芪、百合药材，粉碎，加8～15倍量水提取1～3次，每次2h，滤过，滤液合并，减压浓缩至每ml含1g生药，加乙醇至含醇量40%，冷藏静置12h，滤过，滤液继续加乙醇至含醇量80%，收集沉淀，反复纯化沉淀，加5～20倍量水使充分溶解，加入0.5%～5%鞣酸，混匀，静置12h，离心，取上清液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，得党参黄芪百合总多糖有效部位；其中总多糖的含量为40%～80%；

③红景天总苷的制备：取红景天药材，用5～12倍量的70%乙醇回流提取2～4次，每次1～2小时，浓缩至无醇味,过AB-8大孔吸附树脂,先以水洗脱，再用10%～30%的乙醇洗脱，洗脱速度1～15mL/min,并收集10～30倍量的洗脱液，得到红景天总苷有效部位,其中红景天苷的含量为40～60%；

④肉苁蓉苯乙醇苷的制备：取肉苁蓉，用5～15倍量水回流提取1～3次，每次0.5～1.5h，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15g/ml（25℃），加3～5倍量乙醇沉淀，抽滤，乙醇液保留，减压回收乙醇，滤过，滤液经AB-8大孔吸附树脂处理，先以水洗脱，然后用30%～60%的乙醇洗脱，洗脱速度1～15mL/min,洗脱至近无色，并收集10～30倍量的洗脱液，回收乙醇，减压浓缩，干燥，粉碎，得肉苁蓉苯乙醇苷，其中肉苁蓉苯乙醇苷的含量为30～60%；

④按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型。

4.权利要求1或2所述的阿胶小肽有效部位组合物用于抗疲劳。