CN112745258B - 一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用 - Google Patents

一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用，荧光探针具有式(I)所示结构：
Figure DDA0002911522820000011
制备方法如下：1)将4‑甲基吡啶和碘丁烷用乙醇溶解，加热回流制备得到1‑丁基‑4‑甲级吡啶‑碘化物；2)将4‑二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇在N2的保护下加热直到全部溶解，然后加入化合物1‑丁基‑4‑甲级吡啶‑碘化物，并滴加哌啶，提高温度并回流，直到红褐色固体沉淀析出，即得。所述荧光探针能够在红光下对细胞线粒体进行染色显色，而且对于粘度的响应优于商业化线粒体探针JC‑1，其制备工艺简便，反应步骤少，反应时间短，所用的成本低，产率高，在生物研究和医疗诊断方面具有良好的应用前景。

Description

一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
在生物成像中，靶标的高保真度荧光图像非常重要，尤其是线粒体来说，因为它的形态和数量是不断变化的。例如，在长期缺氧环境下，多种细胞系的线粒体会异常增大。同时，线粒体的形态可以由一组蛋白质控制，这些蛋白质的突变会导致包括帕金森氏症和阿尔茨海默病在内的多种人类疾病。因此，在成像和跟踪线粒体时，只有高保真图像才能提供准确的线粒体信息。所以开发一种新的探针，去提高荧光探针的信噪比进而提高图像保真度是非常有意义的。
考虑到线粒体是一个具有高粘度环境的细胞器，因此为了得到具有高信噪比的线粒体荧光探针，设计转子型荧光探针是一个非常好的策略。预计该探针在未靶向线粒体时，由于内部的旋转并不会发出荧光，而靶向到线粒体后由于分子内旋转受限而发出明亮的荧光，从而大大提高信噪比。目前，对于线粒体的成像，已有许多商业化的荧光探针，诸如MitoTracker Red FM(MTR)，MitoTracker Green FM(MTG)，TMRM,TMRE和JC-1等。然而，上述探针均不具有转子效应，且光稳定性较差。这不利于长时间地高保真地成像先线粒体。此外，经过研究发现，在各种荧光生物传感器中，红光荧光探针非常适合于活细胞的成像。因为，红色发射在成像时避免了蓝/绿色区域的细胞内自发荧光，可以减小背景噪声，提高信噪比。所以，开发红色转子型线粒体荧光探来解决蓝/绿色区域的细胞自发荧光问题，提高探针的粘度响应是具有非常大意义的，也是目前迫切需要解决的科研课题。并且使用简单的合成工业和较低成本得到高产率的荧光探针也非常重要，简便制备工艺的开发具有重大意义。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种高信噪比的线粒体荧光探针及其制备方法与应用，所述荧光探针具有极简单的合成工艺，极低的成本，极高的产率，极强的转子效应，能够高保真度的成像线粒体，本发明的探针在线粒体相关的生物研究和医疗诊断方面具有良好的应用前景。
为了达到以上目的，本发明的技术方案如下所述：
在本发明的第一方面，提供一种高信噪比的线粒体荧光探针，所述荧光探针是式(I)所示结构的化合物：
Figure BDA0002911522800000021
式(I)所示化合物的化学名称为(E)-l-丁基4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶-1碘盐，简称为Mito-1。
在本发明的第二方面，提供一种第一方面所述高信噪比的线粒体荧光探针的制备方法，制备方法概述如下：
(1)将4-甲基吡啶和碘丁烷用乙醇溶解，加热回流制备得到1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物；
(2)将4-二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇在N2的保护下加热直到全部溶解，然后加入化合物1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，并滴加哌啶，提高温度并回流，直到红褐色固体沉淀析出，即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1。
在本发明的第三方面，提供一种第一方面所述高信噪比的线粒体荧光探针在标记或显示线粒体在活细胞中分布的应用。
优选的，所述活细胞为永生化SiHa细胞。
在本发明的第四方面，提供一种第一方面所述高信噪比的线粒体荧光探针在检测或显示线粒体中的应用。
在本发明的第五方面，提供一种第一方面所述高信噪比的线粒体荧光探针在粘度响应中的应用。
本发明的具体实施方式具有以下有益效果：
本发明具体实施方式中的高信噪比线粒体荧光探针能够在红光下对细胞线粒体进行染色显色，这一实验事实证明在红光下，探针Mito-1可以提供与线粒体一一对应的荧光图像，从而直观、高效地检测线粒体形态及数量的变化，为线粒体变化相关的病理学研究带来了极大的方便；
探针Mito-1不仅能够在红外光区检测到线粒体，而且对于粘度的响应优于商业化线粒体探针JC-1，这对于高保真度的追踪线粒体波动、监控某些与线粒体相关疾病发生有非常重要的意义；
本发明具体实施方式中的高信噪比线粒体荧光探针的制备方法与现有技术相比，其制备工艺简便，反应步骤少，反应时间短，所用的成本低，产率高，在实验过程中，原料所用少，合成步骤仅有两步，且反应时间总共只需要2-3h；并且，第一步反应中化合物1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物的产率高达85％，第二步反应中化合物((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1的产率高达70％；
本发明具体实施方式中的高信噪比线粒体荧光探针实现了线粒体在红光范围内的高保真成像的应用，预示其在生物研究和医疗诊断方面具有良好的应用前景。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1(a)为本发明实施例1制备的Mito-1分别在水溶剂和1，4-二氧六环溶剂中测试的紫外光吸收强度；图1(b)为本发明实施例1制备的Mito-1在475nm激发波长下Mito-1分别在水溶剂和1，4-二氧六环溶剂中测试的荧光强度。
图2为本发明实施例1制备的Mito-1对活SiHa细胞进行染色后，473nm激光辐照下收集得到的单光子荧光显微照片。
图3为本发明实施例1制备的Mito-1和线粒体深红(MTDR)依次对活SiHa细胞进行染色后，在473nm激光辐照下得到的单光子荧光显微照片。
图4为商业探针JC-1在475nm激发波长下在乙醇溶剂和甘油溶剂中测试的荧光强度。
图5为本发明实施例1制备的Mito-1在475nm激发波长下在乙醇溶剂和甘油溶剂中测试的荧光强度。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本发明的一种实施方式中，提供了一种高信噪比的线粒体荧光探针，所述荧光探针是式(I)所示结构的化合物：
Figure BDA0002911522800000041
式(I)所示化合物的化学名称为(E)-l-丁基4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶-1碘盐，简称为Mito-1。
本发明具体实施方式中公开的荧光探针Mito-1具有极强的转子效应，能够高保真度的成像线粒体，能够在红光下对细胞线粒体进行染色显色，在红光下探针Mito-1可以提供与线粒体一一对应的荧光图像，从而直观、高效地检测线粒体形态及数量的变化，为线粒体变化相关的病理学研究带来了极大的方便；探针Mito-1不仅能够在红外光区检测到线粒体，而且对于粘度的响应优于商业化线粒体探针JC-1，这对于高保真度的追踪线粒体波动、监控某些与线粒体相关疾病发生有非常重要的意义。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述高信噪比的线粒体荧光探针的制备方法，制备方法概述如下：
(1)将4-甲基吡啶和碘丁烷用乙醇溶解，加热回流制备得到1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物；
(2)将4-二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇在N2的保护下加热直到全部溶解，然后加入化合物1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，并滴加哌啶，提高温度并回流，直到红褐色固体沉淀析出，即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1。
优选的，步骤(1)中加热回流的温度为75℃-85℃(优选80℃)；
优选的，步骤(2)中4-二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇的加热温度为50℃-60℃(优选55℃)；
优选的，步骤(2)中，滴加哌啶后提高温度至85℃-95℃(优选90℃)并回流；
其制备方法的反应方程式如下：
Figure BDA0002911522800000051
本发明具体实施方式中的高信噪比线粒体荧光探针的制备方法工艺简便，反应步骤少，反应时间短，所用的成本低，产率高，在实验过程中，原料所用少，合成步骤仅有两步，且反应时间总共只需要23h；并且反应产率高，第一步反应中化合物1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物的产率高达85％，第二步反应中化合物((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1的产率高达70％。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述高信噪比的线粒体荧光探针在标记或显示线粒体在活细胞中分布的应用。
优选的，所述活细胞为永生化SiHa细胞。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述高信噪比的线粒体荧光探针在检测或显示线粒体中的应用。
本发明的一种实施方式中，提供了一种上述高信噪比的线粒体荧光探针在粘度响应中的应用。
本发明所述高信噪比的线粒体荧光探针在粘度响应中优于商业化线粒体探针JC-1。
实施例1
将4-甲基吡啶和碘丁烷在加入到三口瓶中，用乙醇溶解，搅拌均匀，80℃加热回流制备得到a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，产率为85％；
将化合物d3即4-二甲基氨基苯甲醛(0.11g,0.754mmol)和无水甲醇(25mL)加入到三口瓶，在N2的保护下，在55℃下加热直到全部溶解。然后加入化合物a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物(0.208g,0.754mmol)，并滴加哌啶6滴。添加完成后，提高温度至90℃并回流，直到红褐色固体沉淀析出。即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1,0.21g，产率为70％。
产物((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1的核磁表征数据如下：1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ(ppm):8.77(d,J＝6.9Hz,2H),8.06(d,J＝6.6Hz,2H),7.92(d,J＝15.9Hz,1H),7.60(d,J＝9.0Hz,2H),7.17(q,J＝16.2Hz,1H),6.79(d,J＝9.0Hz,2H),4.41(t,J＝14.7Hz,2H),3.03(s,6H),1.86(m,2H),1.30(m,2H),0.92(t,J＝14.7Hz,3H).
实施例2
将4-甲基吡啶和碘丁烷在加入到三口瓶中，用乙醇溶解，搅拌均匀，75℃加热回流制备得到a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，产率为84％；
将化合物d3即4-二甲基氨基苯甲醛(0.11g,0.754mmol)和无水甲醇(25mL)加入到三口瓶，在N2的保护下，在50℃下加热直到全部溶解。然后加入化合物a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物(0.208g,0.754mmol)，并滴加哌啶6滴。添加完成后，提高温度至85℃并回流，直到红褐色固体沉淀析出。即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1,0.21g，产率为68％。
实施例3
将4-甲基吡啶和碘丁烷在加入到三口瓶中，用乙醇溶解，搅拌均匀，85℃加热回流制备得到a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，产率为83％；
将化合物d3即4-二甲基氨基苯甲醛(0.11g,0.754mmol)和无水甲醇(25mL)加入到三口瓶，在N2的保护下，在60℃下加热直到全部溶解。然后加入化合物a6即1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物(0.208g,0.754mmol)，并滴加哌啶6滴。添加完成后，提高温度至95℃并回流，直到红褐色固体沉淀析出。即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1,0.21g，产率为69％。
Mito-1的光学性能测试
首先，选取极性不同的色谱纯溶液作为溶剂，本发明选用水和1,4-二氧六环；向其中分别加入5μL的实施例1制备的探针分子母液，配制为最终浓度为10μM的探针分子溶液。然后采集其吸收和荧光光谱，并对其最大发射峰位进行分析，得到其吸收和发射光谱的数据，并计算斯托克斯位移、摩尔吸光系数、荧光量子效率等光物理参数。
结果如图1所示，Mito-1分别在水和1,4-二氧六环中的紫外吸收光谱图和在用475nm的激发波长下的荧光强度数据图。
永生化细胞(SiHa)的培养
所有的细胞株都是在37℃，5％CO2的饱和湿度孵箱中培养。SiHa细胞株贴壁培养于内含10％胎牛血清H-DMEM培养液中(含1％双抗)。
Mito-1染色及MTDR复染实验
将接种好的细胞爬片用PBS洗三遍，2μM Mito-1染色细胞，在CO2培养箱中培养15min后吸出培养液，并用PBS洗三遍，洗去未结合的多余染液，细胞生长面朝下盖在载玻片上，在激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察细胞着色部位，荧光分布及亮度变化等，结果发现，Mito-1在细胞内分布区域呈花丝状与线粒体很相似，所以接下来通过与商业化线粒体探针MTDR的复染实验来证明Mito在SiHa细胞中染色位置是否为线粒体。
结果见图2和图3，图2显示了Mito-1依次对活SiHa细胞进行染色后，473nm激光辐照下收集得到的单光子荧光显微照片；图3显示了Mito-1和线粒体深红(MTDR)依次对活SiHa细胞进行染色后，在473nm激光辐照下得到的单光子荧光显微照片。这说明探针Mito-1能够专一地靶向细胞中的线粒体，并且在免洗的情况下得到高保真的清晰图像。
Mito-1粘度响应测试及与商业化探针对比
首先将Mito-1和商业探针JC-1，选取黏度不同的色谱纯溶液作为溶剂，本发明的溶剂选取乙醇和甘油，向其中分别加入5μL的实施例1制备的探针分子母液，配制为最终浓度为10μM的探针分子溶液。然后采集其荧光光谱，并对其二者在不同粘度的溶剂中的最大发射峰位的比值大小进行分析，从而得到粘度对探针荧光强度的影响。
结果见图4和图5，图4显示了JC-1分别在乙醇和甘油的溶剂环境中，用475nm的激发波长下的荧光强度数据图；图5显示了Mito-1分别在乙醇和甘油的溶剂环境中，用475nm的激发波长下的荧光强度数据图。通过对比测试结果，可以看到Mito-1在甘油中的荧光强度比其在乙醇溶液中增强至10倍左右，而JC-1在甘油中的荧光强度比乙醇中的反而低许多。这说明，相比于商业化的线粒体探针JC-1，探针Mito-1具有明显地转子效应，更加有利于高保真的成像具有高粘度环境的线粒体。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种高信噪比的线粒体荧光探针，其特征在于，所述荧光探针是式(I)所示结构的化合物：
Figure FDF0000018917380000011
2.一种权利要求1所述高信噪比的线粒体荧光探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：
(1)将4-甲基吡啶和碘丁烷用乙醇溶解，加热回流制备得到1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物；
(2)将4-二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇在N2的保护下加热直到全部溶解，然后加入化合物1-丁基-4-甲级吡啶-碘化物，并滴加哌啶，提高温度并回流，直到红褐色固体沉淀析出，即得到((E)-1-丁基-4-(4-(二甲氨基)苯乙烯基)吡啶碘盐Mito-1；
步骤(1)中加热回流的温度为80℃；
步骤(2)中4-二甲基氨基苯甲醛和无水甲醇的加热温度为55℃；
步骤(2)中，滴加哌啶后提高温度至90℃并回流。
3.一种权利要求1所述高信噪比的线粒体荧光探针在标记或显示线粒体在活细胞中分布的应用，其特征在于，所述活细胞为永生化 SiHa 细胞。
4.一种权利要求1所述高信噪比的线粒体荧光探针在检测或显示线粒体中的应用。
5.一种权利要求1所述高信噪比的线粒体荧光探针在粘度响应中的应用。
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CN113354627B (zh) * 2021-06-22 2022-03-25 浙江工业大学 一种用于检测粘度的近红外荧光化合物及其制备与应用
CN114031549B (zh) * 2021-11-05 2023-04-07 齐鲁工业大学 一种同时可视化质膜和溶酶体的双靶向荧光探针及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105062467A (zh) * 2015-08-07 2015-11-18 山东大学 一种转子型的双红线粒体荧光探针及其应用
CN110183376A (zh) * 2019-05-24 2019-08-30 青岛科技大学 用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用
CN111362927A (zh) * 2020-04-16 2020-07-03 江西科技师范大学 界面靶向型线粒体探针及其制备方法和应用
CN111848509A (zh) * 2020-08-13 2020-10-30 江西科技师范大学 分子转子型红光线粒体探针及其制备方法和应用
CN112079771A (zh) * 2020-09-23 2020-12-15 华中科技大学 一种水溶性红色荧光的线粒体靶向探针及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105062467A (zh) * 2015-08-07 2015-11-18 山东大学 一种转子型的双红线粒体荧光探针及其应用
CN110183376A (zh) * 2019-05-24 2019-08-30 青岛科技大学 用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用
CN111362927A (zh) * 2020-04-16 2020-07-03 江西科技师范大学 界面靶向型线粒体探针及其制备方法和应用
CN111848509A (zh) * 2020-08-13 2020-10-30 江西科技师范大学 分子转子型红光线粒体探针及其制备方法和应用
CN112079771A (zh) * 2020-09-23 2020-12-15 华中科技大学 一种水溶性红色荧光的线粒体靶向探针及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Imaging mitochondria and plasma membrane in live cells using solvatochromic styrylpyridines;Mukherjee T. et al.;《Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology》;20191205;111732(1-10) *
Mukherjee T. et al..Imaging mitochondria and plasma membrane in live cells using solvatochromic styrylpyridines.《Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology》.2019, *

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