CN112725257A - Gmra1,2,3化合物及其生物合成与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明构建了一株绛红色小单孢菌GMA102工程菌，通过基因工程技术，剔除gmrA基因，阻断其对加拉糖胺3”‑N‑的甲基化。构建gmrA基因缺失工程菌，获得绛红色小单孢工程菌GMA102。通过培养绛红色小单孢工程菌GMA102，经发酵得到发酵液，借助发酵过程进行生物合成，得到氨醛糖化合物GMRA1,2,3；通过离子交换法，快速从发酵液中提取精制氨醛糖GMRA1,2,3新产品，该化合物GMRA1,2,3具有抗枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、藤黄微球菌、抗原虫作用。
Description
技术领域
本发明属生物合成制药领域，涉及氨醛糖类生物药物的研究开发与产业化及其关键技术的发明。
背景技术
氨糖类药物已经在临床上应用了几十年，特别是在抗感染方面，临床应用将近80年，效果显著，经久不衰。庆大霉素是其中的典型代表。早期对庆大霉素的研究确认，具有抗菌，抗原虫和抗蠕虫等作用。最新研究发现，庆大霉素等氨糖类化合物还具有抗癌，抗遗传病和抗病毒等作用。因此，从氨糖类功能性化合物中发现新功能，特别是寻找新型氨糖化合物，是药物研究开发的重要途径之一，受到科学家的高度重视。特别是发现新型氨糖化合物，更是国际性难题，也是药物学家之殷殷期盼。
通过代谢工程，研究各类药用微生物基因组上与药物合成有关的关键基因及其独特功能，来揭示不同化合物的生物合成途径与结构修饰，来提高药品质量，创造新型药物，并筛选新型功能性化合物，是当前药物研究开发的途径之一，也是热点之一，受到高层次科学家的青睐。
产生氨糖类生理活性药物的药用微生物有链霉菌，小单孢菌等。它们都有一个共同特点，就是代谢产物丰富，除了主产物外，还能合成少量，甚至微量的其它活性产物。这其中最复杂的要算小单孢菌了。如产生庆大霉素的绛红色小单孢菌，产生西索霉素的伊纽小单孢菌，产福提霉素的橄榄星小单孢菌等。这给从小单孢菌代谢合成寻找新化合物埋下了伏笔。
庆大霉素产生菌主要是小单孢菌，生物合成途径复杂，组分多种多样，有A，B，C等不同类别，研究最多的是C组分及其生物合成与基因组学。A，B组分以抗原虫为主，C组分以抗菌为主。不同组分有着不同的用途，堪称全身是宝。
庆大霉素C族复合物，包括：C1a、C1、C2、C2a和C2b等，各个组分差异仅仅在甲基化的多少，以及甲基化的位点。不同位点的甲基化，以及甲基化的多少，影响着其关键的生理活性，甚至副作用。比如，庆大霉素C1a其抗菌活性比其它组分高，又是进一步开发半合成抗生素（依替米星）的母体，因此备受关注，所以，寻找含有新型结构特点的氨基寡糖，就显得非常有意义了。
但是，由于糖类研究至今仍然是生命科学的难题。庆大霉素族代谢产物属氨糖类，因此，同样属国际性难题。基于氨糖化合物生物合成的多样性，潜含着可能具有巨大应用价值的生理活性物质。因此，几十年来，科学家一直在这一特殊领域，展开研究，期望得到新的化合物。特别是从代谢组学，基因组学，功能基因研究等方面入手，期望获得新化学实体，但收效甚微。
随着对氨糖类化合物生理功能研究的深入，近十多年来，发现氨糖类化合物，不仅仅具有抗感染功能，还有抗癌，抗病毒，甚至治疗遗传病等潜在功效，因此，得到了科学家的高度重视，研究愈发得到关注。
随着生命科学及其代谢工程技术的发展，对庆大霉素等生物合成基因的研究，不断取得新进展。随着对氨糖类生物合成基因功能研究的深入，对庆大霉素生物合成关键基因的认识越来越辩证。发现有些重要基因，潜伏着与理论预测不同，或者功能更多，且功能多样的奇妙特征，为发现新化合物增添了新的魅力。
在借助生物学实验进行论证与阐明关键功能基因的过程中，构建了许多与产业化应用息息相关的新物种，解决了产业化中的关键技术难题，但还是很难发现新化合物。通过生物学实验，论证了gmrA基因的甲基化功能。有意义的是，该基因不仅仅只修饰核糖体上的甲基化，同时还与绛红糖胺3’,4’双脱羟基有关。此外，还与3”-N的醛基化有关联。
本发明通过研究药用小单孢菌次级代谢产物生物合成基因的功能，来变换生物合成途径，寻找新化合物。理论推测，庆大霉素产生菌——绛红色小单孢菌，其生物合成基因簇上的gmrA基因，是对核糖体RNA进行甲基化修饰，来实现对氨基糖苷类抗生素的抗性。但通过生物学方法研究发现，该基因除了对核糖体甲基化修饰外，还影响庆大霉素加拉糖胺3”位N-的醛基化。通过灭活gmrA基因，阻断其对绛红糖胺3’,4’-位的脱羟基化，得到了系列新化合物：氨醛糖GMRA1,2,3.具有良好的抗菌，抗虫和抗病毒生理功能。
发明内容
本发明的目的在于提供一株产氨醛糖GMRA1,2,3化合物的小单孢菌以及GMRA1，2，3化合物的应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
制备满足基因工程接合转移所需的孢子。将保存于沙土管的庆大霉素产生菌G1008，接入斜面培养基，于37℃下，恒温培养，然后分离单菌落，进行复壮，得到生长丰满的斜面孢子。
构建庆大霉素生物合成基因簇，借助生物信息学技术，推测相关功能基因的orf。通过生物学实验技术，验证各个orf的真实功能。
借助分子生物学技术，敲除庆大霉素生物合成基因簇上的gmrA基因，验证gmrA基因功能。结果表明，gmrA基因确实具有甲基化作用，是耐药性基因的重要成员。除此之外，还极大地影响庆大霉素生物合成的代谢流。gmrA基因不仅仅修饰核糖体的甲基化，还修饰庆大霉素加拉糖胺3”-N的醛基化。
因此，通过敲除gmrA基因，消除其功能，可以改变药用微生物的生物合成途径，得到新型化合物。这一推论预测与结果一致，最终得到了氨醛糖GMRA1,2,3化合物。这些化合物结构新颖，不仅具有庆大霉素C组结构的特点，又有庆大霉素A、B、X组结构的特征。但又与ABCX组的化学结构不同，属新型化合物，隐含着独特的药理学新功能。将该新型化合物称为氨醛糖组化合物。
通过基因工程技术，敲除gmrA基因，构建gmrA基因缺失工程菌，获得新物种绛红色小单孢工程菌GMA102（绛红色小单孢菌变种GMA102，Micromonospora purpureavariant GMA102）；将药用微生物细胞内的药物合成代谢流，定向引入新化合物氨醛糖GMRA1,2,3的生物合成。
通过离子交换法，快速从工程菌的发酵液中提取、精制氨醛糖GMRA1,2,3新产品。
发明内容主要包括以下几个步骤：
A.复壮庆大霉素产生菌——绛红色小单孢菌G1008，得到生长丰满的斜面孢子；
B.通过生物学实验技术，阐明庆大霉素生物合成基因簇上gmrA的功能，及其与药物生物合成的密切关系；
C.构建敲除gmrA基因工程菌，得到绛红色小单孢菌变种GMA102，以及工程菌的鉴定；
D.培养绛红色小单孢工程菌GMA102，经发酵得到含次级代谢产物的发酵液，通过发酵这一特殊过程，借助生物合成，得到氨醛糖GMRA1,2,3化合物；
E.从发酵液中提取精制氨醛糖GMRA1,2,3化合物；
F.氨醛糖化合物 GMRA1,2,3化学结构的确定。
G.氨醛糖化合物 GMRA1,2,3抗菌，抗虫，看病毒（噬菌体）生理功能的初步确认。
所述产氨醛糖GMRA1,2,3化合物的小单孢菌，所述小单孢菌命名为绛红色小单孢菌（Micromonospora purpurea ）GMA102，已于2021年1月20日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.21692，中国普通微生物菌种保藏管理中心地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
所述氨醛糖化合物GMRA1,2,3产自权利要求1所述小单孢菌，其化学结构为：
本发明的优点在于：
（1）本发明构建了一株绛红色小单孢菌GMA102，通过基因工程技术，剔除gmrA基因，阻断其对绛红糖胺3’,4’-位的脱羟基化，以及对加拉糖胺3”-N -的醛基化。构建gmrA基因缺失工程菌，获得绛红色小单孢工程菌GMA102。通过培养绛红色小单孢工程菌GMA102，经发酵得到发酵液，借助发酵过程进行生物合成，得到氨醛糖化合物GMRA1,2,3。
（2）本发明通过培养绛红色小单孢工程菌GMA102，经发酵得到发酵液，借助发酵过程进行生物合成，得到氨醛糖化合物GMRA1,2,3；通过离子交换法，快速从发酵液中提取精制GMRA1,2,3新产品，该化合物 GMRA1,2,3具有抗菌，抗虫，抗病毒（噬菌体），抗肿瘤作用。
附图说明
图1 gmrA在庆大霉素生物合成基因簇上的位置图。
图2 基因gmrA特征DNA序列上的示意图（825 bp）。
图3 敲除gmrA-DNA序列示意图。
图4 重组质粒pKCAE274示意图。
图5 工程菌GMA102代谢产物的TLC检测结果；1：庆大霉素标准品；2：亲株G1008代谢产物； 3：GMRA1,2,3化合物。
图6 氨醛糖GMRA1,2,3化合物的质谱分析结果；G1008庆大霉素C组分（C1，C2，C1a）； GMA102: 氨醛糖GMRA1,2,3化合物。
具体实施方式
实施例1 庆大霉素产生菌G1008的复壮
取沙土管保存的庆大霉素产生菌G1008，接斜面，分离单孢子；挑取生长丰满的单菌落，再接斜面；如此反复，至少5代。最后斜面于37℃培养10天，直至孢子生长丰满，满足基因工程接合转移要求。
实施例2 gmrA基因的选择
构建绛红色小单孢菌G1008的庆大霉素生物合成基因文库，基因库登记号为：GenBank accession No.JQ975418（见图1）。其特征DNA序列为44181bp，其中包括关键基因gmrA。理论推测gmrA（GenBank accession No.JQ975418）属通过对核糖体甲基化，达到对药物的抗性，来实现耐药的终极目标。
实施例3
参照参考文献（Zeng Wei, Xianai Shi, Rong Lian, Weibin Wang, WenrongHong*, Shaobin Guo*. Exclusive Production of GentamicinC1a fromMicromonospora purpurea by Metabolic Engineering. Antibiotics, 2019,8,267;doi:10.3390/antibiotics8040267. www.mdpi.com/journal/antibiotics.）基因敲除策略，敲除gmrA基因，获得gmrA基因缺少工程菌——绛红色小单孢菌GMA102变种，简称GMA102。
实施例4工程菌绛红色小单孢菌GMA102的构建。
1，庆大霉素生物合成基因簇特征DNA序列的功能分析。利用生物信息学技术，对DNA序列进行分析，结果其部分ORF特征如图2所示。其中gmrA（825bp；JQ975418；AJ628149），与甲基化有关，属甲基化耐药性基因。
2，穿梭载体pKCAE274的构建。
通过生物信息学软件调取庆大霉素生物合成基因簇，锁定gmrA基因上下游序列，设计红霉素抗性基因（ermE）替换gmrA基因（825 bp）的研究策略，方案见图3。
gmrA基因序列（SEQ ID NO.1）：
ATGACGACATCTGTGCCCGACGACCGTATCGAGCAGGTCGAGCAGGCCATCACCAAGAGCCGGCGCTACCAGACGGTGGCCCCGGCCACCGTGCGACGCCTGGCCCGGGCTGCCCTCGTCGCCACGCGGGGCGACGTGCCGGACGCGGTGAAGCGCACCAAGCGCGGGCTGCACGAGATCTACGGCGCCTTCCTGCCGCCCAGTCCGCCCAACTACGCAGCGTTGCTCCGGCAGCTCGACTCCGCTGTGGACGACGGTGACGACGAGGCGGTCCGGGCGGCCCTGCGGCGCGCGATGTCGGTGCACGTGTCCACCCGCGAACGATTGCCGCACCTGGCGGAGTTCTACCGGGAGGTCTTCCGCCACGTCCCCCGGCCCAACACGCTGCGTGACCTCGCCTGCGGCCTCAACCCGCTGGCCGCCCCGTGGATGGGGTTGTCGGACGAGACCGTCTACGTCGCCTCCGACATCGACGCCCGGCTGATCGACTTCGTGGACGCCGCCCTGACGAGGTTGGGCGTCGCGCACCGCACGAGTGTGGTCGACGTCCTCGAGGACCGCCTTGACGAGCCGACCGACGTCACGCTATTGCTGAAGACGCTGCCCTGTCTGGAGACTCAGCGACGAGGCTCCGGCTGGGAAGTGATTGACATTGTCAACTCGCCGATTATCGTGGTAACCTTCCCGACCAAGTCTCTCGGTCAGCGATCGAAGGGGATGTTTCAGAACTATTCACAAAGTTTTGAGTCCCAGGCCAGAGAGCGGTCGTGCCGCATTCAGCGACTGGAGATCGGCAACGAGCTGATTTACGTCATTCAGAAATAG。
ermE红霉素抗性基因序列如SEQ ID NO.2所示。
根据特征DNA序列，设计三对引物（P1-P2，P3-P4，P5-P6），见表1。三对引物的位置见图3。
表1 引物序列及其限制性酶切位点
3，穿梭载体pKCAE274的构建
交换臂的克隆：以引物P1/P2和P3/P4分别扩增gmrA基因两端同源交换臂JHb1（2040 bp）和JHb2（2110 bp）。扩增交换臂JHb1和JHb2，经电泳检测，试剂盒回收，依次分别与T载体进行酶连，获得中间质粒pTJhb1（pTb1）和pTJHb2（pTb2），电泳条带大小与理论预测相符。
质粒pTb1经HindIII和EcoRI双酶切，回收2040 bp的Jhb1片段；质粒pFD304经EcoRI和XbaI双酶切，回收1746 bp的ermE基因片段；质粒pKC1139经HindIII和XbaI双酶切并回收。将以上三个片段按照适合的比例，进行酶连，并转化大肠杆菌，获得中间质粒pKCEb1（pKC-JHb1-ermE），其中质粒pFD304的制备方法见Identification of gntK, agene required for the methylation of purpurosamine C-6′ in gentamicinbiosynthesis.J. Gen. Appl. Microbiol., 58, 349‒356 (2012)。
用XbaI和EcoRV对质粒pKCEb1和pTb2进行双酶切，分别回收10118 bp和2114 bp的片段，两个片段再次按照合适的比例进行酶连，并转化大肠杆菌，最终获得质粒pKCAE274。质粒pKCAE274经HindIII和EcoRI双酶切，得到6419 bp、2709 bp、2037 bp和1137 bp四条带；经EcoRI和BglII双酶切，得到5989 bp、3846 bp、2063 bp和404 bp四条带。经EcoRV和HindIII双酶切，得到6426 bp、3174 bp和2702 bp三条带；质粒pKCAE274经以上三种酶切，得到的条带都与理论相符。证明重组质粒pKCAE274构建完毕[图4]。
4，基因gmrA基因缺失工程菌的筛选
单交换工程菌的筛选。利用接合转移技术成功将质粒pKCAE274整合到庆大霉素产生菌——绛红色小单孢菌G1008的基因组中，筛选具有对阿泊拉霉素和红霉素抗性的菌株，命名为绛红色小单孢菌GMA101（简称GMA101）。
根据同源重组原理，设计一对引物P5/P6。理论上，出发菌G1008的PCR产物只有1764 bp单条带，而单交换工程菌GMA101的PCR产物则有1764 bp和2687 bp两条条带。提取GMA101染色体，用引物P5/P6进行PCR，并对扩增产物进行电泳检测，结果得到两条带，1764bp和2687 bp。证明GMA101为单交换工程菌。
基因gmrA缺失工程菌的筛选。单交换工程菌同时含有阿泊拉霉素和红霉素抗性，双交换工程菌含有红霉素抗性；亲株和回复突变工程菌既不含阿泊拉霉素抗性，也没有红霉素抗性。利用这一原理，对单交换菌株进行传代分离，单菌落筛选。最终得到具有红霉素抗性但没有阿泊拉霉素抗性的突变株。红霉素抗性基因ermE替换gmrA基因工程菌可扩增出2687 bp的条带。利用引物P5/P6进行孢子PCR，扩增产物电泳检测，得到一条2687 bp的条带，与预测相符，最终经测序确认。将该菌株命名为绛红色小单孢菌GMA102（简称GMA102）。
实施例5工程菌GMA102代谢产物的制备与结构确定
1，氨醛糖GMRA1，2，3化合物的生物合成
种子培养基：葡萄糖0.6%，玉米淀粉1.0%，玉米粉1.0%，蛋白胨0.5%，黄豆饼粉1.5%， CaCO3 0.2%，pH6.8。
发酵培养基：淀粉6.0%，玉米粉1.2%，蛋白胨0.3%，花生饼粉0.5 %， NH4Cl0.1%，CaCO3 0.5%，pH7.5。
绛红色小单孢工程菌GMA102的培养。工程菌GMA102的沙土管接转接到斜面培养基，在38℃下培养10天，取生长良好的斜面，刮取孢子接入种子培养基。于300rpm/min，36℃摇床培养35小时，然后按20%的接种量转接于发酵培养基（装量为150mL/1000mL三角瓶），36℃摇床发酵100 h(转速为350rpm)。
5立方米发酵罐生产，搅拌转速230转/分钟，通气量1：0.6~1.2 (M3 /M3·min)，培养基，培养温度，接种量比例，发酵时间等，类似于摇瓶发酵，GMRA1,2,3化合物借助培养工程菌的过程，实现生物合成，最终生物合成量可达512单位/mL以上。
2，发酵液中氨醛糖GMRA1,2,3化合物的提取
A、氨醛糖GMRA1,2,3化合物的提取
发酵液稀释后，酸化到pH1.2，半小时后，用碱回调到pH6.8，投入732-NH4 +树脂静态吸附6小时。收集吸附饱和树脂，用0.01M HCl溶液酸洗饱和树脂，再用无离子水洗涤至中性，再用pH7.3氨水进行碱洗，碱洗体积不少于饱和树脂体积的12倍。然后串联到等体积的711树脂柱上，收集树脱液。
B、氨醛糖GMRA1,2,3化合物的精制
洗脱液经浓缩到约280000ug/mL，用浓硫酸调至pH5.8~6.0，加活性炭脱色，透光度达90%以上，过滤去除固体物，得透明澄清溶液。在搅拌下，缓慢向浓缩液中滴加90%以上乙醇，进行过夜析出，之后经离心分离，82%乙醇溶液淋洗，得湿成品。经真空干燥（真空度700mmHg以上，温度60℃，干燥12小时），得代谢产物精制品。
3，氨醛糖GMRA1,2,3化合物结构的确定
工程菌GMA102发酵代谢产物，经TLC分析，结果见图5。从图5可以看出，工程菌GMA102主产氨醛糖GMRA1,2,3化合物。硅胶GF254薄层层析，展开剂为氯仿：甲醇：氨水（1：0.9：0.9）（体积比），混匀取下层作为展开剂。
氨醛糖GMRA1,2,3化合物，经电喷雾电离质谱 （ESI/MS）分析，使用Agilent 6520四极杆-飞行时间质谱仪。该Q-TOP-MS扫描范围设定在正离子模式m/z 100~800，干燥气体为N2，流速为8mL/min，温度为350℃；雾化压力为2.07×105 Pa，毛细管电压为3500V，碎裂电压为135V，MS数据分析使用安捷伦MassHunter软件进行（B.04.00）定性，结果见图6。从质谱检测结果可以看出，在GMA102的代谢产物中，检测到了分子量分别为538（GMRA1，相对离子峰为539.3）、524（GMRA2，相对离子峰为525.3）和510（GMRA3，相对离子峰为511.3）三个化合物，分别比亲株代谢产物的三个主要离子峰的分子量多60。说明工程菌代谢产物肯定发生变化，基因gmrA与庆大霉素生物合成过程密切相关。
从庆大霉素类代谢产物的生物合成特征与规律，结合质谱分析检测结果，并参考TLC薄层层析的斑点变化，显然新型代谢产物GMRA1，2，3的极性比庆大霉素C组高，意味着羟基的数量更多；从TLC的比移值Rf变化与庆大霉素C组的变化规律完全类似，同时借助质谱的精确分子量检测结果，推定GMRA1,2,3的分子结构如图1。基于其化学结构特征，命名为氨醛糖组化合物(简称氨醛糖GMRA1,2,3；氨醛糖化合物GMRA1,2,3；或GMRA1,2,3)
4，GMRA1,2,3化合物生理活性检测
抗菌活性检测。根据中华人民共和国药典附录（国家药典委员会.中华人民共和国药典. （2010年版第二部）。北京:中国医药科技出版社，2010:附录93-98.）：抗生素微生物检定法进行检测。化合物 GMRA1,2,3具有抗菌活性（枯草芽孢杆菌63501：5ug/mL【1】；短小芽孢杆菌63202：10ug/mL【2】；藤黄微球菌28001：15ug/mL【3】）；
取培养好的阿米巴原虫，分成两组，以不加GMRA1,2,3的作为对照，添加GMRA1,2,3化合物（10ug/mL）作为阳性检测对象，37℃培养过夜（24小时），对照组原虫生长，，检测组原虫不生长，作为阳性检测结果的判断准则。结果GMRA1,2,3化合物具有抗原虫活性；
该化合物 GMRA1,2,3具有良好抗菌，抗原虫功能。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 莆田学院
福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司
<120> GMRA1,2,3化合物及其生物合成与应用
<130> 8
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 825
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgacgacat ctgtgcccga cgaccgtatc gagcaggtcg agcaggccat caccaagagc 60
cggcgctacc agacggtggc cccggccacc gtgcgacgcc tggcccgggc tgccctcgtc 120
gccacgcggg gcgacgtgcc ggacgcggtg aagcgcacca agcgcgggct gcacgagatc 180
tacggcgcct tcctgccgcc cagtccgccc aactacgcag cgttgctccg gcagctcgac 240
tccgctgtgg acgacggtga cgacgaggcg gtccgggcgg ccctgcggcg cgcgatgtcg 300
gtgcacgtgt ccacccgcga acgattgccg cacctggcgg agttctaccg ggaggtcttc 360
cgccacgtcc cccggcccaa cacgctgcgt gacctcgcct gcggcctcaa cccgctggcc 420
gccccgtgga tggggttgtc ggacgagacc gtctacgtcg cctccgacat cgacgcccgg 480
ctgatcgact tcgtggacgc cgccctgacg aggttgggcg tcgcgcaccg cacgagtgtg 540
gtcgacgtcc tcgaggaccg ccttgacgag ccgaccgacg tcacgctatt gctgaagacg 600
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tttcagaact attcacaaag ttttgagtcc caggccagag agcggtcgtg ccgcattcag 780
cgactggaga tcggcaacga gctgatttac gtcattcaga aatag 825
<210> 2
<211> 1746
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ggatgatgat ggagatgggc ttcg 24
Claims (4)
1.一株产GMRA1,2,3化合物的小单孢菌，其特征在于，所述小单孢菌命名为绛红色小单孢菌（Micromonospora purpurea ）GMA102，已于2021年1月20日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.21692。
2.一种如权利要求1所述小单孢菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）庆大霉素产生菌G1008的复壮；
（2）敲除gmrA基因，获得gmrA基因缺少工程菌——绛红色小单孢菌GMA102变种。
3.一种氨醛糖化合物GMRA1,2,3，其特征在于，所述化合物产自权利要求1所述小单孢菌，其化学结构为：
4.一种如权利要求3所述化合物在制备抗菌、抗虫、抗病毒、抗肿瘤药物中的应用。
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Cited By (1)
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| CN114369126A (zh) * | 2022-01-19 | 2022-04-19 | 福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司 | Gmra11，12，13化合物的生物合成与应用 |
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-
2021
- 2021-03-03 CN CN202110236001.6A patent/CN112725257A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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