CN112698028B - 免疫层析垫片及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种免疫层析垫片及其制备方法和应用，免疫层析垫片基材具有多个喷涂区，多个喷涂区沿免疫层析垫片基材的长度方向延伸且平行间隔分布，相邻两个喷涂区的间隔距离为1mm～10mm，各喷涂区的宽度为1mm～20mm，位于最外侧的喷涂区与免疫层析垫片基材的边缘在宽度方向上的间隔距离为0mm～4mm；在免疫层析垫片基材的各喷涂区上喷涂垫片处理液，垫片处理液的单次喷涂量为1μL/cm～10μL/cm，然后干燥。本发明在喷涂垫片处理液时，仅对免疫层析垫片的特定区域即上述喷涂区进行喷涂，同时控制一定的喷涂量，从而使处理液组分更均匀地分布在整张免疫层析垫片上，制备的免疫层析试纸条在检测时变异系数减小。

Description

免疫层析垫片及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，特别是涉及一种免疫层析垫片及其制备方法和应用。
背景技术
免疫层析技术是近十年来兴起的一种快速诊断技术，它将传统的免疫标记技术与层析技术结合起来，其原理是以微孔滤膜作为固相载体，以待测液为流动相，利用液体的毛细作用，让待测物向前流动并在检测线发生免疫反应形成免疫复合物，最后通过肉眼或者相应仪器检测，实现对待测物的定性、半定量及定量分析。免疫层析技术具有检测快速、操作简单等优点，通常在加样后10～20分钟即可得到实验结果，且不需要复杂的检测设备，符合即时检测(POCT)的形势需求，因此免疫层析试纸条获得了大规模的应用。
免疫层析试纸条一般由四个部分组成，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。其中，样品垫用来承载样品溶液，硝酸纤维素膜(NC膜)用于承载捕获抗体且为免疫反应发生的重要区域，结合垫用于承载标记抗体，吸水垫用于提供层析的动力，使溶液通过层析作用向上流动。以上四个部分在免疫层析试纸条反应的过程中都有可能因为材质、处理方法、承载量的不同等因素增加了测量结果的变异系数(CV)。目前，一般的制备工艺制备的样品垫或标记垫等免疫层析垫片在用于免疫层析试纸条进行检测时变异系数较大，稳定性较低。
发明内容
基于此，有必要提供一种能够降低变异系数的免疫层析垫片的制备方法。
一种免疫层析垫片的制备方法，包括以下步骤：
提供免疫层析垫片基材，所述免疫层析垫片基材具有多个喷涂区，多个所述喷涂区沿所述免疫层析垫片基材的长度方向延伸且平行间隔分布，相邻两个所述喷涂区的间隔距离为1mm～10mm，各所述喷涂区的宽度为1mm～20mm，位于最外侧的喷涂区与所述免疫层析垫片基材的边缘在宽度方向上的间隔距离为0mm～4mm；
在所述免疫层析垫片基材的各所述喷涂区上喷涂垫片处理液，所述垫片处理液的单次喷涂量为1μL/cm～10μL/cm，然后干燥。
免疫层析垫片例如样品垫或标记垫等需要事先经过垫片处理液等处理后使用，处理方法大多是浸泡法或者涂布法，处理后置于筛网上进行烘干或者自然风干。然而浸泡或涂布的过程中无法精确控制处理液组分的分布均匀度，烘干时也通常会有边缘效应(即中间浓度低于两侧浓度)，造成整张免疫层析垫片中承载的处理液组分的不均匀分布，继而造成不同免疫层析垫片之间的差异，导致免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)增大。此外，也可使用仪器将垫片处理液喷涂于免疫层析垫片上，然后进行烘干或风干。但是，一般的喷涂方法均是对免疫层析垫片整体进行全面的喷涂，过程中也无法精确控制处理液组分的分布均匀度，烘干时也会有边缘效应，从而造成整张免疫层析垫片中承载的处理液组分的不均匀分布，导致免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)增大。
本发明通过大量实验发现，在喷涂垫片处理液时，仅对免疫层析垫片基材的特定区域即上述各喷涂区进行喷涂，同时控制一定的喷涂量，在干燥过程中各喷涂区的处理液组分会扩散开来，从而使处理液组分更均匀地分布在整张免疫层析垫片基材上，提高了免疫层析垫片基材中承载的处理液组分的分布均匀性，降低了不同免疫层析垫片之间的差异，最终使免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)减小。
在其中一个实施例中，在所述喷涂区上喷涂所述垫片处理液的压力为0.1Mpa～0.5Mpa。
在其中一个实施例中，在所述喷涂区上喷涂所述垫片处理液的速度为10mm/s～60mm/s。
在其中一个实施例中，在所述免疫层析垫片基材的每个所述喷涂区上重复喷涂所述垫片处理液三次以上。
在其中一个实施例中，所述免疫层析垫片为样品垫，所述垫片处理液为样品垫处理液；所述样品垫处理液含有缓冲液、糖、阻断剂和防腐剂中的一种或多种。
在其中一个实施例中，所述免疫层析垫片为标记垫，所述垫片处理液为抗体标记液，所述抗体标记液含有荧光微球标记的检测抗体和荧光微球标记的质控抗体。
在其中一个实施例中，所述免疫层析垫片基材的材质为玻璃纤维、聚酯纤维膜或无纺布。
在其中一个实施例中，所述干燥的温度为30℃～60℃，所述干燥的时间为6～24小时。
本发明还提供了一种免疫层析垫片，其根据上述制备方法制备得到。
本发明还提供了一种免疫层析试纸条，包括底板和设于所述底板上的样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫，所述样品垫、所述标记垫、所述反应膜和所述吸水垫依次搭接，所述样品垫和所述标记垫中的至少一种采用上述制备方法制备得到。
附图说明
图1为本发明一实施例的免疫层析垫片基材的喷涂区示意图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
需要说明的是，当元件被称为“固定于”或“设置于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“上”、“下”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的，并不表示是唯一的实施方式。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
如图1所示，本发明一实施方式的免疫层析垫片的制备方法，包括以下步骤：
提供免疫层析垫片基材100，免疫层析垫片基材100具有多个喷涂区10，多个喷涂区10沿免疫层析垫片基材100的长度方向延伸且平行间隔分布，相邻两个喷涂区10的间隔距离为1mm～10mm，各喷涂区10的宽度为1mm～20mm，位于最外侧的喷涂区10与免疫层析垫片基材100的边缘在宽度方向上的间隔距离为0mm～4mm；
在上述免疫层析垫片基材100的各喷涂区10上喷涂垫片处理液，垫片处理液的单次喷涂量为1μL/cm～10μL/cm，然后干燥。
可以理解，长度方向和宽度方向相互垂直，例如以免疫层析垫片基材的一条边为长度方向，另一条相互垂直的边则为宽度方向。
免疫层析垫片例如样品垫或标记垫等需要事先经过垫片处理液等处理后使用，处理方法大多是浸泡法或者涂布法，处理后置于筛网上进行烘干或者自然风干。然而浸泡或涂布的过程中无法精确控制处理液组分的分布均匀度，烘干时也通常会有边缘效应(即中间浓度低于两侧浓度)，造成整张免疫层析垫片中承载的处理液组分的不均匀分布，继而造成不同免疫层析垫片之间的差异，导致免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)增大。此外，也可使用仪器将垫片处理液喷涂于免疫层析垫片上，然后进行烘干或风干。但是，一般的喷涂方法均是对免疫层析垫片整体进行全面的喷涂，过程中也无法精确控制处理液组分的分布均匀度，烘干时也会有边缘效应，从而造成整张免疫层析垫片中承载的处理液组分的不均匀分布，导致免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)增大。
本发明通过大量实验发现，在喷涂垫片处理液时，仅对免疫层析垫片基材100的特定区域即上述各喷涂区10进行喷涂，同时控制一定的喷涂量，在干燥过程中各喷涂区10的处理液组分会扩散开来，从而使处理液组分更均匀地分布在整张免疫层析垫片基材100上，提高了免疫层析垫片基材100中承载的处理液组分的分布均匀性，降低了不同免疫层析垫片基材100之间的差异，最终使免疫层析试纸条产品在检测时变异系数(CV)减小。
在一个具体示例中，相邻两个喷涂区10的间隔距离为1mm～3mm，各喷涂区10的宽度为2mm～6mm，位于最外侧的喷涂区10与免疫层析垫片基材100的边缘在宽度方向上的间隔距离为0mm～2mm，垫片处理液的单次喷涂量为2μL/cm～6μL/cm。
在一个具体示例中，在喷涂区10上喷涂垫片处理液的速度为10mm/s～60mm/s。
在一个具体示例中，在喷涂区10上喷涂垫片处理液的压力为0.1Mpa～0.5Mpa。喷涂压力过大容易击穿垫片基材，部分垫片处理液会遗留在仪器操作台上，或者干燥时遗留在筛网上，从而导致垫片基材中承载的处理液组分的不均匀分布。
在一个具体示例中，在免疫层析垫片基材100的每个喷涂区10上重复喷涂垫片处理液三次以上。如此，少量多次进行喷涂，提高均匀性，防止喷洒过程中免疫层析垫片基材100湿透，导致处理液组分遗留在仪器操作台面或筛网上。
在一个具体示例中，免疫层析垫片为样品垫，垫片处理液为样品垫处理液。可选地，样品垫处理液含有缓冲液、糖、阻断剂和防腐剂中的一种或多种。可选地，样品垫处理液为含1wt～10wt％鼠IgG、1wt％～5wt％植物凝集素、1wt％～10wt％海藻糖、0.1wt％～2wt％BSA、0.1wt％～1wt％酪蛋白、0.1wt％～0.5wt％吐温-20和0.5wt‰Proclin300的磷酸盐缓冲液。
在一个具体示例中，免疫层析垫片为标记垫，垫片处理液为抗体标记液。可选地，抗体标记液含有荧光微球标记的检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体。可选地，抗体标记液中检测抗体、第一质控抗体和标记缓冲液的体积比为100:(4～6):(800～1200)，标记缓冲液为含1wt％～10wt％海藻糖、1wt％～2wt％BSA、0.1wt％～1wt％酪蛋白、0.1wt％～0.5％吐温-20和0.5wt‰Proclin300的磷酸盐缓冲液。
在一个具体示例中，免疫层析垫片基材100的材质为玻璃纤维、聚酯纤维膜或无纺布。可选地，在干燥之后还包括以下步骤：对免疫层析垫片基材100进行裁剪。可以理解，免疫层析垫片基材100的大小可根据需要调整，干燥后再根据试纸条的大小进行裁剪即可。
在一个具体示例中，干燥的温度为30℃～60℃，干燥的时间为6～24小时，以充分干燥。
本发明一实施例的免疫层析垫片，其根据上述制备方法制备得到。
本发明一实施例的免疫层析试纸条，包括底板和设于底板上的样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫，样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫依次搭接，且样品垫和标记垫中的至少一种采用上述免疫层析垫片的制备方法制备得到。
在一个具体示例中，在底板上依次相互搭接地粘贴样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫，切割成适当宽度，即可获得免疫层析试纸条。需要说明的是，样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫之间还可以采用其他的粘贴方式，只要能实现连接即可。
在一个具体示例中，免疫层析试纸条设置于检测卡壳内，检测卡壳上设有加样孔和观察窗，加样孔与免疫层析试纸条的样品垫位置对应，观察窗与免疫层析试纸条的检测线和质控线位置对应。可选地，免疫层析试纸条的宽度为2mm～10mm。
可选地，免疫层析试纸条在温度18～26℃、湿度≤30％的环境下进行装配，在底板上依次搭接样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫，各部分搭接处不少于2mm。
优选地，底板的材质为PVC，样品垫和标记垫的材质为玻璃纤维，反应膜的材质为硝酸纤维素膜，吸水垫的材质为吸水滤纸。
可选地，反应膜上设有两条检测线和一条质控线，检测线包被有捕获抗体，检测线的划线工作液的浓度为0.1mg/mL～4.0mg/mL，划线量为0.1μL/cm～5μL/cm；质控线包被有第二质控抗体，质控线的划线工作液的浓度为0.1mg/mL～4.0mg/mL，划线量为0.1μL/cm～5μL/cm。可以理解，捕获抗体和检测抗体识别抗体的不同表位且互不干扰。优选地，捕获抗体和检测抗体均为单克隆抗体。
以下为具体实施例
实施例1
1.1荧光标记检测抗体的制备
(1)洗涤荧光胶乳微粒：取一离心管，加入荧光微球1mg，涡旋混匀，冷冻高速14000rpm离心10min，去除上清液，加入1mL标记缓冲液，即pH 6.050mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，超声混匀；
(2)微粒的活化：在步骤(1)离心管中加入10μL～100μL标记活化剂A和10μL～100μL标记活化剂B，旋转培养器上反应20min；
标记活化剂A为含50mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，标记活化剂B为含50mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液；
(3)活化终止：将活化后的荧光胶乳微粒冷冻高速14000rpm离心10min，弃上清，留取沉淀，加入1mL缓冲液，即pH 6.0 50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，超声混匀；
(4)抗体的标记：在超声重悬后的荧光胶乳微粒中加入20μg～500μg检测抗体，涡旋混匀，置于旋转培养器上反应120min；
(5)标记终止：将标记后的荧光胶乳微粒冷冻高速14000rpm离心10min，弃上清，留取沉淀；
(6)封闭：向(5)中加入1mL标记封闭液，超声2s，间歇5s，重复3次，超声完成后置于旋转培养器上反应30min。标记封闭液为含0.5％酪蛋白、0.2‰Proclin的50mM Tris三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
(7)纯化：完成上述反应后，冷冻高速14000rpm离心10min，吸去上清，留取沉淀，加入1mL标记荧光胶乳微球稀释液，超声，工作2S，间歇5S，重复3次。荧光微球稀释液含0.5％酪蛋白、5％海藻糖、0.2‰Proclin的50mM Tris三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
1.2荧光标记质控抗体的制备
(1)洗涤荧光胶乳微粒：取一离心管，加入荧光微球1mg，涡旋混匀，冷冻高速14000rpm离心10min，去除上清液，加入1mL标记缓冲液，即pH 6.050mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，超声混匀；
(2)微粒的活化：在步骤(1)离心管中加入10μL～100μL标记活化剂A和10μL～100μL标记活化剂B，旋转培养器上反应20min；
标记活化剂A为含50mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，标记活化剂B为含50mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液；
(3)活化终止：将活化后的荧光胶乳微粒冷冻高速14000rpm离心10min，弃上清，留取沉淀，加入1mL缓冲液，即pH 6.0 50mM MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，超声混匀；
(4)抗体的标记：在超声重悬后的荧光胶乳微粒中加入20～500μg兔IgG单克隆抗体，涡旋混匀，置于旋转培养器上反应120min；
(5)标记终止：将标记后的荧光胶乳微粒冷冻高速14000rpm离心10min，弃上清，留取沉淀；
(6)封闭：向(5)中加入1mL标记封闭液，超声2s，间歇5s，重复3次，超声完成后置于旋转培养器上反应30min，标记封闭液为含0.5％酪蛋白、5％海藻糖、0.2‰Proclin300的50mM Tris三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
(7)纯化：完成上述反应后，冷冻高速14000rpm离心10min，吸去上清，留取沉淀，加入1mL标记封闭液，超声，工作2S，间歇5S，重复3次。
1.3标记垫的制备
(1)将玻璃纤维裁切为(16±1)mm×(300±10)mm大小用作标记垫；
(2)将标记好的检测抗体、兔IgG单克隆抗体、标记垫缓冲液按100:5:1000(V:V:V)混合均匀，90W超声，工作2s，间歇5s，重复3次，得到抗体标记液；其中，标记垫缓冲液为含1wt％～10wt％海藻糖、1wt％～2wt％BSA、0.1wt％～1wt％酪蛋白、0.1wt％～0.5％吐温-20和0.5wt‰Proclin300的磷酸盐缓冲液。
(3)将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘1mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次以上，45℃干燥过夜(12小时)；
1.4样品垫的制备
(1)将玻璃纤维裁切为(16±1)mm×(300±10)mm大小用作样品垫；
(2)制备样品垫处理液，样品垫处理液为含1wt～10wt％鼠IgG、1wt％～5wt％植物凝集素、1wt％～10wt％海藻糖、0.1wt％～2wt％BSA、0.1wt％～1wt％酪蛋白、0.1wt％～0.5wt％吐温-20和0.5wt‰Proclin300的磷酸盐缓冲液；
(3)将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘1mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜；
1.5反应膜的制备
用含1wt％～10wt％蔗糖的PB缓冲液将捕获抗体稀释到0.1mg/mL～2.0mg/mL作为检测T线的工作液。用含1wt％～10wt％蔗糖的PB缓冲液将羊抗兔IgG稀释到0.1mg/mL～2.0mg/mL作为为质控C线的工作液。
准备PVC底板，将硝酸纤维素膜粘贴至指定区域，在硝酸纤维素膜上划T线和C线，划线量为0.1μL/cm～5μL/cm，完成后将片材放置在50℃干燥箱中干燥12～72小时。
1.6卡条的组装
在温度18～26℃、湿度≤30％的环境下进行装配，在底板上依次搭接样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫。将粘贴好的大板切成4.0mm宽的试纸条，装入塑料卡壳内，即得到检测卡。将检测卡置于铝膜袋中，加入干燥剂1包，热合封口即得到免疫层析试纸条产品。
实施例2
本实施例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘0mm，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为1μL/cm，每条喷涂区的宽度为1mm，喷涂速度为10mm/s，喷涂压力为0.1Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘0mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为1μL/cm，每条喷涂区的宽度为1mm，喷涂速度为10mm/s，喷涂压力为0.1Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
实施例3
本实施例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘4mm，且相邻喷涂区之间的距离为10mm，每条喷涂区的喷涂量为10μL/cm，每条喷涂区的宽度为20mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.5Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘4mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离为10mm，每条喷涂区的喷涂量为10μL/cm，每条喷涂区的宽度为20mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.5Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
实施例4
本实施例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘1mm，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.7Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘1mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.7Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
实施例5
本实施例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘1mm，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为20mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的三个喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘1mm，第二条喷涂区位于第一条喷涂区与第三条喷涂区之间，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为20mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
对比例1
本对比例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘8mm，相邻喷涂区之间的距离为6mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中第一条喷涂区与第三条喷涂区分别距离玻璃纤维的边缘8mm，相邻喷涂区之间的距离为6mm，每条喷涂区的喷涂量为4μL/cm，每条喷涂区的宽度为4mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
对比例2
本对比例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘1mm，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为30μL/cm，每条喷涂区的宽度为10mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的喷涂区，其中最外侧的喷涂区距离玻璃纤维对应侧的边缘1mm，且相邻喷涂区之间的距离为1mm，每条喷涂区的喷涂量为30μL/cm，每条喷涂区的宽度为10mm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
对比例3
本对比例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液喷涂于玻璃纤维的所有区域，喷涂量为4μL/cm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液喷涂于玻璃纤维的所有区域，喷涂量为4μL/cm，喷涂速度为60mm/s，喷涂压力为0.4Mpa，重复喷涂三次，45℃干燥过夜。
对比例4
本对比例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将抗体标记液涂布于玻璃纤维的所有区域，涂布量为20μL/cm，涂布速度为60mm/s，45℃干燥过夜(12小时)；
将样品垫处理液涂布于玻璃纤维的所有区域，涂布量为20μL/cm，涂布速度为60mm/s，45℃干燥过夜(12小时)；
对比例5
本对比例与实施例1基本相同，区别在于样品垫和标记垫的制备方法：
将玻璃纤维直接浸泡于抗体标记液中，然后45℃干燥过夜；
将玻璃纤维直接浸泡于样品垫处理液中，然后45℃干燥过夜。
采用上述各实施例和对比例的免疫层析试纸条检测相同的校准品溶液1与校准品溶液2(其中校准品溶液1浓度为10mg/L，校准品溶液2浓度为50mg/L)，每个浓度点平行测试10次，结果如下表。可见，采用本发明的制备方法制备免疫层析垫片，能够降低免疫层析试纸条产品在检测时变异系数，提高稳定性。
Figure BDA0002850258460000131
Figure BDA0002850258460000141
Figure BDA0002850258460000151
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种免疫层析垫片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
提供免疫层析垫片基材，所述免疫层析垫片基材具有多个喷涂区，多个所述喷涂区沿所述免疫层析垫片基材的长度方向延伸且平行间隔分布，相邻两个所述喷涂区的间隔距离为1mm~3mm，各所述喷涂区的宽度为2mm~6mm，位于最外侧的喷涂区与所述免疫层析垫片基材的边缘在宽度方向上的间隔距离为0mm~2mm；
在所述免疫层析垫片基材的各所述喷涂区上喷涂垫片处理液，所述垫片处理液的单次喷涂量为2μL/cm~6μL/cm，然后干燥；在所述喷涂区上喷涂所述垫片处理液的压力为0.1Mpa~0.5Mpa；在所述喷涂区上喷涂所述垫片处理液的速度为10mm/s~60mm/s；在所述免疫层析垫片基材的每个所述喷涂区上重复喷涂所述垫片处理液三次以上。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述免疫层析垫片为样品垫，所述垫片处理液为样品垫处理液；所述样品垫处理液含有缓冲液、糖、阻断剂和防腐剂中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述免疫层析垫片为标记垫，所述垫片处理液为抗体标记液，所述抗体标记液含有荧光微球标记的检测抗体和荧光微球标记的质控抗体。
4.根据权利要求1~3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述免疫层析垫片基材的材质为玻璃纤维、聚酯纤维膜或无纺布。
5.根据权利要求1~3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述干燥的温度为30℃~60℃，所述干燥的时间为6~24小时。
6.一种免疫层析垫片，其特征在于，根据权利要求1~5任一项所述的制备方法制备得到。
7.一种免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板和设于所述底板上的样品垫、标记垫、反应膜和吸水垫，所述样品垫、所述标记垫、所述反应膜和所述吸水垫依次搭接，所述样品垫和所述标记垫中的至少一种采用如权利要求1~5任一项所述的制备方法制备得到。
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