CN108614113A - 一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法 - Google Patents

一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法，该处理液由以下原料组成：BSA 0.5‑5％，PVP‑10 0.1‑1％，Triton X‑100 0.1‑1％，余量为0.02‑0.1mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。预处理方法为将处理液以6‑10μL/cm的量喷涂在纤维垫上，干燥，得到预处理的金标垫。本发明金标垫处理液中配方简单、不含糖，更有利于金标垫吸水及金标蛋白的释放。本发明公开的方法不同于现有将金标垫在处理液中浸泡的方法，而是直接喷涂在玻璃纤维棉上，有效改善了金标垫的均一性、吸水性及适用广泛性。

Description

一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法
技术领域
本发明涉及一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法，属于免疫层析检测技术领域。
背景技术
金标垫，是胶体金免疫层析试纸的重要组成部分，其主要是用于吸附胶体金标记的蛋白等，常用材料为玻璃纤维棉。金标垫决定了金标蛋白的活性和释放性，因此对胶体金免疫层析试纸的效果影响很大。目前，金标垫的制备方法为在纤维棉上直接喷涂或浸泡胶体金标记的蛋白，或将纤维棉采用处理液浸泡处理后，再喷涂或浸泡胶体金标记的蛋白。但在使用过程中发现，因金标垫处理方法及处理液配方不合适，往往存在金标蛋白释放慢且不完全，从而影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液及预处理方法。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液，由以下原料组成：BSA 0.5-5％，PVP-10 0.1-1％，Triton X-100 0.1-1％，余量为0.02-0.1mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
优选的，处理液由以下原料组成：BSA 5％，PVP-10 0.1％，Triton X-100 0.1％，余量为0.02mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
一种胶体金免疫层析试纸的金标垫预处理方法，将处理液以6-10μL/cm的量喷涂在纤维垫上，干燥，得到预处理的金标垫。
喷涂方法为：沿纤维垫长度方向的中心喷涂处理液，且喷涂后纤维垫上的处理液两侧边缘线与纤维垫对应侧的侧沿之间均存在间隙。
干燥的条件为：37-42℃，10-70min。
本发明有益效果：
本发明金标垫处理液中配方简单、不含糖，更有利于金标垫吸水及金标蛋白的释放。其中，BSA(牛血清白蛋白)及聚乙烯吡咯烷酮(PVP-10)能封闭纤维棉及NC膜，同时保护金标蛋白的稳定性；Na2B4O7·10H2O可以提供碱性离子环境，更利于抗原抗体反应及金标蛋白的释放；Triton X-100用于金标垫的处理可以加速金标蛋白的释放，且可以降低产品的非特异性。本发明处理液选择不加糖的原因：糖在产品存放过程中很容易结晶，会影响金标蛋白的释放，以及金颗粒在膜上的移动速度，从而影响产品的货架期及检测准确性。
本发明公开的方法不同于现有将金标垫在处理液中浸泡的方法，而是直接喷涂在玻璃纤维棉上，有效改善了金标垫的均一性、吸水性及适用广泛性。选择喷涂的方式替代浸泡预处理金标垫的原因如下：1、喷涂的方式可以保证金标垫处理的均一性，改善浸泡金标垫产生的边缘效应；2、喷涂的方式会使处理液在局部固定，能让金标垫其余部分保持蓬松的状态，增加金标垫的吸水性；3、喷涂的方式还可以打破一些试剂的使用限制，例如Tween-20因其浸泡金标垫后使垫的粘附性降低不能固定在支撑板上，从而限制了它在金标垫中的使用，而选择喷涂的方式制备的金标垫会使它的粘附性大大提高，适用性更广泛；4、喷涂的方式可以使金标蛋白喷涂后固定在一定范围内而不大面积扩散，更有利于金标蛋白的稳定及释放，大大提高胶体金免疫层析试纸的检测灵敏度及稳定性。
附图说明
图1为实施例1处理过的金标垫和未经预处理的金标垫喷涂金标蛋白的效果。
图2为对比例方法处理的金标垫情况。
图3为实施例1、对比例和未经处理的金标垫的使用情况。图中，A代表实施例1，B代表未经预处理，C代表对比例。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。如无特殊说明，本发明具体实施方式中的“％”均为质量体积百分比(g/mL)。
实施例1
一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液，由以下原料组成：BSA 5％，PVP-100.1％，Triton X-100 0.1％，余量为0.02mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
金标垫预处理方法：利用喷涂仪器将处理液以8μL/cm的量喷涂在纤维垫上，42℃烘50min，得到预处理的金标垫。
喷涂方法为：沿纤维垫长度方向的中心喷涂处理液，且喷涂后纤维垫上的处理液两侧边缘线与纤维垫对应侧的侧沿之间均存在间隙。
实施例2
一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液，由以下原料组成：BSA 3％，PVP-101％，Triton X-100 0.1％，余量为0.1mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
金标垫预处理方法：利用喷涂仪器将处理液以6μL/cm的量喷涂在纤维垫上，37℃烘70min，得到预处理的金标垫。
喷涂方法为：沿纤维垫长度方向的中心喷涂处理液，且喷涂后纤维垫上的处理液两侧边缘线与纤维垫对应侧的侧沿之间均存在间隙。
实施例3
一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液，由以下原料组成：BSA 3％，PVP-100.5％，Triton X-100 0.1％，余量为0.05mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
金标垫预处理方法：利用喷涂仪器将处理液以10μL/cm的量喷涂在纤维垫上，40℃烘10min，得到预处理的金标垫。
喷涂方法为：沿纤维垫长度方向的中心喷涂处理液，且喷涂后纤维垫上的处理液两侧边缘线与纤维垫对应侧的侧沿之间均存在间隙。
对比例
金标垫的预处理方法：将纤维垫浸泡在处理液中15min，然后取出37℃下烘干，得到预处理的金标垫。
其中，处理液由以下原料组成：BSA 3％，海藻糖8％，Tween-20 2％，余量为0.01mol/L磷酸盐缓冲液。
效果试验
1、在实施例1处理过的金标垫上喷涂金标蛋白(喷涂位置与处理液喷涂位置相同)，金标蛋白成聚集的一条线固定于金标垫上；而在未经预处理的金标垫上喷涂金标蛋白(喷涂位置与处理过的金标垫位置相同)，金标蛋白成弥散状浸满整个金标垫，说明本发明处理的金标垫可以让金标蛋白固定在一定范围内，更有利于金标蛋白的稳定及释放(结果如图1)。
2、对比例方法处理的金标垫干燥后分布不均匀，边缘出现处理物沉淀发黄，且质地较硬，因处理液中含有Tween-20无法粘附在支撑板上，在切割时容易发生金标垫脱落现象，这一缺点利用喷涂处理的方法可以改善(结果如图2)。
3、在实施例1、对比例和未经预处理的金标垫上喷涂胶体金标记的猪瘟抗原蛋白，并制成试纸检测猪瘟病毒抗体标准阳性血清，10min后观察。实施例1金标垫上金标蛋白释放率在90％以上，对比例及未经任何处理的金标垫上金标蛋白释放率均在70％以下(结果如图3)。
以上所述仅为本发明最佳的实施例，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种胶体金免疫层析试纸金标垫的处理液，其特征在于，由以下原料组成：BSA 0.5-5％，PVP-10 0.1-1％，Triton X-100 0.1-1％，余量为0.02-0.1mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
2.根据权利要求1所述的处理液，其特征在于，由以下原料组成：BSA 5％，PVP-100.1％，Triton X-100 0.1％，余量为0.02mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
3.一种胶体金免疫层析试纸的金标垫预处理方法，其特征在于，将处理液以6-10μL/cm的量喷涂在纤维垫上，干燥，得到预处理的金标垫。
4.根据权利要求3所述的金标垫预处理方法，其特征在于，处理液由以下原料组成：BSA0.5-5％，PVP-10 0.1-1％，Triton X-100 0.1-1％，余量为0.02-0.1mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
5.根据权利要求4所述的金标垫预处理方法，其特征在于，处理液由以下原料组成：BSA5％，PVP-10 0.1％，Triton X-100 0.1％，余量为0.02mol/L Na2B4O7·10H2O溶液。
6.根据权利要求3所述的金标垫预处理方法，其特征在于，喷涂方法为：沿纤维垫长度方向的中心喷涂处理液，且喷涂后纤维垫上的处理液两侧边缘线与纤维垫对应侧的侧沿之间均存在间隙。
7.根据权利要求3-6任一项所述的的金标垫预处理方法，其特征在于，干燥的条件为：37-42℃，10-70min。
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