CN101427137A

CN101427137A - 用于检测妊娠相关激素的装置和方法

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Publication number: CN101427137A
Application number: CNA2007800142316A
Authority: CN
Inventors: C·普卢默; J·鲍尔
Original assignee: HEALTH CAUSE CO Ltd; BRITISH PREGNANCY ADVISORY SER
Current assignee: HEALTH CAUSE CO Ltd; BRITISH PREGNANCY ADVISORY SER
Priority date: 2006-04-21
Filing date: 2007-04-20
Publication date: 2009-05-06
Anticipated expiration: 2027-04-20
Also published as: CN101427137B; GB0607964D0; ZA200809698B; UA96597C2

Abstract

本发明提供了一种检测并指示单个妊娠相关激素浓度(特别是hCG)的装置(10)，该装置(10)包括限定轴向流动路径的基体(16)，该基体(16)包括：(i)位于所述流动路径的上游末端的用于接收流体样品的样品接收区(18)；(ii)位于所述流动路径之内并处于所述样品接收区(18)的下游的多个检测区(22)，其中，每个检测区能够检测与相邻检测区相比浓度不同的激素；和(iii)用于记录由该装置或以前的装置所记录的之前的激素浓度的指示器(26)。所述装置尤其适于给出流产或非自然妊娠终止的指示。本发明还提供了使用该检验装置的方法。

Description

用于检测妊娠相关激素的装置和方法

技术领域

本发明涉及用于监测从妊娠期雌性哺乳动物(如人类)获取的样品中的妊娠激素(如绒膜促性腺激素，尤其是人绒膜促性腺激素(hCG))的浓度的试验试剂盒。该试验可被用于监测妊娠早期，以提供异常妊娠和正常流产的早期指示，还可指示化学诱导妊娠终止是否成功。

背景技术

人类绒膜促性腺激素(hCG)是一种可刺激孕酮分泌的蛋白质激素。研究者已经研究了超过25年并研究了在妊娠中和许多不同病理情况下(如胚胎滋养层疾病、睾丸癌，许多肿瘤)的hCG分子形式。已经发现hCG具有多种形式，包括完整hCG，不含α亚基的hCG，不含β亚基的hCG和hCG的多种片段和异构体。

hCG具有两个非共价连接的亚基(α和β)，这两个亚基共享了约10％的序列同一性并属于相同的构型。α和β亚基分别具有5和6个双硫键。

α亚基具有92个氨基酸，并通过脑下垂体和胎盘组织进行表达。β亚基(145个氨基酸)决定了完整hCG分子的生物学和免疫反应的独特性。已证明针对C末端肽开发的抗体在hCG检测中特别有效。这类抗体表现出最小程度地与，或不与黄体激素(LH)的交叉反应性。已证明这类C末端抗体在测定妊娠早期的低浓度的hCG是特别有效的。

多年来在妊娠检测中检测hCG和另一种激素(孕酮)。这类检测装置包括量杆如EP0125118，膜的方法如US4,818,677，和横向流动分析系统如GB2,204,398和EP0306772。这类装置大部分进行定性检测。就是说，它们检测hCG是否达到某一特定浓度以上从而为受试的妇女提供是否怀孕的“是/否”的答案。

通常，在孕期为大约10-12周时才能进行扫描以确定怀孕是否正常和是否已经成功。

本发明的发明人意识到存在这样一种需求，提供一种简单的，易于操作并经济有效的方法以确认妇女是否仍怀孕。这种方法还可以进行妊娠问题和自然流产的早期检测。通常这类流产在妊娠早期被漏检，导致在之后的妊娠中进行第一次扫描时的相当大的失望和痛苦。而且，本发明的发明人意识到这类检测试剂盒可被扩展成提供一种监测化学诱导妊娠终止的简单方法。

US5,786,220公开了一种辨别正常和非正常妊娠的方法。该方法依赖于测定孕酮或孕酮代谢物的浓度。浓度高于预定的阈值则表明是正常妊娠。hCG浓度可与孕酮浓度一起测定。当hCG超过一个阈值水平但低于某一值时可视的标记物被积累。当事实上个体在检测期间没有怀孕时，所显示的hCG能避免对正常妊娠的错误预测。公开的优选方法提供了两种信号，其中存在一种信号而缺失另一种信号表明正常妊娠。详述了孕酮在血液，血浆或血清中的阈值为5-50ng/ml。hCG的阈值水平是25-100mIU/ml。

本专利顺便指出，当孕酮水平保持在25ng/ml之上时hCG一天一天的连续增长可用于指示明显的妊娠。在受精后八周，hCG水平低于1000mIU/ml且孕酮为25ng/ml表明妊娠有危险。还描述了测定血清中hCG和孕酮的半定量方法。提出了五个hCG浓度：500、1000、1500、2000和2500mlU。当hCG高于2500mIU时，只有最后的线显色。可用相同的方法测定孕酮。

US2005/0130120公开了用于检测和区别在单个流体样品中不同分析物的方法。其目的在于测定样品中的多个分析物，如激素、代谢物、和来自于感染因子(如细菌和病毒)的抗原。

US 2003/1075991A公开了用于定量测定样品中0-150,000mIU/ml的hCG的基于光学侧流式基体(matrix)。该技术使用以抗-hCG探针固定化的捕获区。使用复合光束装置测定所捕获的hCG浓度。该技术用于协助早期妊娠的预测。

US2003/0003597公开了另一种可选择的测定妊娠结果的方法。该方法检测样品中hCG的初期妊娠的特定的异构体。并将该异构体和正常妊娠受试者或未怀孕受试者中的标准化量进行对比。

EP 1571451A公开了从雌性受试者获取样品并测量样品中hCG水平。从该样品能够推知确定预计到期日。所述公开的方法的一个方面是取大量样品以估计预期的分娩日期或受精日期。该方法考察hCG水平的增加并将其与预定的hCG曲线浓度相配从而确定日期。建议的复合装置包括一个微处理器以在大量的日期中进行hCG测试并记录数据。微处理器通常位于分离的读出装置中，从而使得所使用的分析装置能够测定分析物。

相反的是，本发明的申请人提出一种简单的、便宜的装置，使得早期怀孕的妇女可容易地检测出降低水平的hCG。

Barnhart K.等在《妇产科学》(obstetrics and gynaecology)(2004)，第104卷，第50-54页和第975-981页中讨论了怀孕女性的hCG的升高和自然流产之后血清中的hCG的降低。该文献指出了自然流产中hCG降低的比率，这通过一个二次方程模型来描述，hCG存在水平越高，hCG降低越快。在2天内降低比率范围为21％到35％，在7天内的降低比率为60％到84％。在2天内小于21％的降低比率或在7天内小于60％的降低比率暗示存在滞留的胚胎滋养层或异位妊娠。从而hCG水平的降低可用于指示妊娠中胎儿的流产或其它问题。

在Christian Fiala的《Improving Medical Abortion》(瑞典，斯德哥尔摩，卡罗琳斯卡医学院妇女儿童健康系，2005，ISBN 91-7140-458-9)(“ImprovingMedical Abortion”，Christian Fiala，Dept.of Woman and Child Health，Karolinska Inst.，Stockholm，Swenden，2005，ISBN 91-7140-458-9)中，提出了研究小组的进一步的研究目的是使用尿中的hCG测试来确定女性是否成功流产的鉴定方法。这表明目前还不能提供这类测试。该文献也确认了在流产一周后hCG水平降低到流产前水平的20％。

本发明的发明人认识到这可用于指示化学诱导妊娠终止。导致此类妊娠终止的药物通常被称为“堕胎药”，在许多国家在妊娠的头几周(在英国是头9周)采用这种方式终止妊娠。一种常采用的方法是利用称为米非司酮(mifepristone)(又称为Mifegyne或RU486)的药。通常是在诊所开出，然后由接受治疗者带回家。在经过多达2天的时段后，给予第二种药物前列腺素。与这种方法相关的一个问题是低剂量的治疗可能不一定有效。因此需要该治疗无效的早期指示从而可从医生得到进一步的处理和诊断，并在法定允许时间范围内进行这类处理。能够由患者在家里进行而不需要去诊所，使患者能不连续地进行，这减少了对她们来说常常是创伤的时间。

在处理之前的hCG水平的测定还提供了原始的hCG水平测定。期望hCG浓度可提供妊娠可能终止的早期指示。

发明内容

本发明的发明人认识到需要一种简单易用的，可以在家中使用的测试试剂盒。优选利用和改造传统的和已经充分证实的技术以生产一种便宜的家用分析试剂盒。它可以用作安慰剂(comfort)，以鉴测正常妊娠的hCG的逐渐升增，或更优选地鉴测自然或非自然的流产。

相应地，本发明的第一个方面提供了一种用于检测并指示样品中单个妊娠相关激素浓度的装置，该装置包括限定轴向流动路径的基体(matrix)，该基体包括：

(i)位于所述流动路径的上游末端的用于接收流体样品的样品接收区；和

(ii)位于所述流动路径之内并处于所述样品接收区的下游的多个检测区，其中，每个检测区能够检测与相邻检测区相比浓度不同的激素；该装置还包括

(iii)用于记录由该装置或别的装置所记录的激素浓度的指示器，例如，位于所述装置上或所述装置的包装上。

本发明的发明人认识到当该装置用于家庭中时，使用者可能经常会丢失他们可能记下的由最初使用的装置所记录的浓度的所有纸张。因此，他们认识到对于在后使用的装置，该装置具有用于记录在前测试的激素浓度的指示器，可以进行即时比较。这有助于减少丢失在先测试结果的可能性。

相应地，该装置包括用于记录由该装置或别装置记录的激素浓度的指示器。该指示器可以是简单的一个位置，在该位置上可以放置所述装置上的合适浓度的标记。该标记可以是通过笔记录在该装置上。可选择地，例如，所述装置可以包括模制在所述装置的包装上的一系列凸起部分。凸起部分可以是可变形的，从而可以压入适宜的浓度，引起对应于适宜浓度的凹陷。指示器可以是固定的，或者也可以是可拆卸的以使其可以被转移到另一台装置上。在所述装置的包装上还可以记录之前记录的浓度。所述指示器可包括数字编码带或彩色编码带以读数并记录水平。指示器可以任选地包含一个指示器以显示可以成功使用超声波成像时hCG已经达到的水平。

包装可以是盒子或其它容器或包装材料，所述装置在使用之前被装在所述包装中。

优选地，所述装置是一次性的。术语“一次性的”表示所述装置是一次性使用的装置。更优选地，装置使用者能够通过目测所述装置(例如，不须使用单独的读数器)而直接获得激素的量的指示。

优选地，装置可以适宜于检测流产或非自然妊娠终止相关的妊娠相关激素的降低。如下所述，本发明的申请人优化了装置以检测这种情况。

所述测试试剂盒优选适宜于检测作为怀孕进展的hCG水平的自然增加(从而给例如能够进行超声波之前的母亲一种安慰因素)，并且还能够检测胎儿流产时hCG浓度的迅速降低。

该装置优选是量杆形式。然而，试剂盒也可以以其它本领域公知的侧流装置形式。例如，侧流装置可以包括一个阱(well)，可以通过如吸管和注射器将样品放置在所述阱中。随后样品中的流体被吸入所述基体中并通过该装置。

优选检测单个妊娠相关激素。妊娠相关激素最优选是绒膜促性腺激素。然而，也可以使用孕酮。优选地，妊娠相关激素是人类的激素。然而，可想象的是待检测的激素可以来自任何哺乳动物，以追踪例如在商业上具重要意义的动物(如马类)的早期妊娠进程，或任选地追踪稀有哺乳动物的早期妊娠。

所述基体可以是通常用于免疫测定中的任何常规的固相类型，包括量杆、膜、吸收式垫、珠、微量滴定阱和测试管等。如前所显示，这类装置是本领域公知的。常见基体材料包括高密度聚乙烯片状材料、纸、硝酸纤维素、尼龙衍生物、纤维素等本领域公知的材料。这些材料可任选地和例如牛全血清白蛋白或牛血清白蛋白衍生物、动物全血清、酪蛋白或脱脂乳粉一起被制成模具。

样品接收区是基体中施用单个样品的部分。样品可以是如血、血清或尿。样品接收区可以通过例如使用针对待除去的血细胞或者激素的固定化的抗体从样品中去除血细胞(例如红细胞、白细胞)和/或不同的激素。该体系是本领域中公知的。优选地，样品是尿。

位于流动路径之内并位于样品接收区下游的多个检测区能检测浓度互不相同的激素。优选地，这些检测区提供的指示能通过视觉辨别浓度的高低。在最简单的指示形式中，表示特定浓度或水平的激素的信号(representation)、图形或数字的指示在所述装置中的窗口内显示为一种颜色。可选择地，可以使用更复杂的显示器，例如可以使用液晶指示器以给出激素水平的视觉显示。将hCG结合转化成电或LCD信号的装置本身是公知的。然而，这类基于电子的体系增加了装置成本。在一个优选的形式中，显示器可以仅仅是一系列有色的检测区。有色的检测区的数字越大，激素浓度越高。接着可将变色的检测区记录在指示器上以用于和之后的测试进行比较。

优选地，检测区各自含有使标记的妊娠相关激素受到限制的限制元素。限制元素通常是抗体或抗体的片段。优选地，这类抗体对妊娠相关激素来说是特异性的。即，它们结合待分析的激素并基本不与样品中的其它激素或其它化合物结合。

通常将限制元素固定在检测区。

本发明的发明人已经确定的一个潜在问题是标记试剂在激素浓度较低时没有特异性。本发明的本发明人已经认识到可以通过使用抗生物素蛋白-生物素体系来减少这种情况。

抗生物素蛋白(以及链菌抗生物素蛋白)最初是从蛋白中分离出来的，是公知的蛋白，其和生物素以亲和常数为10^-15结合。本发明的发明人认识到可以通过使用抗生物素蛋白-生物素结合而提高测试的灵敏度。

优选地，限制元素包括抗生物素蛋白/生物素结合对(即生物素或抗生物素蛋白)的一半，且所述装置包括连结在所述抗生物素蛋白/生物素结合对(即抗生物素蛋白或生物素)的另一半上的抗妊娠相关激素的抗体(例如抗hCG的抗体)。所述抗体可以和激素结合，并依次被捕获，并通过抗生物素蛋白/生物素结合对被结合到检测区的限制元素上。所述抗体可以在样品接收区或标记区(如下文所述)提供，并且，所述抗体在检测区中通过抗生物素蛋白/生物素结合对之间的相互作用被捕获之前在溶液中和激素结合。

术语“抗生物素蛋白”意指包括抗生物素蛋白和链菌抗生物素蛋白(最初从细菌中分离)两者。将抗生物素蛋白和链菌抗生物素蛋白固定在基体上的方法，和将抗生物素蛋白或生物素和蛋白质例如抗体结合的方法都是本领域公知的。结合抗生物素蛋白的或结合生物素的抗体优选是单克隆抗-hCG抗体。

优选地，标记试剂以标记的抗妊娠相关激素(例如抗-hCG)多克隆抗体被提供。除了优选结合在抗生物素蛋白/生物素对的另一半的抗体外，还优选这种抗体。

抗体基本上是由免疫球蛋白基因或其片段编码的多肽。抗体可以是免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD或IgE中的任意一种。抗体可以是多克隆或单克隆抗体。抗体可包括完整的免疫球蛋白或其片段。免疫球蛋白的片段包括Fab、Fv和F(ab′)2、Fab′等。抗体还可包括通过重组技术得到的嵌合抗体或其片段。适宜的抗体是本领域公知的。

优选地，在最接近所述样品接收区的检测区和位于所述样品接收区的下游并远离所述样品接收区的检测区之间测到的妊娠相关激素的浓度是增加的。即，接近样品检测区的激素浓度较低，而在样品接收区的下游并远离样品接收区的检测区检测到的妊娠相关激素浓度较高。

优选地，所述基体通常是线性的，检测区可以位于伸出基体平面的基体部分。穿过基体的样品可以通过例如毛细管作用而通过伸出基体平面的基体部分而被转移到检测区，在检测区样品和例如限制元素相遇。这有助于预防各检测区之间的例如用于检测hCG的染料的渗出(leaching)。可以使用分子阀使样品按单行方向进入检测区。

优选地，样品流经样品接收区，选择性地流经标记区，并通过较低浓度检测区，到达较高浓度检测区。

每个分离的检测区测得一个不同浓度的激素。这可简单地通过在每个检测区提供不同浓度的抗体(例如一系列稀释浓度的抗体)而实现。或者，可以因为例如hCG从样品接收区流经更远区域的能力不同而测得不同的浓度。每个检测区都可吸引标记的hCG。渐进升高量的标记的hCG可通过相邻检测区。

抗体优选固定在每个检测区。

例如，检测区可以包括用于检测400、15000和40000mIU/ml激素的检测区。假如样品仅含有约400mIU/ml的激素，那么基本上只有用于检测400mIU/ml的检测区被标记。然而，假如样品含有高于40000mIU/ml的激素，那么用于检测400、15000和40000mIU/ml的检测区都将被标记。

优选地，流动路径内设置有标记区，该标记区位于所述流动路径内并介于所述样品接收区和多个检测区之间并含有标记试剂，所述标记试剂能够结合妊娠相关激素并且在流动样品存在下是可流动，其中，每个所述检测区含有能够限制被标记的妊娠相关激素的限制元素。标记区可以和样品接收区一样位于该装置的同一部分。

优选地，所述标记试剂是附着于特定结合元件(例如能够结合妊娠相关激素的抗体)上的可检测标记。当通过标记区时，标记试剂通过流动从样品中释放出来。随后标记试剂和妊娠相关激素结合。所述附着可以是共价或非共价结合。这类标记物自身在本领域是公知的。该标记不需要仅对妊娠相关激素有特异性，因为被标记试剂所标记的其它物质可以很简单地洗出检测区，而被标记的妊娠相关激素则通过优选提供于每个检测区的限制元素被固定。然而，优选地，标记试剂优选包括结合元件，例如抗体或抗体片断，所述抗体对妊娠相关激素具有特异性。抗体或其片段，或实际上任选的结合元件被标记。这种标记使标记试剂产生与样品中妊娠相关激素的存在相关的可检测的信号。标记本身可以形成标记试剂。

标记可以是能够产生视觉可检测信号或实际上通过仪器手段可测定的信号的任何物质。标记包括酶和底物、色原体、荧光化合物和放射性标记。其它适宜的标记包括胶乳粒子或珠子、胶态金属粒子(例如金)、胶态非金属粒子(例如硒或碲)或其它本领域公知的该类标记。优选地，标记可产生肉眼视觉可测的颜色信号，不需要进一步的仪器检测。

优选地，所述装置包括6到30个分离的检测区，更优选为6-20，特别优选为8-15，或10-15，最优选为9个或12个分离的检测区。优选地，每个检测区分别能检测不同浓度的激素。

优选地，待检测的激素是hCG。优选地，所述装置可检测样品中的10-260,000mIU/ml的hCG。更优选地，可检测的hCG浓度介于40-165,000mIU/ml。

检测的hCG优选是总hCG，优选地而非限制性地是hCG单个的特定异构体。

本发明的发明人已经考虑了在下述网页上报道的经验研究的结构：americanpregnancy.org、ivfer.com、greenjournal.org、spals.com、birth.com.au、sydpath.stvincents.com.au、Human Reproduction、http://humrep.oxfordjournals.org/cgi/reprint/14/9/2375、ivfer.com/hcg_survey.htm以及fertilityplus.org/faq/hpt.html。他们比较并平均了在早期妊娠过程中观测到的hCG数据，并用它们构建了待测的激素浓度最优选布置的模型。确认的结果显示如下。

这张表上指出的一个问题是，在15天和18天之间，本发明的发明人已经确认与所预期的常规相比有一个相当大的升高。这个hCG水平的突然升高发生在排卵正常进行的点上，并且升高的hCG水平将持续约10天。这和所报道的妊娠妇女的生理症状是一致的。需要指出的是在15天和18天有约189mIU/ml到约735mIU/ml的增加，随后持续增加，到第21天超过2000mIU/ml。这个观测结果的重要性意味着介于500-1500，更优选600-1400、700-1300、800-1200、900-1100mIU/ml之间的hCG浓度可以不需要通过所述装置来检测。这减少了需要的分离的检测区的数量，或意味着可利用附加的检测区来改善检测的hCG范围。

优选地，所述测试试剂盒能够检测浓度介于约1500-2500mIU/ml的hCG。这是妊娠进行到足以可以使用阴道探针的超声波扫描确认妊娠的常见的浓度。额外地或选择性地，可以检测约4000-7000mIU/ml的浓度。4000-7000mIU/ml表示的是用腹部探针的超声波扫瞄确认妊娠的常见的早期的点。

确认待测hCG的优选浓度的额外的考虑因素是进行早期药物流产(例如临床妊娠终止)的典型的时期。典型地，这发生在妊娠35天，其中hCG水平大约为120,000mIU/ml。在英国，目前早期药物流产的最迟的点是妊娠63天。从约5周开始，即当hCG水平可能为150,000mIU/ml时，可以使用超声波检测妊娠。假如胎儿流产，不管是自然的或通过人工手段的，可以观测到hCG的量迅速地降低。

从而所述试剂盒优选应当能够检测作为妊娠进程的hCG水平的自然增加(从而给予希望确认妊娠进程顺利的期待的母亲一个安慰因素)，并且能够检测当胎儿流产时hCG浓度水平的迅速降低。

优选地，每个检测区的待检测的激素浓度可以是：40、100、400、1600、4000、8000、16000、32000、64000、96000、132000、164000mIU/ml，或更优选地为2500、7000、15000、27500、40000、55000、75000、10000mIU/ml。后一浓度范围给使用较少浓度的装置提供了尤其有利的适用范围。

附图1显示了经历了正常妊娠和随后的自发流产或妊娠终止的hCG水平的增加和降低。这些数据还以对数形式表示在附图2中。由所述装置检测的hCG优选的浓度(测试水平)已经被迭加。这说明了检测装置能够检测与正常妊娠相关的hCG的增加以及由于流产/堕胎而导致的hCG的降低。如上文所述，hCG浓度是使用来自多个公众可得到的资源中的数据而决定的。

“模型数据”是可得到的经验数据的最佳拟合线。

当测试用于检测诱导妊娠终止时，通常仅在妊娠终止之前进行测试以确定基线。通常使用分离的装置在第4天以及在第8天(假如结果显示需要)重复该测试以跟踪hCG浓度的降低。

优选地，本发明的装置还包括控制区和指示测试完成的部件，所述控制区位于所述流动路径中并处于控制部件的下游。该控制区在本领域通常所知的装置中是公知的。例如，简单地，它可以是当来自样品的湿气达到能使化学物质变得可以看到时的所述装置上的点。

优选地，所述装置是量杆形式。在这种情况下，所述装置可以包括芯子，该芯子构成用于接收样品(例如尿样)的样品接收区的至少一部分。该芯子可以由任何适宜的吸收性物质制成，例如亲水聚乙烯材料、丙烯酸纤维、滤纸或本领域所知的类似物。所述芯子能够将样品转移到所述基体的其余部分以用于测试。样品接收区或样品接收区的一部分可以包括在暴露于样品下能够改变颜色的部分。例如，可以是一旦变湿润就改变颜色的化学物质。这可用于确保同一装置不会由于失误而连续进行测定。还可以提供一个盖子，以用于在使用之前，或实际上在使用之后覆盖样品接收区从而防止样品从样品接收区洒出。

本发明的装置优选具有适宜的外壳从而避免组成该装置的器件的意外的接触。该外壳可包括一个或多个窗口用于观测检测区和/或控制区。当不使用芯子时，测试装置可以包括一个小孔或阱用于接受样品。该外壳也可以包含一个或多个脊顶的或成型的部分以使该装置能够容易地操作。该外壳可以由本领域公知的适宜的塑料材料形成。

优选地，本发明的装置以包含多个该装置的试剂盒的形式提供。这使该装置可以在妊娠期间于不同天数时使用，从而可以观测到在妊娠不同天数之间的浓度。因此，一个试剂盒优选包括2、3或更多个该装置。

该装置也可以和通常能检测25-40mIU hCG的常规的妊娠检测试剂盒组合使用。

本发明另一方面提供了一种监测妊娠的方法，该方法包括：

(i)提供第一样品，并使用本发明的装置检测妊娠相关激素的第一浓度；

(ii)提供日期晚于所述第一样品的第二样品，并使用本发明的装置检测该第二样品中的妊娠相关激素的第二浓度；和

(iii)比较所述第一浓度和所述第二浓度，从而获得妊娠进程的指示。

本发明的另一方面提供了一种指示非自然因素诱导的妊娠终止的方法，该方法包括：

(i)提供第一样品，并使用本发明的装置检测所述样品中的妊娠相关激素的第一浓度；

(ii)诱导妊娠终止，例如，通过化学诱导流产；

(iii)提供日期晚于所述第一样品的第二样品，并使用本发明的装置检测该第二样品中的妊娠相关激素的第二浓度；和

(iv)比较所述第一浓度和所述第二浓度，从而获得妊娠进程的指示。

通常在体外测定样品，例如用血、唾液或最优选是尿。

优选地，在本发明的方法中，将所述第一浓度记录在用于检测第二样品的浓度的装置上或该装置的包装上。

本发明还提供了一种监测非自然因素诱导的妊娠终止是否已经发生的方法，该方法包括对已经诱导终止妊娠的患者中得到的样品进行测定，利用一种用于检测并指示单个妊娠相关激素(特别是人绒膜促性腺激素)的浓度的装置测量妊娠相关激素的浓度，所述装置包括限定轴向流动路径的基体，该基体包括：

(i)位于所述流动路径的上游的末端的用于接收流体样品的样品接收区；和

(ii)位于所述流动路径之内并处于所述样品接收区的下游的多个检测区，其中，每个检测区能够检测与相邻检测区相比浓度不同的激素；以及

(iii)将测得的激素浓度与诱导妊娠终止之前的样品中的激素浓度或诱导妊娠终止后立即测得的样品中的激素浓度进行比较。

优选地，所述装置或其包装上包括用于记录通过由所述装置或别的装置所记录的之前的激素浓度的指示器。

所述装置可以包括本发明的装置所限定的一种或多种特征。

在妊娠终止之前测得的浓度或诱导妊娠终止后立即测得的浓度可以使用所述装置或别的测试装置获得。

优选地，妊娠相关激素浓度的降低显示出堕胎或流产已经发生。这样的变化提供了堕胎或流产已经发生的指示，从而使用者知道是否要寻找医生确定这是否已经发生。

最优选地，本发明的装置是手持式的并提供浓度的视觉指示。

优选地，在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天的间隔下进行连续测试。

也可将上文记载的抗生物素蛋白/生物素体系改造适用于传统的妊娠测试试剂盒以提高其灵敏性。

本发明的另一方面提供了一种用于检测妊娠相关激素(特别是hCG)的装置，该装置包括限定轴向流动路径的基体，该基体包括：

(ii)位于所述流动路径之内并处于所述样品接收区的下游的一个或多个检测区，所述样品接收区包括限制元素，该限制元素包括抗生物素蛋白/生物素结合对的一半，所述装置还包括：

(iii)连接在抗生物素蛋白/生物素结合对的另一半上的抗-妊娠相关激素抗体(例如抗-hCG抗体)。

所述装置的器件可以如本发明的任一方面所描述的一样的方式单独地使用或组合地使用。

所述装置可以简单地检测单个激素浓度是否已经超出。所述浓度可能是介于25-40mIU/ml。

附图说明

接下来，本发明将仅以实施例的形式进行描述，参见下述附图：

图1显示了在正常妊娠和自发流产或妊娠终止过程中典型的hCG水平，还显示了检测的hCG的优选浓度(“测试水平”)。

图2显示的是与图1相同的数据，但是是基于对数型图表的。

图3显示了本发明的装置的示意横截面。

图4显示了上文的测试试剂盒的视图。

图5显示了上文的第二测试试剂盒。

图6显示一种可供选择的装置，该装置具有从一侧沿基体延伸出去的检测区。

图7显示了优选的检测区布置的示意图。

图8显示了实施例的测试装置对不同浓度的hCG的检测。

浓度A为0，B为500、C为2500、D为7000、E为15000、F为27500、G为40000、H为55000、I为75000、J为100000mIU hCG/ml。

具体实施方式

我们首先参照图3。图3显示了一种试剂盒10，该试剂盒10包括外壳12。外壳12包括多个窗口14，以观察基体16。基体16包括样品接收区18。样品接收区18包括用于吸收液体样品(例如尿样品)的芯子。尿样品流过芯子并穿过基体16。芯子可以是任何适宜的吸收性材料(例如纸)，并优选含有一旦接触液体就改变颜色的化合物。如上所述，基体16自身可以由任何适宜的材料形成。基体16最优选由高密度聚乙烯片状材料形成。流体样品在样品接收区18中流动并穿过标记区20。标记区20提供能够结合样品中的妊娠相关激素并在流体样品存在下可流动的标记试剂。标记试剂优选能够结合hCG。典型地，标记试剂是标记有可观察的标记(例如金溶胶或其它有色的标记)的抗-hCG抗体。当妊娠相关激素(例如hCG)通过基体16时候，它们会被标记。被标记的激素随后通过一系列的检测区22。检测区22包括以不同浓度固定的抗体。抗体对于妊娠相关激素来说是特异性的。典型地，抗体是山羊或绵羊抗-人绒膜促性腺激素。抗体与有色的激素结合并使激素固定。接近样品接收区18的检测区测定的激素浓度较低。距离样品接收区18远的检测区22测得的浓度较高。当足够浓度的标记激素通过基体16到达分离的检测区时，在检测区22区域产生色带。该色带可以通过窗口14被观测到。假如只有低浓度的激素经过，从而检测区22中只有一个区域变色；而用于检测较高浓度的检测区域不会变色，因为大部分标记激素被接近样品接收区18的检测区所捕获。在渐进增加的浓度的情况下，将激活更多的检测区22。

提供了控制区24。当足量的样品进入基体16时，样品将进入控制区24。控制区24包括一旦施加湿气即可变色的适宜的化学物质。这种色带可以通过窗口14中的一个来观察。

图4显示了本发明的优选的实施方式。其利用了12个可以通过窗口14观测的检测区。检测区可检测的浓度为：40、100、400、1600、4000、8000、16000、32000、64000、96000、132000、164000mIU/ml。检测区24可通过窗口观测。也可看到提供样品接收区18的芯子和用于在使用前和使用后覆盖芯子的盖子27。该图还显示了指示器或记录区26。指示器或记录区26用于记录检测样品中的激素的浓度。在该特定情况下，从12个窗口中的11个中检测到激素。与其关联的浓度大约为132000到164000mIU/ml。这是如标记28所示的测试1。因此没有使用指示器。

该图也显示出一系列脊顶30，脊顶30凸起进入箱子12中，使该装置更易于控制和操作。

图5显示了第二试剂盒。在图5中，需要指出的是，从第一次测试中的浓度(如图4中所示)已经显示在指示器带26的点32上。第二测试显示出hCG浓度的降低。即，仅仅在窗口1-8(与其相关的浓度大约为32000到64000mIU/ml)中显示出颜色。这种激素浓度的降低表示妊娠可能有问题并事实上表示流产。这表明使用者应当寻求使用药物的建议。

两次测试的时间间隔通常是1-4天。

图6显示了一种可选择的实施方式，其中，检测区40伸出基体16的平面。如上所述，检测区优选含有妊娠相关激素的特异性抗体。检测区40优选包括与基体16的整体(bulk)的材料相同的基质材料。一部分样品优选通过毛细管作用移入检测区。可以使用本领域已知的类型的分子阀或来确保样品只按照一个方向移动并离开基体16的平面。保留的样品继续沿着基体平面到达随后的检测区40或控制区24。

这种布置的有利之处是其有助于阻止从相邻的检测区捕获的标记物的渗出(leaching)。

图7显示了优选使用的抗生物素蛋白-生物素结合对。检测区22包括与其表面结合的抗生物素蛋白33。在该图中，通过结合在生物素分子34上的单克隆抗体抗hCG抗体36将hCG 38捕获到抗生物素蛋白33上。生物素34和抗生物素蛋白33结合从而通过抗体36在检测区22限制激素38。激素38可以通过与标记有例如胶乳标记42的多克隆抗体46的结合而被检测。可选择地，生物素可以被连接到检测区，并替代地单克隆抗-hCG和抗生物素蛋白连结。被标记的多克隆抗体40、42和结合生物素的抗体34、36可以提供在所述装置的样品接收区或标记区，使这些抗体能够在样品通过基体移动到检测区之前与放置在这些区域的样品中的激素结合。

图8显示了通过测试带对不同浓度的hCG的检测。

材料和试剂：

·S&S FF60硝基纤维素膜，pt#10534315，产品批号为DH0348-1

芯子：沃特曼(Whatman)470，产品批号为FO15

结合垫：沃特曼标准(Whatman Standard)17型，该沃特曼标准17型用以下物质封闭：10mM四硼酸钠、4％山羊血清、3％BSA、1％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、0.25％特列顿(triton)X-100，并且用OD50小鼠抗hCG-金和1mg/ml小鼠IgG，(lot#2/26/07MA)喷射。

·小鼠抗hCG金结合物预先喷射到封闭的标准17(产品批号为031907MA)上。

·膜封闭缓冲液：10mM磷酸盐、0.1％BSA、0.2％PVP、4％蔗糖、0.1％叠氮化物，产品批号为032107MA

·G&L60mm层压背衬(laminate backing)

·75 x 100mm玻璃试管，用于跑测试带

·测试线：山羊抗hCG(Fitzgerald，产品批号为X0610190)

·对照线：山羊抗小鼠IgG(Quad Five，产品批号为41-4222)

·HCG标准(Fitzgerald，产品批号为015K1453)

·女性尿，批次为022807(用于稀释hHCG标准)

·Biodot Frontline仪器

方法

将25mm的FF60层压到16mm的衬靶纸上。将对照抗体(山羊抗-小鼠)在PBS(磷酸盐缓冲液)中稀释到0.5mg/ml。然后将对照的抗体灌入BioJetQuanti line No.2中并使用BioJet分配器以1μl/cm的速度(即50mm/秒)进行分散。在距所述硝基纤维素膜顶部5mm处喷洒对照线。

然后将测定线抗体稀释，将山羊抗-hCG在PBS中稀释到3mg/ml、2mg/ml和1mg/ml。将1mg/ml的抗体溶液灌入BioJet Quanti line No.1中，并使用BioJet分配器以1μl/cm(即50mm/秒)的速度进行分散。以间隔1.8mm喷洒测定线。

然后将测试线倒空并将2mg/ml的抗体溶液灌入BioJet Quanti line No.2中，并使用Frontline分配器以1μl/cm(即50mm/秒)的速度进行分散。如下述表中所示喷洒测试线。

使用3mg/ml的抗体溶液重复该操作，将卡片在37℃干燥30分钟。使用10ml的膜封闭物通过缓慢将膜拖过封闭缓冲液并使封闭缓冲液通过毛细管作用经过材料而封闭该膜。然后将该卡片置于一张纸巾上以从膜的顶部吸去多余的液体，并在37℃干燥该卡片30分钟。

然后将经剥离和干燥的结合物衬垫切割成20ml，并在膜上层压成具有2ml重叠的薄片。将芯子切割成19mm，并在膜上层压成具有2ml重叠的薄片。然后用切割器将测试卡切割成4mm的带。

为了测定所述的带，将100μl的hCG标准物用移液管移入玻璃试管的底部。将所述带和结合衬垫一起加入玻璃试管的下部，使所述带通过毛细管作用吸收测试材料。20分钟后将所述带从试管中移出并拍照。

表中的数字指的是在测试线上呈谱带的山羊抗hCG(mg/ml)。

测试线	1	2	3	4	5	6	7	8	9	总计
测试线	1	2	3	4	5	6	7	8	9	总计		1	3	2	2	2	2	2	2	2	18

结果：

浓度(mIU hCG/ml)

A-0 F-27,500

B-500 G-40,000

C-2500 H-55,000

D-7000 I-75,000

E-15000 J-100,000

结果显示于图8中。

Claims

1、一种用于检测并指示单个妊娠相关激素(特别是人绒膜促性腺激素)的浓度的装置，该装置包括限定轴向流动路径的基体，该基体包括：

(ii)位于所述流动路径之内并处于所述样品接收区的下游的多个检测区，其中，每个检测区能够检测与相邻检测区相比浓度不同的激素；该装置还包括：

(iii)用于记录由该装置或别的装置所记录的之前的激素的浓度的指示器。

2、根据权利要求1所述的装置，其中，所述指示器位于该装置上或位于该装置的包装上。

3、根据权利要求1或2所述的装置，该装置是一次性的。

4、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，该装置适宜于检测与流产或非自然妊娠终止相关的妊娠相关激素的降低。

5、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，该装置是量杆形式。

6、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，所述流动路径内设置有标记区，该标记区位于所述样品接收区和多个检测区之间并含有标记试剂，该标记试剂能够结合妊娠相关激素并在流动样品存在下是可流动的，其中，每个所述检测区中含有能够限制被标记的妊娠相关激素的限制元素。

7、根据权利要求6所述的装置，其中，所述限制元素是对所述妊娠相关激素具有特异性的抗体或抗体的片段。

8、根据权利要求6所述的装置，其中，所述限制元素包括抗生物素蛋白/生物素结合对的一半，且该装置还包括结合在所述抗生物素蛋白/生物素对的另一半上的抗妊娠相关激素的抗体。

9、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，在最接近所述样品接收区的检测区和位于所述样品接收区的下游并远离所述样品接收区的检测区之间检测到的妊娠相关激素的浓度是增加的。

10、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，该装置包括6-30个所述检测区。

11、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，该装置可检测到的样品的人绒膜促性腺激素的浓度介于10-260,000mIU/ml之间。

12、根据权利要求11所述的装置，其中，可检测到的人绒膜促性腺激素的浓度介于150-165,000mIU/ml之间。

13、根据上述项权利要求中的任意一项所述的装置，其中，所述检测区能够检测的人绒膜促性腺激素的浓度大约为：400、2500、7000、15000、27500、40000、55000、75000、100000mIU/ml。

14、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，该装置包括能够检测浓度为1500-2500mIU/ml和/或4000-7000mIU/ml的人绒膜促性腺激素的检测区。

15、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，该装置还包括控制区和用于指示测试完成的部件，所述控制区位于流动路径中并处于控制部件的下游。

16、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，其中，所述样品接收区包括芯子。

17、根据权利要求16所述的装置，其中，所述芯子暴露于样品时能够改变颜色。

18、根据上述权利要求中的任意一项所述的装置，该装置还包括用于覆盖所述样品接收区的盖子。

19、一种用于追踪妊娠进程的试剂盒，该试剂盒包括多个根据上述权利要求中的任意一项所述的装置。

20、一种监测妊娠的方法，该方法包括：

(i)提供第一样品，并检测该样品中的妊娠相关激素的第一浓度，该检测过程任选地使用权利要求1-18中的任意一项所述的装置；

(ii)提供日期晚于所述第一样品的第二样品，并使用权利要求1-18中的任意一项所述的装置检测该第二样品中的妊娠相关激素的第二浓度；和

21、一种检测非自然因素诱导的妊娠终止的方法，该方法包括：

(i)提供第一样品，并检测该样品中的妊娠相关激素的第一浓度；

(ii)诱导妊娠终止；

(iii)提供日期晚于所述第一样品的第二样品，并使用权利要求1-18中的任意一项所述的装置检测第二样品中的妊娠相关激素的第二浓度；

22、一种监测非自然因素诱导的妊娠终止是否已经发生的方法，该方法包括对从已经诱导终止妊娠的患者中得到的样品进行测定，用一种用于检测并指示单个妊娠相关激素(特别是人绒膜促性腺激素)的浓度的装置测量妊娠相关激素的浓度，所述装置包括限定轴向流动路径的基体，该基体包括：

23、根据权利要求20-22中的任意一项所述的方法，其中，将第一浓度记录在用来检测第二样品中的浓度的装置上或该装置的包装上。

24、根据权利要求20-23中的任意一项所述的方法，其中，所述妊娠相关激素浓度的降低表明已经发生流产。