CN217505882U - 一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，包括底板、样品垫板和结合垫层，硝酸纤维素膜层与吸水纸层区间设有检测显示层和质控带，检测显示层由主检测带和第二检测带组成，主检测带由鼠抗人IgG抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，第二检测带由鼠抗人IgM抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，质控带由羊抗鼠多克隆抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一质控线，有效快速结合，检测时各液体的下渗时间处于可控的状态，且液体在渗透运动地过程中能得到有效显现，充分结合，保证同一样品液体中的甲流IgG和IgM抗体的检测结果精确度高、可用于全血、血清、血浆的检测技术。

Description

一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸

技术领域

本实用新型属于免疫生物技术领域，具体涉及一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸。

背景技术

目前，现有技术中CN201610389390.5 一种肺炎支原体抗体双标记纳米时间分辨荧光免疫层析定量试纸及其制备方法肺炎支原体抗体双标记纳米时间分辨荧光免疫层析试纸，在一个免疫层析板上同时进行MP-IgM和MP-IgG定量检测，解决了现有技术中MP-IgM和MP-IgG试纸盒无法同时检测MP-IgM和MP-IgG的问题，但该甲流支原体抗体双标记纳米时间分辨荧光免疫层析定量试纸，在使用检测时依旧存在一定的不足，具体体现在，其是结合垫3表面喷涂有鼠抗人IgG抗体和鼠抗人IgM抗体，检测时各液体的下渗时间依旧处于不可控的状态，或者说控制精度依旧不理想，且液体在渗透运动地过程中并不能得到有效显现，MP-IgM和MP-IgG的检测带设置于同一结合垫上，在检测过程中会出现相同的误差，各流程环节所用的检测带液体会相互干扰，且检测灵敏度也有待进一步去提升。

检测时需加样大量的样本，样本量少，那么MP-IgM和MP-IgG不足，将导致不能被鼠抗人IgG抗体或鼠抗人IgM抗体完全捕获，处于不可控的状态，或者说控制精度依旧不理想，影响最终的检出率，导致漏检风险；MP-IgM和MP-IgG的标记物鼠抗人IgG抗体和鼠抗人IgM抗体设置于同一结合垫上，将可能导致两者互相干扰，出现非特异性反应，影响最终的准确性；检测带T线为MP抗原，包被在硝酸纤维素膜上，抗原必须封闭，否则很难包被，容易造成非特异性反应。

发明内容

本实用新型的目的在于提供一种在硝酸纤维素膜上相间隔依次设置甲流IgG、IgM的检测带以及羊抗鼠多克隆抗体的质控带，结合垫表面喷涂标记甲流抗原的包裹铕离子的时间分辨荧光微球，不仅能够在一个时间分辨荧光免疫层析试纸上同时进行甲流IgG和IgM抗体的定量检测，还可以有效将未结合的时间分辨荧光微球继续前行，到达质控线C时，针对二抗的抗体(羊抗鼠IgG)与时间分辨荧光微球上的二抗结合，在C线处出现时间分辨荧光微球的聚集，过量的时间分辨荧光微球二抗则继续向吸水块迁移，可以保证同一样品液体中的甲流IgG和IgM抗体的检测结果方便、快速、灵敏度高、定量、可用于全血、血清、血浆的检测技术的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸。

本实用新型的技术方案为：一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，包括底板、样品垫板和结合垫层，所述样品垫板和结合垫层依次搭接于底板上，所述底板上设置有硝酸纤维素膜层，所述底板一端设有吸水纸层，所述结合垫层的后端搭接于硝酸纤维素膜层前端上，所述样品垫板的后端搭接于结合垫层的前端上，所述结合垫层通过粘结层与底板相贴合粘结，所述吸水纸层的前端搭接于硝酸纤维素膜层的后端上，所述硝酸纤维素膜层与吸水纸层区间设有检测显示层和质控带，所述检测显示层由主检测带和第二检测带组成，所述质控带与主检测带、第二检测带平行轴向设置于硝酸纤维素膜层上，主检测带由鼠抗人IgG抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述第二检测带由鼠抗人IgM抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述质控带由羊抗鼠多克隆抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一质控线；所述主检测带和第二检测带设置间距范围为0.30cm～0.50cm，质控带与第二检测带之间间距设置范围为0.80cm～1.2cm。

作为本实用新型的进一步改进，所述结合垫层外表面喷涂有甲流抗原材料层，所述甲流抗原材料层偶联有镧系稀土离子的混合荧光微球。

作为本实用新型的进一步改进，所述甲流抗原材料层采用喷金划膜仪以2-5μL/cm的量将混合微球溶液喷涂于聚酯膜形成的结合垫层上。

作为本实用新型的进一步改进，所述主检测带设置长度为2.0cm～3.5cm，所述主检测带宽度范围为0.15cm～0.25cm。

作为本实用新型的进一步改进，荧光微球的直径为120nm。

作为本实用新型的进一步改进，所述硝酸纤维素膜层设置为多孔过滤载体。

作为本实用新型的进一步改进，所述镧系稀土离子为铕离子Eu3材料制成。

相比于现有技术，本实用新型具有如下优点：

所述硝酸纤维素膜层与吸水纸层区间设有检测显示层和质控带，所述检测显示层由主检测带和第二检测带组成，所述质控带与主检测带、第二检测带平行轴向设置于硝酸纤维素膜层上，主检测带由鼠抗人IgG抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述第二检测带由鼠抗人IgM抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述质控带由羊抗鼠多克隆抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一质控线；所述主检测带和第二检测带设置间距范围为0.30cm～0.50cm，质控带与第二检测带之间间距设置范围为0.80cm～1.2cm，使用喷金划膜仪喷涂于聚酯膜上，当样品垫上加入样品液后，在毛细作用下，样品液向吸水纸一段泳动，同时样本中的待测物与时间分辨荧光微球上的抗原(Eu3+-甲流抗原)形成待测物复合物(Eu3+-甲流抗原—InfluA-IgG和Eu3+-甲流抗原—InfluA-IgM)；随着层析作用，复合物向前移动，先到达识别待测物(InfluA-IgG)的检测线T1（711）处，再到达识别待测物(InfluA-IgM)的检测线T2（712）处，形成二抗-待测物-针对待测物的特异性抗体夹心复合物(Eu3+-鼠抗人IgG—InfluA-IgG—InfluA抗原和Eu3+-鼠抗人IgM—InfluA-IgM—InfluA抗原)；在T1、T2线处出现时间分辨荧光微球的聚集。未结合的时间分辨荧光微球继续前行，检测带设置长度为2.0cm～3.5cm，所述主检测带宽度范围为0.15cm～0.25cm，有效快速结合，到达质控线C时，针对二抗的抗体(羊抗鼠IgG)与时间分辨荧光微球上的二抗结合，在C线处出现时间分辨荧光微球的聚集，过量的时间分辨荧光微球二抗则继续向吸水块迁移，检测时各液体的下渗时间处于可控的状态，且液体在渗透运动地过程中能得到有效显现，硝酸纤维素膜上相间隔依次设置甲流IgG、IgM的检测带以及羊抗鼠多克隆抗体的质控带，结合垫表面喷涂标记甲流抗原的包裹铕离子的时间分辨荧光微球，不仅能够在一个时间分辨荧光免疫层析试纸上同时进行甲流IgG和IgM抗体的定量检测，还可以充分结合，保证同一样品液体中的甲流IgG和IgM抗体的检测结果精确度高、误差小，方便、快速、灵敏度高、定量、可用于全血、血清、血浆的检测技术。

本实用新型，标记的是甲流抗原，直接针对样本中甲流IgG抗体或甲流IgM抗体结合，避免了结合样本中所有的IgG抗体或IgM抗体，提高了检测的检出率；主检测带（711）、第二检测带（712）分别包被的是鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体，抗体更容易包被在硝酸纤维素膜上，两条带更能直观的区分甲流IgG感染和甲流IgM感染。

附图说明

图1为一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸的结构示意图。

图2为一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸的正面剖视图。

其中，1-底板，2-样品垫板，3-结合垫层，4-硝酸纤维素膜层，5-吸水纸层，6-粘结层，7-检测显示层，8-质控带，711-主检测带，712-第二检测带。

具体实施方式

为统一技术用语，下面详细描述本实用新型的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本实用新型，而不能理解为对本实用新型的限制。

在本实用新型的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的组合或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。另外，本实用新型实施例的描述过程中，所有图中的“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等器件位置关系，均以图1为标准。

参阅图1-2，一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，包括底板1、样品垫板2和结合垫层3，所述样品垫板2和结合垫层3依次搭接于底板1上，所述底板1上设置有硝酸纤维素膜层4，所述硝酸纤维素膜层4设置为多孔过滤载体，所述底板1一端设有吸水纸层5，所述结合垫层3的后端搭接于硝酸纤维素膜层4前端上，所述样品垫板2的后端搭接于结合垫层3的前端上，所述结合垫层3通过粘结层6与底板1相贴合粘结，所述吸水纸层5的前端搭接于硝酸纤维素膜层4的后端上，所述硝酸纤维素膜层4与吸水纸层5区间设有检测显示层7和质控带8，所述检测显示层7由主检测带711和第二检测带712组成，所述质控带8与主检测带711、第二检测带712平行轴向设置于硝酸纤维素膜层4上，主检测带711由鼠抗人IgG抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述第二检测带712由鼠抗人IgM抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述质控带8由羊抗鼠多克隆抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一质控线；

所述主检测带711和第二检测带712设置间距范围为0.30cm～0.50cm，质控带8与第二检测带712之间间距设置范围为0.80cm～1.2cm。所述主检测带711设置长度为2.0cm～3.5cm，所述主检测带711宽度范围为0.15cm～0.25cm。

所述结合垫层3外表面喷涂有甲流抗原材料层311，所述甲流抗原材料层311偶联有镧系稀土离子的混合荧光微球，所述镧系稀土离子为铕离子Eu3材料制成，荧光微球的直径为120nm。所述甲流抗原材料层311采用喷金划膜仪以2-5μL/cm的量将混合微球溶液喷涂于聚酯膜形成的结合垫层3上。

所述的荧光免疫层析定量试纸条的制备方法，包括如下步骤：

(1)原材料准备：准备符合要求的底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；

(2)标记甲流抗原的包裹铕离子的荧光微球的制备：取包裹荧光微球溶液50μL，向其中加入EDC和MES缓冲液，EDC的终浓度为0.05-0.2mg/ml，MES的终浓度为0.05-0.2mmol/L，在室温下振荡15分钟，将离心管速冷冻离心机中，18000 g/min，离心15分钟。去除上清液后，加入甲流抗原，荧光微球与甲流抗原的质量比为1:200-1：50；室温反应1小时，18000g/min离心，去除上清液后，加入质量浓度为1％的BSA溶液，至BSA终浓度为0.05mol/L，用pH为7.1-7.5的磷酸盐缓冲液至甲流抗原浓度为0.1-0.3μg/μL，待用；

(3)结合垫的制备：将步骤(2)制备荧光微球溶液，用喷金划膜仪以2-5μL/cm的量，将混合微球溶液喷涂于聚酯膜形成的结合垫上，避光的条件下于35-40℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用；

(4)硝酸纤维素膜的制备：使用0.02mol/L，pH为7.1-7.5的、含质量浓度1％海藻糖的磷酸盐缓冲液，分别稀释鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体、羊抗鼠多克隆抗体浓度最终到1μg/μL，使用喷金划膜仪以1μL/cm的量将三者分别喷于硝酸纤维素膜上。得到依次设置的检测带T1（711），检测带T2（712），质控带（C），35-40℃烘干1h，加入干燥剂封存备用；

(5)样品垫的制备：使用含质量浓度为1％BSA、0.1％酪蛋白的0.02M pH7.1- 7.5的磷酸盐缓冲液浸泡样品垫1h后，35-40℃烘干3小时；

(6)免疫层析膜条的组装：将上述步骤所制得的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次组装在底板上，即得到产品甲流IgG、IgM抗体时间分辨荧光免疫层析试纸。

原理如图1-2所示，具体如下：将包裹Eu3+的荧光微球标记甲流抗原，使用喷金划膜仪喷涂于聚酯膜上，当样品垫上加入样品液后，在毛细作用下，样品液向吸水纸一段泳动，同时样本中的待测物与时间分辨荧光微球上的抗原(Eu3+-甲流抗原)形成待测物复合物(Eu3+-甲流抗原—InfluA-IgG和Eu3+-甲流抗原—InfluA-IgM)；随着层析作用，复合物向前移动，先到达识别待测物(InfluA-IgG)的检测线T1（711）处，再到达识别待测物(InfluA-IgM)的检测线T2（712）处，形成二抗-待测物-针对待测物的特异性抗体夹心复合物(Eu3+-鼠抗人IgG—InfluA-IgG—InfluA抗原和Eu3+-鼠抗人IgM—InfluA-IgM—InfluA抗原)；在T线处出现时间分辨荧光微球的聚集。未结合的时间分辨荧光微球继续前行，到达质控线C时，针对二抗的抗体(羊抗鼠IgG)与时间分辨荧光微球上的二抗结合，在C线处出现时间分辨荧光微球的聚集，过量的时间分辨荧光微球二抗则继续向吸水块迁移。采用时间分辨荧光免疫层析分析仪读卡，T 线和C线产生相应的荧光信号，参照标准浓度曲线就可以得到待测样品溶液的浓度。

以上所述仅为本实用新型的实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是利用本实用新型说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本实用新型的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，包括底板（1）、样品垫板（2）和结合垫层（3），所述样品垫板（2）和结合垫层（3）依次搭接于底板（1）上，所述底板（1）上设置有硝酸纤维素膜层（4），所述底板（1）一端设有吸水纸层（5），所述结合垫层（3）通过粘结层（6）与底板（1）相贴合粘结，其特征在于：所述硝酸纤维素膜层（4）与吸水纸层（5）区间设有检测显示层（7）和质控带（8），所述检测显示层（7）由主检测带（711）和第二检测带（712）组成，所述质控带（8）与主检测带（711）、第二检测带（712）平行轴向设置于硝酸纤维素膜层（4）上，主检测带（711）由鼠抗人IgG抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述第二检测带（712）由鼠抗人IgM抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一检测线，所述质控带（8）由羊抗鼠多克隆抗体涂层稀释并用喷金划膜仪喷于硝酸纤维素膜层上形成一质控线；

所述主检测带（711）和第二检测带（712）设置间距范围为0.30cm～0.50cm，质控带（8）与第二检测带（712）之间间距设置范围为0.80cm～1.2cm。

2.如权利要求1所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：所述结合垫层（3）外表面喷涂有甲流抗原材料层（311），所述甲流抗原材料层（311）偶联有镧系稀土离子的混合荧光微球。

3.如权利要求2所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：所述甲流抗原材料层（311）采用喷金划膜仪以2-5μL/cm的量将混合微球溶液喷涂于聚酯膜形成的结合垫层（3）上。

4.如权利要求1所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：所述主检测带（711）设置长度为2.0cm～3.5cm，所述主检测带（711）宽度范围为0.15cm～0.25cm。

5.如权利要求1所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：荧光微球的直径为120nm。

6.如权利要求1所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：所述硝酸纤维素膜层（4）设置为多孔过滤载体。

7.如权利要求2所述的甲流抗体单标记荧光免疫层析定量试纸，其特征在于：所述镧系稀土离子为铕离子Eu3材料制成。

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