CN112684167A - 一种化学发光免疫试剂、冻干微球及其及冻干微球的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种化学发光免疫试剂，包括：磁微粒包被原料，磁微粒为固相载体，偶联抗原抗体等原料；吖啶酯标记原料，吖啶酯为发光信号标记物，标记抗原或抗体等原料。一种化学发光免疫试剂冻干微球，还包括试剂储存剂，保护试剂的稳定性以及提供免疫反应所需环境，所述试剂存储剂包括冻干保护剂、PEG20000、以及抗氧化剂。一种化学发光免疫试剂冻干微球的制备步骤如下：用磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料配制化学发光免疫试剂；添加试剂储存剂，保护试剂稳定性；液氮冻干发光免疫试剂，形成冷冻微球；将冷冻微球转入冻干机，冷冻干燥后充保护气体分装保存。本发明解决发光免疫试剂不能常温保存与运输的问题。

Description

一种化学发光免疫试剂、冻干微球及其及冻干微球的制备 方法

技术领域

本发明涉及化学发光免疫试剂的技术领域，尤其是涉及一种化学发光免疫 试剂、冻干微球及其冻干微球的制备方法。

背景技术

近年来，发光免疫试剂广泛应用在食品检测、病原体检测和癌基因诊断等 方面。但发光免疫试剂在保存和运输条件上要求苛刻，一般需要保存在2-8℃， 需要冷链运输。这些条件如果得不到满足，会对发光免疫试剂的性能造成很大 的影响，甚至导致试剂失效。

目前已有不少即时检测产品投入中国市场。现有的发光免疫试剂不易对检 测物进行分离和检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种化学发光免疫试剂及其冻干微球的制备方法，解 决现有技术中，发光免疫试剂不易对检测物进行分离和检测的问题。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种试剂，包括：

磁微粒包被原料，磁微粒为固相载体，偶联抗原抗体等原料；

吖啶标记原料，吖啶酯为发光信号标记物，标记抗原或抗体等原料；。

一种化学发光免疫试剂冻干微球的制备方法，还包括试剂储存剂，减少试 剂在冻干过程中受到多种应力损伤，保护试剂不易变性和失活，从而保护试剂 的稳定性，所述试剂存储剂包括冻干保护剂、PEG20000、以及抗氧化剂。

进一步设置为：所述冻干保护剂包括：甘露醇、海藻糖、酪蛋白、表面活 性剂、明胶、防腐剂、以及缓冲液TBS。

进一步设置为：所述冻干保护剂按质量百分数之和为100％计，各组分占质 量百分数为：甘露醇2％-10％，海藻糖5％-20％，酪蛋白0.5％-2％，表面活性剂 0.05％-0.5％、明胶0.05％-1％，以及防腐剂0.1％-1％、以及缓冲液TBS 65.5％-92.3％。

进一步设置为：所述缓冲液TBS由10-50mm TRIS-HCL和0.85％NaCL制成, 使缓冲液的pH7.0-7.4的中性环境下。

进一步设置为：所述表面活性剂为吐温20、吐温80或triton x100。

9.进一步设置为：所述抗氧化剂为硫代硫酸钠与EDTA-2Na按1：1混合使 用。

一种化学发光免疫试剂冻干微球的制备方法如下：

S1:配置化学发光免疫试剂：采用磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料配制， 其中磁微粒作为固相载体，吖啶酯作为发光信号标记物；

S2：在配制好的化学发光免疫试剂中，添加试剂储存剂，保护试剂稳定性；

S3:利用液氮冻干化学发光免疫试剂，形成冻干的珠点小球，分液冷冻样品， 形成冷冻微球，实现单人份包装测试模式；

S4：将冷冻微球转入冻干机，冷冻干燥后充保护气体分装保存，解决现有 化学发光试剂不能常温储存与运输的问题。

综上所述，本发明的有益技术效果为：

1.通过利用磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料配制化学发光免疫试剂，以 磁微粒作为固相载体，吖啶酯作为发光信号标记物，试剂与样本反应形成磁微 粒偶联原料与待测物、吖啶酯标记原料的免疫复合物，在施加磁场作用下，通 过洗涤分离出免疫复合物，复合物在激发液的作用下发光，实现对待测物的检 测；

2.通过加入试剂储存剂，对试剂进行温度、湿度、PH值环境下的保护，便 于制备完成的发光免疫试剂进行冻干，形成冻干的珠点小球，分液冷冻样品， 形成冷冻微球，实现单人份包装测试模式；

3.通过利用液氮冻干的珠点小球，分液冷冻样品，形成冷冻微球，再将冻 干微球转入冻干机，冷冻干燥后充保护气体分装保存，解决现有化学发光试剂 不能常温储存与运输的问题。

具体实施方式

为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加 清楚、明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当 理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本 发明。

本发明公开的一种化学发光免疫试剂，包括：

磁微粒包被原料，磁微粒为固相载体，偶联抗原抗体等原料；

吖啶标记原料，吖啶酯为发光信号标记物，标记抗原或抗体等原料；

一种化学发光免疫试剂冻干微球，包括：磁微粒包被原料、吖啶标记原料、 以及试剂储存剂，试剂储存剂用以减少试剂在冻干过程中收到多种应力损伤， 保护试剂不易变性和失活，保护试剂的稳定性。

试剂储存剂包括冻干保护剂、PEG20000、以及抗氧化剂。

冻干保护剂包括：甘露醇、海藻糖、酪蛋白、表面活性剂、明胶、防腐剂、 以及缓冲液TBS。

其中，

甘露醇：作为冻干填充剂，无吸湿性，冻干快，冻干过程可防止有效组分 随水蒸气一起升华，并使有效组分成形；

海藻糖：冻结过程，起到低温保护的作用，干燥脱水过程中起到脱水保护 剂的作用；

酪蛋白:蛋白保护的作用，脱水干燥过程中填充剂的作用，同时在免疫试剂 中可以起到控制本底，消除假阳的作用；

表面活性剂为吐温20、吐温80或triton x100：冻干过程降低冰水界面 张力所引起的冻结和脱水变形，复水过程中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂 的作用。同时降低免疫反应过程中非特异性反应；

明胶：冻干填充剂，同时免疫反应中可以封闭点位，增强蛋白质的的稳定 性，消除非特异性反应；

防腐剂采用Proclin 300:广泛抑菌，生物相容性好。

PEG20000：低温保护剂和脱水保护剂的作用，同时免疫反应中可起到加速 反应，提高试剂灵敏度的作用；

抗氧化剂硫代硫酸钠和EDTA-2Na：防止试剂在冻干过程及贮藏过程中发生 氧化变质。

一种化学发光免疫试剂冻干微球的制备方法如下：

S1:配置化学发光免疫试剂：采用磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料配制， 其中磁微粒作为固相载体，吖啶酯作为发光信号标记物；

S2：在配制好的化学发光免疫试剂中，添加试剂储存剂，保护试剂的稳定 性；

S3:利用液氮冻干化学发光免疫试剂，形成冻干的珠点小球，分液冷冻样品， 形成冷冻微球，实现单人份包装测试模式；

S4：将冷冻微球转入冻干机，冷冻干燥后冲保护气体分装保存，解决现有 化学发光试剂不能常温储存与运输的问题。

显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明 的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本 发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范 围之内。

Claims (8)

1.一种化学发光免疫试剂，其特征在于：包括：

磁微粒包被原料，磁微粒为固相载体，偶联抗原抗体等原料；

吖啶酯标记原料，吖啶酯为发光信号标记物，标记抗原或抗体等原料。

2.一种冻干微球，包括权利要求1所述的一种化学发光免疫试剂，其特征在于：还包括试剂储存剂，减少试剂在冻干过程中收到多种应力损伤，保护试剂不易变性和失活，从而保护试剂的稳定性，所述试剂存储剂包括冻干保护剂、PEG20000、以及抗氧化剂。

3.根据权利要求2所述的一种冻干微球，其特征在于：所述冻干保护剂包括：甘露醇、海藻糖、酪蛋白、表面活性剂、明胶、防腐剂、以及缓冲液TBS。

4.根据权利要求2所述的一种冻干微球，其特征在于：所述冻干保护剂按质量百分数之和为100％计，各组分占质量百分数为：甘露醇2％-10％，海藻糖5％-20％，酪蛋白0.5％-2％，表面活性剂0.05％-0.5％、明胶0.05％-1％，以及防腐剂0.1％-1％、以及缓冲液TBS65.5％-92.3％。

5.根据权利要求3或4所述的一种冻干微球，其特征在于：所述缓冲液TBS由10-50mmTRIS-HCL和0.85％NaCL制成,使缓冲液的pH7.0-7.4的中性环境下。

6.根据权利要求2所述的一种冻干微球，其特征在于：所述表面活性剂为吐温20、吐温80或triton x 100。

7.根据权利要求2所述的一种冻干微球，其特征在于：所述抗氧化剂为硫代硫酸钠与EDTA-2Na按1：1混合使用。

8.根据权利要求2-7任意一项所述的一种化冻干微球，其特征在于：一种化学发光免疫试剂冻干微球的制备方法如下：

S1:配置化学发光免疫试剂：采用磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料配制，其中磁微粒作为固相载体，吖啶酯作为发光信号标记物；

S2：在配制好的化学发光免疫试剂中，添加试剂储存剂，保护试剂的稳定性；

S3:利用液氮冻干化学发光免疫试剂，形成冻干的珠点小球，分液冷冻样品，形成冷冻微球，实现单人份包装测试模式；

S4：将冷冻微球转入冻干机，冷冻干燥后充保护气体分装保存，解决现有化学发光试剂不能常温储存与运输的问题。