CN114152739A - 荧光抗体冻干小球及其制备方法 - Google Patents

荧光抗体冻干小球及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114152739A
CN114152739A CN202111493215.8A CN202111493215A CN114152739A CN 114152739 A CN114152739 A CN 114152739A CN 202111493215 A CN202111493215 A CN 202111493215A CN 114152739 A CN114152739 A CN 114152739A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fluorescent antibody
freeze
solution
drying
fluorescent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111493215.8A
Other languages
English (en)
Inventor
徐陈槐
熊霞
熊顺强
罗林翔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Saiji Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Jiangxi Saiji Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Saiji Biotechnology Co ltd filed Critical Jiangxi Saiji Biotechnology Co ltd
Priority to CN202111493215.8A priority Critical patent/CN114152739A/zh
Publication of CN114152739A publication Critical patent/CN114152739A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了一种荧光抗体冻干小球，包括冻干保护溶液和荧光抗体溶液，所述荧光抗体冻干小球由所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1‑5:1，所述荧光抗体冻干小球的形状为球体状结构，使得荧光抗体冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存；而且荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题。本发明还提供了一种荧光抗体冻干小球的制备方法，制备工艺简单方便，确保了制得球状的荧光抗体冻干小球，提升了稳定性和保存寿命。

Description

荧光抗体冻干小球及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种荧光抗体冻干小球及其制备方法。
背景技术
目前国内市场中荧光抗体产品以液态为主，制备成干粉的只有少数一两家，制备成小球形态的，市场上暂时未找到。冻干成粉末状的荧光抗体存在以下缺陷：(1)易黏连管壁，复溶时会出现复溶不完全，导致结果测试不准确；(2)多个荧光抗体混合冻干成粉末状，冻干粉内，每个荧光抗体的量差异较大，不便于试剂的检测。而以液态状的荧光抗体也存在取样偏差，导致的检测结果存在偏差的问题。
公开号为CN111110638A的中国专利公开了一种偶联有蛋白的微球冻干制剂及其制备方法、保存方式，微球冻干制剂包括冻干保护剂和偶联有蛋白的微球；冻干保护剂包括溶剂和溶质，溶剂为0.1～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液；以溶剂的体积计，溶质为：动物血清：1～10％(v/v)；海藻糖：1～10％(w/v)；聚乙烯吡咯烷酮：0.2～5％(w/v)；葡聚糖：0.2～5％(w/v)；甘露醇：3％～10％(w/v)；Proclin300：0.01～0.1％(v/v)；冻干保护剂的pH值为7.4±0.5；偶联有蛋白的微球冻干制剂由冻干保护剂和偶联有蛋白的微球混合后冻干获得，其中，所述偶联有蛋白的微球中的蛋白为抗体或者抗原，例如GenScript公司的荧光抗体SOX2。但该专利采用偶联有抗体或者抗原的微球与冻干保护剂混合后冻干制剂的形态是以粉末形式存在的，冻干后的样品易黏连在冻干品的容器内壁上，不能进行固态的转移。
因此，有必要提供一种新型的荧光抗体冻干小球及其制备方法以解决现有技术中存在的上述问题。
发明内容
本发明的目的在于一种荧光抗体冻干小球及其制备方法，使得冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存；而且所述荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题。
为实现上述目的，本发明的所述荧光抗体冻干小球，包括冻干保护溶液和荧光抗体溶液，所述荧光抗体冻干小球由所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1。
本发明的所述荧光抗体冻干小球的有益效果在于：通过包括冻干保护溶液和荧光抗体溶液，所述荧光抗体冻干小球由所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合后冻干获得，两种组分均为溶液，更容易混合均匀；通过所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1，确保所述冻干保护溶液能充分与荧光抗体溶液混合，从而使得在冻干后所述冻干保护溶液能充分包覆保护荧光抗体；得到形状为球体状结构的所述荧光抗体冻干小球，使得荧光抗体冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存；而且所述荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题。
优选的，所述荧光抗体冻干小球应用于白细胞分型的检测和各白细胞亚群的百比分的检测中的至少一种。其有益效果在于：所述荧光抗体冻干小球可直接应用于白细胞分型的检测和各白细胞亚群的百比分的检测，检测方便。
优选的，所述冻干保护溶液包括：
Figure BDA0003399196910000031
其有益效果在于：有利于保障荧光抗体的稳定性，且该组分的冻干保护溶液适用于不同的荧光抗体，通用性好。
优选的，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为单一类型的荧光抗体或多种不同类型的荧光抗体。其有益效果在于：可快速实现根据实际情况进行组合使用，便于检测。
优选的，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体包括PerCP标记的鼠抗人CD3单克隆抗体、FITC标记的鼠抗人CD4单克隆抗体和PE标记的鼠抗人CD8单克隆抗体中的至少一种。其有益效果在于：可快速实现根据实际情况进行组合使用，便于检测。
优选的，所述荧光抗体冻干小球的直径为2.5-3.5mm。其有益效果在于：该直径的小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多个荧光抗体混合不均匀的问题；而且球状可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差。
优选的，所述冻干保护溶液的pH值为7.2-7.4。其有益效果在于：有效保证了荧光抗体的稳定性。
优选的，本发明还提供了一种荧光抗体冻干小球的制备方法，包括以下步骤：
S1：配制荧光抗体溶液和配制冻干保护溶液；
S2：将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液；
S3：通过冻珠设备将所述荧光抗体冻干原溶液滴至液氮中，使液滴状的所述荧光抗体冻干原溶液在液氮中冻结形成球体状结构的荧光抗体冻珠；
S4：通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球。
本发明的所述荧光抗体冻干小球的制备方法的有益效果在于：通过S1：配制荧光抗体溶液和配制冻干保护溶液，S2：将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液，两种组分均为溶液，更容易混合均匀，且确保所述冻干保护溶液能充分与荧光抗体溶液混合，从而在混合后冻干后所述冻干保护溶液能充分包覆保护荧光抗体；通过S3：通过冻珠设备将所述荧光抗体冻干原溶液滴至液氮中，使液滴状的所述荧光抗体冻干原溶液在液氮中冻结形成球体状结构的荧光抗体冻珠，即利用微量精密的液珠滴液设备，将配制好的荧光抗体冻干原溶液滴出一个小液珠滴入液氮中，使得液滴在液氮的作用下能迅速冻结形成小球状荧光抗体冻珠，制备简单，形成冻珠速度快，有利于提升荧光抗体的稳定性；通过S4：通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球，使荧光抗体冻干小球的形状为球体状结构，即转移至已设定好参数的冷冻干燥机中进行冷冻干燥，冻结的小球在冷冻干燥机中脱水并保持球形状态，从而形成了荧光抗体冻干小球，使得确保了制得球状的荧光抗体冻干小球，且提升了稳定性和保存寿命；该制备工艺简单方便，较偶联抗体或抗原的微球的制备工艺更为简便，制备得到的荧光抗体冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存，而且所述荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题，可用于白细胞分型的检测，以及用于检测各白细胞亚群的百比分。
优选的，所述步骤S3中所述冻珠设备的参数设置为：前进速度55-65mm/s，后撤速度230-280mm/s，滴液体积为9-12μL。其有益效果在于：有利于液滴在液氮的作用下能迅速冻结形成小球状荧光抗体冻珠，有利于保障荧光抗体的稳定性。
优选的，所述步骤S3中所述冻珠设备的滴液针设置在含液氮的金属杯上方，所述滴液针的外径为1.3-1.5mm，所述滴液针的出液口与所述金属杯中的液氮平面距离为5-15cm，所述滴液针的出液间隔时长为13-30秒。其有益效果在于：有利于液滴在液氮的作用下能迅速冻结形成小球状荧光抗体冻珠，有利于保障荧光抗体的稳定性。
优选的，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为多种不同类型的荧光抗体，所述步骤S2中将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液的步骤包括：
将多种不同类型的荧光抗体溶液分别各自与所述冻干保护溶液混合制备成多种荧光抗体冻干分溶液后，再将所述多种荧光抗体冻干分溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1；
或将多种不同类型的荧光抗体溶液同时与所述冻干保护溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1。其有益效果在于：可快速实现根据实际情况进行组合使用，便于检测。
优选的，所述步骤S4中通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球的步骤具体包括：
开启冷冻干燥机，并对所述冷冻干燥机预冷至预冷温度后将所述荧光抗体冻珠置于所述冷冻干燥机中；
设置所述冷冻干燥机中的搁板的温度以对所述荧光抗体冻珠依次进行第一阶段干燥、第二阶段干燥和第三阶段干燥，且将所述第一阶段干燥、所述第二阶段干燥和所述第三阶段干燥中的所述搁板的温度设置为依次上升。其有益效果在于：分阶段干燥且各阶段的搁板温度依次上升，以避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
附图说明
图1为本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法的流程示意图；
图2为本发明实施例中冻珠设备的结构示意图；
图3为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图；
图4为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+CD4+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图；
图5为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+CD8+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
为克服现有技术中存在的问题，本发明实施例提供了荧光抗体冻干小球及其制备方法，使得冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态状因取样偏差导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存；而且所述荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体冻干小球，包括冻干保护溶液和荧光抗体溶液，所述荧光抗体冻干小球由所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1，所述荧光抗体冻干小球的形状为球体状结构，使得荧光抗体冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，实现由液态到固态的转变，利于运输与保存，而且所述荧光抗体冻干小球不会与容器内壁黏连，可实现固态的转移，解决了粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多种抗体混合不均匀的问题。
本发明的所述受试样本为人的离体全血样品。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体冻干小球应用于白细胞分型的检测和各白细胞亚群的百比分的检测中的至少一种，所述荧光抗体冻干小球可直接应用于白细胞分型的检测和各白细胞亚群的百比分的检测，检测方便。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体冻干小球的直径为2.5-3.5mm。
本发明一些实施例中，所述冻干保护溶液的pH值为7.2-7.4，有效保证了荧光抗体的稳定性。
图1为本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法的流程示意图。
本发明一些实施例中，参考图1，所述荧光抗体冻干小球的制备方法，包括以下步骤：
S1：配制荧光抗体溶液和配制冻干保护溶液；
S2：将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液；
S3：通过冻珠设备将所述荧光抗体冻干原溶液滴至液氮中，使液滴状的所述荧光抗体冻干原溶液在液氮中冻结形成球体状结构的荧光抗体冻珠；
S4：通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球。使得制备得到了形状为球体状结构的荧光抗体冻干小球。
本发明一些实施例中，所述步骤S4执行之后还包括步骤：干燥后取出，装入西林瓶中，加盖密封。
本发明一些实施例中，所述步骤S1中配制冻干保护溶液的步骤包括：按预设配方配置所述冻干保护溶液，并采用0.01mol/L的盐酸溶液或0.01mol/L氢氧化钠溶液调节所述冻干保护溶液的pH值至7.2-7.4，以利于保证荧光抗体的稳定性，且适用于不同的荧光抗体，通用性好。
本发明一些实施例中，所述预设配方，即所述冻干保护溶液包括：
Figure BDA0003399196910000081
具体的，所述磷酸盐缓冲液的作用是保持溶液PH值的稳定；
所述牛血清白蛋白起到蛋白保护的作用，在脱水干燥过程中起填充剂的作用，同时在免疫试剂中可以起到控制本底，消除假阳的作用；
所述明胶，英文名为Gelatin，其作为冻干填充剂，其无吸湿性，冻干快，冻干过程可防止有效组分随水蒸气一起升华，并使有效组分成形；
所述聚乙二醇8000起低温保护剂和脱水保护剂的作用，同时免疫反应中可起到加速反应，提高试剂灵敏度的作用；
所述TritonX-100，即聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂，用于在冻干过程降低冰水界面张力所引起的冻结和脱水变形，复水过程中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用，同时降低免疫反应过程中非特异性反应。
实施例1-5冻干保护溶液的制备：按表1的组分和含量称取所述磷酸盐缓冲液、所述明胶、所述聚乙二醇8000和所述TritonX-100，加入800mL的纯化水中并搅拌溶解，量取所述牛血清白蛋白加入溶液中并混和均匀，使用纯化水，将配制的溶液体积定容至1L，最后使用0.22μm的滤膜对溶液进行过滤。
表1冻干保护溶液的组分和含量
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
磷酸盐缓冲液(mol/L) 0.01 0.025 0.05 0.075 0.1
牛血清白蛋白(g/L) 0.5 2.5 5 7.5 10
明胶(g/L) 0.1 0.25 0.5 0.75 1
聚乙二醇8000(g/L) 1 2.5 5 7.5 10
TritonX-100(mL/L) 0.5 1.25 2.5 3.75 5
pH 7.3±0.1 7.3±0.1 7.3±0.1 7.3±0.1 7.3±0.1
效果实施例1-5：选取PerCP标记的鼠抗人CD3单克隆抗体作为荧光抗体溶液。将按实施例1-5配制好的所述冻干保护剂分别与所述荧光抗体溶液按照5:1的体积比例混匀后冻干获得5组含有不同配方的冻干保护剂的所述荧光抗体冻干小球，然后在37℃高温条件下，通过加速稳定性实验考察分析这5组含有不同冻干保护剂的所述荧光抗体冻干小球的加速稳定性。
加速稳定性试验方法为：将效果实施例1-5中刚冻干的自制荧光抗体冻干小球各取3个对同一样本进行检测，记录CD3+细胞的百分比结果。然后效果实施例1-5中刚冻干的自制荧光抗体冻干小球各取至少12个放入37℃恒温箱中，在第3天、第5天、第7天、第9天分别从37℃恒温箱中将效果实施例1-5的所述自制荧光抗体冻干小球各取3个对上述同一样本进行检测，记录CD3+细胞的百分比结果。具体实验结果见表2。
其中，表2中CV指该实施例当次实验结果的变异系数，均值指该实施例当次实验结果的检测均值，P点比值指该实施例当次实验的检测均值与37℃高温加速第0天的检测均值的比值。表2所用试剂和原料均市售可得。
表2效果实施例1-5的荧光抗体冻干小球的冻干保存效果
Figure BDA0003399196910000101
参考表2，可知，效果实施例1-5的所述荧光抗体冻干小球在37℃高温保存的第3、5、7、9天，P点比值有下降趋势，但效果实施例1-5的所述荧光抗体冻干小球在第9天的P点比值均大于96％，说明在37℃加速稳定考察下保存第9天，样品稳定性仍然保持在96％以上的活性，且按实施例1-5含量配制的所述冻干保护剂制备得到的所述荧光抗体冻干小球的稳定性差异不大。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为单一类型的荧光抗体或多种不同类型的荧光抗体，可快速实现根据实际情况进行组合使用，便于检测。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体包括PerCP标记的鼠抗人CD3单克隆抗体、FITC标记的鼠抗人CD4单克隆抗体和PE标记的鼠抗人CD8单克隆抗体中的至少一种，可快速实现根据实际情况进行组合使用，便于检测。
本发明一些实施例中，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为多种不同类型的荧光抗体，所述步骤S2中将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液的步骤包括：
将多种不同类型的荧光抗体溶液分别各自与所述冻干保护溶液混合制备成多种荧光抗体冻干分溶液后，再将所述多种荧光抗体冻干分溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1；
或将多种不同类型的荧光抗体溶液同时与所述冻干保护溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1。
本发明一些实施例中，所述步骤S3中所述冻珠设备的参数设置为：前进速度55-65mm/s，后撤速度230-280mm/s，滴液体积为9-12μL，有利于液滴在液氮的作用下能迅速冻结形成小球状荧光抗体冻珠，有利于提升荧光抗体的稳定性。
本发明一些实施例中，所述步骤S3中所述冻珠设备的滴液针设置在含液氮的金属杯上方，所述滴液针的外径为1.3-1.5mm，所述滴液针的出液口与所述金属杯中的液氮平面距离为5-15cm，所述滴液针的出液间隔时长为13-30秒，有利于液滴在液氮的作用下能迅速冻结形成小球状荧光抗体冻珠，有利于提升荧光抗体的稳定性。
图2为本发明实施例中冻珠设备的结构示意图。
本发明一些具体实施例中，所述冻珠设备包括两个冻干工位、机械手、控制面板和控制按钮。参考图2，所述两个冻干工位分别为第一冻干工位1和第二冻干工位2，可以根据需求选择开关。所述机械手3固定于横向导向柱4，所述机械手3和所述横向导向柱4活动连接且垂直设置，所述机械手3可在所述横向导向柱4上沿X轴方向移动，以及沿Z轴方向移动，所述机械手3的底部设置有注液针6。所述X轴方向为沿所述横向导向柱4的长度方向，所述Z轴方向与所述X轴方向垂直。所述控制按钮包括急停按钮7、复位按钮8、启动按钮9、电源开关10和电源指示灯11。所述控制面板5设有多个功能模块。
具体的，所述功能模块包括：
目标循环次数模块，用于设置注液的循环次数，对所述第一冻干工位和所述第二冻干工位分别完成一次注液为一个循环，如果要多次注液就可以设置多次循环；
当前循环次数模块，用于显示当前完成的循环次数；
循环延时模块，用于设置多次循环的相邻循环之间的延时时长；
自动启动模块，所述启动按钮9按下直至变至绿色，表示所述冻珠设备已进入自动状态，按下所述控制面板5中的所述自动启动模块，所述冻珠设备中的所述注液针就会在所述机械手的带动下自动走位进行注液；
自动停止模块，在自动运行中有需要暂停的时候，或者有突发情况按下急停按钮7可以让所述冻珠设备停下来，处理完成后复位自动停止模块或松掉急停按钮7再按自动启动模块即可再次启动；
X轴画面模块，用于进入X轴位置参数设置画面；
Z轴画面模块，用于进入Z轴位置参数设置画面；
注液画面模块，用于进入注液泵画面参数设置画面；
报警画面模块，用于进入报警记录画面，实时报警时通过滚动条在控制面板5的触摸屏中显示，可以按下面板复位按钮进行复位，如果复位不了需要重启电源。
所述X轴画面模块包括：
第一当前位置单元，用于设置所述机械手3在X轴方向的横向导向柱4当前所在的位置；
第一点动速度单元，用于设置所述机械手3在横向导向柱4上左右移动的移动速度；
第一自动速度单位，用于设置所述机械手3在横向导向柱4上走位和自动生产时的速度；
第一等待位单位，用于设置完成动作后所述机械手3所处的位置，方便下次注液的最佳等待位置；
第一注液位单元，用于设置所述机械手3在所述第一冻干工位1注液的位置；
第二注液位单元，用于设置所述机械手3在所述第二冻干工位2注液的位置。
通过手动移动机械手，寻找合适的注液位置，根据当前位置的显示的数值，在控制面板的相应模块和单元输入适应的参数即可。
所述Z轴画面模块包括：
第二当前位置单元，用于设置所述机械手3在Z轴方向的当前所在的位置；
第二点动速度单元，用于设置所述机械手3在Z轴方向上下移动的移动速度；
第二自动速度单位，用于设置所述机械手3在Z轴方向走位和自动生产时的速度；
第二等待位单元，用于设置所述机械手3在X轴方向移动使注液针6不会碰到冻干工位的高度；
第三注液位单元，用于设置注液针6伸入所述第一冻干工位1和所述第二冻干工位2的高度，根据产品工艺设定。
所述注液画面模块包括:
注液量设置单元，用于根据实际需求输入所需的注液量，比如，需要注15UL，就输入15，按下注液启动，会注液一次，注出来的量进行称重，少了或者多了可以通过液量补偿进行修改；
前进速度设置单元，用于设置注液泵在注液时的前进速度；
后退速度设置单元，用于设置注液泵在注液时的后退速度；
回抽距离设置单元，是指在有挂液的情况下设置注液针回抽的距离，开启回抽功能时才会启用，回抽距离根据实际情况设定；
待机延时设置单元，是指在设备不生产的情况下，按下待机模式，泵会根据设定的时间进行运转，待机模式注液阀门是关闭的，不会把液体注到平台上面；
注液次数设置单元，用于设置计量泵的运行注液次数，可设置具体的圈数；
当前次数显示单元，显示计量泵当前运行的注液次数，只做参考，不可设置；
注液启动单元，是指在当前画面下，调试好参数，按下注液启动，注液泵启动一次。
本发明一些实施例中，所述步骤S4中通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球的步骤具体包括：
开启冷冻干燥机，并对所述冷冻干燥机预冷至预冷温度后将所述荧光抗体冻珠置于所述冷冻干燥机中；
设置所述冷冻干燥机中的搁板的温度以对所述荧光抗体冻珠依次进行第一阶段干燥、第二阶段干燥和第三阶段干燥，且将所述第一阶段干燥、所述第二阶段干燥和所述第三阶段干燥中的所述搁板的温度设置为依次上升，以避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
本发明一些具体实施例中，所述步骤S4中通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球的步骤具体包括：
S40：开启冷冻干燥机，并对所述冷冻干燥机预冷至预冷温度后将所述荧光抗体冻珠置于所述冷冻干燥机中；
S41：设置所述冷冻干燥机中的搁板的温度以进行第一阶段干燥；
S42：调节所述搁板的温度以进行第二阶段干燥；
S43：调节所述搁板的温度以进行第三阶段干燥。
本发明一些实施例中，所述步骤S40中的所述预冷温度为小于-20℃，避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
本发明一些实施例中，所述步骤S41中设置所述冷冻干燥机中的搁板的温度以进行第一阶段干燥的步骤具体包括：
S411：将所述搁板的温度设置为-45℃，并保持该温度4h；
S412：将所述搁板的温度设置为-35℃，并对所述冷冻干燥机抽真空后保持该温度6-8h。避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
本发明一些可能实施例中，所述步骤S412中对所述冷冻干燥机抽真空形成的真空度小于20pa，避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
本发明一些实施例中，所述步骤S42中调节所述搁板的温度以进行第二阶段干燥的步骤具体包括：
S421：将所述搁板的温度设置为-32℃，并保持该温度6-8h；
S422：将所述搁板的温度设置为-30℃，并保持该温度6-8h；
S423：将所述搁板的温度设置为-25℃，并保持该温度1-2h；
S424：将所述搁板的温度设置为-20℃，并保持该温度1-2h；
S425：将所述搁板的温度设置为-10℃，并保持该温度1-2h；
S426：将所述搁板的温度设置为0℃，并保持该温度2-8h。避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
本发明一些实施例中，所述步骤S43中调节所述搁板的温度以进行第三阶段干燥的步骤具体包括：
S431：将所述搁板的温度设置为10℃，并保持该温度1-2h；
S432：将所述搁板的温度设置为25℃，并保持该温度2-8h。避免破坏荧光抗体的性能，有利于保障荧光抗体的稳定性。
实施例6-10为荧光抗体冻干小球的制备，其中，选取PerCP标记的鼠抗人CD3单克隆抗体作为荧光抗体溶液，并将按表1中实施例1所示的冻干保护溶液的组分和含量配置的所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按表3所示的体积比例混合均匀后冻干获得所述抗原蛋白冻干小球。表3中的总溶液指所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合均匀制备而成的荧光抗体冻干原溶液。
表3冻干保护溶液与荧光抗体溶液的组成和体积比例
Figure BDA0003399196910000161
Figure BDA0003399196910000171
将实施例6-10制备得到的所述荧光抗体冻干小球在37℃高温条件下，通过加速稳定性试验考察分析这5组荧光抗体冻干小球的加速稳定性。具体实验结果见表4。对实施例6-10制得的所述荧光抗体冻干小球进行的所述加速稳定性试验方法与对效果实施例1-5制得的所述荧光抗体冻干小球进行的加速稳定性试验方法相同，在此不再赘述。
表4实施例6-10的荧光抗体冻干小球的冻干保存效果
Figure BDA0003399196910000172
参考表4，可知，实施例6-10制备得到的所述荧光抗体冻干小球在37℃高温保存的第3、5、7、9天，P点比值有下降趋势，但实施例6-10的所述荧光抗体冻干小球在第9天的P点比值均大于96％，说明在37℃加速稳定考察下保存第9天，样品稳定性仍然保持在96％以上的活性，且实施例6-10中所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比不同，制得的所述荧光抗体冻干小球的稳定性差异不大。
图3为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图；
图4为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+CD4+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图；
图5为采用本发明实施例的荧光抗体冻干小球的制备方法制备的自制冻干小球与BD试剂分别对CD3+CD8+细胞进行细胞百分比检测得到的对比结果的示意图。
现有技术中，荧光抗体试剂盒主要以液态型为主，如美国BD公司的淋巴细胞亚群检测试剂盒BDMultiTESTIMKKit，为CD3FITC、CD4APC、CD8PE、CD45PerCP组合的荧光抗体混合溶液，所述试剂盒的货号为662965，其利用流式细胞仪法，对人的离体全血样品中的T淋巴细胞的CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞进行定量检测以得到各阳性细胞的百分比。
其中，美国BD公司(Becton,DickinsonandCompany)，中文译文为碧迪医疗器械有限公司，是世界上最大的生产和销售医疗设备，医疗系统和试剂的医疗技术公司之一。
将所述效果实施例1的制备的所述荧光抗体冻干小球和对比例进行对照实验。其中，以美国BD公司的淋巴细胞亚群检测试剂盒BDMultiTESTIMKKit中的荧光抗体混合溶液作为对比例。
对比例：利用流式细胞仪法，将BD公司的所述试剂盒中的荧光抗体混合溶液分别对人的离体全血样品中的T淋巴细胞的CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞进行定量检测以得到各阳性细胞的百分比，即得到CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD8+细胞百分比，测试60个样本并记录检测结果。实验例：利用流式细胞仪法，将本发明中的所述效果实施例1的所述荧光抗体冻干小球分别对人的离体全血样品中的T淋巴细胞的CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞进行定量检测以得到各阳性细胞的百分比，即得到CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD8+细胞百分比，测试60个样本并记录检测结果。具体的检测方法为本领域的常规手段，在此不做赘述。
将对比例的检测结果和实验例的CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD8+细胞百分比分别制备校准曲线，其对比结果分别如图3、图4和图5所示。参考图3、图4和图5，BD荧光抗体混合溶液试剂和本发明的自制荧光抗体冻干小球的对比检测结果中，两者的CD3+细胞百分比、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD8+细胞百分比斜率接近与“1”，且相关系数r均大于0.975，t检验结果表明两者试剂检测结果一致，即表明本发明实施例的所述冻干小球的检测性能与对照品的检测性能一致。
虽然在上文中详细说明了本发明的实施方式，但是对于本领域的技术人员来说显而易见的是，能够对这些实施方式进行各种修改和变化。但是，应理解，这种修改和变化都属于权利要求书中所述的本发明的范围和精神之内。而且，在此说明的本发明可有其它的实施方式，并且可通过多种方式实施或实现。

Claims (12)

1.一种荧光抗体冻干小球，其特征在于，包括冻干保护溶液和荧光抗体溶液，所述荧光抗体冻干小球由所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1。
2.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述荧光抗体冻干小球应用于白细胞分型的检测和各白细胞亚群的百比分的检测中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述冻干保护溶液包括：
Figure FDA0003399196900000011
4.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为单一类型的荧光抗体或多种不同类型的荧光抗体。
5.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体包括PerCP标记的鼠抗人CD3单克隆抗体、FITC标记的鼠抗人CD4单克隆抗体和PE标记的鼠抗人CD8单克隆抗体中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述荧光抗体冻干小球的直径为2.5-3.5mm。
7.根据权利要求1所述的荧光抗体冻干小球，其特征在于，所述冻干保护溶液的pH值为7.2-7.4。
8.一种荧光抗体冻干小球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配制荧光抗体溶液和配制冻干保护溶液；
S2：将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液；
S3：通过冻珠设备将所述荧光抗体冻干原溶液滴至液氮中，使液滴状的所述荧光抗体冻干原溶液在液氮中冻结形成球体状结构的荧光抗体冻珠；
S4：通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球。
9.根据权利要求8所述的荧光抗体冻干小球的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中所述冻珠设备的参数设置为：前进速度55-65mm/s，后撤速度230-280mm/s，滴液体积为9-12μL。
10.根据权利要求8所述的荧光抗体冻干小球的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中所述冻珠设备的滴液针设置在含液氮的金属杯上方，所述滴液针的外径为1.3-1.5mm，所述滴液针的出液口与所述金属杯中的液氮平面距离为5-15cm，所述滴液针的出液间隔时长为13-30秒。
11.根据权利要求8所述的荧光抗体冻干小球的制备方法，其特征在于，所述荧光抗体溶液中的荧光抗体为多种不同类型的荧光抗体，所述步骤S2中将所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液按1:1-5:1的体积比例混合均匀，制备成荧光抗体冻干原溶液的步骤包括：
将多种不同类型的荧光抗体溶液分别各自与所述冻干保护溶液混合制备成多种荧光抗体冻干分溶液后，再将所述多种荧光抗体冻干分溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1；
或将多种不同类型的荧光抗体溶液同时与所述冻干保护溶液混合制备成所述荧光抗体冻干原溶液，且使所述冻干保护溶液与所述荧光抗体溶液的体积比例为1:1-5:1。
12.根据权利要求8所述的荧光抗体冻干小球的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中通过冷冻干燥工艺将所述荧光抗体冻珠制备成荧光抗体冻干小球的步骤具体包括：
开启冷冻干燥机，并对所述冷冻干燥机预冷至预冷温度后将所述荧光抗体冻珠置于所述冷冻干燥机中；
设置所述冷冻干燥机中的搁板的温度以对所述荧光抗体冻珠依次进行第一阶段干燥、第二阶段干燥和第三阶段干燥，且将所述第一阶段干燥、所述第二阶段干燥和所述第三阶段干燥中的所述搁板的温度设置为依次上升。
CN202111493215.8A 2021-12-08 2021-12-08 荧光抗体冻干小球及其制备方法 Pending CN114152739A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111493215.8A CN114152739A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 荧光抗体冻干小球及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111493215.8A CN114152739A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 荧光抗体冻干小球及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114152739A true CN114152739A (zh) 2022-03-08

Family

ID=80454047

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111493215.8A Pending CN114152739A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 荧光抗体冻干小球及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114152739A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118091117A (zh) * 2024-04-25 2024-05-28 江西赛基生物技术有限公司 一种用于制备冻干小球的保护剂及其应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101363846A (zh) * 2008-09-05 2009-02-11 甘肃省医学科学研究院 一种冻干人淋巴细胞表面抗原质控品及其制备方法
CN102230935A (zh) * 2011-04-13 2011-11-02 苏州博赛生物医药有限公司 高通量荧光单抗纳米微球试剂盒
CN108913758A (zh) * 2018-07-18 2018-11-30 贝南生物科技（厦门）有限公司 一种用于荧光pcr扩增试剂的冻干方法及其应用
CN108938600A (zh) * 2018-07-11 2018-12-07 南京锐利施生物技术有限公司 玻璃体内注射的对抗体药物双重保护的微球及其制备方法
CN110093403A (zh) * 2019-03-19 2019-08-06 融智生物科技（青岛）有限公司 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法
CN110452956A (zh) * 2018-05-08 2019-11-15 北京中科生仪科技有限公司 一种pcr反应试剂的冻干微球及其制备方法
CN111965344A (zh) * 2020-08-25 2020-11-20 沈阳瑞好生物科技有限公司 一种冻干磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN112378835A (zh) * 2021-01-15 2021-02-19 泛肽生物科技(浙江)有限公司 一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用
CN112684167A (zh) * 2020-12-18 2021-04-20 安邦（厦门）生物科技有限公司 一种化学发光免疫试剂、冻干微球及其及冻干微球的制备方法
CN113484258A (zh) * 2021-06-30 2021-10-08 重庆东渝中能实业有限公司 一种c-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101363846A (zh) * 2008-09-05 2009-02-11 甘肃省医学科学研究院 一种冻干人淋巴细胞表面抗原质控品及其制备方法
CN102230935A (zh) * 2011-04-13 2011-11-02 苏州博赛生物医药有限公司 高通量荧光单抗纳米微球试剂盒
CN110452956A (zh) * 2018-05-08 2019-11-15 北京中科生仪科技有限公司 一种pcr反应试剂的冻干微球及其制备方法
CN108938600A (zh) * 2018-07-11 2018-12-07 南京锐利施生物技术有限公司 玻璃体内注射的对抗体药物双重保护的微球及其制备方法
CN108913758A (zh) * 2018-07-18 2018-11-30 贝南生物科技（厦门）有限公司 一种用于荧光pcr扩增试剂的冻干方法及其应用
CN110093403A (zh) * 2019-03-19 2019-08-06 融智生物科技（青岛）有限公司 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法
CN111965344A (zh) * 2020-08-25 2020-11-20 沈阳瑞好生物科技有限公司 一种冻干磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN112684167A (zh) * 2020-12-18 2021-04-20 安邦（厦门）生物科技有限公司 一种化学发光免疫试剂、冻干微球及其及冻干微球的制备方法
CN112378835A (zh) * 2021-01-15 2021-02-19 泛肽生物科技(浙江)有限公司 一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用
CN113484258A (zh) * 2021-06-30 2021-10-08 重庆东渝中能实业有限公司 一种c-反应蛋白检测试剂冻干微球及制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118091117A (zh) * 2024-04-25 2024-05-28 江西赛基生物技术有限公司 一种用于制备冻干小球的保护剂及其应用
CN118091117B (zh) * 2024-04-25 2024-07-02 江西赛基生物技术有限公司 一种用于制备冻干小球的保护剂及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114167049A (zh) 冻干小球及其制备方法
CN114159555A (zh) 抗原蛋白冻干小球及其制备方法
US3655838A (en) Method of pelletizing analytical or immunological reagents
Chang et al. The porcine ovarian follicle: I. Selected chemical analysis of follicular fluid at different developmental stages
CN100403030C (zh) 检测苏丹红药物的酶联免疫试剂盒及方法
CN111965344B (zh) 一种冻干磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
Young et al. Radioimmunoassay of secretin in human serum
CN114152739A (zh) 荧光抗体冻干小球及其制备方法
Ahmed et al. Internalization and degradation of human chorionic gonadotropin in ovine luteal cells: kinetic studies
CN106324243A (zh) 一种胶体金免疫层析试纸条及其制备和使用方法
CN112378835B (zh) 一种标准聚苯乙烯绝对计数微球冻干品及其制备方法、应用
Catt et al. A solid phase disc radioimmunoassay for human growth hormone
CN102768278B (zh) 用于检测β-受体兴奋剂的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒
CN101307303B (zh) 检测盐酸克伦特罗残留的试剂盒及其制备方法
CN111856044A (zh) 全血型冻干粉免疫抑制剂质量控制物质及其制备方法和应用
CN116794333A (zh) 一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方及其制备方法
US4712310A (en) Co-spray technique
CN108918851A (zh) 一种拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法
CN100501407C (zh) 检测阿维菌素类药物的酶联免疫试剂盒及方法
US4100268A (en) Preparation of gentamicin sensitized particles for agglutination tests
CN100476439C (zh) 一种检测动物源性食品中氟喹酮类药物的酶联免疫试剂盒
CN109142335A (zh) 空间邻近化学发光法检测降钙素原的试剂盒及其检测方法
Wright et al. A method for the immunoassay of insulin
CN116183903A (zh) 一种用于AlphaLISA检测的冻干保护剂组合物及其制备方法
CN113092767B (zh) 一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination