CN112645745A - 一种含哈茨木霉的微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种含哈茨木霉的微生物菌剂及其制备方法，所述的制备方法包括菌种培养、物料预处理、混料制剂。本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，在施用过程中，植物吸收利用率高，相比于现有微生物菌剂，施用量降低10‑15%；相同贮藏环境条件下，贮藏期相比于现有微生物菌剂延长12‑20个月；长期贮藏后，相比于新微生物菌剂，性能下降率小于1%；施用一年后，土壤含水率为25.1‑28.4%，土壤孔隙度为28‑33%；制备工艺过程科学，产品质量稳定，能够适用于大规模、工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及微生物菌剂领域，尤其是涉及一种含哈茨木霉的微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
土传病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害。土地的连作,复种指数的提高,及施肥的不合理使得土传病害近年来不断加剧的原因。猝倒病、根腐病、立枯病是作物苗期的主要病害，一般使得少数幼苗死亡，造成缺行断垄，甚至造成幼苗成片倒伏死亡的严重后果。
目前人们对于土传病害还没有形成用药预防的习惯,一般是病害发生后才使用药剂兑水喷雾防治，但其往往由于失去了最佳的防治时期，而导致作物受损。
复合微生物菌剂肥料是指采用特定的微生物与营养物质复合而成，能提供、保持或改善植物营养，提高农产品产量或改善农产品品质的活体微生物制品。
复合微生物菌剂肥料中采用的木霉(Trichoderma)是一类重要的植物病害生防真菌，隶属于半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Hyphomycetales)、丝孢科(Hyphomycetaceae)，广泛分布于土壤、腐烂的木材和其它基物中。
哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)在生物防治中的作用在国内外多有研究。其具有竞争作用、重寄生作用、抗生素作用、植物生长调节作用。主要用于防治田间和温室内蔬菜、果树、花卉等农作物的白粉病、灰霉病、霜霉病、叶霉病、叶斑病等叶部真菌性病害。目前已经有采用哈茨木霉菌制备微生物菌剂的技术情报见诸报道。
申请人经研究发现，目前现有的含哈茨木霉的微生物菌剂在施用过程中，植物吸收利用率较低，需要的施加量较大；同时现有的含哈茨木霉的微生物菌剂的稳定性不佳，对贮藏环境要求苛刻，不利于贮藏；进一步的，现有的含哈茨木霉的微生物菌剂，对土壤的改善效果极其有限，功能性单一。
中国专利CN105211106A公开了一种含哈茨木霉菌和腐殖酸的颗粒剂，其采用哈茨木霉菌、噁霉灵及腐殖酸混合制备所述的颗粒剂，以解决农业生产中，长期以单一药剂进行病害防治，病菌容易产生抗性，防治效果不理想的问题。但是，该专利所述的颗粒剂稳定性不佳，对贮藏环境要求苛刻，不利于长期贮藏；同时，其对土壤的改善效果有限。
中国专利CN109503282A公开了一种农用微生物菌剂及其制备工艺，其采用复合菌剂与生物有机质等原料配合的方式，制得所述的微生物菌剂。但是，该专利的农用微生物菌剂稳定性不佳，对贮藏环境要求苛刻，不利于长期贮藏；进一步的，其采用室外半坑式发酵堆制生物有机质的方式，其发酵过程受室外调节的综合影响，发酵产品质量不稳定，由此导致产品性能不稳定，不适宜大规模、工业化生产。
发明内容
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供含哈茨木霉的微生物菌剂及其制备方法，以实现以下发明目的：
（1）提高含哈茨木霉的微生物菌剂在施用过程中，植物的吸收利用率，减少菌剂施用量；
（2）提高含哈茨木霉的微生物菌剂的稳定性，能够长期贮藏；
（3）提高含哈茨木霉的微生物菌剂对土壤的改善效果。
为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：
一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，包括菌种培养、物料预处理、混料制剂；
所述菌种培养，包括菌种活化、菌种混合、菌种发酵；
所述菌种活化，将哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌分别投入接种至葡萄糖琼脂培养基内，在20-30℃，30-50RPM转速条件下，摇床培养50-60h，制得各活化菌种。
进一步的，所述菌种混合，将所述活化后的哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌按预定量混合，制得混合菌种；
所述哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌的浓度比为12-15:3-5:2-3:3-5:1-2:1-2；
所述菌种发酵，将所述混合菌种按11-13％的接种量投入至发酵培养基，起始发酵温度为32℃，发酵湿度为75%，氧浓度为26.3%，发酵5-7d，收集发酵液；
然后将所述发酵液在7000-8000RPM条件下离心分离5-8min，分离收集菌体；然后将菌体喷于淀粉上，含水量为12%，制得复合菌粉；
所述菌种发酵过程中，2d后发酵湿度降低至70%，4d后发酵湿度降低至65%。
进一步的，所述物料预处理，包括微波处理、冻干、破碎、混料、平衡、发酵；
所述微波处理，将预定份数的腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮分别置于微波环境下，进行处理；
所述微波处理，前2-5min，微波强度为3KW；后3-5min，微波强度为5KW；
所述腐殖酸，含有的活性官能团（总酸基）大于8meq/g。
进一步的，所述冻干，将所述微波处理后的各原料置于-30℃环境下，预冷冻12~16h；然后降温至-70℃，抽真空至-0.05~-0.04MPa，进行升华干燥1~2h；然后升温至30~40℃，抽真空至-0.02MPa，保持负压3~5h；完成冻干步骤；
所述破碎，将所述冻干后制得的各原料研磨破碎成100-200目的颗粒，混合，混匀后制得功能性复合颗粒；
所述腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮的重量份比值为10-20:5-7:2-3:5-7:5-7:2-3:3-5。
进一步的，所述平衡，将所述破碎制得的功能性复合颗粒置入密闭容器内，加压至10-15MPa，保压10-15min后，0.5s内泄压至常压；然后，将所述功能性复合颗粒，在氮气气氛下，温度为60-70℃，湿度为65%条件下，静置2-3h，制得平衡后的功能性复合颗粒。
进一步的，所述发酵，将所述平衡制得的功能性复合颗粒，投入至5-10倍体积的去离子水中，然后投入葡萄糖、尿素、KH2PO4，混合均匀；投入预定份数的嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌，30-100RPM搅拌1-2h，静置发酵5-7d；滤除固体物，制得功能性复合颗粒发酵液；
所述功能性复合颗粒：葡萄糖：尿素：KH2PO4的重量份比值为50:7:5:3；
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的加入量为2wt%；
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的浓度比为1:3:2:1。
进一步的，所述混料制剂，将预定份数的复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖混合均匀，喷浆挤压造粒成0.8-1.2mm的颗粒，制得本发明所述的含哈茨木霉的微生物菌剂。
进一步的，所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖的重量份比值为20-30:40-50:10-12:2-3:1-2:1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：2-3:5-9:1-2。
进一步的，所述活性炭，为经鼠尾胶原改性的活性炭，制备方法为：
取大鼠或小鼠的鼠尾，采用3-5倍去离子水淋洗2次，单次淋洗时间为2min；然后将所述鼠尾投入至1.5-2倍体积的医用酒精中浸渍20-30min；取出所述浸渍后鼠尾的尾腱，投入至20倍重量份的0.1%醋酸溶液中，在冰水浴条件下，震荡分解2-3d；分离出上层清液，制得所述鼠尾胶原；
然后采用去离子水将所述鼠尾胶原稀释至原有体积的50倍，混匀后，投入0.5-0.8倍体积的活性炭，静置30-40min，滤出所述活性炭，烘干，制得所述活性炭；
所述活性炭，四氯化碳吸附值大于105%，水分含量小于3%，比表面积700-900 m2/g，孔径为10-20nm。
进一步的，所述复合氨基酸，缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸；
所述缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸的重量份比值为5:2:1:5；
所述海带提取物，岩藻黄质大于50%；
所述复合胶，为采用普鲁兰酶将瓜尔胶的多糖侧链半乳糖含量控制在22-25%范围内，然后与2倍重量份的黄原胶混合均匀，制备而成。
所述一种含哈茨木霉的微生物菌剂，通过前述方法制得。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，在施用过程中，植物吸收利用率高，相比于现有微生物菌剂，施用量降低10-15%，有效节约生产成本。
（2）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，稳定性好，相同贮藏环境条件下，贮藏期相比于现有微生物菌剂延长12-20个月。
（3）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，稳定性好，长期贮藏后，相比于新微生物菌剂，性能下降率小于1%。
（4）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，具有良好的土壤改善效果，施用一年后，土壤含水率为25.1-28.4%，土壤孔隙度为28-33%。
（5）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，对葡萄的霜霉病防效达77.5%，对番茄的灰霉病防效达81.7%。
（6）本发明的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，工艺过程科学，产品质量稳定，能够适用于大规模、工业化生产。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现说明本发明的具体实施方式。
实施例1
一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，包括菌种培养、物料预处理、混料制剂。
所述菌种培养，包括菌种活化、菌种混合、菌种发酵。
所述菌种活化，将哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌分别投入接种至葡萄糖琼脂培养基内，在20℃，30RPM转速条件下，摇床培养50h，制得各活化菌种。
所述哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum），保藏编号为CGMCC 5.1233。
所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏编号为CGMCC1.12939。
所述地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），保藏编号为CGMCC1.7677。
所述绿色木霉菌（Trichoderma viride），保藏编号为CGMCC3.7339。
所述微紫青霉菌（Penicillium janthinellum），保藏编号为CGMCC3.17857。
所述维多利亚维希尼克氏酵母菌（Vishniacozyma victoriae），保藏编号为CGMCC2.5589。前述各菌种均能从市售渠道获得。
所述菌种混合，将所述活化后的哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌按预定量混合，制得混合菌种。
所述哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌的浓度比为12:5:3:5:1:1。
所述菌种发酵，将所述混合菌种按11％的接种量投入至发酵培养基，起始发酵温度为32℃，发酵湿度为75%，氧浓度为26.3%，发酵5d，收集发酵液。将所述发酵液在7000RPM条件下离心分离5min，分离收集菌体；然后将菌体喷于淀粉上，含水量为12%，制得复合菌粉。
发酵过程中，2d后发酵湿度降低至70%，4d后发酵湿度降低至65%。同时，每24h搅拌一次，搅拌转速30RPM，搅拌时间2min。
所述物料预处理，包括微波处理、冻干、破碎、混料、平衡、发酵。
所述微波处理，将预定份数的腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮分别置于微波环境下，进行处理。
所述微波处理，微波频率为2.2GHz。
所述微波处理，前2min，微波强度为3KW；后3min，微波强度为5KW。
所述腐殖酸，含有的活性官能团（总酸基）大于8meq/g。
所述冻干，将所述微波处理后的各原料置于-30℃环境下，预冷冻12h；然后降温至-70℃，抽真空至-0.04MPa，进行升华干燥1h；然后升温至30℃，抽真空至-0.02MPa，保持负压3h；完成冻干步骤。
所述破碎混合，将所述冻干后制得的各原料在2000RPM条件下，研磨破碎成100目的颗粒；然后将破碎后的各原料颗粒混合，混匀后制得功能性复合颗粒。
所述腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮的重量份比值为10:7:3:7:7:2:3。
所述平衡，将所述功能性复合颗粒置入密闭容器内，加压至10MPa，保压10min后，0.5s内泄压至常压；然后，将所述功能性复合颗粒，在氮气气氛下，温度为60℃，湿度为65%条件下，静置2h，制得平衡后的功能性复合颗粒。
所述发酵，将所述平衡后的功能性复合颗粒，投入至8倍体积的去离子水中，然后投入葡萄糖、尿素、KH2PO4，混合均匀；投入预定份数的嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌，30RPM搅拌1h，静置发酵5d；滤除固体物，制得功能性复合颗粒发酵液。
所述功能性复合颗粒：葡萄糖：尿素：KH2PO4的重量份比值为50:7:5:3。
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的加入量为2wt%。
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的浓度比为1:3:2:1。
所述混料制剂，将预定份数的所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖混合均匀，喷浆挤压造粒成0.8mm的颗粒，制得本发明所述的含哈茨木霉的微生物菌剂。
所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖的重量份比值为20:50:10:2:1:2:1:1:2:2:2:2:5:1。
所述活性炭，为经鼠尾胶原改性的活性炭。
所述改性活性炭的制备方法为：取大鼠或小鼠的鼠尾，采用5倍去离子水淋洗2次，单次淋洗时间为2min；然后将所述鼠尾投入至2倍体积的医用酒精中浸渍20min；取出所述浸渍后鼠尾的尾腱，投入至20倍重量份的0.1%醋酸溶液中，在冰水浴条件下，震荡分解2d；分离出上层清液，制得所述鼠尾胶原。然后采用去离子水将所述鼠尾胶原稀释至原有体积的50倍，混匀后，投入0.8倍体积的活性炭，静置40min，滤出所述活性炭，烘干，制得所述改性活性炭。
所述活性炭，四氯化碳吸附值大于105%，水分含量小于3%，比表面积800m2/g，孔径为13nm。
所述复合氨基酸，缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。
所述缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸的重量份比值为5:2:1:5。
所述海带提取物，岩藻黄质大于50%。
所述复合胶，为采用普鲁兰酶将瓜尔胶的多糖侧链半乳糖含量控制在22-25%范围内，然后与2倍重量份的黄原胶混合均匀，制备而成。
经检测，本实施例的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，相比于现有微生物菌剂，施用量降低10%；相同贮藏环境条件下，贮藏期相比于现有微生物菌剂延长15个月；长期贮藏后，相比于新微生物菌剂，性能下降率小于1%；施用一年后，土壤含水率为25.1%，土壤孔隙度为30%；对葡萄的霜霉病防效为76.5%，对番茄的灰霉病防效为80.2%。
实施例2
一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，包括菌种培养、物料预处理、混料制剂。
所述菌种培养，包括菌种活化、菌种混合、菌种发酵。
所述菌种活化，将哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌分别投入接种至葡萄糖琼脂培养基内，在25℃，50RPM转速条件下，摇床培养60h，制得各活化菌种。
所述哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum），保藏编号为CGMCC 5.1233。
所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏编号为CGMCC1.12939。
所述地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），保藏编号为CGMCC1.7677。
所述绿色木霉菌（Trichoderma viride），保藏编号为CGMCC3.7339。
所述微紫青霉菌（Penicillium janthinellum），保藏编号为CGMCC3.17857。
所述维多利亚维希尼克氏酵母菌（Vishniacozyma victoriae），保藏编号为CGMCC2.5589。前述各菌种均能从市售渠道获得。
所述菌种混合，将所述活化后的哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌按预定量混合，制得混合菌种。
所述哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌的浓度比为15:3:2:5:2:2。
所述菌种发酵，将所述混合菌种按13％的接种量投入至发酵培养基，起始发酵温度为32℃，发酵湿度为75%，氧浓度为26.3%，发酵7d，收集发酵液。将所述发酵液在8000RPM条件下离心分离8min，分离收集菌体；然后将菌体喷于淀粉上，含水量为12%，制得复合菌粉。
发酵过程中，2d后发酵湿度降低至70%，4d后发酵湿度降低至65%。同时，每24h搅拌一次，搅拌转速50RPM，搅拌时间5min。
所述物料预处理，包括微波处理、冻干、破碎、混料、平衡、发酵。
所述微波处理，将预定份数的腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮分别置于微波环境下，进行处理。
所述微波处理，微波频率为2.5GHz。
所述微波处理，前3min，微波强度为3KW；后5min，微波强度为5KW。
所述腐殖酸，含有的活性官能团（总酸基）大于8meq/g。
所述冻干，将所述微波处理后的各原料置于-30℃环境下，预冷冻15h；然后降温至-70℃，抽真空至-0.05MPa，进行升华干燥2h；然后升温至35℃，抽真空至-0.02MPa，保持负压5h；完成冻干步骤。
所述破碎混合，将所述冻干后制得的各原料在3000RPM条件下，研磨破碎成200目的颗粒；然后将破碎后的各原料颗粒混合，混匀后制得功能性复合颗粒。
所述腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮的重量份比值为15:7:3:5:5:3:5。
所述平衡，将所述功能性复合颗粒置入密闭容器内，加压至15MPa，保压15min后，0.5s内泄压至常压；然后，将所述功能性复合颗粒，在氮气气氛下，温度为65℃，湿度为65%条件下，静置3h，制得平衡后的功能性复合颗粒。
所述发酵，将所述平衡后的功能性复合颗粒，投入至6倍体积的去离子水中，然后投入葡萄糖、尿素、KH2PO4，混合均匀；投入预定份数的嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌，60RPM搅拌1h，静置发酵7d；滤除固体物，制得功能性复合颗粒发酵液。
所述功能性复合颗粒：葡萄糖：尿素：KH2PO4的重量份比值为50:7:5:3。
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的加入量为2wt%。
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的浓度比为1:3:2:1。
所述混料制剂，将预定份数的所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖混合均匀，喷浆挤压造粒成1.0mm的颗粒，制得本发明所述的含哈茨木霉的微生物菌剂。
所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖的重量份比值为30:40:12:2:2:2:1:1:1:1:2:3:9:2。
所述活性炭，为经鼠尾胶原改性的活性炭。
所述改性活性炭的制备方法为：取大鼠或小鼠的鼠尾，采用5倍去离子水淋洗2次，单次淋洗时间为2min；然后将所述鼠尾投入至2倍体积的医用酒精中浸渍30min；取出所述浸渍后鼠尾的尾腱，投入至20倍重量份的0.1%醋酸溶液中，在冰水浴条件下，震荡分解3d；分离出上层清液，制得所述鼠尾胶原。然后采用去离子水将所述鼠尾胶原稀释至原有体积的50倍，混匀后，投入0.65倍体积的活性炭，静置40min，滤出所述活性炭，烘干，制得所述改性活性炭。
所述活性炭，四氯化碳吸附值大于105%，水分含量小于3%，比表面积800m2/g，孔径为12nm。
所述复合氨基酸，缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。
所述缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸的重量份比值为5:2:1:5。
所述海带提取物，岩藻黄质大于50%。
所述复合胶，为采用普鲁兰酶将瓜尔胶的多糖侧链半乳糖含量控制在22-25%范围内，然后与2倍重量份的黄原胶混合均匀，制备而成。
经试验，本实施例的一种含哈茨木霉的微生物菌剂，相比于现有微生物菌剂，施用量降低15%；相同贮藏环境条件下，贮藏期相比于现有微生物菌剂延长20个月；长期贮藏后，相比于新微生物菌剂，性能下降率小于1%；施用一年后，土壤含水率为28.4%，土壤孔隙度为33%；对葡萄的霜霉病防效达77.5%，对番茄的灰霉病防效达81.7%。
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括菌种培养、物料预处理、混料制剂；
所述菌种培养，包括菌种活化、菌种混合、菌种发酵；
所述菌种活化，将哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌分别投入接种至葡萄糖琼脂培养基内，在20-30℃，30-50RPM转速条件下，摇床培养50-60h，制得各活化菌种。
2.根据权利要求1所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述菌种混合，将所述活化后的哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌按预定量混合，制得混合菌种；
所述哈茨木霉菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、绿色木霉菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌的浓度比为12-15:3-5:2-3:3-5:1-2:1-2；
所述菌种发酵，将所述混合菌种按11-13％的接种量投入至发酵培养基，起始发酵温度为32℃，发酵湿度为75%，氧浓度为26.3%，发酵5-7d，收集发酵液；
然后将所述发酵液在7000-8000RPM条件下离心分离5-8min，分离收集菌体；然后将菌体喷于淀粉上，含水量为12%，制得复合菌粉；
所述菌种发酵过程中，2d后发酵湿度降低至70%，4d后发酵湿度降低至65%。
3.根据权利要求1所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述物料预处理，包括微波处理、冻干、破碎、混料、平衡、发酵；
所述微波处理，将预定份数的腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮分别置于微波环境下，进行处理；
所述微波处理，前2-5min，微波强度为3KW；后3-5min，微波强度为5KW；
所述腐殖酸，含有的活性官能团（总酸基）大于8meq/g。
4.根据权利要求3所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述冻干，将所述微波处理后的各原料置于-30℃环境下，预冷冻12~16h；然后降温至-70℃，抽真空至-0.05~-0.04MPa，进行升华干燥1~2h；然后升温至30~40℃，抽真空至-0.02MPa，保持负压3~5h；完成冻干步骤；
所述破碎，将所述冻干后制得的各原料研磨破碎成100-200目的颗粒，混合，混匀后制得功能性复合颗粒；
所述腐殖酸、方解石、海藻、稻壳、秸秆、蒲公英叶片、菩提果果皮的重量份比值为10-20:5-7:2-3:5-7:5-7:2-3:3-5。
5.根据权利要求3所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述平衡，将所述破碎制得的功能性复合颗粒置入密闭容器内，加压至10-15MPa，保压10-15min后，0.5s内泄压至常压；然后，将所述功能性复合颗粒，在氮气气氛下，温度为60-70℃，湿度为65%条件下，静置2-3h，制得平衡后的功能性复合颗粒。
6.根据权利要求3所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵，将所述平衡制得的功能性复合颗粒，投入至5-10倍体积的去离子水中，然后投入葡萄糖、尿素、KH2PO4，混合均匀；投入预定份数的嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌，30-100RPM搅拌1-2h，静置发酵5-7d；滤除固体物，制得功能性复合颗粒发酵液；
所述功能性复合颗粒：葡萄糖：尿素：KH2PO4的重量份比值为50:7:5:3；
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的加入量为2wt%；
所述嗜酸乳杆菌、微紫青霉菌、维多利亚维希尼克氏酵母菌、枯草芽孢杆菌的浓度比为1:3:2:1。
7.根据权利要求1所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述混料制剂，将预定份数的复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖混合均匀，喷浆挤压造粒成0.8-1.2mm的颗粒，制得本发明所述的含哈茨木霉的微生物菌剂。
8.根据权利要求7所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述复合菌粉、功能性复合颗粒发酵液、活性炭、复合氨基酸、复合胶、海带提取物、硝酸铜、硝酸钙、硫酸镁、硫酸锌、磷酸二氢钾、葡萄糖酸内酯、尿素、甘露聚糖的重量份比值为20-30:40-50:10-12:2-3:1-2:1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：2-3:5-9:1-2。
9.根据权利要求7所述的一种含哈茨木霉的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述活性炭，为经鼠尾胶原改性的活性炭，制备方法为：
取大鼠或小鼠的鼠尾，采用3-5倍去离子水淋洗2次，单次淋洗时间为2min；然后将所述鼠尾投入至1.5-2倍体积的医用酒精中浸渍20-30min；取出所述浸渍后鼠尾的尾腱，投入至20倍重量份的0.1%醋酸溶液中，在冰水浴条件下，震荡分解2-3d；分离出上层清液，制得所述鼠尾胶原；
然后采用去离子水将所述鼠尾胶原稀释至原有体积的50倍，混匀后，投入0.5-0.8倍体积的活性炭，静置30-40min，滤出所述活性炭，烘干，制得所述活性炭；
所述活性炭，四氯化碳吸附值大于105%，水分含量小于3%，比表面积700-900 m2/g，孔径为10-20nm。
10.一种含哈茨木霉的微生物菌剂，其特征在于， 根据权利要求1至权利要求9任一项所述的制备方法制得。
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