CN109879678A - 一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用，该复合微生物菌肥由枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌按重量比(1～2)∶(1～2)∶(1～3)复配而成，枯草芽胞杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌的菌浓均为6x109cfu/g。本发明公开的复合微生物菌肥对柿树角斑病防治效果好、无化学残留且不易产生抗药性，还能促进柿树增产20％以上。
Description
技术领域
本发明涉及肥料生产技术领域，更具体的说是涉及一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用。
背景技术
柿树角斑病属半知菌亚门，丛梗孢目，为害柿叶及柿蒂；5～8月份降雨早、雨日多、雨量大，有利于分生孢子的产生和侵入，发病早而严重，老叶、树冠下部叶及内膛叶发病严重；叶片受害，初期正面出现不规则形黄绿色病斑，以后颜色逐渐加深，变成褐色或黑褐色，病斑上密生黑色绒状小粒点。柿蒂染病多发生在蒂周围，褐色哐深褐色，边缘明显或不明显，由蒂尖向内扩展，发病严重时，引起大量落叶、落果，落果后病蒂大部分仍残留在树上，越冬后第二年复发。
目前，对于柿树角斑病的防治，仍以化学农药杀菌剂为主，由于大量使用化学农药而造成的环境污染问题也日趋严重；同时，采用化学农药杀菌剂，角斑病病原菌菌种产生耐药性、抗药性，增加了防治的难度，甚至造成防治失败。此外，化学农药因其不具有选择性，对有益的生物也会造成成胁；而且，很多化学农药是不可降解或难于降解的，容易在动植物体内积累而造成污染物的富集。
因此，提供一种对柿树角斑病防治效果好、无化学残留、不易产生抗药性的复合微生物菌肥及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用，该复合微生物菌肥对柿树角斑病防治效果好、无化学残留、不易产生抗药性。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种复合微生物菌肥，由枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌按照(1～2)∶(1～2)∶(1～3)复配而成；所述枯草芽胞杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌的菌浓均为6x109cfu/g。
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109～3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％～10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30～37℃、罐压0.04～0.06MPa，进行深层通气搅拌培养24～30h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000～14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8～16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80～120目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108～3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％～10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30～37℃、罐压0.04～0.06MPa，静止培养14～24h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000～14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8～16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80～120目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以(1～2)∶(1～2)∶(1～3)的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
进一步，所述固体培养基的配制方法如下：取蛋白胨8g，牛肉膏5g，氯化钠5g，蒸馏水定容至1000ml，调节pH 7.2～7.4，加入18～20g琼脂，121℃灭菌30min。
进一步，所述液体培养基的配方为：蛋白胨8g，酵母膏15g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾0.2g，硫酸镁2g，葡萄糖20g，碳酸钙1g，蒸馏水定容至1000ml。
所述复合微生物菌肥的使用方法，将枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌按重量比(1～2)∶(1～2)∶(1～3)混合均匀，用水稀释1000～3000倍，喷施于柿树或用于浇灌。
所述复合微生物菌肥在防治柿树角斑病中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用，该复合微生物菌肥由枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌按重量比(1～2)∶(1～2)∶(1～3)复配而成，对柿树角斑病防治效果好、无化学残留且不易产生抗药性，还能促进柿树增产20％以上。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)编号为ATCC 21951；地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)编号为ATCC 12759；洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)编号为ATCC 25416；均为购买获得。
实施例1
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，进行深层通气搅拌培养24h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，静止培养14h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以1∶1∶1的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例2
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持37℃、罐压0.06MPa，进行深层通气搅拌培养30h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过120目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持37℃、罐压0.06MPa，静止培养24h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过120目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以2∶2∶3的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例3
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持35℃、罐压0.05MPa，进行深层通气搅拌培养27h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速12000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间12h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过100目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持35℃、罐压0.05MPa，静止培养18h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速12000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间12h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过100目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以1∶2∶3的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例4
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，进行深层通气搅拌培养24h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，静止培养14h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以1∶1∶3的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例5
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，进行深层通气搅拌培养24h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，静止培养14h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以2∶2∶1的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例6
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，进行深层通气搅拌培养24h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，静止培养14h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以2∶1∶3的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
实施例7
一种复合微生物菌肥的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，进行深层通气搅拌培养24h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，分别得到菌浓为6x1010cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108cfu/ml时，将种子罐中的培养液以10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30℃、罐压0.04MPa，静止培养14h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以1∶1∶2的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
对比例1
一种复合微生物菌肥，只含有枯草芽孢杆菌，枯草芽胞杆菌的菌浓为6x109cfu/g。
对比例2
一种复合微生物菌肥，只含有洋葱伯克霍尔德氏菌，洋葱伯克霍尔德氏菌的菌液浓度为6x109cfu/ml。
对比例3
一种复合微生物菌肥，只含有地衣芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌的菌液浓度为6x109cfu/ml。
(一)分别将实施例1-7，对比例1-3获得的微生物菌肥稀释1000倍，用于喷施。
柿树角斑病防治试验采用田间试验，选取长势相近，角斑病病症基本一致的柿树；每个处理小区50株，每个处理(实施例1-7，对比例1-3的复合微生物菌肥稀释1000倍；对照例：清水)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷洒，喷施于柿树的树干、枝条和叶；在4月下旬，开始喷洒，每隔10d喷施一次，共喷施5次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后10d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的角斑病复发情况，并计算与对照例相比，各处理第一年的增产率，结果如表1所示。
表1
由表1可知，采用本发明的复合微生物菌肥，能够高效防治柿树角斑病，防治效果明显优于单独使用枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌或地衣芽孢杆菌；且使用3年后基本不复发。
(二)分别将实施例1-7，对比例1-3获得的微生物菌肥稀释3000倍，用于喷施。
柿树角斑病防治试验采用田间试验，选取长势相近，角斑病病症基本一致的柿树；每个处理小区50株，每个处理(实施例1-7，对比例1-3的复合微生物菌肥稀释3000倍；对照例：清水)各3个重复，采用随机区组排列，处理小区间留一行作保护行，用背负式电动喷雾器在上午露水干后进行喷洒，喷施于柿树的树干、枝条和叶；在4月下旬，开始喷洒，每隔10d喷施一次，共喷施5次；在下一次喷施前记录每次喷施后3个重复的平均病株数，最后一次喷施后10d记录3个重复的平均病株数，以及第二年和第三年的角斑病复发情况，并计算与对照例相比，各处理第一年的增产率，结果如表2所示。
表2
由表2可知，采用本发明的复合微生物菌肥，能够高效防治柿树角斑病，防治效果明显优于单独使用枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌或地衣芽孢杆菌；且使用3年后基本不复发。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (5)
1.一种复合微生物菌肥，其特征在于，由枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌按照(1～2)∶(1～2)∶(1～3)复配而成；所述枯草芽胞杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌的菌浓均为6x109cfu/g。
2.根据权利要求1所述的一种复合微生物菌肥的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)制备枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌的活菌粉剂
a、菌种培养：将保存的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌分别转接在新鲜配制的固体培养基摆成的试管斜面上，进行菌种活化；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将活化的菌种在种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐内培养液中凝结芽抱杆菌的菌数达到2x109～3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％～10％的接种量转入1m3发酵罐的液体培养基中，保持30～37℃、罐压0.04～0.06MPa，进行深层通气搅拌培养24～30h；
d、枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000～14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8～16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80～120目筛，分别得到菌浓为6x109cfu/g的枯草芽孢杆菌和洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂；
(2)制备地衣芽孢杆菌活菌粉剂：
a、三角瓶种子培养：配制液体培养基，培养保存的地衣芽孢杆菌；
b、种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，将三角瓶中培养的地衣芽孢杆菌加入种子罐中进行培养；
c、发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5～5.0，菌数达到5x108～3x109cfu/ml时，将种子罐中的培养液以5％～10％的接种量转入1m3发酵罐中的液体培养基中，保持30～37℃、罐压0.04～0.06MPa，静止培养14～24h；
d、地衣芽孢杆菌活菌粉剂的制备：通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速10000～14000r/min；然后送入热风循环烘箱，设定温度40±2℃，时间8～16h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80～120目筛，得到菌浓为6x109cfu/g的地衣芽孢杆菌活菌粉剂；
(3)制备枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和地衣芽孢杆菌混合菌剂：
将步骤(1)制备的枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德氏菌活菌粉剂与步骤(2)制备的地衣芽孢杆菌活菌粉剂以(1～2)∶(1～2)∶(1～3)的重量比均匀混合，制成复合微生物菌肥。
3.根据权利要求2所述的一种复合微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述固体培养基的配制方法如下：取蛋白胨8g，牛肉膏5g，氯化钠5g，蒸馏水定容至1000ml，调节pH 7.2～7.4，加入18～20g琼脂，121℃灭菌30min。
4.根据权利要求2所述的一种复合微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述液体培养基的配方为：蛋白胨8g，酵母膏15g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾0.2g，硫酸镁2g，葡萄糖20g，碳酸钙1g，蒸馏水定容至1000ml。
5.根据权利要求1所述的一种复合微生物菌肥，在防治柿树角斑病中的应用。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN116986943A (zh) * | 2023-06-20 | 2023-11-03 | 施可丰化工股份有限公司 | 一种绿色高效大豆秸秆生物炭多元聚合物磷肥增效剂及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102286395A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-12-21 | 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所 | 一株兼防烟草野火病和角斑病的枯草芽孢杆菌 |
| CN109169715A (zh) * | 2018-09-05 | 2019-01-11 | 广东顾地丰生物科技有限公司 | 一种含多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的复配生物杀菌剂组合物 |
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2019
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102286395A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-12-21 | 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所 | 一株兼防烟草野火病和角斑病的枯草芽孢杆菌 |
| CN109169715A (zh) * | 2018-09-05 | 2019-01-11 | 广东顾地丰生物科技有限公司 | 一种含多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的复配生物杀菌剂组合物 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116986943A (zh) * | 2023-06-20 | 2023-11-03 | 施可丰化工股份有限公司 | 一种绿色高效大豆秸秆生物炭多元聚合物磷肥增效剂及其制备方法 |
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