CN103553810A - 一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，其有效成分为枯草芽孢杆菌50~55份，放线菌10~15份，光合细菌8~10份，淡紫拟青霉6~10份，酵母菌3~5份，双歧杆菌2~4份；该产品是复合配制产品，功能全互补性强，可与化学肥料有机肥料混用，提高上述肥料的利用率30%左右，抗病抑菌，提高地力，活化土壤，增产提质，抗倒伏，降低农残，耐储藏，保花率提高50%、挂果提前7～10天、产量提高15～20%。此外，由于肥料产品中含有白刺链霉菌放线菌，它在抑制黄瓜枯萎病病原真菌生长方面具有非常显著的抑制效果，试验结果表明，在连作黄瓜枯萎病的土壤上施用本产品后，黄瓜枯萎病发病率低于10%。

Description

一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，尤其涉及一种防治黄瓜黄瓜枯萎病的复合生物有机肥颗粒剂的制备方法。 

背景技术

我国是农业大国，从 20 世纪90年代开始，我国一些科研单位和企业相继研制和生产一类被统称为“生物有机肥”的产品并投放市场。由于这类肥料产品研制和生产初衷是集有机肥料和生物肥料优点于一体，既有利于增产增收，又有利于培肥土壤、改善土壤微生态系统、减少无机肥料用量，提高并改善农产品品质，符合我国农业可持续发展和绿色食品生产的方向，这几年得到了快速的发展。生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸秆等)为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。它区别于仅利用自然发酵(腐熟)所制成的有机肥。生物有机肥产品除了含有较高的有机质外，还含有具有特定功能的微生物，这是此类产品的本质特征，并且所含

微生物应表现出一定的肥料效应，如具有增进土集肥力、制造和协助农作物吸收营养、活化土壤中难

溶的化合物供作物吸收利用，或可产生多种活性物质和抗、抑病物质，对农作物的生长有良好的刺激

与调控作用，可减少或降低作物病虫害的发生，以及改善农产品品质等方面的作用。与普通有机肥相比，生物有机肥生产的技术含量相对较高，除了在腐熟过程中加入促进有机物料腐熟、分解的生物菌剂，以实现定向腐熟、除臭等目的，并且在产品中加人具有特定功能的微生物，以提升产品的作用效果。在发 酵生产工艺上，多数企业采用槽式堆置发酵法，其它的发酵方法，如平地堆置发酵法、密封仓式发酵法、塔式发酵法等在生产中也得到了应用。在发酵、腐熟过程中物料的水分、C/N比、温度等的调节及腐熟剂的使用是生产工艺的关键，特别是菌剂的应用直接影响着物料发酵的周期及腐熟程度。而如何确定发酵物料的腐熟度是整个生产的关键环节，只有彻底腐熟的物料才有利于后加人功能菌的存活并发挥作用。另外，有的产品中还加人无机养分，如何减少无机养分对功能菌的影响也是生产环节中必须考虑的一个重要问题。

在发酵物料的后处理方面，大多数企业加人功能菌剂进行复配、定型，产品剂型以颗粒剂为主。此外，有1/3的产品在后处理过程中采用了造粒技术，多数以圆盘造粒为主，也有采用滚筒造粒或挤压造粒。颗粒产品克服了颗粒剂产品外观差、层次低及使用中随风飘扬的缺点，提高了产品的商品性，同时也提高了企业的生产成本，并对有效菌的存活产生了一定的影响。

微生物菌种是微生物肥料产品的核心，对生物有机肥而言也是如此。一般在生产过程中，有两个环节涉及到微生物的使用，一是在腐熟过程中加人促进物料分解、腐熟兼具除臭功能的非病原腐熟菌剂，多由复合菌系组成，常见菌种有芽抱杆菌、乳酸菌、酵母菌、放线菌、青霉、木霉、根霉等;二是在物料腐熟后加人的功能菌，以固氮菌、溶磷菌、硅酸盐细菌、乳酸菌、假单胞菌、芽胞杆菌、放线菌、光合细菌等为主，在产品中发挥特定的肥料效应。

    目前，我国利用秸秆的主要途径是秸秆还田、用作饲料、肥料、作为生物质能源进行秸秆气化、秸秆发电和生产酒精等的开发。秸秆还田可以显著增加土壤中有机碳的含量，此外，研究表明在我国稻田推广秸秆还田的固碳潜力以及对减缓全球变暖的贡献很大。2.158倍(途非等，2010)。由此可见，秸秆还田后，稻田增排甲烷的温室效应会大幅抵消土壤固碳的减排效益。农作物桔秆是反自动物粗饲料的重要组成部分，但秸秆本身特有的细胞结构使其不能有效地被反自动物消化利用。目前提高秸秆消化率的方法有很多，如物理处理、化学处理、生物处理以及复合处理等方式，然而由于投资成本高或技术不成熟或带来污染等原因，秸秆利用率低。堆肥化是将有机废弃物，包括作物秸秆、畜禽粪便等，在人工调节水分、C/N比、pH值和通风条件下，通过发酵腐熟和微生物分解作用，制成有机肥料的过程。经过堆肥化过程之后，有机废弃物的体积和质量减少，杀灭了其中的病菌和杂草种子，减小植物性毒素的产生，

并能除臭，同时稳定其中的养分和有机质含量，是有机废弃物减量化、无害化和资源化的根本途径。秸秆气化是一项方兴未艾的新兴生物质能源利用技术，然而在秸秆资源气化的商业化发展过程中，受到了众多制约因素的影响:秸秆燃气价格偏低，提价可能性小，燃气用户规模小，用途单一，秸秆气化站初始投资较高，使得秸秆气化站的经济效益尚不明显;政府扶持过程中暴露出非市场行为的缺陷;秸秆气化技术的成熟性与实用性不强，秸秆气化设备及施工验收体系的标准化不够完善等。秸秆发电既可以替代部分常规能源，又可以减轻环境污染，增加经济收益，因此在我国受到高度重视。至2007年底，我国共有7个秸秆发电项目正式投产，它们都是国家电网公司旗下的国能生物发电有限公司经营的，装机容量均为2.5万千瓦。而在这7个秸秆发电项目中，有6个是亏损的，唯一保本经营的山东单县秸秆电厂，之所以能保本经营，其特殊原因是该项目是我国第一个秸秆发电项目，2006年以前就已核准，上网电价为0.7%元/千瓦时，即每千瓦时可享受0.452元的补贴。而其他己投产的6个项目，都是2006年以后核准的，只能享受每千瓦时0.25元的补贴。秸秆发电厂亏损的主要原因是单位投资成本高;秸秆比重小，热值低，运输量巨大;秸秆收购具有很强的季节性，无法连续均衡收购，因而秸秆电厂一般需储存至少半年的秸秆量，占地面积巨大。由此可见，我国的秸秆发电产业具有相当高的风险。纤维素和半纤维素是用来生产燃料酒精的原料。农作物秸秆中含有大量纤维素和半纤维素，为生产酒精提供了丰富的原料。然而很多专家认为用玉米秸秆制酒精在目前条件下不可行，主要原因是亏损，如果按常规方式生产玉米秸秆酒精，要投入巨额资金建工厂，用秸秆生产酒精的成本折算大约需要7000元/吨，而目前国内酒精的市场销售价特级酒精为3800-3850元/吨，这意味着工厂生产1吨酒精要承担3150元的巨额亏损的风险，这在当前的技术水平情况下，企业根本无法接受。而麦秆分步糖化发酵产乙醇，甜高粱秸秆固态发酵提取粗乙醇的技术也仅有初步研究。由此可见，采用堆肥化方式将秸秆和畜禽粪便制成有机复合肥的方式，是目前和今后发展的主流。目前国内外己开发了大量技术与工艺，生产出形式多样的有机肥、有机无机复合肥、各种作物专业肥、多功能有机生物肥等等。

黄瓜极易产生自毒作用，其组织和根系分泌物中分离出包括苯丙烯酸，对轻基苯甲酸等酚酸类物质在内的十余种自毒物质。日光温室黄瓜根区土壤中对羟基苯甲酸、阿魏酸、苯甲酸均随种植年限的增加呈明显的积累，连作9年的温室土壤中酚酸类物质含量非常高。温室黄瓜在连作条件下，土壤根际微生物数量表现较明显的温室效应。与非连作对照比较，连作土壤真菌数量明显增多，放线菌数量总的变化趋势降低；土壤微生物总量和细菌数量变化，连作5年以上土壤普遍降低，5年以下(包括5年)土壤则变化不明显：微生物生理类群中氨化细菌数量变化不大，硝化细菌数量低于非连作对照，反硝化细菌即连作土壤高于对照土壤。保护地黄瓜连作连作时间短毛霉，曲霉，木霉．青霉等真菌数量较多，而连作时间长则尖镰孢及其他镰孢菌，丝菌菌等真菌明显累积，而连作黄瓜真菌病害逐年加重又造成了有害真菌在土壤中相对积累。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治黄瓜枯萎病的复合生物有机肥颗粒剂的制备方法。 

本发明的技术方案为：一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）复合菌粉的制备

A、分别制备各菌种的菌液

（1）枯草芽孢杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 23659接入到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：淀粉5﹪、腐植酸钾1%、豆饼粉7.5﹪、磷酸氢二钾0.2﹪、硫酸铵0.1﹪、硫酸镁0.05﹪、三氯化铁0.005﹪、碳酸钙0.05﹪、酵母粉0.01﹪、硼酸0.005﹪，pH值调至7.2～7.4，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通气量0.5～1.0L∕L·min，搅拌速度150～200rpm，罐压0.5kg∕cm²，耗氧培养48小时，得到的菌液中枯草芽孢杆菌斯氏亚种菌数≥2.0×10⁹cfu/ mL；

（2）放线菌菌液的制备

在无菌条件下，将白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CGMCC 7434接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：葡萄糖2.9%、黄豆粉1.6 %、可溶性淀粉4%、酵母粉1%、腐植酸钾1%、蛋白胨0.4 %、 硫酸镁 0.05 %、NaCl 0.2 %、 碳酸钙0.5%，pH值调至7.5-8.0，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～30℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通入量2～3L∕L·min，搅拌速度为150~210 rpm，发酵时间60~130小时得到放线菌菌液发酵液，发酵后期将菌丝全部打碎成该菌的菌落形成单位，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.5×10⁹ cfu/ mL；

（3）淡紫拟青霉菌菌液的制备

在无菌条件下，将淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus) CGMCC3.4034接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：可溶性淀粉2%，硝酸钾0.1%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.05%，硫酸亚铁0.001%，，pH值调至7.2-7.4；

发酵过程中培养温度为30-37℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为12-24h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥2.0×10⁹ cfu/ mL；

（4）酵母菌菌液的制备

在无菌条件下，将产朊假丝酵母(Candida utilis) CICC 1422接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规YPD酵母培养基；

发酵过程中培养温度为为25-40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为36-72h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL； 

（5）光合细菌菌液的获得： 

在无菌条件下，将球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide) ATCC 17023、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris )ATCC 17001中的一种或组合接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基；

培养条件为25-40℃光照下厌氧培养36-48小时，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL；

（6）双歧杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将双歧杆菌（Lactococcus lactis）ACCC 11054接种到液体培养基中，其中所述的培养基按重量百分数计为：番茄汁20%、可溶性淀粉0.05%、蛋白胨1.5%、氯化钠5.0g、酵母菌0.6%、葡萄糖2%，pH值调至7.2，

发酵过程中培养温度范围30℃～35℃培养2～3天，得到菌数≥5.0×10⁹cfu/ml的种子培养液，然后接种到50升含有5%（重量百分数）红糖的无菌水中，接种量为无菌水重量的2﹪，在溶氧量为5﹪即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为5%的条件下，25℃～30℃于密封罐中静置培养10～15天，得到菌数≥1.0×10⁹cfu/ml的双歧杆菌菌液；

B、获得混合菌粉： 

通过分别在各菌种的菌液中加入碳酸钙，所述碳酸钙的加入量为菌液总重量的40﹪～50﹪，搅拌30min～40min，脱水浓缩，低温烘干至含水率≤5﹪，粉碎，得到细度≥100目的各菌种的菌粉； 然后将各菌种的菌粉如下比例混合，有效成份按重量份数计：

枯草芽孢杆菌50~55份，

放线菌10~15份，

光合细菌8~10份，

淡紫拟青霉6~10份，

酵母菌3~5份，

双歧杆菌2~4份； 

C、复配

将上述步骤制得的复合菌粉与有机硅和黄腐酸钾复配，重量比分别为：菌粉30%、沸石粉.5%、黄腐酸钾65%，然后进行混合造粒低温烘干，冷却，筛分，检验合格，包装成品，得到复合生物有机肥颗粒剂产品。

本发明的有益效果在于，该产品是复合配制产品，功能全互补性强，可与化学肥料有机肥料混用，提高上述肥料的利用率30%左右，抗病抑菌，提高地力，活化土壤，增产提质，抗倒伏，降低农残，耐储藏，保花率提高50%、挂果提前7～10天、产量提高15～20%。此外，由于肥料产品中含有白刺链霉菌放线菌，它在抑制黄瓜枯萎病病原真菌生长方面具有非常显著的抑制效果，试验结果表明，在连作黄瓜枯萎病的土壤上施用本产品后，黄瓜枯萎病发病率低于10%。

具体实施方式

下面用具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明不仅仅局限于以下实施例。

实施例1

A、分别制备各菌种的菌液

（1）枯草芽孢杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 23659接入到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：淀粉5﹪、腐植酸钾1%、豆饼粉7.5﹪、磷酸氢二钾0.2﹪、硫酸铵0.1﹪、硫酸镁0.05﹪、三氯化铁0.005﹪、碳酸钙0.05﹪、酵母粉0.01﹪、硼酸0.005﹪，pH值调至7.2～7.4，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通气量0.5～1.0L∕L·min，搅拌速度150～200rpm，罐压0.5kg∕cm²，耗氧培养48小时，得到的菌液中枯草芽孢杆菌斯氏亚种菌数≥2.0×10⁹cfu/ mL；

（2）放线菌菌液的制备

在无菌条件下，将白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CGMCC 7434接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：葡萄糖2.9%、黄豆粉1.6 %、可溶性淀粉4%、酵母粉1%、腐植酸钾1%、蛋白胨0.4 %、 硫酸镁 0.05 %、NaCl 0.2 %、 碳酸钙0.5%，pH值调至7.5-8.0，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～30℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通入量2～3L∕L·min，搅拌速度为150~210 rpm，发酵时间60~130小时得到放线菌菌液发酵液，发酵后期将菌丝全部打碎成该菌的菌落形成单位，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.5×10⁹ cfu/ mL；

（3）淡紫拟青霉菌菌液的制备

在无菌条件下，将淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus) CGMCC3.4034接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：可溶性淀粉2%，硝酸钾0.1%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.05%，硫酸亚铁0.001%，，pH值调至7.2-7.4；

发酵过程中培养温度为30-37℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为12-24h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥2.0×10⁹ cfu/ mL；

（4）酵母菌菌液的制备

在无菌条件下，将产朊假丝酵母(Candida utilis) CICC 1422接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规YPD酵母培养基；

发酵过程中培养温度为为25-40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为36-72h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL； 

（5）光合细菌菌液的获得： 

在无菌条件下，将球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide) ATCC 17023、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris )ATCC 17001中的一种或组合接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基；

培养条件为25-40℃光照下厌氧培养36-48小时，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL；

（6）双歧杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将双歧杆菌（Lactococcus lactis）ACCC 11054接种到液体培养基中，其中所述的培养基按重量百分数计为：番茄汁20%、可溶性淀粉0.05%、蛋白胨1.5%、氯化钠5.0g、酵母菌0.6%、葡萄糖2%，pH值调至7.2，

发酵过程中培养温度范围30℃～35℃培养2～3天，得到菌数≥5.0×10⁹cfu/ml的种子培养液，然后接种到50升含有5%（重量百分数）红糖的无菌水中，接种量为无菌水重量的2﹪，在溶氧量为5﹪即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为5%的条件下，25℃～30℃于密封罐中静置培养10～15天，得到菌数≥1.0×10⁹cfu/ml的双歧杆菌菌液；

B、获得混合菌粉： 

通过分别在各菌种的菌液中加入碳酸钙，所述碳酸钙的加入量为菌液总重量的40﹪～50﹪，搅拌30min～40min，脱水浓缩，低温烘干至含水率≤5﹪，粉碎，得到细度≥100目的各菌种的菌粉； 然后将各菌种的菌粉如下比例混合，有效成份按重量份数计：

枯草芽孢杆菌50份，

放线菌15份

光合细菌8份，

淡紫拟青霉6份，

酵母菌3份； 

双歧杆菌4份； 

C、制备复合生物有机肥颗粒剂

向上述步骤制得的混合菌液中添加由钠盐、锰盐、镁盐等组成的无机盐混合液，所述无机盐混合液的添加量为所述混合菌液重量的2~3％；

再向混合菌液中添加精稻糠、草炭、沸石粉的吸附剂，添加量为为所述混合菌液重量的8~15％；

进行混合造粒低温烘干，冷却，筛分，检验合格，包装成品，得到复合生物有机肥颗粒剂产品。

实施例2

在B步骤制备混合菌液，各菌液按如下比例混合：

枯草芽孢杆菌53份，

放线菌12份

光合细菌9份，

淡紫拟青霉8份，

酵母菌4份； 

双歧杆菌3份； 

其余同实施例1

实施例3

在B步骤制备混合菌液，各菌液按如下比例混合：

枯草芽孢杆菌55份，

放线菌10份

光合细菌10份，

淡紫拟青霉10份，

酵母菌5份； 

双歧杆菌2份； 

其余同实施例1

采用本发明实施例1-3制备的多菌种微生物复合冲施肥，按照10kg/亩作为冲施肥使用，根据黄瓜生长规律，在作物生长、开花期和坐果期，共冲施3次，或在作物定植后，每10—20天一次，共使用2～3次。使用效果如下：叶片加厚、保花率提高50%、挂果提前7～10天、产量提高15～20%，黄瓜枯萎病发病率低于10%。

Claims (1)

1.一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）复合菌粉的制备

A、分别制备各菌种的菌液

（1）枯草芽孢杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 23659接入到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：淀粉5﹪、腐植酸钾1%、豆饼粉7.5﹪、磷酸氢二钾0.2﹪、硫酸铵0.1﹪、硫酸镁0.05﹪、三氯化铁0.005﹪、碳酸钙0.05﹪、酵母粉0.01﹪、硼酸0.005﹪，pH值调至7.2～7.4，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通气量0.5～1.0L∕L·min，搅拌速度150～200rpm，罐压0.5kg∕cm²，耗氧培养48小时，得到的菌液中枯草芽孢杆菌斯氏亚种菌数≥2.0×10⁹cfu/ mL；

（2）放线菌菌液的制备

在无菌条件下，将白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CGMCC 7434接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：葡萄糖2.9%、黄豆粉1.6 %、可溶性淀粉4%、酵母粉1%、腐植酸钾1%、蛋白胨0.4 %、 硫酸镁 0.05 %、NaCl 0.2 %、 碳酸钙0.5%，pH值调至7.5-8.0，在120℃左右进行灭菌20 min；

发酵过程中培养温度范围28～30℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通入量2～3L∕L·min，搅拌速度为150~210 rpm，发酵时间60~130小时得到放线菌菌液发酵液，发酵后期将菌丝全部打碎成该菌的菌落形成单位，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.5×10⁹ cfu/ mL；

（3）淡紫拟青霉菌菌液的制备

在无菌条件下，将淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus) CGMCC3.4034接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：可溶性淀粉2%，硝酸钾0.1%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.05%，硫酸亚铁0.001%，，pH值调至7.2-7.4；

发酵过程中培养温度为30-37℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为12-24h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥2.0×10⁹ cfu/ mL；

（4）酵母菌菌液的制备

在无菌条件下，将产朊假丝酵母(Candida utilis) CICC 1422接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规YPD酵母培养基；

发酵过程中培养温度为为25-40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8-10L/ L·min、发酵时间为36-72h、搅拌转速为200-300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL； 

（5）光合细菌菌液的获得： 

在无菌条件下，将球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide) ATCC 17023、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris )ATCC 17001中的一种或组合接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基；

培养条件为25-40℃光照下厌氧培养36-48小时，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×10⁹ cfu/ mL；

（6）双歧杆菌菌液的制备：

在无菌条件下，将双歧杆菌（Lactococcus lactis）ACCC 11054接种到液体培养基中，其中所述的培养基按重量百分数计为：番茄汁20%、可溶性淀粉0.05%、蛋白胨1.5%、氯化钠5.0g、酵母菌0.6%、葡萄糖2%，pH值调至7.2，

发酵过程中培养温度范围30℃～35℃培养2～3天，得到菌数≥5.0×10⁹cfu/ml的种子培养液，然后接种到50升含有5%（重量百分数）红糖的无菌水中，接种量为无菌水重量的2﹪，在溶氧量为5﹪即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为5%的条件下，25℃～30℃于密封罐中静置培养10～15天，得到菌数≥1.0×10⁹cfu/ml的双歧杆菌菌液；

B、获得混合菌粉： 

通过分别在各菌种的菌液中加入碳酸钙，所述碳酸钙的加入量为菌液总重量的40﹪～50﹪，搅拌30min～40min，脱水浓缩，低温烘干至含水率≤5﹪，粉碎，得到细度≥100目的各菌种的菌粉； 然后将各菌种的菌粉如下比例混合，有效成份按重量份数计：

枯草芽孢杆菌50~55份，

放线菌10~15份，

光合细菌8~10份，

淡紫拟青霉6~10份，

酵母菌3~5份，

双歧杆菌2~4份； 

C、复配

将上述步骤制得的复合菌粉与有机硅和黄腐酸钾复配，重量比分别为：菌粉30%、沸石粉.5%、黄腐酸钾65%，然后进行混合造粒低温烘干，冷却，筛分，检验合格，包装成品，得到复合生物有机肥颗粒剂产品。