CN112630179B - 具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点及其制备方法及检测l-半胱氨酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点及其制备方法及检测L‑半胱氨酸的方法，该普鲁士蓝量子点由紫外光谱吸收检测显示该在310nm有一个吸收峰，具有氧化物模拟酶性质。应用该普鲁士蓝量子点对L‑半胱氨酸进行比色法检测具有效果高，准确性高的优点。该具有氧化物模拟酶性质的量子点具有优异的催化效率进而能够催化多种底物；同时该普鲁士蓝量子点的制备方法具有操作简便、成本低和重现性好的优点；应用该具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点对L‑半胱氨酸进行检测，该检测L‑半胱氨酸的方法具有灵敏度高，选择性好的特点。
Description
技术领域
本发明涉及普鲁士蓝量子点，具体地，涉及一种具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点及其制备方法及检测L-半胱氨酸的方法。
背景技术
L-半胱氨酸(L-Cys)在维持生命系统中不同类型的细胞变化中起着非常重要的作用。L-半胱氨酸的抗氧化特性提高了体内的解毒水平，平衡了血糖水平，维持了生物体的正常的消化系统。因此，L-半胱氨酸的检测对人体健康具有重要意义。近年来，一些检测方法如高效液相色谱法，荧光光谱法，电化学法等用来检测L-半胱氨酸，但这些方法都面临着仪器价格昂贵，样品制备过程复杂，耗时等不可克服的缺点。
因此，提供一种具有操作简便、成本低、准确性高和重现性好等优点的 L-半胱氨酸的检测方法，将对L-半胱氨酸的检测具有重大的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点及其制备方法及检测L-半胱氨酸的方法，该具有氧化物模拟酶性质的量子点具有优异的催化效率进而能够催化多种底物；同时该普鲁士蓝量子点的制备方法具有操作简便、成本低和重现性好的优点；应用该具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点对L-半胱氨酸进行检测，该检测L-半胱氨酸的方法具有灵敏度高，选择性好的特点。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰。
本发明第二方面提供一种普鲁士蓝量子点的制备方法，包括将普鲁士蓝分散于0.3-0.5mol/L的盐酸溶液中进行水热反应的步骤。
本发明第三方面提供一种前文所述的制备方法制备得到的普鲁士蓝量子点。
本发明第四方面提供一种检测L-半胱氨酸的方法，其中，包括：1)将不同量的L-半胱氨酸分别加入相同体积的空白混合液中，得到多组标准样：其中空白混合液中含有水、醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和普鲁士蓝量子点；2)配制所述已知浓度的混合液10-15min后，测定标准样的吸光度；3)以标准样中L-半胱氨酸的浓度为横坐标，以测定的吸光度为纵坐标，制作线性拟合方程；4)将含未知浓度的L-半胱氨酸加入至空白溶液中作为待测样，按照检测标准样同样的方法检测待测样的吸光度，根据线性拟合方程计算出待测样中L-半胱氨酸的浓度；其中，所述普鲁士蓝量子点为第一方面或第三方面所述的普鲁士蓝量子点。
根据本发明，该普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测，如图2所示，显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰，可能是归因于羰基官能团的 n-π*跃迁，其表面具有含氧基团C＝O。可见该普鲁士蓝量子点具有含氧基团 C＝O，从而使得该普鲁士蓝量子点在不需要加入过氧化氢的情况下，直接氧化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)显色，在652nm处有吸收峰，使普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶的性质，应用普鲁士蓝量子点的氧化物模拟酶的性质参于催化反应；进而构建比色传感平台，最终通过该量子点开发了一种简单、低成本、催化效率高、快速有效的检测L-半胱氨酸的方法。该具有氧化物模拟酶性质的量子点具有优异的催化效率进而能够催化多种底物；同时该普鲁士蓝量子点的制备方法具有操作简便、成本低和重现性好的优点；应用该具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点对L-半胱氨酸进行检测，该检测L-半胱氨酸的方法具有灵敏度高，选择性好的特点。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1A为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的透射电子显微镜图片 (TEM)；图1B为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的柱状粒径分布图；
图2为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点与3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色紫外吸收图；
图3为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的紫外吸收图(Absorbance)；
图4为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的红外图(FTIR)；
图5为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的X射线衍射图谱(XRD)；
图6为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点的X射线光电子能谱分析图 (XPS)；
图7为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点检测L-半胱氨酸的紫外吸收图；
图8为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点检测L-半胱氨酸的紫外吸收变化图；
图9为实施例1中制备的普鲁士蓝量子点检测L-半胱氨酸的选择性图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供一种普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰。
根据本发明，该普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测，如图3所示，显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰，可能是归因于羰基官能团的 n-π*跃迁，其表面具有含氧基团C＝O。可见该普鲁士蓝量子点具有含氧基团 C＝O，且图2所示，从而使得该普鲁士蓝量子点该在不需要加入过氧化氢的情况下，直接氧化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)显色，如图2所示，在652nm处有一个吸收峰，使普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶的性质，应用普鲁士蓝量子点的氧化物模拟酶的性质参于催化反应；进而构建比色传感平台，最终通过该量子点开发了一种简单、低成本、催化效率高、快速有效的检测L-半胱氨酸的方法。该具有氧化物模拟酶性质的量子点具有优异的催化效率进而能够催化多种底物；同时该普鲁士蓝量子点的制备方法具有操作简便、成本低和重现性好的优点；应用该具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点对L-半胱氨酸进行检测，该检测L-半胱氨酸的方法具有灵敏度高，选择性好的特点。
根据本发明，优选地，由红外光谱(FT-IR)检测所述普鲁士蓝量子点，如图4所示，在3449cm-1、1641cm-1和1099cm-1处均出现一个吸收峰，可以看出该量子点含有不饱和碳键，在3449cm-1归属于O-H的伸缩振动，1641cm-1处归因于C＝C的振动，1099cm-1归因于C-O的振动。从而为该普鲁士蓝量子点的进一步应用提供基础。
根据本发明，优选地，其中，由X射线衍射图谱(XRD)检测所述普鲁士蓝量子点，如图5所示，在2θ为23°存在一个衍射峰，说明普鲁士蓝量子点成功合成。通过对本发明的普鲁士蓝量子点进行X射线光电子能谱检测，检测结果见图6，由图6可以看出该含有铁元素，说明普鲁士蓝量子点的合成。
根据本发明，优选地，所述普鲁士蓝量子点的尺寸范围为0.02-4.5nm。例如，本发明的实施例1中的制得的普鲁士蓝量子点进行透射电镜检测，检测结果见图1A和图1B，从图中可以看出制备出的量子点尺寸大小分散较均匀，接近球形的颗粒物，平均尺寸大小为1.75nm，和纳米材料尺寸分布特点相一致。
本发明第二方面提供一种普鲁士蓝量子点的制备方法，包括将普鲁士蓝分散于0.3-0.5mol/L的盐酸溶液中进行水热反应的步骤。
根据本发明，本发明将普鲁士蓝分散于0.3-0.5mol/L的盐酸溶液中进行水热反应的步骤，即可得到目标的产物具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点。该普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测，如图3所示，显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰，可能是归因于羰基官能团的n-π*跃迁，其表面具有含氧基团C＝O。可见该普鲁士蓝量子点具有含氧基团C＝O，从而使得该普鲁士蓝量子点该在不需要加入过氧化氢的情况下，直接氧化底物 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)显色，在652nm处有一个吸收峰，使普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶的性质，应用普鲁士蓝量子点的氧化物模拟酶的性质参于催化反应；进而构建比色传感平台，最终通过该量子点开发了一种简单、低成本、催化效率高、快速有效的检测L-半胱氨酸的方法。该普鲁士蓝量子点的制备方法简单，重现性好，具有较高的推广应用价值。
根据本发明，盐酸溶液的浓度为0.3-0.5mol/L，例如可以为 0.3mol/L,0.35mol/L,0.4mol/L,0.45mol/L,0.5mol/L，也可以为0.3-0.5之间的任意值或任意区间。均可实现本发明。
根据本发明，在上述技术方案中，普鲁士蓝的英文名称为Prussian Blue， CAS号为14038-43-8，分子式为C18Fe7N18。
根据本发明，水热反应的温度可在较宽的范围内选择，优选地，水热反应的温度为170-200℃，进一步优选地，水热反应的温度为180-190℃；在此优选的实施方式中，所得的普鲁士蓝量子点在对L-半胱氨酸的检测中，表现出更好的选择性和准确性。
根据本发明，水热反应的温度可在较宽的范围内选择，优选地，水热反应的时间为8-12h，进一步优选地，水热反应的时间为9-11h。在此优选的实施方式中，所得的普鲁士蓝量子点在对L-半胱氨酸的检测中，表现出更好的选择性和准确性。
根据本发明，普鲁士蓝的用量可以在较宽的范围内选择，优选地，相对于30mL盐酸溶液，普鲁士蓝的用量为0.1-0.5g。
根据本发明，还包括对所得的含有产物的混合物进行分离的步骤。优选地，还包括对水热反应之后的产物进行分离的步骤。其中，所述分离的方式可以采用本领域的常规的分离方式，优选地，所述分离方式包括对水热反应之后的混合物离心、收集上清液，对收集的上清液采用针式滤器过滤，并对过滤后的液体进行浓缩干燥的步骤。
本发明第三方面提供一种前文所述的制备方法制备得到的普鲁士蓝量子点。
根据本发明，该普鲁士蓝量子点，由紫外光谱吸收检测，如图3所示，显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰，可能是归因于羰基官能团的 n-π*跃迁，其表面具有含氧基团C＝O。可见该普鲁士蓝量子点具有含氧基团 C＝O，该普鲁士蓝量子点该在不需要加入过氧化氢的情况下，直接氧化底物 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)显色，如图2所示，在652nm处有一个吸收峰，使普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶的性质，应用普鲁士蓝量子点的氧化物模拟酶的性质参于催化反应；进而构建比色传感平台，最终通过该量子点开发了一种简单、低成本、催化效率高、快速有效的检测L-半胱氨酸的方法。
本发明第四方面提供一种检测L-半胱氨酸的方法，其中，包括：1)将不同量的L-半胱氨酸分别加入相同体积的空白混合液中，得到多组标准样：其中空白混合液中含有水、醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和普鲁士蓝量子点；2)配制所述已知浓度的混合液10-15min后，测定标准样的吸光度；3)以标准样中L-半胱氨酸的浓度为横坐标，以测定的吸光度为纵坐标，制作线性拟合方程；4)将含未知浓度的L-半胱氨酸加入至空白溶液中作为待测样，按照检测标准样同样的方法检测待测样的吸光度，根据线性拟合方程计算出待测样中L-半胱氨酸的浓度；其中，所述普鲁士蓝量子点为前文所述的普鲁士蓝量子点。
根据本发明，上述通过检测吸光度的方法为比色法。
根据本发明，标准样或待测样中普鲁士蓝量子点的含量可以在较宽范围内选择，为了提高检测的准确性，优选地，相对于1mL的标准样或待测样，普鲁士蓝量子点的含量为0.01-0.03mg。
根据本发明，标准样或待测样中3,3',5,5'-四甲基联苯胺的含量可以在较宽范围内选择，为了提高检测的准确性，优选地，优选地，相对于1mL的标样或待测样，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的含量为0.05-0.1mg。
根据本发明，醋酸钠缓冲溶液的选用可以在较宽范围内选择，优选地，醋酸钠缓冲溶液的pH为3-4；
进一步优选地，标准样和待测样的pH为3-4。
根据本发明，优选地，标准样或待测样中L-半胱氨酸的浓度范围为 0-10μmol/L；优选为不大于5μmol/L。
根据本发明，3,3',5,5'-四甲基联苯胺、普鲁士蓝量子点可以直接在配制标准溶液或待测溶液时直接添加，也可以采用溶液的形式添加，均可实现本发明。
为了更好地控制添加量，减少误差，在本发明一种优选的实施方式中， TMB由浓度为3-7mmol/L的溶液提供，普鲁士蓝量子点由300-500μg/mL的溶液提供。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
实施例1
将0.1000g普鲁士蓝(分子式为C18Fe7N18)固体粉末溶于1mL盐酸 12mol/L加入29mL超纯水，混合均匀后转移至50mL内衬有聚四氟乙烯的反应釜中，于180℃水热反应10h，取出反应釜自然冷却至室温；
通过离心(转速为8000rpm，离心时间为10min)收集上清液，用0.22μm 水相针式滤器进行过滤，旋蒸浓缩之后真空干燥得到普鲁士蓝量子点的固体粉末。
实施例2
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，盐酸以1mL 10mol/L的盐酸替代实施例1中的盐酸。
实施例3
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，盐酸以1mL 11mol/L的盐酸替代实施例1中的盐酸。
实施例4
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，盐酸以1mL 13mol/L的盐酸替代实施例1中的盐酸。
实施例5
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的温度为170℃。
实施例6
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的温度为190℃。
实施例7
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的温度为200℃。
实施例8
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的时间为8h。
实施例9
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的时间为11h。
实施例10
按照实施例1中的方法制备普鲁士蓝量子点，不同的是，水热反应的时间为12h。
对比例1
按照文献Talanta,2014，120：362–367中记载的方法，将1mM的 100mLK3[Fe(CN)6]逐滴加入到1mM的100mLFeCl2溶液中制备出普鲁士蓝纳米粒子。
检测例1
对实施例1制得的普鲁士蓝量子点进行透射电镜检测，检测结果见图1A 和图1B，从图1A中可以看出制备出的量子点尺寸大小分散较均匀，接近球形的颗粒物，从图1B可见，尺寸范围为0.02-4.5nm，平均尺寸大小为1.75nm，和纳米材料尺寸分布特点相一致。
对实施例1制得的普鲁士蓝量子点进行紫外光谱吸收检测，检测结果见图3，由图可以看出量子点在310nm处有一吸收峰，可能是归因于羰基官能团的n-π*跃迁，其表面具有含氧基团C＝O，说明本发明所得的普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶光学性质。
如图2所示，本实施例的普鲁士蓝量子点在含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的缓冲溶液中，在652nm处有一个吸收峰，而没有添加普鲁士蓝量子点的含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的缓冲溶液中，在652nm处没有吸收峰，可见，本发明的普鲁士蓝量子点能够催化3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色。进一步验证了本发明所得的普鲁士蓝量子点具有氧化物模拟酶光学性质。
对实施例1制得的普鲁士蓝量子点进行红外光谱检测，检测结果见图4，由图可以看出量子点含有不饱和碳键，在3449cm-1归属于O-H的伸缩振动， 1641cm-1处归因于C＝C的振动，1099cm-1归因于C-O的振动。从而为普鲁士蓝量子点的进一步应用提供基础。
对实施例1制得的普鲁士蓝量子点进行X射线衍射图谱检测，检测结果见图5，由图可以看出在2θ为23°处存在普鲁士蓝量子点的衍射峰，说明普鲁士蓝量子点成功合成。
对实施例1制得的普鲁士蓝量子点进行X射线光电子能谱检测，检测结果见图6，由图可以看出含有铁元素，说明普鲁士蓝量子点的合成。
按照上述相同的方法对实施例2-10的产物进行表征，表征结果与实施例1的产物的表征结果基本一致。
应用例1
将100μL实施例1制得的普鲁士蓝量子点分散在水分中配制成 120μg/mL的混合液，以100μL 0.25mM 3,3',5,5'-四甲基联苯胺为显色底物分散在1mL 0.2M pH为4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，分别加入浓度从0-60μM 浓度的L-半胱氨酸配制成标准溶液，在25℃下反应12min后进行紫外吸收光谱检测，具体结果见图8。
从图7中可以看出，随着L-半胱氨酸浓度的增加吸收峰逐渐降低。从图 8中的紫外吸收变化图可知，可通过在L-半胱氨酸浓度范围为0-5μmol/L范围与吸光度存在线性关系，可实现对L-半胱氨酸的检测。线性方程为 y＝0.0308x-0.00202，R2＝0.993，x为L-半胱氨酸的摩尔浓度，y为吸光度值。
当测定未知溶液的吸光度后，代入线性方程，可求得未知溶液中的L- 半胱氨酸的浓度。
将实施例1制得的普鲁士蓝量子点替换为实施例1-10中的普鲁士蓝量子点。按照上述方法对L-半胱氨酸标准溶液进行检测，并制作线性方程。发现，实施例2-10中的所得的普鲁士蓝量子点对应的线性方程的R2在0.985 以上，可见对L-半胱氨酸检测显示出较高的准确性。
对比应用例1
按照应用例1中的方法对L-半胱氨酸标准溶液进行检测。不同的是，将实施例1制得的普鲁士蓝量子点替换为对比例1中的普鲁士蓝纳米粒子。
发现在0-60μM浓度范围内，L-半胱氨酸与吸光度并不存在明显的线性关系。
对对比例1制得的普鲁士蓝纳米粒子进行紫外光谱吸收检测，所得的普鲁士蓝纳米粒子与应用例1相同的情景下与3,3',5,5'-四甲基联苯胺混合，在 652nm处没有吸收峰。将对比例1制得的普鲁士蓝纳米粒子替换本发明的普鲁士蓝量子点，在与应用例1中相同的L-半胱氨酸中溶液中应用比色法分析，吸光度与L-半胱氨酸的浓度也不存在线性关系，说明对比例1所得的普鲁士蓝纳米粒子不具有氧化物模拟酶性质，也不能采用本发明的方法用于 L-半胱氨酸的检测。
检测例2
为验证该检测L-半胱氨酸的方法具有良好的选择性，进行选择性实验，包括：1)将100μL,0.2mM的甲硫氨酸，赖氨酸，色氨酸，组氨酸，Ca2+， Na+,Cl-,HCO3 -和L-半胱氨酸分别加入相同体积的空白溶液中，得到多组混合液：其中空白溶液中含有水、醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和普鲁士蓝量子点；2)配制所述的混合液10-15min后，测定吸光度；3)测定空白溶液的吸光度；3)将得到的吸光度相减为吸光度的变化值，作出柱状图，结果见图9。
从图9可对该检测方法进行评价，知该方法对检测L-半胱氨酸具有较好的选择性。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (10)
1.一种具有氧化物模拟酶性质的普鲁士蓝量子点，其特征在于，
所述普鲁士蓝量子点的制备方法包括：将普鲁士蓝分散于0.3-0.5mol/L的盐酸溶液中进行水热反应的步骤；
其中，由紫外光谱吸收检测显示该普鲁士蓝量子点在310nm有一个吸收峰；
由红外光谱检测所述普鲁士蓝量子点，在3449cm-1、1641cm-1和1099cm-1处均出现一个吸收峰；
由X射线衍射图谱检测所述普鲁士蓝量子点，在2θ为23o存在一个衍射峰；
所述普鲁士蓝量子点的尺寸范围为0.02-4.5nm。
2.根据权利要求1所述的普鲁士蓝量子点，其中，水热反应的温度为170-200℃。
3.根据权利要求1所述的普鲁士蓝量子点，其中，水热反应的时间为8-12h。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的普鲁士蓝量子点，其中，相对于30mL盐酸溶液，普鲁士蓝的用量为0.1-0.5g。
5.根据权利要求1中所述的普鲁士蓝量子点，其中，还包括对水热反应之后的产物进行分离的步骤。
6.根据权利要求5所述的普鲁士蓝量子点，其中，所述分离方式包括对水热反应之后的混合物离心、收集上清液，对收集的上清液采用针式滤器过滤，并对过滤后的液体进行浓缩干燥的步骤。
7.一种检测L-半胱氨酸的方法，其中，包括：
1）将不同量的L-半胱氨酸分别加入相同体积的空白混合液中，得到多组标准样：其中空白混合液中含有水、醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和普鲁士蓝量子点；
2）配制所述标准样10-15min后，测定标准样的吸光度；
3）以标准样中L-半胱氨酸的浓度为横坐标，以测定的吸光度为纵坐标，制作线性拟合方程；
4）将含未知浓度的L-半胱氨酸加入至空白溶液中作为待测样，按照检测标准样同样的方法检测待测样的吸光度，根据线性拟合方程计算出待测样中L-半胱氨酸的浓度；
其中，所述普鲁士蓝量子点为权利要求1所述的普鲁士蓝量子点。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，相对于1mL的标准样或待测样，普鲁士蓝量子点的含量为0.01-0.03mg。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的含量为0.05-0.1mg。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的方法，其中，标准样和待测样的pH为3-4。
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