CN109115740B - 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用 - Google Patents

一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109115740B
CN109115740B CN201810913939.5A CN201810913939A CN109115740B CN 109115740 B CN109115740 B CN 109115740B CN 201810913939 A CN201810913939 A CN 201810913939A CN 109115740 B CN109115740 B CN 109115740B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cnqds
trypsin
tio
solution
auncs
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810913939.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109115740A (zh
Inventor
邹小波
胡雪桃
石吉勇
史永强
李文亭
张文
黄晓玮
李志华
徐艺伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu University
Original Assignee
Jiangsu University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu University filed Critical Jiangsu University
Priority to CN201810913939.5A priority Critical patent/CN109115740B/zh
Publication of CN109115740A publication Critical patent/CN109115740A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109115740B publication Critical patent/CN109115740B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/08—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials
    • C09K11/65—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials containing carbon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N2021/6417—Spectrofluorimetric devices
    • G01N2021/6421—Measuring at two or more wavelengths
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明属于光化学检测技术领域，涉及一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用；具体步骤为：首先制备CNQDs溶液、CNQDs/TiO2荧光微球和比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球；然后利用比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球进行胰蛋白酶检测，检测步骤为：将胰蛋白酶标准溶液加入比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中，获取不同浓度下的荧光图片和荧光光谱曲线，构建检测胰蛋白酶可视化阵列和标准曲线，实现样品中胰蛋白酶的可视化且定量检测；本发明工艺简单，检测方法高效、快速，同时也拓展了荧光微球的应用范围，具有广阔的应用前景。

Description

一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其 应用
技术领域
本发明属于光化学检测技术领域，具体涉及一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其在胰蛋白酶检测中的应用。
背景技术
胰蛋白酶在胰腺中形成，能水解肽链相连的氨基酸类化合物，能够有效地消化蛋白质，是人体最重要的消化酶之一。胰蛋白酶生产障碍会阻碍消化过程，在胰腺组织以外产生胰蛋白酶可能涉及癌症过程。在正常人的尿液中基本不含胰蛋白酶，但是急性胰腺炎病人及慢性肾功能衰竭病人的胰蛋白酶含量会明显增高，半数以上的胰腺癌及慢性胰腺炎病人的胰蛋白酶含量也会增高。因此，简单并及时监测胰蛋白酶含量对疾病的诊断具有重要的参考价值。
目前，检测胰蛋白酶的方法有色谱法、荧光分析法、分光光度法、电化学法、表面增强拉曼光谱法等。色谱法操作繁琐，检测耗时长；分光光度法容易受到复杂样品本身颜色的影响；电化学法和表面增强拉曼光谱法容易受到环境等外界因素的影响。荧光分析法因其灵敏度高、选择性强且操作简便受到了研究者的广泛关注，但是传统的荧光分析法需要特殊的荧光染料标记，使得检测成本偏高，且有些荧光材料荧光性质不稳定，易受周围环境的影响，重复性差。因此，开发成本低、重复性好以及灵敏度高的胰蛋白酶荧光探针是研究的热点。
荧光微球一般指微球表面标有荧光物质(包括表面包覆)或微球体内含有荧光物质的微球。其作为一种特殊功能的微球，因其稳定的形态结构及稳定而高效的发光效率等特点，越来越受到广大科技工作者的青睐。因此，本发明提出一种能够实现胰蛋白酶快速、准确且特异性检测的复合荧光微球。
发明内容
为了克服现有技术存在的缺陷，如有些技术操作繁琐、有些技术重复性差等。本发明提供了一种能够特异性检测胰蛋白酶的比率型复合荧光微球的制备方法，并实现了胰蛋白酶的比率型荧光检测。本发明获得的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球性质稳定，能快速且准确检测胰蛋白酶的含量。
本发明首先提供一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，具体包括以下步骤：
S1：制备氮化碳荧光量子点(CNQDs)溶液；
将三聚氰胺放于马弗炉中煅烧，得到黄色的C3N4粉末；然后，将C3N4粉末和KOH溶液溶于聚乙二醇200(PEG 200)中；搅拌后，将溶液转移至反应釜中进行反应，得到反应液，冷却至室温后，进行抽滤、透析，得到CNQDs溶液；
S2：制备CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
将钛酸四丁酯和乙二醇混合并在室温下搅拌反应，得到钛前驱体；然后，将钛前驱体加入到含有CNQDs和吐温20的丙酮溶液中，搅拌后得到CNQDs/TiO2荧光微球的乳状液，离心得到沉淀，分散于乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
S3：制备比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球；
将3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)加入到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液中，磁力搅拌，离心得到固体沉淀，分散到乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液；将CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液和牛血清蛋白溶液（BSA）混合搅拌，随后加入四氯金酸溶液，搅拌后加入氢氧化钾溶液，进行搅拌，然后离心得到了比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球；
本发明还提供一种基于比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球检测胰蛋白酶的方法，具体步骤为：
（1）配制一定浓度的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液；
（2）配制一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液，浓度分别为Q1、Q2、Q3、……、Qn-1、Qn，共n个浓度梯度，n为正整数；
（3）向步骤（1）制备的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中加入步骤（2）制备的胰蛋白酶标准溶液，由于胰蛋白酶能够特异性水解牛血清蛋白(BSA)，当比率型CNQDs/TiO2/AuNCs中存在胰蛋白酶时，稳定的AuNCs会沉淀聚集，产生的荧光会被猝灭；而CNQDs/TiO2不受影响，产生的荧光基本保持不变，利用荧光成像分析仪获取了不同浓度下的荧光图片，组成了检测胰蛋白酶可视化阵列，随着胰蛋白酶浓度的增加，荧光图片的颜色逐渐由红色变为蓝色，利用荧光分光光度计获取了不同浓度下的荧光光谱曲线，随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处的荧光强度逐渐下降，而440 nm处的荧光强度基本保持不变；
（4）记录胰蛋白酶加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值(I650/I440)之间的关系建立检测胰蛋白酶的标准曲线，标准曲线的方程为y= a+ b x（y为胰蛋白酶的浓度(μg/mL)，x代表荧光强度比值(I650/I440)，a和b分别为方程的常数项和系数）；
（5）样品中胰蛋白酶的定量检测：将待测样品加入步骤（1）的荧光微球CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中，获取样品的荧光图片，与检测胰蛋白酶可视化阵列对比可发现样品中存在胰蛋白酶，且浓度在Qi-Qi+1(i< n)之间，由此实现了胰蛋白酶的定性及半定量检测；通过获取样品的荧光光谱曲线，记录样品加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，计算荧光强度比值Yr (I650/I440)，参照步骤（4）建立的标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶的浓度Q (μg/mL)= ((Yr-a)/b)，由此实现了样品中胰蛋白酶的定量检测。
优选的，步骤S1中所述反应的条件为温度180℃，时间16h。
优选的，步骤S1中所述KOH溶液的浓度为1.1g/mL。
优选的，步骤S1中所述C3N4粉末、PEG 200和KOH溶液的质量之比为0.1-1: 5-1000:1-100。
优选的，步骤S2中所述钛酸四丁酯和乙二醇的体积比为0.1-1: 10-100。
优选的，步骤S2中所述钛前驱体、CNQDs、吐温20和丙酮的体积比为1-10: 3-10:0.01-1:10-50。
优选的，步骤S3中所述APTES和CNQDs/TiO2乙醇溶液的体积比为10-3-10-2: 1-10。
优选的，步骤S3中所述牛血清蛋白溶液的浓度为50 mg/mL；所述四氯金酸溶液的浓度为10 mM；所述氢氧化钾溶液的浓度为1.1 g/mL。
优选的，步骤S3中所述磁力搅拌的时间为12-24h；所述混合搅拌的时间为1-4h；所述加入四氯金酸溶液的搅拌条件为，温度37℃，时间10-30min；所述加入氢氧化钾溶液搅拌的条件为：温度37℃，时间8~24h。
优选的，步骤S3中所述的CNQDs/TiO2-NH2、牛血清蛋白溶液、四氯金酸溶液和氢氧化钾的体积比为1-10: 1-10: 1-10: 0.1-5。
优选的，步骤（1）中所述的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液浓度为0.005-0.02mg/mL。
优选的，步骤（2）中所述一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液浓度为0-600 μg/mL。
本发明的有益技术效果在于：
（1）与单一的CNQDs相比，本发明制备的CNQDs/TiO2荧光微球性质稳定，比表面积大且吸附能力强，能够有效地吸附金纳米簇，高效地合成具有双发射峰的复合荧光微球。
（2）与现有的荧光微球相比，本发明制备的比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球具有双发射的性质，荧光发射峰为650 nm和440 nm，两个峰间隔210 nm，两个荧光发射峰不会互相干扰，荧光性质更加稳定。
（3）与单一型的荧光检测方法相比，本发明利用比率型的荧光分析方法，将两个波长处的荧光强度比值作为响应信号，其不受光源强度和仪器灵敏度的影响，提高了检测的灵敏度和特异性。
（4）与现有的胰蛋白酶检测技术相比，本发明提供的基于比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球的荧光分析方法具有高效，简便快速的特点，同时也拓展了荧光微球的应用范围。
附图说明
图1中a和b分别是CNQDs/TiO2荧光微球和比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的荧光光谱曲线，插图c和d分别是CNQDs/TiO2荧光微球和比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的荧光图片；
图2是比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的扫描电镜图片;其中（a）是100nm的扫描电镜图片；（b）是50nm的扫描电镜图片。
图3中（a）是根据不同浓度的胰蛋白酶标准溶液建立的检测胰蛋白酶可视化阵列；（b）是添加不同浓度胰蛋白酶后的荧光光谱曲线；（c）是根据胰蛋白酶浓度和相应的荧光强度比值(I650/I440)建立的标准曲线。
图4中（a）为待测样品的荧光图片，（b）为待测样品的荧光光谱曲线。
具体实施实例
实施例1：
S1：制备CNQDs溶液；
制备CNQDs的具体步骤为：首先称取10 g三聚氰胺放于600℃马弗炉中煅烧2 h。得到黄色的C3N4粉末；其次，将30 mg的C3N4粉末溶于3 g PEG 200中，并加入1.5 g浓KOH(1.1g/mL)；搅拌15min后，将溶液转移至反应釜中，在180℃下反应16h；冷却至室温后，将反应液用孔径为0.22 μm的有机膜进行抽滤，收集滤液在截留分子量为1000的透析袋中透析24h，将透析得到的溶液用蒸馏水定容到100 mL待用。
S2：制备CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
将0.15 mL钛酸四丁酯逐渐加入10 mL乙二醇中并在室温下持续搅拌10 h，得到钛前驱体；然后，4 mL钛前驱体加入到含有10 mL CNQDs、0.1 mL吐温20的40 mL丙酮溶液中，搅拌24 h后得到CNQDs/TiO2纳米微球的乳状液。使用高速离心机离心得到沉淀，使用乙醇洗涤三遍，最后分散在5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液。
S3：制备比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球；
将10 μL APTES加入到CNQDs/TiO2乙醇溶液中，搅拌24 h后使得CNQDs/TiO2表面覆盖大量氨基。高速离心得到固体沉淀，将沉淀分散到5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液。将5 mL的CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液和5 mL牛血清蛋白溶液（50 mg/mL）混合搅拌2h，随后加入5 mL四氯金酸溶液（10 mM），37℃下搅拌混合10min后加入1 mL浓氢氧化钾溶液(1.1 g/mL)，溶液在37℃下持续搅拌12h后，在高速离心下得到了比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
本发明还提供的一种比率型荧光探针检测胰蛋白酶方法的步骤为：
（1）配制浓度为0.01 mg/mL的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液；
（2）配制一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液，浓度分别为0、10、30、50、70、90、100、150、200、250 和300 μg/mL；
（3）将胰蛋白酶标准溶液加入到比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中，利用荧光成像仪获取添加不同量胰蛋白酶的荧光图片，组成检测胰蛋白酶可视化阵列（图3a）。由检测胰蛋白酶可视化阵列可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，红色荧光逐渐变淡，荧光颜色由红色逐渐变为蓝色。根据胰蛋白酶浓度不同，比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球颜色呈现出规律性的变化，故本发明成功建立了检测胰蛋白酶可视化阵列，用于可视化检测胰蛋白酶含量。利用荧光分光光度计获取荧光光谱图（图3b），由荧光光谱图可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处荧光逐渐下降，而440 nm处荧光强度保持不变。比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球对胰蛋白酶产生了比率型的荧光响应，故可将比率型荧光信号用于胰蛋白酶的定量检测；
（4）记录胰蛋白酶标准溶液加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值(I650/I440)之间的关系建立检测胰蛋白酶的标准曲线（图3c），标准曲线的方程为y=1.7501- 0.0040x（R2= 0.9903）。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测胰蛋白酶的含量；
（5）样品中胰蛋白酶的定量检测：
将待测样品加入比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液，利用荧光成像仪获取样品的荧光图片(图4a)，通过与检测胰蛋白酶可视化阵列对比发现样品中存在胰蛋白酶，且浓度大概在30 μg/mL-50 μg/mL之间，由此实现了胰蛋白酶的定性及半定量检测。记录加入样品后的荧光曲线（图4b），荧光强度比值Yr(I650/I440)为1.6134，参照步骤S4 (4)中建立的标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶浓度Q (Q =(1.6134-1.7501)/(-0.0040))为34.175 μg/mL，由此实现了样品中胰蛋白酶的定量检测。将样品加入到复合荧光微球溶液中，通过建立的检测胰蛋白酶可视化阵列和标准曲线，能够实现样品中胰蛋白酶的检测。
表1本发明检测结果与标准法检测结果的对比
样品 本检测法(μg/mL) RSD (%) 标准法(μg/mL) RSD (%)
样品1 34.175 3.27 33.459 4.86
通过与标准比色法对比，本发明的检测结果和标准方法结果相近（如表1所示），且本法测定结果的相对标准偏差(RSD，%)较标准方法小，说明本检测法检测结果波动小，检测结果稳定，重复性好。通过目测法比较荧光图片的颜色可以可视化定性检测出样品中是否含有胰蛋白酶和半定量检测出胰蛋白酶的大概浓度。通过获取的荧光光谱图和胰蛋白酶的标准曲线可以准确定量检测出胰蛋白酶的含量。总之，本发明建立的方法准确度高，通过肉眼以及建立的标准曲线可以实现样品中的胰蛋白酶检测。另外，标准方法的检测限为149ng/mL，而本方法的检测线为0.156 ng/mL，低于标准法的检测限。
本发明方法灵敏度高、检测线低且重复性好的主要原因有：（1）制备的氮化碳量子点荧光特性优良并且性质稳定；（2）通过制备CNQDs/TiO2微球可以保护氮化碳量子点，使其不受周围环境变化的影响，荧光性质更加稳定，为提高检测的重复性提供了基础；（3）因CNQDs/TiO2荧光微球比表面积大且吸附能力强，能够有效地吸附金纳米簇，高效地合成具有双发射峰的CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球，该复合荧光微球性质稳定，荧光性能好。（4）胰蛋白酶能够特异性地识别比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球，使荧光信号发生变化。因此本发明制备的比率型复合荧光微球能够实现胰蛋白酶的快速、准确检测。
图1中曲线a和b分别是CNQDs/TiO2荧光微球和比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的荧光光谱曲线（插图c和d分别是两者的荧光图片）；由图1中的CNQDs/TiO2的荧光曲线（曲线a）可知该荧光微球的发射波长为440 nm，且由CNQDs/TiO2的荧光图片（插图c）可看出该荧光微球发出蓝色的荧光。由图1中的曲线b（比率型CNQDs/TiO2/AuNCs的荧光曲线）可知CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的具有两个发射波长，分别为440 nm和650 nm，且由插图d（比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的荧光图片）可看出该荧光微球发出红色的荧光。由图1可知本发明成功的制备了具有双发射性质的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
图2a和b是比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的扫描电镜图片，由电镜图片可以看出复合纳米微球呈圆形，粒径为50±8.5 nm。由图2可知本发明成功合成了CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
图3中(a)、(b)和(c)分别是建立的检测胰蛋白酶可视化阵列、添加不同浓度胰蛋白酶的荧光光谱曲线和根据胰蛋白酶浓度和相应的荧光强度比值(I650/I440)建立的标准曲线。由检测胰蛋白酶可视化阵列可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，红色荧光逐渐变淡，荧光颜色由红色逐渐变为蓝色。根据胰蛋白酶浓度不同，比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球颜色呈现出规律性的变化，故本发明成功建立了检测胰蛋白酶可视化阵列，用于可视化检测胰蛋白酶含量。由荧光光谱图可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处荧光逐渐下降，而440 nm处荧光强度保持不变。比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球对胰蛋白酶产生了比率型的荧光响应。根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值(I650/I440)之间的关系建立了检测胰蛋白酶标准曲线（y=1.7501- 0.0040x（R2= 0.9903）），由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测胰蛋白酶的含量。
图4中a和b分别为待测样品的荧光图片和待测样品的荧光光谱曲线。待测样品的荧光图片为浅红色，利用目视法将样品的荧光图片与检测胰蛋白酶可视化阵列对比发现，该荧光的颜色介于30 μg/mL和50 μg/mL的荧光图片之间，说明样品中胰蛋白酶的浓度大概在30 μg/mL-50 μg/mL之间，由此本发明实现了样品中胰蛋白酶的可视化半定量检测。待测样品的荧光光谱曲线具有两个发射峰，发射波长分别为440 nm和650 nm，同时两者的荧光强度比值为(I650/I440)为1.6134，参照建立的检测胰蛋白酶标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶浓度为34.175 μg/mL，由此本发明实现了样品中胰蛋白酶的定量检测。
实施例2：
S1：制备CNQDs溶液；
制备CNQDs的具体步骤为：首先称取10 g三聚氰胺放于600℃马弗炉中煅烧2 h。得到黄色的C3N4粉末；其次，将30 mg的C3N4粉末溶于1.5 g PEG 200中，并加入0.3 g浓KOH(1.1g/mL)；搅拌15min后，将溶液转移至反应釜中，在180℃下反应16 h；冷却至室温后，将反应液用孔径为0.22 μm的有机膜进行抽滤，收集滤液在截留分子量为1000的透析袋中透析24 h，将透析得到的溶液用蒸馏水定容到100 mL待用。
S2：制备CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
将0.1 mL钛酸四丁酯逐渐加入10 mL乙二醇中并在室温下持续搅拌10 h，得到钛前驱体。然后，1 mL钛前驱体加入到含有3 mL CNQDs、0.01 mL吐温20的13.01 mL丙酮溶液中，搅拌24 h后得到CNQDs/TiO2纳米微球的乳状液。使用高速离心机离心得到沉淀，使用乙醇洗涤三遍，最后分散在5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液。
S3：制备比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球
将1 μL APTES加入到1 mL CNQDs/TiO2乙醇溶液中，搅拌24 h后使得CNQDs/TiO2表面覆盖大量氨基。高速离心得到固体沉淀，将沉淀分散到5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液。将1 mL的CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液和10 mL牛血清蛋白溶液（50 mg/mL）混合搅拌2h，随后加入10 mL四氯金酸溶液（10 mM），37℃下搅拌混合20min后加入5 mL浓氢氧化钾溶液(1.1 g/mL)，溶液在37℃下持续搅拌8 h后，在高速离心下得到了比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
S4：本发明提供的一种比率型荧光探针检测胰蛋白酶方法的步骤为：
（1）配制浓度为0.02 mg/mL的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液；
（2）配制一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液，浓度分别为0、10、30、50、70、90、100、150、200、250, 300, 400, 500和600 μg/mL；
（3）将胰蛋白酶标准溶液加入到比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中，利用荧光成像仪获取添加不同量胰蛋白酶的荧光图片，组成检测胰蛋白酶可视化阵列。由检测胰蛋白酶可视化阵列可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，红色荧光逐渐变淡，荧光颜色由红色逐渐变为蓝色。根据胰蛋白酶浓度不同，比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球颜色呈现出规律性的变化，故本发明成功建立了检测胰蛋白酶可视化阵列，用于可视化检测胰蛋白酶含量。利用荧光分光光度计获取荧光光谱图，由荧光光谱图可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处荧光逐渐下降，而440 nm处荧光强度保持不变。比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球对胰蛋白酶产生了比率型的荧光响应，故可将比率型荧光信号用于胰蛋白酶的定量检测；
（4）记录胰蛋白酶标准溶液加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值(I650/I440)之间的关系建立检测胰蛋白酶的标准曲线，标准曲线的方程为y=1.8601- 0.0030x（R2= 0.9853）。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测胰蛋白酶的含量；
（5）样品中胰蛋白酶的定量检测：
将待测样品加入比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液，利用荧光成像仪获取样品的荧光图片，通过与检测胰蛋白酶可视化阵列对比发现样品中存在胰蛋白酶，且浓度大概在100 μg/mL-150 μg/mL之间，由此实现了胰蛋白酶的定性及半定量检测。记录加入样品后的荧光曲线，荧光强度比值Yr(I650/I440)为1.5302，参照步骤S4 (4)中建立的标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶得到浓度Q (Q=1.5302-1.8601)/(-0.0030)为109.9667 μg/mL，由此实现了样品中胰蛋白酶的定量检测，该方法与标准法检测结果相近且相对标准偏差较小（表2）。。将样品加入到复合荧光微球溶液中，通过建立的检测胰蛋白酶可视化阵列和标准曲线，能够实现样品中胰蛋白酶的检测。
表2本发明检测结果与标准法检测结果的对比
样品 本检测法(μg/mL) RSD (%) 标准法(μg/mL) RSD (%)
样品1 109.9667 3.46 110.630 4.57
实施例3：
S1：制备氮化碳荧光量子点(CNQDs)
制备CNQDs的具体步骤为：首先称取10 g三聚氰胺放于600℃马弗炉中煅烧2 h。得到黄色的C3N4粉末；其次，将30 mg的C3N4粉末溶于30 g PEG 200中，并加入3 g浓KOH(1.1g/mL)；搅拌15min后，将溶液转移至反应釜中，在180℃下反应16 h；冷却至室温后，将反应液用孔径为0.22 μm的有机膜进行抽滤，收集滤液在截留分子量为1000的透析袋中透析24 h，将透析得到的溶液用蒸馏水定容到100 mL待用。
S2：制备CNQDs/TiO2荧光微球
将0.1 mL钛酸四丁酯逐渐加入50 mL乙二醇中并在室温下持续搅拌10 h，得到钛前驱体。然后，10 mL钛前驱体加入到含有10 mL CNQDs、1 mL吐温20的61 mL丙酮溶液中，搅拌24 h后得到CNQDs/TiO2纳米微球的乳状液。使用高速离心机离心得到沉淀，使用乙醇洗涤三遍，最后分散在5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液。
S3：制备比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球
将10 μL APTES加入到10 mL CNQDs/TiO2乙醇溶液中，搅拌24 h后使得CNQDs/TiO2表面覆盖大量氨基。高速离心得到固体沉淀，将沉淀分散到5 mL乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液。将10 mL的CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液和1 mL牛血清蛋白溶液（50 mg/mL）混合搅拌2h，随后加入1 mL四氯金酸溶液（10 mM），37℃下搅拌混合30min后加入0.1 mL浓氢氧化钾溶液(1.1 g/mL)，溶液在37℃下持续搅拌10 h后，在高速离心下得到了比率型CNQD/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
本发明提供的一种比率型荧光探针检测胰蛋白酶方法的步骤为：
（1）配制浓度为0.005 mg/mL的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液；
（2）配制一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液，浓度分别为0、5、10、20、30、50、70、90、100、120、150、和200 μg/mL；
（3）向比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中加入胰蛋白酶标准溶液，利用荧光成像仪获取添加不同量胰蛋白酶的荧光图片，组成检测胰蛋白酶可视化阵列。由检测胰蛋白酶可视化阵列可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，红色荧光逐渐变淡，荧光颜色由红色逐渐变为蓝色。根据胰蛋白酶浓度不同，比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球颜色呈现出规律性的变化，故本发明成功建立了检测胰蛋白酶可视化阵列，用于可视化检测胰蛋白酶含量。利用荧光分光光度计获取荧光光谱图，由荧光光谱图可发现随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处荧光逐渐下降，而440 nm处荧光强度保持不变。比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球对胰蛋白酶产生了比率型的荧光响应，故可将比率型荧光信号用于胰蛋白酶的定量检测；
（4）记录胰蛋白酶标准溶液加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值(I650/I440)之间的关系建立检测胰蛋白酶的标准曲线，标准曲线的方程为y=1.3501- 0.0049x（R2= 0.9725）。由结果可知，该标准曲线线性关系好，能够准确地检测胰蛋白酶的含量；
（5）样品中胰蛋白酶的定量检测：
将待测样品加入比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液，利用荧光成像仪获取样品的荧光图片，通过与检测胰蛋白酶可视化阵列对比发现样品中存在胰蛋白酶，且浓度大概在120 μg/mL-150 μg/mL之间，由此实现了胰蛋白酶的定性及半定量检测。记录加入样品后的荧光曲线，荧光强度比值Yr(I650/I440)为0.7119，参照步骤S4 (4)中建立的标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶得到浓度Q (Q =0.7119-1.3501)/(-0.0049)为130.245 μg/mL，由此实现了样品中胰蛋白酶的定量检测，该方法与标准法检测结果相近且相对标准偏差较小（表3）。将样品加入到复合荧光微球溶液中，通过建立的检测胰蛋白酶可视化阵列和标准曲线，能够实现样品中胰蛋白酶的准确检测。
表3本发明检测结果与标准法检测结果的对比
样品 本检测法(μg/mL) RSD (%) 标准法(μg/mL) RSD (%)
样品1 130.245 3.79 131.458 4.77

Claims (10)

1.一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤如下：
S1：制备CNQDs溶液；
将三聚氰胺放于马弗炉中煅烧，得到黄色的C3N4粉末；然后，将C3N4粉末和KOH溶液溶于PEG 200中；搅拌后，将溶液转移至反应釜中进行反应，得到反应液，冷却至室温后，进行抽滤、透析，得到CNQDs溶液；
S2：制备CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
将钛酸四丁酯和乙二醇混合并在室温下搅拌反应，得到钛前驱体；然后，将钛前驱体加入到含有CNQDs和吐温20的丙酮溶液中，搅拌后得到CNQDs/TiO2荧光微球的乳状液，离心得到沉淀，分散于乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液；
S3：制备比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球；
将APTES加入到CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液中，磁力搅拌，使得CNQDs/TiO2表面覆盖大量氨基，离心得到固体沉淀，分散到乙醇溶液中，得到CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液；将CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液和牛血清蛋白溶液混合搅拌，随后加入四氯金酸溶液，搅拌后加入氢氧化钾溶液，进行搅拌，然后离心得到了比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球。
2.根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述反应的条件为温度180℃，时间16h。
3. 根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述C3N4粉末、PEG 200和KOH溶液的质量之比为0.1-1:5-1000:1-100,所述KOH溶液的浓度为1.1g/mL。
4. 根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述钛酸四丁酯和乙二醇的体积比为0.1-1: 10-100；所述钛前驱体、CNQDs、吐温20和丙酮的体积比为1-10: 3-10: 0.01-1:10-50。
5.根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述APTES和CNQDs/TiO2荧光微球乙醇溶液的体积比为10-3-10-2:1-10。
6. 根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述牛血清蛋白溶液的浓度为50 mg/mL；所述四氯金酸溶液的浓度为10 mM；所述氢氧化钾溶液的浓度为1.1 g/mL。
7. 根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述磁力搅拌的时间为12-24h；所述混合搅拌的时间为1-4h； 所述加入四氯金酸溶液的搅拌条件为，温度37℃，时间10-30min；所述加入氢氧化钾溶液搅拌的条件为：温度37℃，时间8~24h。
8. 根据权利要求1所述的一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述的CNQDs/TiO2-NH2乙醇溶液、牛血清蛋白溶液、四氯金酸溶液和氢氧化钾的体积比为1-10: 1-10: 1-10: 0.1-5。
9.根据权利要求1~8任一项所述方法制备的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球用于检测胰蛋白酶的用途，其特征在于，步骤如下：
（1）配制一定浓度的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液；
（2）配制一系列浓度的胰蛋白酶标准溶液，浓度分别为Q1、Q2、Q3、……、Qn-1、Qn，共n个浓度梯度，n为正整数；
（3）向步骤（1）制备的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中加入步骤（2）制备的胰蛋白酶标准溶液，由于胰蛋白酶能够特异性水解牛血清蛋白；当比率型CNQDs/TiO2/AuNCs中存在胰蛋白酶时，稳定的AuNCs会沉淀聚集，产生的荧光会被猝灭；而CNQDs/TiO2不受影响，产生的荧光基本保持不变，利用荧光成像分析仪获取了不同浓度下的荧光图片，组成了检测胰蛋白酶可视化阵列，随着胰蛋白酶浓度的增加，荧光图片的颜色逐渐由红色变为蓝色，利用荧光分光光度计获取了不同浓度下的荧光光谱曲线，随着胰蛋白酶浓度的增加，650 nm处的荧光强度逐渐下降，而440 nm处的荧光强度基本保持不变；
（4）记录胰蛋白酶加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，分别记为I650和I440；根据胰蛋白酶的浓度和相对应的荧光强度比值之间的关系建立检测胰蛋白酶的标准曲线，标准曲线的方程为y= a+ b x，其中y为胰蛋白酶的浓度，μg/mL；x代表荧光强度比值，I650/I440；a和b分别为方程的常数项和系数；
（5）样品中胰蛋白酶的定量检测：将待测样品加入步骤（1）的荧光微球CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球水溶液中，获取样品的荧光图片，与检测胰蛋白酶可视化阵列对比可发现样品中存在胰蛋白酶，且浓度在Qi-Qi+1(i< n)之间，由此实现了胰蛋白酶的定性及半定量检测；通过获取样品的荧光光谱曲线，记录样品加入后在650 nm和440 nm处的荧光强度，计算荧光强度比值Yr ，即I650/I440；代入步骤（4）建立的标准曲线，得到待测样品中胰蛋白酶的浓度，由此实现了样品中胰蛋白酶的定量检测。
10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于，步骤（1）中所述的比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的水溶液浓度为0.005-0.02mg/mL；步骤（2）中所述的胰蛋白酶标准溶液的浓度为0-600 μg/mL。
CN201810913939.5A 2018-08-10 2018-08-10 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用 Active CN109115740B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810913939.5A CN109115740B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810913939.5A CN109115740B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109115740A CN109115740A (zh) 2019-01-01
CN109115740B true CN109115740B (zh) 2020-08-28

Family

ID=64853132

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810913939.5A Active CN109115740B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109115740B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112326620A (zh) * 2020-11-16 2021-02-05 南京思泰乐生物科技有限公司 一种快速荧光蛋白酶活性检测方法
CN114177200B (zh) * 2021-12-02 2022-08-19 中南大学 一种habt-c纳米材料及其制备和应用
CN114441489A (zh) * 2021-12-24 2022-05-06 郑州大学 一种基于荧光微球和碳点的比率型荧光生物探针制备方法及在刀豆球蛋白a检测中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102590166A (zh) * 2012-02-10 2012-07-18 中国科学院长春应用化学研究所 一种胰蛋白酶的检测方法
CN104383919A (zh) * 2014-09-30 2015-03-04 江南大学 具有可见光光活性的纳米簇模拟酶的制备及其比色法检测胰蛋白酶应用
CN104841470A (zh) * 2015-04-17 2015-08-19 浙江工业大学 一种复合型二氧化钛纳米片光催化剂及其制备方法和应用
CN107603593A (zh) * 2017-08-30 2018-01-19 浙江工业大学 一种比率型荧光探针及其制备与检测谷胱甘肽的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102590166A (zh) * 2012-02-10 2012-07-18 中国科学院长春应用化学研究所 一种胰蛋白酶的检测方法
CN104383919A (zh) * 2014-09-30 2015-03-04 江南大学 具有可见光光活性的纳米簇模拟酶的制备及其比色法检测胰蛋白酶应用
CN104841470A (zh) * 2015-04-17 2015-08-19 浙江工业大学 一种复合型二氧化钛纳米片光催化剂及其制备方法和应用
CN107603593A (zh) * 2017-08-30 2018-01-19 浙江工业大学 一种比率型荧光探针及其制备与检测谷胱甘肽的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A fluorescence resonance energy transfer biosensor based on carbon dots and gold nanoparticles for the detection of trypsin;Shaomei Xu等;《Sensors & Actuators: B. Chemical》;20180715;第273卷;全文 *
synthesizing a nano-composite of BSA-capped Au nanoclsters/graphitic carbon nitride nanosheets as a new fluorescent probe for dopamine detection;Xingrong Guo等;《Analytica chimica acta》;20160909;第942卷;全文 *
新型荧光碳量子点纳米探针的制备及其生化分析应用研究;上官璟芳;《中国博士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20180615(第 06 期);全文 *
量子点和金簇纳米传感器制备及在药物检测中的应用研究;李红霞;《中国博士学位论文全文数据库 信息科技辑》;20170315(第3期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109115740A (zh) 2019-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hu et al. A signal-amplified ratiometric fluorescence biomimetic sensor based on the synergistic effect of IFE and AE for the visual smart monitoring of oxytetracycline
CN109115740B (zh) 一种比率型CNQDs/TiO2/AuNCs复合荧光微球的制备方法及其应用
An et al. Carbon dots-based dual-emission ratiometric fluorescence sensor for dopamine detection
CN107677656B (zh) 一种比率荧光纳米探针及其应用
CN107828772B (zh) 一种用于比率荧光检测的固定化酶反应器及其制备方法
Ahmadi et al. Electrochemiluminescence paper-based screen-printed electrode for HbA1c detection using two-dimensional zirconium metal-organic framework/Fe3O4 nanosheet composites decorated with Au nanoclusters
US20210269421A1 (en) Water-soluble fluorescent probe and nanoparticals with aggregation-induced emission effect for ovarian cancer and preparation method and use thereof
Chen et al. Upconversion nanoparticles with bright red luminescence for highly sensitive quantifying alkaline phosphatase activity based on target-triggered fusing reaction
Lu et al. A novel dual response ratiometric fluorescent probe for the determination of H 2 O 2 and glucose via etching of silver nanoparticles
Wei et al. Homogeneous electrogenerated chemiluminescence immunoassay for the detection of biomarkers by magnetic preconcentration on a magnetic electrode
CN105527277B (zh) 一种雌酮分子印迹电化学发光传感器的制备方法及应用
Liu et al. Glutenin-directed gold nanoclusters employed for assaying vitamin B 1
Wang et al. Ratiometric fluorescence sensor and smartphone-based microfluidic sensing platform based on oxidation induced Ce (III)/Ce (IV) phosphatase-like activity and complexation effect activation for sarcosine detection
CN109100400A (zh) 用于检测刀豆蛋白a的传感器及其制备方法和应用
Liu et al. A label-free “turn-on” fluorescence platform for glucose based on AuNCs@ MnO 2 nanocomposites
CN110372681B (zh) 一种用于选择性检测人血清白蛋白的自组装纳米荧光探针的应用
CN111573654A (zh) 用于检测酸性环境pH的绿色荧光碳量子点及其制备方法
CN206146944U (zh) 检测肺癌标志物的试剂盒
CN106124579B (zh) 一种电化学纳米免疫传感器的通用信号放大系统的制备方法
Li et al. A novel gold nanoprobe for a simple electrochemiluminescence determination of a prostate-specific antigen based on a peptide cleavage reaction
CN106370646B (zh) 检测待测样品中蛋白质的方法
CN115124992A (zh) 一种基于智能手机的比率荧光传感器及其制备方法和应用
CN109971478A (zh) 铽离子掺杂的纳米颗粒用于荧光双波长检测多巴胺的方法
CN113960317A (zh) 一种测量生物样品中nad+浓度的生物传感器及方法
Cao et al. Band-pass filter–assisted ratiometric fluorescent nanoprobe composed of N-(2-aminoethyl-1, 8-naphthalimide)-functionalized gold nanoclusters for the determination of alkaline phosphatase using digital image analysis

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant