CN112595849A - 用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药生物技术领域，公开了一组用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物，所述标志物为RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合。本发明还公开了上述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用，所述产品为试纸条或试剂盒。本发明首次将RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合作为早期食管癌筛查的标志物，该标志物具有较高的灵敏度和特异度，极大地提高了早期食管癌的检出率，可用于食管癌高发区无症状人群的大规模筛查，有利于无症状食管癌高危人群早期发现，从而大大降低了食管癌患者的死亡率。

Description

用于早期食管癌筛查的血清学检测标志物及其应用

本申请是申请号为CN 2020104853723，申请日为2020-06-01，名称为“一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条”的发明专利的分案申请。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条。

背景技术

食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，我国是全球食管癌发病率最高的国家。河南是中国食管癌高发省份，在中国,围绕太行山地区的河南、河北和山西三省交界地区,特别是河南的林州、安阳和辉县等地,是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区，食管癌高发区(发病率＞60/10万)人口超过4371万，占全省人口的41％。

目前，临床上90％的食管癌患者就诊时已属中晚期，导致此结局的主要原因是患者早期无特异症状，缺乏无症状高危人群预警筛查的分子靶标。尽管早期食管癌5年生存率可达90％以上，但临床发现率极低(仅占5％左右)。从正常食管上皮经各级癌前病变到早期癌的多阶段演进分子机制尚不清楚，缺乏高危人群预警和早期食管癌筛查的分子分型模型和技术是导致这一现象的主要原因之一。

早期发现是降低食管癌发病率和死亡率的关键。目前，色素内镜和黏膜活检是食管癌早期发现的重要筛查方法。但是，内镜筛查效率低(例如，常规高发区内镜筛查高危人群，早期癌的发现率仅2％左右，约90％以上的无症状高危人群均为“陪伴检查”)，这些限制了内镜筛查在无症状人群中的推广应用。

肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化后免疫特性可以识别或诊断肿瘤。尽管目前临床常用的一些肿瘤标志物，如CA125(癌抗原125)、CA199(癌抗原199)、CEA(癌胚抗原)和SCCA(鳞状细胞癌抗原)等可用于食管癌的诊断，但其敏感性和特异性均不高，尤其是对早期食管鳞癌患者的诊断价值不够高。本研究团队在前期利用全基因组关联分析、全基因组测序和全基因组外显子测序等技术建立的基因组学数据库的基础上，采用蛋白芯片技术对早期食管癌患者、高发区无症状高危人群以及正常人血清进行检测和分析，筛选出三种在食管癌患者和正常人中差异化表达的肿瘤血清标志物——RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白。

RBM47蛋白(RNA结合基序蛋白47)，RNA结合蛋白(RBPs)对基因表达的调控在大多数细胞信号转导途径中的作用越来越明显。RBPs控制RNA生物合成的几个方面，包括剪接、定位、稳定性和翻译效率。其中一个RBPs是RBM47，最近有人认为它可以作为肿瘤抑制因子，因为它可以抑制乳腺癌和结肠癌的进展。RBM47在转录水平上调节p53。通过控制p53基因，RBM47的敲除同时也降低了p21在转录水平的表达，使来自不同实体的放射癌细胞株进入细胞死亡。

BCAS4蛋白(乳腺癌扩增序列4)，在乳腺癌中，有几个染色体位点经常被扩增，这意味着基因的位置对肿瘤的发展和进展很重要，BCAS4在大量乳腺癌细胞系中过度表达。有研究表明BCAS4被预测编码211氨基酸23-kD细胞质蛋白(76.7％PSORT II程序的可能性)与任何其他已知基因或蛋白质没有同源性。主要表达于大脑、胸腺、脾脏、肾脏和胎盘。

HNMT蛋白(组胺N-甲基转移酶)，组胺是一种具有局部效应的生物活性物质，但参与调节机体的不同过程，包括疾病的发病机制，广泛分布于人类肝、脑、肾、肺、皮肤、胃肠道、气道及红细胞等组织中，是人体内重要的自身活性物质,具有十分广泛而重要的生理作用，参与了多种疾病的病理生理过程；组胺N-甲基转移酶是体内催化组胺生物转化主要代谢酶，与组胺失活密切相关。

RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白在正常人血清中低表达，在食管癌患者血清中高表达；而且，进一步采用统计学检验发现，三种蛋白在食管癌人群中的阳性率均显著高于正常人群，有显著差异。由此说明，RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白可以用于食管癌的诊断。针对该发现，本研究团队利用RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白作为检测指标制备用于早期食管癌检测的产品，用于对食管癌高发区无症状人群进行食管癌早期筛查(无创、简便、经济)，以期提高食管癌早期检出率，改善患者生存质量，减轻家庭和社会负担。

发明内容

针对现有技术中存在的问题和不足，本发明的目的之一旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物，本发明的目的之二旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物的检测试剂的应用，本发明的目的之三旨在提供一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明首先提供了一种用于早期食管癌筛查的标志物，所述标志物为HNMT蛋白、BCAS4蛋白、RBM47蛋白中的任意一种或多种的组合。

本发明还提供了一种上述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。

根据上述的应用，优选地，所述检测试剂为与所述标志物特异性结合的抗体。

根据上述的应用，优选地，所述产品通过免疫层析法或酶联免疫法检测样本中的所述标志物。

根据上述的应用，优选地，所述样本为血清。

根据上述的应用，优选地，所述产品为试纸条或试剂盒。

本发明还提供了一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，所述试纸条包括结合垫和层析垫，所述结合垫上包被有捕获抗体，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A的混合物，RBM47抗体A、BCAS4抗体A、HNMT抗体A均带有可检测的标记物；所述层析垫上设有三条检测线和一条质控线，所述检测线上均固定有检测抗体，三条检测线固定的检测抗体分别为HNMT抗体B、BCAS4抗体B、RBM47抗体B，同种抗原的抗体A、抗体B识别抗原的不同表位；所述质控线上固定有羊抗兔IgG。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述标记物为胶体金颗粒，其中，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A分别用不同粒径的胶体金颗粒标记。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，HNMT抗体A、BCAS4抗体A、RBM47抗体A分别为HNMT单克隆抗体、BCAS4单克隆抗体、RBM47单克隆抗体，RBM47单克隆抗体用粒径为27.5nm的胶体金颗粒标记，BCAS4单克隆抗体用粒径为52nm的胶体金颗粒标记，HNMT单克隆抗体用粒径为64nm的胶体金颗粒标记，相对应的颜色分别为橙红色、红色和紫红色。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，HNMT抗体B、BCAS4抗体B、RBM47抗体B分别为HNMT多克隆抗体、BCAS4多克隆抗体、RBM47多克隆抗体。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述试纸条还包括样品垫、吸样垫和底板，所述样品垫、结合垫、层析垫和吸样垫依次固定在底板上；其中，结合垫的一端压在样品垫的下方，结合垫的另一端压在层析垫的上方；层析垫的一端压在结合垫的下方，层析垫的另一端压在吸样垫的下方。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述捕获抗体中HNMT单克隆抗体、BCAS4单克隆抗体、RBM47单克隆抗体的质量比为1:1:1。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述层析垫上的三条检测线和一条质控线按照以下次序排列而成：从靠近吸样垫一端到靠近结合垫一端依次为包被有羊抗兔IgG的质控线C、固定有RBM47多克隆抗体的检测线T3、固定有BCAS4多克隆抗体的检测线T2、固定有HNMT多克隆抗体的检测线T1。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，层析垫上检测线T1、T2、T3以及质控线C之间的间隔均不小于5mm。

根据上述的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条，优选地，所述样品垫的材质为吸水性玻璃纤维，所述结合垫的材质为玻璃纤维膜，所述层析垫的材质为硝酸纤维膜；所述吸样垫的材质为吸水纸或吸水性玻璃纤维膜；所述底板为PVC底板、硬纸板或硬质纤维板。

本发明还提供了一种包含上述用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的试剂盒。

根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包括吸滴管、血清加样杯和一次性注射器。

本发明用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的使用方法为：将待测血清样本滴加在试纸条的样品垫上或将试纸条样品垫插入待测血清样品中，取出试纸条后5～15min内观察检测线和质控线颜色变化并记录结果。

本发明用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的结果判定方法为：

阳性结果：在试纸条的层析垫T1、T2、T3检测线中至少有一条检测线显色(T1、T2、T3检测线对应的颜色分别为紫红色、红色、橙红色)，且质控线C显色，判定检测结果为阳性。

阴性结果：试纸条层析垫上的T1、T2、T3检测线均未显色，仅质控线C显色，判定检测结果为阴性。

无效结果：质控线C未显色，判断检测结果为无效，需重新检测。

本发明用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的检测原理为：

将试纸条插入待测样品中，样品流向吸样垫的方向，当流到结合垫上时，结合垫上包被的胶体金标记RBM47单克隆抗体、胶体金标记BCAS4单克隆抗体、胶体金标记HNMT单克隆抗体溶解，其中，胶体金标记RBM47单克隆抗体与血清样品中可能含有的RBM47抗原(RBM47蛋白)结合，形成胶体金标记RBM47单克隆抗体-RBM47抗原复合物，胶体金标记BCAS4单克隆抗体与血清样品中可能含有的BCAS4抗原(BCAS4蛋白)结合，形成胶体金标记BCAS4单克隆抗体-BCAS4抗原复合物，胶体金标记HNMT单克隆抗体与血清样品中可能含有的HNMT抗原(HNMT蛋白)结合，形成胶体金标记HNMT单克隆抗体-TXLNA抗原复合物；由于毛细管效应，三种胶体金标记的捕获抗体-抗原复合物在层析垫上移动，当移动至检测线T1时，胶体金标记HNMT单克隆抗体-HNMT抗原复合物与HNMT多克隆抗体特异性结合，形成固化的免疫复合物，被截留在检测线T1上；当移动至检测线T2时，胶体金标记BCAS4单克隆抗体-BCAS4抗原复合物与BCAS4多克隆抗体特异性结合，形成固化的免疫复合物，被截留在检测线T2上；当移动至检测线T3时，胶体金标记RBM47单克隆抗体-RBM47抗原复合物与RBM47多克隆抗体特异性结合，形成固化的免疫复合物，被截留在检测线T3上；游离的胶体金标记捕获抗体由于毛细管效应继续向前移动，与质控线C上包被的羊抗兔IgG发生结合而被截留在质控线上；多余的未结合的物质在毛细作用下继续移动到吸样垫上。因此，通过检测线T1、T2、T3的显色情况以及质控线的显色情况，能够定性判断待测样本中RBM47、BCAS4和HNMT肿瘤相关抗原。

由于血清中肿瘤相关抗原的表达丰度与其对应的自身抗体的表达丰度成正比，肿瘤相关抗原高表达，其对应的自身抗体也会高表达。因此，也可以将RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白作为检测试剂来应用，用于检测血清中RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白对应的自身抗体，以三种肿瘤相关抗原的自身抗体作为食管癌的诊断和筛查指标。

与现有技术相比，本发明取得的积极有益效果为：

(1)本发明首次将RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白这三种蛋白用于食管癌早期筛查检测，通过检测人血清中RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白的表达水平，可以有效检测食管癌，尤其是早期食管癌；而且，将RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白作为一个组合用于早期食管癌筛查检测时，其检测灵敏度高达92.1％(即早期食管癌患者中应用这3个蛋白进行诊断时被正确的诊断为早期食管癌的比率为92.1％)，特异度达到了83.6％(即非食管癌患者中应用这3个蛋白进行诊断时确定为未患食管癌者的比率为83.6％)，因此，本发明的标志物具有较高的灵敏度和特异度，极大地提高了早期食管癌的检出率，而且，对食管癌的检出率远高于现有临床内镜筛查食管癌的检出率，可用于食管癌高发区无症状人群的大规模筛查，有利于无症状食管癌高危人群早期发现，从而大大降低了食管癌患者的死亡率，为食管癌患者和家庭带来极大的福祉。

(2)本发明的该试纸条能够快速检测人血清中的RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白，实现了三种肿瘤标志物的联合检测，而且，试纸条具有较高的灵敏度和特异度，针对早期癌的检测准确性高，极大地提高了早期食管癌的检出率，有利于无症状食管癌高危人群早期发现，同时也为实现食管癌高发区无症状高危人群长期跟踪提供重要的检测手段，具有广阔的市场前景和社会效益。

(3)本发明结合垫上包被的三种捕获抗体分别采用不同粒径的胶体金颗粒进行标记，使层析垫上每种肿瘤标标志物显示不同的颜色，结果判断更加直观。

(4)本发明早期食管癌筛查试纸条操作简便，使用方便，而且检测出结果时间短，只需将其测试端插入待检的样品液中10s左右，然后在15min内即可判定检测结果，极大地提高了早期食管癌的诊断效率。

(5)本发明用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条不需其它仪器及试剂，非专业人员也可随时检测，可极大的降低检测成本和检测费用，而且人为操作误差小、稳定性好。

(6)本发明用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的检测样本为血清，需血量少，群众痛苦小、接受度高。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条的结构示意图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。

肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化后免疫特性可以识别或诊断肿瘤。本研究团队在前期利用全基因组关联分析、全基因组测序和全基因组外显子测序等技术建立的基因组学数据库的基础上，采用蛋白芯片技术对早期食管癌患者、高发区无症状高危人群以及正常人血清进行检测和分析，筛选出三种在食管癌患者血清中高表达的肿瘤标志物——RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白。RBM47蛋白、BCAS4蛋白和HNMT蛋白在正常人血清中低表达，在食管癌患者血清中高表达；而且，进一步采用统计学检验发现，三种蛋白在食管癌人群中的阳性率均显著高于正常人群，有显著差异。由此说明，RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白可以用于食管癌的诊断。针对该发现，本研究团队利用RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白作为检测指标来制备用于早期食管癌检测的试纸条，用于检测样本中RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白的表达水平，实现食管癌的早期筛查。

下列实施例所述的实验方法，如无特殊说明，均为本技术领域常规技术，或按照生产厂商所建议的条件；所用试剂、材料和仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：试纸条的制备

1、实验材料

本发明中所用的生物活性原料均为市售产品。其中，RBM47单克隆抗体购自abcam公司，货号为ab154176；BCAS4单克隆抗体购买自Abnova，货号为H00055653-K；HNMT单克隆抗体购买自abcam公司，货号为ab166609；RBM47多克隆抗体、BCAS4多克隆抗体、HNMT多克隆抗体均购买自武汉艾美捷生物科技公司，货号分别为PAB20345、PAB17637、PAB1874。

PVC底板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜、吸水纸等均为现有市售产品。

2、制备结合垫

(1)胶体金的制备：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液。向三个250mL锥形瓶中均加入100mL双蒸水及1％氯化金1mL，加热至沸腾；然后再磁力搅拌下分别向三个锥形瓶中加入1.5mL、1.1mL、0.8mL 1％柠檬酸三钠水溶液，混匀，继续加热沸腾30min。将锥形瓶冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积，得到胶体金溶液，电镜下检测三种胶体金溶液中胶体金颗粒的粒径。

(2)胶体金标记RBM47单克隆抗体、胶体金标记BCAS4单克隆抗体、胶体金标记HNMT单克隆抗体的制备：

分别对RBM47单克隆抗体溶液、BCAS4单克隆抗体溶液、HNMT单克隆抗体溶液透析除盐(4℃过夜)，调整蛋白质浓度至1mg/ml；在电磁搅拌下，RBM47单克隆抗体用粒径为27.5nm的胶体金标记，BCAS4单抗用粒径为52nm的胶体金标记，HNMT单抗用粒径为64nm的胶体金标记，得到三种胶体金标记的单克隆抗体。然后将胶体金标记的HNMT单克隆抗体、BCAS4单克隆抗体、RBM47单克隆抗体按质量比1:1:1的比例混合，得到捕获抗体溶液。

(3)结合垫的制备：

选用玻璃纤维膜作为结合垫材料，将玻璃纤维膜放入预处理液(预处理为含2％BSA、3％蔗糖、0.6M NaCl、0.2％Tween-20的硼酸盐缓冲液)中浸泡10～15min，然后于36～38℃烘干或真空冷冻干燥；将预处理后的玻璃纤维膜浸入上述胶体金标记抗体溶液中，充分浸泡后取出，冷冻干燥，得到结合垫。

3、制备层析垫

选用硝酸纤维素膜作为层析垫材料，在硝酸纤维素膜上标记好3条检测线T1、T2、T3和1条质控线C的位置，彼此之间间隔6mm。分别将HNMT多克隆抗体、BCAS4多克隆抗体、RBM47多克隆抗体、羊抗兔IgG装入BioDot喷膜机中，在硝酸纤维膜上3条检测线T1、T2、T3和1条质控线C的位置上按0.1-0.5μL/mm用量进行划线，37℃烘干过夜；然后将硝酸纤维素膜浸入含1％BSA的0.01mol/L PBS缓冲液(PH8.0)中，然后取出硝酸纤维素膜用PBS缓冲液清洗，干燥后得到层析垫。

4、样品垫制备

样品垫的材质为玻璃纤维膜，将玻璃纤维膜放入样品垫封闭液中浸泡30min，37℃烘干，即得样品垫；其中样品垫封闭液为含1％BSA、1.0％～2.0％蔗糖、0.1％-0.5％Tween-20、0.1-1.0％PVP聚乙烯基吡咯烷酮的0.01mol/L PBS缓冲液(pH＝7.4)。

5、试纸条组装

试纸条由样品垫、结合垫、层析垫、吸样垫和底板组成，吸样垫的材料为吸水滤纸。

将样品垫、结合垫、层析垫、吸样垫依次裁剪成合适的尺寸，宽度为1cm，长度为8cm。将层析垫贴合在底板的中间，为检测区和质控区，即在层析垫上设置用以判读结果的检测线T1、T2和T3以及质控线C；层析垫右端(上段)为手持部位，固定有吸样垫(吸水滤纸)，吸收检测样品中多余液体；层析垫左端固定结合垫，包被有胶体金标记的RBM47单克隆抗体、BCAS4单克隆抗体、HNMT单克隆抗体；结合垫和吸样垫分别与层析垫的两端重叠；结合垫远离层析垫的一端(下段)固定有样品垫，用于接触待检测样品，组装完成后干燥，即得用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条(参见图1)。

6、试纸条的使用方法

将待测血清样本滴加在试纸条的样品垫上或将试纸条样品垫插入待测血清样品中，取出试纸条后5～15min内观察检测线和质控线颜色变化并记录结果。

7、试纸条的检测结果判定

阳性结果：在试纸条的层析垫T1、T2、T3检测线中至少有一条检测线显色(T1、T2、T3检测线对应的颜色分别为紫红色、红色、橙红色)，且质控线C显色，判定检测结果为阳性。

阴性结果：试纸条层析垫上的T1、T2、T3检测线均未显色，仅质控线C显色，判定检测结果为阴性。

无效结果：质控线C未显色，判断检测结果为无效，需重新检测。

8、试纸条检测时的注意事项

(1)被检样品在室温(20℃左右)条件下检测。

(2)要求被检样品为新鲜样品。样品收集1h内检测，保证结果的可靠性。

(3)本试纸条仅供体外检测粗筛，不能作为确认试剂，阳性结果必须进行进一步上消化道内镜检查协诊。

(4)30min后观察结果无效。

(5)试纸条应避光保存。

实施例2：试纸条的诊断价值分析

用本发明实施例1制备的试纸条检测经病理确诊的早期食管癌患者和正常人的血清样品，评估分析本发明试纸条用于早期食管癌筛查和诊断的价值。

1、样本来源

收集来自郑州大学第一附属医院河南省食管鳞癌重点开放实验室的280例血清样本。280例血清样本中包含140例早期食管癌患者血清(食管癌组)和140例正常人血清(对照组)。140例正常人血清(对照组)来自该实验室合作医院体检中心的健康体检人群，无任何肿瘤相关的证据。140例正常人中，男性94例，女性46例，平均年龄51.8岁，年龄范围40-74岁。140份早期食管癌患者血清(食管癌组)来源于经组织病理学证实的早期(0期+I期)食管癌患者，均未接受放疗或化疗治疗，140例早期食管癌患者中，男性102例，女性38例，平均年龄56.4岁，年龄范围43-82岁。

2、实验方法

采用本发明实施例1制备的试纸条分别对食管癌组、对照组的血清样本进行检测，具体检测的方法为：取100μl待测血清样本，将试纸条下端的样品垫插入待测血清样本中10s～15s，取出试纸条，将试纸条平放静置5～15min，观察检测线和质控线颜色变化，判断检测结果。

同时为了与本发明实施例1制备的试纸条检测性能进行对比，本发明制备了6种对比试纸条，6种对比试纸条的检测指标分别为RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白、RBM47蛋白+BCAS4蛋白、BCAS4蛋白+HNMT蛋白、RBM47蛋白+HNMT蛋白。采用6种对比试纸条分别对食管癌组、对照组的血清样本进行检测。

根据结果判断标准，分别计算食管癌组和对照组中这3种抗原的阳性率(每组中检测出的阳性对象例数除以该组被检测对象总例数即为阳性率)；应用spss26.0软件进行统计学检验，采用两独立样本卡方检验方法比较食管癌组和对照组中抗原阳性率，检验水平α＝0.05，当p＜0.05时，结果具有统计学意义，然后采用筛检试验的方法评价自身抗体检测食管鳞癌的诊断价值(表1)。

3、结果分析

根据试纸条的检测结果评价其对食管癌的筛查诊断价值，结果如表1所示。

表1不同抗原组合对食管癌诊断价值的真实性评价

由表1可知，食管癌组中RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白的阳性率分别为41.4％、33.6％、27.1％，对照组中RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白的阳性率分别为7.9％、6.4％、5.0％，RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白在食管癌组的阳性率均高于其在对照组中的阳性率，且食管癌组与对照组间的差异具有统计学意义(P＜0.05)。由此可见，RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白这三种肿瘤相关抗原可作为早期食管癌诊断检测指标，用于早期食管癌的检测，具有诊断价值。

而且，从由表1还可以看出，随着试纸条检测指标(抗原)的增加，早期食管癌患者血清中，抗原的阳性率(即灵敏度)逐渐增大，而特异度则逐渐减小；当试纸条联合检测RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白三种抗原时，对早期食管癌的检测灵敏度达到了92.1％，也就是说食管癌患者中应用该检测方法能够正确诊断食管癌鳞癌的百分比为92.1％。随着试纸条检测指标的增加，检测的特异度有所降低，但是联合检测RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白三种肿瘤相关抗原时，检测特异度仍能达到83.6％，也就是说非食管癌患者采用这种方法检测时，正确诊断为健康人的百分比为83.6％。

而且，与单独采用检测一种抗原的试纸条相比，采用联合检测RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白3种肿瘤相关抗原的试纸条进行早期食管鳞癌诊断时，其灵敏度分别为检测单一指标RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白的2.2倍、2.7倍和3.4倍。

因此，通过联合检测血清样本中的RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白三种抗原对早期食管癌筛查诊断，可以保证诊断特异度的前提下，大幅提高诊断的灵敏度；对待检测对象食管癌风险评估具有较好的诊断和应用价值。

此外，约登指数在统计学上指灵敏度和特异度之和减去1，其范围为0～1，约登指数越接近1，其诊断价值就越高。本发明中，随着试纸条检测的抗原指标的增加，约登指数不断增加且逐渐趋于1，表明这3种肿瘤相关抗原联合用于诊断和筛查早期食管癌具有较好的诊断价值。

综上所述，通过联合检测血清样本中的RBM47蛋白、BCAS4蛋白、HNMT蛋白三种抗原对早期食管癌筛查诊断，能保证较高的特异度和灵敏度，对待检测对象食管癌风险评估具有较好的诊断和应用价值。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，但不仅限于上述实例，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种用于早期食管癌筛查的标志物，其特征在于，所述标志物为RBM47蛋白或RBM47蛋白与BCAS4蛋白的组合或RBM47蛋白与HNMT蛋白的组合。

2.权利要求1所述标志物的检测试剂在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为与所述标志物特异性结合的抗体。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品通过免疫层析法或酶联免疫法检测样本中的所述标志物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述样本为血清。

6.根据权利要求2～5任一所述的应用，其特征在于，所述产品为试纸条或试剂盒。

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