RU2119167C1 - Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови - Google Patents

Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови Download PDF

Info

Publication number
RU2119167C1
RU2119167C1 RU95114680/14A RU95114680A RU2119167C1 RU 2119167 C1 RU2119167 C1 RU 2119167C1 RU 95114680/14 A RU95114680/14 A RU 95114680/14A RU 95114680 A RU95114680 A RU 95114680A RU 2119167 C1 RU2119167 C1 RU 2119167C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
serum
whole blood
carrier
monoclonal antibodies
oncomarker
Prior art date
Application number
RU95114680/14A
Other languages
English (en)
Other versions
RU95114680A (ru
Inventor
Г.В. Виха
О.А. Полетаева
А.Г. Мешандин
Т.Б. Шапошникова
Original Assignee
Виха Галина Васильевна
Полетаева Ольга Александровна
Мешандин Алексей Гаврилович
Шапошникова Татьяна Борисовна
Научно-технический центр "Лекбиотех"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Виха Галина Васильевна, Полетаева Ольга Александровна, Мешандин Алексей Гаврилович, Шапошникова Татьяна Борисовна, Научно-технический центр "Лекбиотех" filed Critical Виха Галина Васильевна
Priority to RU95114680/14A priority Critical patent/RU2119167C1/ru
Publication of RU95114680A publication Critical patent/RU95114680A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2119167C1 publication Critical patent/RU2119167C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Набор предназначен для скрининга населения при формировании групп с высоким риском заболевания онкологическими заболеваниями, при картировании зон проживания с высоким уровнем канцерогенеза, для оценки степени опасности радиационного поражения рабочих, занятых в потенциально канцерогенных производственных процессах. Набор содержит носитель с иммобилизованными моноклональными антителами, буферный раствор и контрольные образцы. В качестве носителя набор содержит 2 мл гидрозоля оксида железа (III) с размером частиц 0,1 - 0,8 мкм. На носитель иммобилизовано 800 - 1400 мкг моноклональных антител, продуцируемых штаммом гибридных культивируемых клеток животных Mus. musculus L Nо ВСКК/П/456Д. К качестве буферного раствора набор содержит 0,06 М ацетатный буфер, имеющий pH 7,2, с добавкой 0,15 М хлорида натрия. В качестве контрольных образцов - положительный контроль, содержащий гликопротеин-онкомаркер, и отрицательный контроль - донорскую сыворотку или цельную кровь. Использование набора позволяет выявить 50 - 60% онкологических больных по анализу сыворотки или цельной крови. 3 табл.

Description

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для скрининга населения для отбора групп с высоким риском онкологических заболеваний, картирования зон проживания с высоким риском канцерогенеза, для оценки степени опасности радиационного поражения, мониторинга рабочих, занятых в потенциально канцерогенных производственных процессах, слежение за лечением и выявление рецидивов.
Известно использование моноклональных антител (мкат) для дифференциального иммуногистохимического исследования пунктатов, скарификатов, мазков, соскобов с опухолей при хирургических операциях с целью уточняющей диагностики.
Для целей скрининга и мониторинга, выявления рецидивов неприемлема пункционная биопсия для забора биологического материала.
В связи с этим используют свойство антигенов опухолей слущиваться и поступать в кровоток, где они могут быть определены с помощью мкат.
С целью расширения возможности диагностики злокачественных новообразований в последнее десятилетие широко разрабатываются методы серологического определения в сыворотке опухолеассоциированных антигенов. Для целей мониторинга рака молочной железы с большим или меньшим успехом используют такие маркеры, как РЭА (раковоэмбриональный антиген), CA-15-3, MCA, CA-125, TPS (The Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation, V. 55, 1995; Tumor Markers. Current Status and Future Trends).
Прототипом данного технического решения может служить набор фирмы Hoffman La Roche для определения муциноподобного ассоциированного с карциномами антигена (МСА), высокомолекулярного гликопротеина, который обнаруживается иммуногистологически в различных карциномах, особенно карциномах молочной железы и в отдельных случаях нормального эпителия слизистой. (Cancer Res., V. 48, P. 6799-6802 (1988).
Набор состоит из шариков из полистирола, покрытых мышиными мкат против МСА, конъюгата мышиных мкат против МСА с пероксидазой хрена, стандартные растворы с концентрациями МАС 125, 25 и 50 U/мл, контрольная сыворотка с известным содержанием МСА, буфер, концентрат субстрата ТМБ пероксидазы, перекись водорода в буфере, останавливающий энзиматическую реакцию раствор-серная кислота.
В качестве диагностических признаков используются следующие критерии: 1) повышение уровня маркера против верхней границы нормы,
2) выраженная динамика снижения уровня маркера после лечения не менее чем на 50%. Анализ МСА может быть использован для мониторинга и обнаружения рецидивов.
Однако анализ, предусматривающий использование этого набора, является длительным, продолжительность его составляет 4 - 6 ч.
Другой недостаток заключается в невозможности определения опухолевых маркеров в образцах крови. Связанная с этим необходимость получения сыворотки также увеличивает время проведения анализа.
На сегодняшний день все маркеры, используемые для серодиагностики злокачественных опухолей, содержатся в сыворотке здоровых доноров. Процесс злокачественного роста сопровождается повышением уровня этих маркеров в сыворотке. Поэтому эти маркеры не могут быть использованы для скрининга. Их используют только для мониторинга терапии, обнаружения рецидивов.
Не существует диагностикума для скрининга, а также для обнаружения опухолеассоциированных антигенов в цельной крови.
Цель изобретения заключается в устранении указанных недостатков.
Поставленная цель достигается использованием нового маркера опухолевого роста, определяемого в сыворотке мкат, продуцируемыми штаммом гибридных культивируемых клеток мышей Mus. musculus L No BCKK/П/456Д (SU N 1698287 A1, 1989, БИ N 46, 1991), использованием в скрининговом экспреасс-анализе принципа агглютинации антигеном антител, покрывающих частицы гидроксида железа.
В состав набора-диагностикума входит: гидрозоль оксида железа (2 мл), нагруженный 800 - 1400 мкг мкат, рабочий буфер для разведения проб и гидрозоля (0,06М ацетатный буфер pH 7,2 с добавкой 0,15 М NaCl), планшет U-образный, положительный контроль с содержанием гликопротеинового маркера не менее 1-2 мкг и отрицательный контроль - донорская сыворотка или кровь.
Проведение анализа. Разведения сыворотки (или цельной крови, к которой предварительно добавлен 4% цитрат натрия в соотношении 1:9) готовят в планшетах в интервале 1 - 100 в ацетатном буфере pH 7,2. После этого добавляют 50 мкл разведенного в 10 раз гидрозоля оксида железа, нагруженного мкат. Иммунохимическая реакция проходит в течение 10 - 15 мин. В случае положительного результата имеет место яркая точка, в случае отрицательного результат - зонтик.
Основные характеристики диагностикума приведены в таблице 1.
Пример 1. Кровь 7 здоровых доноров в возрасте от 22 до 40 лет исследовали на присутствие антигена, определяемого с помощью данного набора. Ни в одном из случаев не наблюдали положительной реакции.
Пример 2. Образцы сывороток и крови 15 пациентов с неонкологической патологией в возрасте от 26 до 45 лет исследовали на присутствие антигена. Ни в одном из случаев не наблюдали положительной реакции.
Пример 3. Образцы сывороток или крови 21 пациента, у которых при гистологическом обследовании установлен рак молочной железы разных стадий развития, исследовали на присутствие антигена. В сыворотке или крови 12 пациентов обнаружена положительная реакция.
Пример 4. Образцы сывороток 11 пациентов, у которых при гистологическом исследовании установлена злокачественная лимфома, исследовали на присутствие антигена. У 10 пациентов обнаружена положительная реакция.
Пример 5. Образцы сывороток 7 пациентов, у которых при гистологическом исследовании установлен рак яичников II, III, IV стадий, исследовали на присутствие антигена. У 4 пациентов обнаружена положительная реакция.
Пример 6. Образцы сывороток 9 пациентов, у которых при гистологическом исследовании установлен рак легких III и IV стадий, исследованы на присутствие антигена. У 5 пациентов обнаружена положительная реакция.
Результаты экспериментов представлены в таблице 2. Из таблицы видно, что с помощью предлагаемого диагностикума выявляется 50-60% онкологических больных по анализу сыворотки или цельной крови, взятой из пальца. В таблице 3 представлены результаты анализа образцов сывороток двумя методами с использованием моноклональных антител, продуцируемых штаммов гидридных клеток мышей Mus. musculus L: количественным ИФА и иммуноагглютинационным, описанным в данной заявке. Как видно из таблицы, наблюдается корреляция этих двух методов в отношении выявления нового опухолевого маркера.

Claims (1)

  1. Набор для скринингового анализа онкомаркера, содержащий носитель с иммобилизованными моноклональными антителами, буферный раствор и контрольные образцы, отличающийся тем, что в качестве носителя набор содержит 2 мл гидрозоля оксида железа (III) с размером частиц 0,1 - 0,8 мкм, на котором иммобилизовано 800 - 1400 мкг моноклональных антител, продуцируемых штаммом гибридных культивируемых клеток животных Mus.musculus L No ВСКК/П/456Д, в качестве буферного раствора набор содержит 0,06 М ацетатный буфер, имеющий pH 7,2, с добавкой 0,15 М хлорида натрия, а в качестве контрольных образцов - положительный контроль, содержащий гликопротеин-онкомаркер, и отрицательный контроль - донорскую сыворотку или цельную кровь.
RU95114680/14A 1995-08-31 1995-08-31 Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови RU2119167C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95114680/14A RU2119167C1 (ru) 1995-08-31 1995-08-31 Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95114680/14A RU2119167C1 (ru) 1995-08-31 1995-08-31 Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU95114680A RU95114680A (ru) 1997-11-27
RU2119167C1 true RU2119167C1 (ru) 1998-09-20

Family

ID=20171356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU95114680/14A RU2119167C1 (ru) 1995-08-31 1995-08-31 Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2119167C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2590700C2 (ru) * 2012-10-12 2016-07-10 Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации Способ идентификации регуляторных короткоживущих белков в протеоме человека, участвующих в специфической модуляции цитотоксического эффекта

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Cancer Res., 1988, vol.48, p.6799 - 6802. 2. *
6. Прикладная иммунология / Под ред.А.А.Сохина. - Киев: Здоровья, 1984, с.184 - 185. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2590700C2 (ru) * 2012-10-12 2016-07-10 Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации Способ идентификации регуляторных короткоживущих белков в протеоме человека, участвующих в специфической модуляции цитотоксического эффекта

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Peyrat et al. Prognostic significance of circulating p53 antibodies in patients undergoing surgery for locoregional breast cancer
Summers et al. Prognosis in carcinoma of the urinary bladder based upon tissue blood group ABH and Thomsen-Friedenreich antigen status and karyotype of the initial tumor
CN101598731B (zh) 一种用于肿瘤病理诊断用途的免疫组织化学诊断试剂盒
US9618512B2 (en) Biomarker for breast cancer
Nakamichi et al. Detection of serum/salivary exosomal Alix in patients with oral squamous cell carcinoma
CN112345755B (zh) 乳腺癌的生物标志物及其应用
Shimizu et al. Proliferative activity of human thyroid tumors evaluated by proliferating cell nuclear antigen/cyclin immunohistochemical studies
KR0141608B1 (ko) 폐암의 조기 검출 방법 및 키트
CN110187109B (zh) 一种用于贲门腺癌早期筛查的自身抗体联合检测elisa试剂盒
Adrover et al. Expression of high p53 levels in colorectal cancer: a favourable prognostic factor
WO2018157831A1 (zh) 一种肺癌监测试剂盒及其使用方法
EP0042482B1 (en) Process for detecting the presence of malignant and pre-malignant cells in humans
Hanna et al. Cellular localization of estrogen binding sites in human breast cancer
RU2119167C1 (ru) Набор для скринингового анализа онкомаркера в сыворотке и цельной крови
Dhokia et al. A new immunoassay using monoclonal antibodies HMFG1 and HMFG2 together with an existing marker CA125 for the serological detection and management of epithelial ovarian cancer
CN111610331B (zh) 一种用于早期食管癌筛查的血清学检测试纸条
Shin et al. The expression of adipophilin is frequently found in solid subtype adenocarcinoma and is associated with adverse outcomes in lung adenocarcinoma
Warlick et al. Rapid diagnosis of pulmonary coccidioidomycosis: Cytologic v potassium hydroxide preparations
CN111175521B (zh) 一种用于甲状腺髓样癌及淋巴结转移床旁快速鉴别的荧光免疫层析试纸的制备方法
Stendahl et al. Expression of placental alkaline phosphatase in epithelial ovarian tumours
La Masood et al. The value of imprint cytology in cytochemical detection of steroid hormone receptors in breast cancer
Mirowski et al. Serological and immunohistochemical detection of a 65-kDa oncofetal protein in breast cancer
RU2787170C1 (ru) Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме молочной железы
Silén et al. Evaluation of a new tumor marker for cytokeratin 8 and 18 fragments in healthy individuals and prostate cancer patients
Stanley et al. Peanut lectin binding in breast carcinoma: Lack of correlation with estrogen receptor content

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20040901