CN116449003A - 宫颈癌相关抗体蛋白组合在胶体金试纸条中的应用 - Google Patents
宫颈癌相关抗体蛋白组合在胶体金试纸条中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物医学工程及生物医药技术技术领域，公开了宫颈癌相关抗体蛋白组合在胶体金试纸条中的应用。该胶体金试纸条联合利用TCOF1基因表达产物或/和p16基因表达产物为抗原的检测试剂对宫颈癌和早期宫颈癌进行检测，检测结果同时具有较高的灵敏度和特异度，同时兼具技术重现性好、成本低、操作简单、使用方便的优点，非常适合宫颈癌高发区无症状人群的大规模筛查和早期发现及预后判断，易于推广应用。
Description
技术领域
本发明属于生物医学工程及生物医药技术领域，具体涉及宫颈癌相关抗体蛋白组合在无症状高危人群筛查和早期发现胶体金试纸条中的应用。
背景技术
在西方欧美发达国家由于宫颈癌筛查和人乳头瘤病毒（Human papillomavirus ,HPV）疫苗的广泛应用，宫颈癌的发病率和死亡率明显下降，但在发展中国家，宫颈癌的发病率仍处于较高水平，死亡率也位于女性肿瘤的首位。在中国，宫颈癌的发病率和死亡率仍处于较高水平，并有逐年升高和年轻化趋势。
从高危型HPV感染到宫颈浸润癌一般需要10-15年，这为宫颈癌的早发现、早诊断早治疗开辟了新途径。但宫颈癌前病变临床症状不明显，不易引起患者的注意。因此，通过筛查手段早期发现宫颈癌早期病变显得尤为重要。目前用于宫颈癌的筛查方法有宫颈刮片、宫颈薄层液基细胞学检查、人乳头瘤病毒（Human papillomavirus, HPV）DNA检测、HPVE6/E7 mRNA检测、细胞双染检测、阴道镜检查和宫颈活组织病理检查，这些方法极大地提高了宫颈癌及宫颈早期病变的检出率。但是由于液基细胞筛查方法的低敏感性，HPV和细胞双染的低特异性，阴道镜和活检的创伤性和甲基化检测试剂盒的价钱昂贵性，而且临床往往组合检测，增加患者的精神和经济负担。因此，开发高通量、高特异性和敏感性、低成本的检测方法是提高早期宫颈癌检出率、降低宫颈癌发病率的关键。
肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化后免疫特性可以识别或诊断肿瘤。单独使用一种肿瘤标志物检测，灵敏度和特异性都比较低，容易出现误诊或者漏诊，因此选择更有诊断价值的标志物组合，对宫颈癌早期发现和早期诊断就显得极为重要。发明人在预实验中发现，以下2种特异性抗原在93％的早期宫颈癌和癌前病变患者血清中被检测到，而在正常人血清中检出率仅为12％。因此提示我们，以下2种特异抗原的检测对于宫颈癌无症状高危人群筛查和早期发现及预后判断具有十分重要的意义。
TCOF1为树状核糖体生物发生因子1，在生物发生、DNA损伤反应（DDR）、有丝分裂调节和端粒完整性等多种过程中发挥着至关重要的作用，目前与癌症关系仍不清楚，但是有研究显示在包括膀胱癌、乳腺癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、头颈部肿瘤以及黑色素瘤和淋巴瘤等中高表达，而在肾癌、肺癌等肿瘤中低表达。TCOF1可能与某些免疫检查点之间的相关性、微卫星不稳定性、肿瘤突变负荷（TMB）相互作用，通过ATP酶活性、微管结合、微管蛋白结合和催化活性，并通过“细胞周期”参与肿瘤发生以及“细胞衰老”途径影响预后。p16为一种多肿瘤抑癌基因，参与多种肿瘤的形成和发展，在控制细胞的生长和分化、细胞周期调控中发挥重要作用，而且p16与多种恶性肿瘤恶性程度、侵袭性及预后的关系密切。
20世纪70年代，Faulk和Taylor首次将胶体金作为示踪物用于免疫电镜检测技术，后来随着该技术蓬勃发展，出现了如免疫渗滤试验和免疫层析试验等方法。其中胶体金免疫层析试纸条就是最常见的一种，因其快速，简便和灵敏度较高，从而在多个领域得到了广泛应用。氯金酸（HAuCl4）在还原剂作用下，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团会因静电吸附牢固结合，这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性，因此金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。因此，亟需一种速度快、准确、简便、低成本的可用于无症状高危人群的宫颈癌筛查和早期发现的胶体金试纸条。
发明内容
针对现有技术中存在的问题和不足，本发明的目的在于提供宫颈癌相关抗体蛋白组合在无症状高危人群宫颈癌筛查和早期发现及预后判断胶体金试纸条中的应用。
基于上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明第一方面提供了用于检测标志物的检测试剂在制备用于宫颈癌筛查和预后判断产品中的应用，尤其是无症状高危人群的宫颈癌筛查和早期发现及预后判断。
优选地，所述标志物为TCOF1基因表达产物或/和p16基因表达产物。
优选地，所述TCOF1基因表达产物为TCOF1蛋白；所述p16基因表达产物为p16蛋白。
优选地，所述产品的检测样本为血清。
优选地，所述检测试剂包括检测TCOF1基因表达产物的分子或/和检测p16基因表达产物的分子。
优选地，所述检测TCOF1基因表达产物的分子为与TCOF1基因表达产物特异性结合的TCOF1抗体；所述检测p16基因表达产物的分子为与p16基因表达产物特异性结合的p16抗体。更加优选地，所述抗体为单克隆抗体。
优选地，所述产品通过免疫层析法或酶联免疫法检测样本中的所述标志物。
优选地，所述产品为试纸条或试剂盒。
本发明第二方面提供了一种用于宫颈癌筛查和预后判断的试纸条，所述试纸条含有能够特异性检测TCOF1基因表达产物、p16基因表达产物的检测试剂。
优选地，所述试纸条的检测样本为血清。
优选地，所述检测试剂包括检测TCOF1基因表达产物的分子或/和检测p16基因表达产物的分子。
优选地，所述检测TCOF1基因表达产物的分子为与TCOF1基因表达产物特异性结合的TCOF1抗体；所述检测p16基因表达产物的分子为与p16基因表达产物特异性结合的p16抗体。
优选地，所述试纸条包括结合垫和层析垫；所述结合垫上包被有捕获抗体，所述捕获抗体为p16抗体A和TCOF1抗体A，其中，p16抗体A、TCOF1抗体A均带有可检测的标记物；所述层析垫上设有2条检测带和1条对照带；所述检测带上固定有检测抗体，2条检测带沿样品流动方向分别固定的检测抗体为p16抗体B、TCOF1抗体B；同种抗原的抗体A和抗体B识别抗原的不同表位；所述对照带上固定有抗体A二抗。更加优选地，所述抗体A二抗为羊抗鼠IgG。
优选地，所述标记物为胶体金颗粒；所述p16抗体A、TCOF1抗体A分别用不同粒径的胶体金颗粒标记。
优选地，所述p16抗体A为p16单克隆抗体；所述TCOF1抗体A为TCOF1单克隆抗体。
优选地，所述p16抗体B为p16单克隆抗体；所述TCOF1抗体B为TCOF1单克隆抗体。
优选地，所述试纸条还包括背衬、样品垫和吸样垫；所述样品垫、结合垫、层析垫和吸样垫沿长度方向依次铺设在背衬上。其中，结合垫的一端压在样品垫的下方，结合垫的另一端压在层析垫的上方；层析垫的一端压在结合垫的下方，层析垫的另一端压在吸样垫的下方。
更加优选地，所述层析垫为硝酸纤维素膜。
优选地，所述层析垫上的2条检测带和1条对照带按照以下次序排列而成：从靠近结合垫一端到靠近吸样垫一端依次为包被有固定有p16单克隆抗体的检测带T1，固定有TCOF1单克隆抗体的检测带T2、固定有抗体A二抗的对照带C。
本发明第三方面提供了一种包含上述第二方面所述的用于宫颈癌筛查和预后判断的试纸条的试剂盒。
优选地，所述试剂盒还包括吸滴管、血清加样杯、一次性注射器。
本发明用于无症状高危人群宫颈癌筛查和早期发现及预后判断的试纸条的使用方法为：将待测血清样品滴加在试纸条的样品垫上，或将试纸条样品垫插入待测血清样品中，取出试纸条后5-15min内观察检测带和对照带颜色变化并记录结果。其中，血清样品在检测前可以用样品稀释液进行稀释。
本发明用于无症状高危人群宫颈癌筛查和早期发现及预后判断的试纸条的结果判定方法为：
阳性结果：试纸条层析垫上的检测带T1、T2中至少有一条显色，且对照带C显色，判定检测结果为阳性。
阴性结果：试纸条层析垫上的检测带T1、T2均未显色，仅对照带C显色，判定检测结果为阴性。
无效结果：对照带C未显色，判断检测结果为无效，需重新检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
（1）本发明首次将P16和TCOF1蛋白作为抗原用于宫颈癌筛查和早期发现及预后判断的检测，具体采用双抗夹心法提供了一种可用于宫颈癌筛查和早期发现及预后判断的胶体金试纸条，可同时检测2中适用于无症状高危人群的宫颈癌筛查和早期发现及预后判断的分子标志物。在其中一项实施例中，本发明试纸条对宫颈癌的筛查和早期发现及预后判断的检测灵敏度高达82.3%，特异性达到了97.5%。因此，本发明试纸条对宫颈癌筛查和早期发现及预后判断具有较高的灵敏度和特异度，适用于宫颈癌高发区无症状人群的大规模筛查，提高宫颈癌和早期宫颈癌的检出率，有利于无症状高危人群筛查和早期发现及预后判断，从而达到提高宫颈癌患者生存率、降低宫颈癌发病率的最终目标。
（2）本发明制备的试纸条可用于同时检测血清样品中的2种抗原，检出成功率高，技术重现性好，耗材少，成本低，操作简单、误差小，使用方便、快捷，极大地提高了宫颈癌和早期宫颈癌检测效率和诊断效率，易于推广应用。
本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。
附图说明
图1为本发明实施例1中TCOF1肿瘤相关标志物在血清中的分布图；
图2为本发明实施例1中P16肿瘤相关标志物在血清中的分布图；
图3为试纸条的结构示意图；
图4为本发明实施例2中2种肿瘤标志物的3种显色组合的灵敏度和特异性数据柱形图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例结合附图，对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。
实施例1：宫颈癌相关抗原在宫颈癌检测中的应用
本实施例通过对郑州市妇幼保健院160例宫颈癌前病变及宫颈癌患者和40例正常人的血清中特异性抗原的检测和分析，发现了TCOF1和p16这2种抗原在无症状高危人群筛查和早期发现及预后判断宫颈癌血清中的表达明显高于正常人群。
一、实验样本
选取来自郑州市妇幼保健院160例宫颈癌前病变及宫颈癌患者血清和40例正常体检患者血清，160例宫颈癌前病变及宫颈癌患者均未接受放疗或化疗；40例正常体检患者均无肿瘤相关病史。其中，160例宫颈癌前病变及宫颈癌患者又平均分为CIN Ⅰ级组、CIN Ⅱ级组、CIN Ⅲ级组和CC组4组，具体为：40例CIN Ⅰ级组为宫颈低级别鳞状上皮内病变（Lowgrade squamous inteaepitheliallesion, LSIL）；40例CIN Ⅱ级组和40例CIN Ⅲ级组为宫颈高级别鳞状上皮内病变（High Grade squamous inteaepitheliallesion, HSIL）；40例CC组为宫颈早期鳞癌（CC，Ⅰ期）。各组之间患者平均年龄差异无统计学意义，见表1。
表1 各组患者年龄情况
二、实验方法
1. 样品要求：血清≥30uL，新鲜制备或冻存于-80℃。
2. 试剂：
（1）封闭液：3mL 10%BSA，加入7mL 1×PBS溶液，混匀，置于冰上。
（2）孵育液：1mL 10%BSA，加入9mL 1×PBST溶液，混匀，置于冰上。
（3）清洗液：1×PBST，存放于4℃冰箱。
（4）HuProtTM蛋白芯片（购自美国CDILaboratories ,Inc .货号HM-1001）
3. 样品检测
（1）封闭：使用芯片清洗盒，用10mL移液枪加入10mL封闭液，将芯片从-80冰箱取出，正面朝上迅速置于清洗盒中；轻轻震荡，用封口膜封住清洗盒，再横向放在侧摆摇床上，室温3h，记录芯片编号。
（2）血清样本孵育：将预先准备好的样本孵育液加到芯片孵育盒，将芯片转移到对应的样本孵育液中（记录样品名称及对应的芯片编号），再将芯片孵育盒放入保湿盒内，侧摆摇床上，4℃冷库，过夜孵育。（血清以1∶200比例稀释，总体积3mL）
（3）清洗：用镊子将芯片取出（注意不能触及或划破芯片的上表面），置于加入有清洗液的芯片清洗盒中，放置水平摇床上，100rpm/min，清洗3次，每次10min。
（4）二抗孵育：用镊子将芯片转移到加入了3mL二抗孵育液的孵育盒中，侧摆摇床40rpm，避光，室温60min。二抗孵育液：使用anti-human IgG和IgM荧光二抗，孵育液稀释抗体至其工作液浓度（注意二抗孵育时避光）。
（5）清洗：同步骤“（3）”。注意该过程应避光操作。
（6）完成后用ddH2O清洗2次，每次10min。注意该过程应避光操作。
（7）干燥：将芯片置于芯片干燥机离心干燥。
（8）扫描：按照扫描仪的操作规范和使用说明操作，设置参数为：Power90%，PMTvalue650，若存在爆点，调节PMT或者Power至扫描无爆点。
（9）数据提取：将对应GAL文件打开，将芯片图像和GAL文件每个阵列整体对齐，按下自动对齐按钮，提取数据并保存。
三、判定标准
经过对实验数据的提取、重复性分析、数据校正等一系列分析。对于任意一个蛋白，计算CIN Ⅰ级组、CIN Ⅱ级组、CIN Ⅲ级组和CC组（癌症组）与NC组（对照组）的差异倍数，即foldchange＝CIN Ⅰ级组、CIN Ⅱ级组、CIN Ⅲ级组或CC组均值/NC组均值，用以表示癌前病变组或癌症组高于对照组的程度；定义，foldchange≥2即为潜在差异，一般认为差异倍数越大，两组间区别越明显。对于不同样本组，为避免出现阴性蛋白之间的比较，在进行样本比对前，根据归一化之后芯片上蛋白点信号SNR值的分布设置阳性蛋白判断阈值，定义IgG－SNR＞4、IgM－SNR＞5时判断该蛋白为阳性蛋白。在此基础上，以对照组在该蛋白上的SNR为计算对象设定cutoff阈值（cutoff－IgG≥4 ，cutoff－IgM≥5），分别计算CIN Ⅰ级组、CINⅡ级组、CINⅢ级组和CC组的阳性率（1-sensitivity）和正常对照组的阳性率（1-specificity）。
四、判定结果
根据对4组160例宫颈癌前病变和早期宫颈癌患者血清和40例正常人血清中自身抗体的检测和计算分析，发现TCOF1和p16这2种自身抗体在宫颈癌前病变和早期宫颈癌血清中明显高于正常人群，具体见图1和图2。
通过比较2种自身抗体在宫颈癌前病变和早期宫颈癌血清中含量（图1、图2）可知，这2种肿瘤自身抗体在CIN Ⅰ级组、CINⅡ级组、CINⅢ级组和CC组中平均表达量与NC组中表达量均具有明显差异，由于自身抗体存在于患者血清中，与血清中肿瘤相关抗原的丰度呈正比，因此该2种自身抗体对应的肿瘤相关抗原可以用作宫颈癌前病变和早期宫颈癌筛查。
实施例2：2种抗体蛋白在制备宫颈癌无症状高危人群筛查和早期发现的胶体金试纸条中的应用
本申请制备了一种用于宫颈癌无症状高危人群筛查和早期发现的胶体金试纸条，包括PVC底板，底板上设有从其一端开始依次连接的样品垫、胶体金标记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述胶体金标记的结合垫为包被有分别用胶体金标记的TCOF1单克隆抗体和p16单克隆抗体的混合物；所述硝酸纤维素膜上设有一条对照线和两条检测线，两条检测线上分别固定有鼠抗人TCOF1单克隆抗体、鼠抗人p16单克隆抗体。
具体制备方法为：
1. 含有2条检测带（T线）和1条对照带（C线）的硝酸纤维素膜的制备
试剂来源：TCOF1单克隆抗体（克隆号8H3）购自武汉艾美捷科技有限公司、p16单克隆抗体（克隆号GM501）购自基因科技（上海）有限公司；
鼠抗人TCOF1单克隆抗体（货号HPA038237）购自武汉艾美捷科技有限公司、鼠抗人p16单克隆抗体（货号GT201304）购自基因科技（上海）有限公司；2种鼠抗人单克隆抗体在硝酸纤维素膜上的位置，自样品垫到吸水纸的方向，分别为p16、TCOF1；
T线划线：分别将鼠抗人p16单克隆抗体、鼠抗人TCOF1单克隆抗体，装入胶体金划膜仪中，在硝酸纤维素膜上按0.1μL/mm的量划线（膜规格为25mm×310mm）；
C线划线：羊抗鼠抗体IgG包被液装入胶体金划膜仪中，在硝酸纤维素膜上按0.1μL/mm的量划线。（膜规格为25mm×310mm）包被：37℃包被2小时；封闭：37℃封闭30分钟；
干燥：将包被后的硝酸纤维素膜放入真空干燥器内干燥20小时，真空度0.1。
2. 制备胶体金标记的结合垫
胶体金标记：分别对TCOF1单克隆抗体、p16单克隆抗体溶液透析除盐（4℃过夜），调整蛋白质浓度至1mg/mL；TCOF1单抗、p16单抗和胶体金用量采用目测法；在电磁搅拌下，TCOF1单抗用粒径14.8nm的胶体金颗粒标记，p16单抗用粒径24.8nm的胶体金颗粒标记；最终检测TCOF1、p16的条带相对应颜色为橙、红；然后等比例将2种免疫金混合，得到混合免疫金。
包被：胶体金稀释液稀释至OD＝10.0，10mm×310mm玻璃纤维在溶液中浸泡5-10分钟。
干燥：将标记后的玻璃纤维放入真空干燥器内干燥20小时，取出密闭保存待用。
3. 组装
备料：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜（层析垫）、吸水垫和PVC背衬等按生产工艺要求裁成一定的规格和尺寸；
黏贴：按生产工艺要求将各组分别贴在白色塑料板上；
裁切：用切条机将组装好的反应板切成3mm宽的试剂条；
装袋：装入铝箔袋内，外加干燥剂防潮。机器封口。
实施例3：TCOF1抗体蛋白在制备宫颈癌无症状高危人群筛查和早期发现的胶体金试纸条中的应用
本实施例试纸条的制备方法与本发明实施例2公开的试纸条的制备方法基本相同，其不同之处在于：本实施例试纸条检测指标为TCOF1蛋白，该试纸条的结合垫上包被的捕获抗体为胶体金标记的TCOF1单克隆抗体；该试纸条硝酸纤维素膜上设有1条检测带和1条对照带，所述检测带上固定有鼠抗人TCOF1单克隆抗体，所述对照带C上固定有羊抗鼠IgG。
实施例4：p16抗体蛋白在制备宫颈癌无症状高危人群筛查和早期发现的胶体金试纸条中的应用
本实施例试纸条的制备方法与本发明实施例2公开的试纸条的制备方法基本相同，其不同之处在于：本实施例试纸条检测指标为p16蛋白，该试纸条的结合垫上包被的捕获抗体为胶体金标记的p16单克隆抗体；该试纸条硝酸纤维素膜上设有1条检测带和1条对照带，所述检测带上固定有鼠抗人p16单克隆抗体，所述对照带C上固定有羊抗鼠IgG。
试纸条的检测试验：
1. 样本来源
取1200例早期宫颈癌或癌前病变患者，均为病理确诊的早期宫颈鳞癌或癌前病变患者（病例组），年龄29-76岁，平均54岁。
另选1200例正常对照（对照组），均经子宫全切病理诊断排除宫颈癌或癌前病变，年龄35-88岁，平均55岁。
2. 标本收集
采集受检者静脉血3mL，分离血清，置-20℃冰箱保存。采用本发明试纸条（本实施例制备）检测2种标志物（TCOF1蛋白，p16蛋白）。
3. 检测过程
用吸滴管将待检样品（血清）收集在血清加样杯中，将试纸条的样品垫一端浸入血清中，等候约4-5分钟，将样品完全被吸收之后，取出试纸条进行鉴定。
4. 判断标准
检测时，反应4-5分钟后，若试纸条的2条检测带至少有1条检测带显色，且对照带位置上也出现相应的颜色，则待测样品检测为阳性；若仅在对照带位置上出现显色条带，而检测带位置上无显色条带，则待检样品检测为阴性；若在对照带位置上未出现显色条带，无论检测带位置上是否出现显色条带，检测结果都无效。
5. 检测结果与分析
阳性标本若检测结果为阳性的，则判定为真阳性：检测结果为阴性的，则判定为假阴性。阴性样本若检测结果为阴性的，则判定为真阴性：检测结果为阳性的，则判定为假阳性。检测结果见表2，检测试纸条的灵敏度和特异性见图4，灵敏度和特异性计算公式如下所示：
灵敏度（%）=真阳性÷（真阳性+假阴性）×100%
特异性（%）=真阴性÷（真阴性+假阳性）×100%
表2 2种肿瘤标志物TCOF1、p16检测结果
对1200例早期宫颈癌和1200正常人血清进行2种肿瘤标志物的检测，由表2和图4可知，组合肿瘤标志物后，早期宫颈癌诊断的灵敏度和特异性也随之增加，较于单一指标检测有明显提升（灵敏度82.3%，特异性97.5%）。因此，使用TCOF1、p16这2种宫颈癌肿瘤标志物组合进行高危人群的筛查，可以大大提高早期宫颈癌的发现率。从而达到提高宫颈癌患者生存率、降低宫颈癌发病率的最终目标。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的不足，且具高度产业利用价值。上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
Claims (10)
1.用于检测标志物的检测试剂在制备用于宫颈癌筛查和预后判断产品中的应用，其特征在于，所述标志物为TCOF1基因表达产物或/和p16基因表达产物；所述产品的检测样本为血清。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括检测TCOF1基因表达产物的分子或/和检测p16基因表达产物的分子。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测TCOF1基因表达产物的分子为与TCOF1基因表达产物特异性结合的TCOF1抗体；所述检测p16基因表达产物的分子为与p16基因表达产物特异性结合的p16抗体。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品通过免疫层析法或酶联免疫法检测样本中的所述标志物；所述产品为试纸条或试剂盒。
5.一种用于宫颈癌筛查和预后判断的试纸条，其特征在于，所述试纸条上含有能够特异性检测TCOF1基因表达产物、p16基因表达产物的检测试剂。
6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测样本为血清。
7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述检测试剂包括检测TCOF1基因表达产物的分子或/和检测p16基因表达产物的分子。
8.根据权利要求7所述的试纸条，其特征在于，所述检测TCOF1基因表达产物的分子为与TCOF1基因表达产物特异性结合的TCOF1抗体；所述检测p16基因表达产物的分子为与p16基因表达产物特异性结合的p16抗体。
9.根据权利要求8所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条上包括结合垫和层析垫；所述结合垫上包被有捕获抗体，所述捕获抗体为p16抗体A和TCOF1抗体A，其中，p16抗体A、TCOF1抗体A均带有可检测的标记物；所述层析垫上设有2条检测带和1条对照带；所述检测带上固定有检测抗体，2条检测带沿样品流动方向分别固定的检测抗体为p16抗体B、TCOF1抗体B；同种抗原的抗体A和抗体B识别抗原的不同表位；所述对照带上固定有抗体A二抗。
10.一种包含权利要求5-9任一所述的用于宫颈癌筛查和预后判断的试纸条的试剂盒。
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2023
- 2023-05-06 CN CN202310501445.7A patent/CN116449003A/zh active Pending
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