CN112493257A - 一种杀虫复合微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杀虫复合微生物菌剂，包括以下原料：绿僵菌、苏云金杆菌、枯草芽孢杆菌‑阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌‑植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质、抗氧化剂、稳定剂，还公开了所述杀虫复合微生物菌剂的制备方法，加入绿僵菌和苏云金杆菌，通过绿僵菌和苏云金杆菌协同增效，具有十分突出的防治效果，通过加入枯草芽孢杆菌‑阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌‑植物乳杆菌混合发酵液，进一步有助于各菌种之间协同生长、代谢，协同增效杀虫，提高杀虫效果，以腐殖酸作为保护剂，以亚临界水解产物提供养分，能有效提高微生物菌体的萌发率和存活率，为微生物长效杀虫提供了一定的保障。

Description

一种杀虫复合微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂领域，具体是一种杀虫复合微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
微生物菌剂是指目标微生物(有效菌)经过工业化生产扩繁后，利用多孔的物质作为吸附剂(如草炭、蛭石)，吸附菌体的发酵液加工制成的活菌制剂。这种菌剂用于拌种或蘸根，具有直接或间接改良土壤、恢复地力、预防土传病害、维持根际微生物区系平衡和降解有毒害物质等作用。农用微生物菌剂恰当使用可以提高农产品产量、改善农产品品质、减少化肥用量、降低成本、改良土壤、保护生态环境。
目前作物病虫害的防治主要采用化学农药，不仅易产生抗药性，还会造成严重的环境污染等问题，从而需要能够杀虫的复合微生物菌剂。
发明内容
本发明的实施例目的在于提供一种杀虫复合微生物菌剂及其制备方法和应用，以解决上述问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种杀虫复合微生物菌剂，包括以下按照重量份的原料：绿僵菌10-20份、苏云金杆菌10-20份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液6-10份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液8-14份、腐殖酸1-3份、亚临界水解产物10-20份、分散介质4-10份、抗氧化剂1-2份、稳定剂1-2份。
在一种可选方案中：包括以下按照重量份的原料：绿僵菌12-18份、苏云金杆菌12-18份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液7-9份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液9-13份、腐殖酸1.5-2.5份、亚临界水解产物13-17份、分散介质6-8份、抗氧化剂1.2-1.8份、稳定剂1.3-1.7份。
在一种可选方案中：包括以下按照重量份的原料：绿僵菌15份、苏云金杆菌15份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液8份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液11份、腐殖酸2份、亚临界水解产物15份、分散介质7份、抗氧化剂1.5份、稳定剂1.5份。
在一种可选方案中：所述枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在20-30℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
在一种可选方案中：所述地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为25-35℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养24-36h后，转接发酵培养基，进行发酵18-24h，接种量为发酵总体积的1-3％。
在一种可选方案中：所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
在一种可选方案中：所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：(1-2)混合而成。
在一种可选方案中：所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至800-900℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为200-300目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量10-16倍的水及入膨润土质量0.2-0.6倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于2000-4000r/min的离心机中离心处理10-20min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
在一种可选方案中：所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在90-100℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在300-400℃温度下煅烧1-2h，然后再放入-40℃冷冻20-30min；在450-550℃温度下再煅烧30-40min，然后用50-70MHz超声波超声处理10-20min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹20-30min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
在一种可选方案中：所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯或特丁基对苯二酚。
在一种可选方案中：所述稳定剂为柠檬酸或山梨酸。
上述杀虫复合微生物菌剂的制备方法，步骤如下：
1)按配比准备各原料；
2)分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度30-40℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，30-40℃条件下培养24-30h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；
3)将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
相较于现有技术，本发明实施例的有益效果如下：
加入绿僵菌和苏云金杆菌，绿僵菌寄主昆虫达200种以上，能寄生金龟甲、象甲、金针虫、鳞翅目害虫幼虫和半翅目蝽象等，可诱发昆虫产生绿僵病，可在种群内形成重复侵染，对人畜无害，对天敌昆虫安全，不污染环境，苏云金杆菌经害虫食入后，寄生于寄主的中肠内，在肠内合适的碱性环境中生长繁殖，晶体毒素经过虫体肠道内蛋白酶水解，形成有毒效的较小亚单位，它们作用于虫体的中肠上皮细胞，引起肠道麻痹、穿孔、虫体瘫痪、停止进食，随后苏云金杆菌进入血腔繁殖，引起白血症，导致虫体死亡，通过绿僵菌和苏云金杆菌协同增效，具有十分突出的防治效果，可广泛应用于农业生产中，通过加入枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液，进一步有助于各菌种之间协同生长、代谢，协同增效杀虫，提高杀虫效果，以腐殖酸作为保护剂，以亚临界水解产物提供养分，能有效提高微生物菌体的萌发率和存活率，为微生物长效杀虫提供了一定的保障，以分散介质吸附更多的微生物以及微生物代谢产物，延长作用时间。
具体实施方式
以下实施例会对本发明进行详述，本发明所列举的各实施例仅用以说明本发明，并非用以限制本发明的范围。对本发明所作的任何显而易知的修饰或变更都不脱离本发明的精神与范围。
实施例1
按配比准备以下按照重量份的原料：绿僵菌10份、苏云金杆菌10份、枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液6份、地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液8份、腐殖酸1份、亚临界水解产物10份、分散介质4份、抗氧化剂1份、稳定剂1份；分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度30℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，30℃条件下培养24h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
其中，所述枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在20℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
所述地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为25℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养24h后，转接发酵培养基，进行发酵18h，接种量为发酵总体积的1％。
所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：1混合而成。
所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至800℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为200目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量10倍的水及入膨润土质量0.2倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于2000r/min的离心机中离心处理10min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在90℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在300℃温度下煅烧1h，然后再放入-40℃冷冻20min；在450℃温度下再煅烧30min，然后用50MHz超声波超声处理10min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹20min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
所述稳定剂为柠檬酸。
实施例2
按配比准备以下按照重量份的原料：绿僵菌12份、苏云金杆菌12份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液7份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液9份、腐殖酸1.5份、亚临界水解产物13份、分散介质6份、抗氧化剂1.2份、稳定剂1.3份；分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度32℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，302℃条件下培养26h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
其中，所述枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在22℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
所述地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为27℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养28h后，转接发酵培养基，进行发酵20h，接种量为发酵总体积的1％。
所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：1混合而成。
所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至820℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为220目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量12倍的水及入膨润土质量0.3倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于2500r/min的离心机中离心处理12min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在92℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在320℃温度下煅烧1h，然后再放入-40℃冷冻22min；在470℃温度下再煅烧32min，然后用55MHz超声波超声处理12min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹22min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
所述稳定剂为柠檬酸。
实施例3
按配比准备以下按照重量份的原料：绿僵菌15份、苏云金杆菌15份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液8份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液11份、腐殖酸2份、亚临界水解产物15份、分散介质7份、抗氧化剂1.5份、稳定剂1.5份；分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度35℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，35℃条件下培养27h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
其中，所述枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在25℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
所述地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为30℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养30h后，转接发酵培养基，进行发酵21h，接种量为发酵总体积的2％。
所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：2混合而成。
所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至850℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为250目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量13倍的水及入膨润土质量0.4倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于3000r/min的离心机中离心处理15min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在95℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在350℃温度下煅烧1.5h，然后再放入-40℃冷冻25min；在500℃温度下再煅烧35min，然后用60MHz超声波超声处理15min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹25min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
所述抗氧化剂为特丁基对苯二酚。
所述稳定剂为柠檬酸。
实施例4
按配比准备以下按照重量份的原料：绿僵菌12-18份、苏云金杆菌12-18份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液7-9份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液9-13份、腐殖酸1.5-2.5份、亚临界水解产物13-17份、分散介质6-8份、抗氧化剂1.2-1.8份、稳定剂1.3-1.7份；分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度38℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，38℃条件下培养28h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
其中，所述枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在25℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
所述地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为30℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养33h后，转接发酵培养基，进行发酵22h，接种量为发酵总体积的3％。
所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：2混合而成。
所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至880℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为280目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量14倍的水及入膨润土质量0.5倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于3500r/min的离心机中离心处理18min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在98℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在380℃温度下煅烧2h，然后再放入-40℃冷冻28min；在530℃温度下再煅烧38min，然后用65MHz超声波超声处理18min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹28min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯。
所述稳定剂为山梨酸。
实施例5
按配比准备以下按照重量份的原料：绿僵菌20份、苏云金杆菌20份、枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液10份、地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液14份、腐殖酸3份、亚临界水解产物20份、分散介质10份、抗氧化剂2份、稳定剂2份；分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度40℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，40℃条件下培养30h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；将绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20％以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
其中，所述枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在30℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
所述地衣芽孢杆菌植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为35℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养36h后，转接发酵培养基，进行发酵24h，接种量为发酵总体积的3％。
所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：2混合而成。
所述改性膨润土的制备方法如下：取膨润土置于马弗炉中程序升温至900℃，恒温焙烧2h，冷却后研磨至粒径为300目；往焙烧处理后的膨润土中加入膨润土质量16倍的水及入膨润土质量0.6倍的木质素磺酸钠搅拌形成悬浮泥浆，取上层悬浊液于24000r/min的离心机中离心处理20min，真空抽滤，喷雾干燥即得。
所述改性滑石粉的制备方法如下：将滑石粉在100℃下烘干，去除滑石粉表面的水分；接着将滑石粉在400℃温度下煅烧2h，然后再放入-40℃冷冻30min；在550℃温度下再煅烧40min，然后用70MHz超声波超声处理20min；用-20℃的氮气对滑石粉冷吹30min，冷却至室温，即得改性滑石粉。
所述抗氧化剂为特丁基对苯二酚。
所述稳定剂为山梨酸。
对比例1
在实施例3的基础上，不含绿僵菌；
对比例2
在实施例3的基础上，不含苏云金杆菌；
对比例3
在实施例3的基础上，不含绿僵菌和苏云金杆菌；
对比例4
一种市售的微生物菌剂；
以作物品种为辣椒、草莓和黄瓜进行试验，在辣椒青枯病的发病初期使用实施例1-5以及对比例1-4的微生物菌剂对辣椒进行灌根，使用量为15g/亩，每隔4d灌根1次，共灌根3次，最后1次灌根5d后，计算防治效果；在草莓根腐病的发病初期使用实施例1-5以及对比例1-4的的微生物菌剂对草莓进行灌根，使用量为20g/亩，每隔3d灌根1次，共灌根3次，最后1次灌根5d后，计算防治效果；在黄瓜枯萎病的发病初期使用实施例1-5以及对比例1-4的微生物菌剂对黄瓜进行灌根，使用量为18g/亩，每隔4d灌根1次，共灌根3次，最后1次灌根5d后，计算防治效果。
Figure BDA0002821367520000101
Figure BDA0002821367520000111
从以上结果可以看出，本申请制备的微生物菌剂防治效果好，通过绿僵菌和苏云金杆菌协同增效，能够极大的提高微生物菌剂的抗病效果。
加入绿僵菌和苏云金杆菌，绿僵菌寄主昆虫达200种以上，能寄生金龟甲、象甲、金针虫、鳞翅目害虫幼虫和半翅目蝽象等，可诱发昆虫产生绿僵病，可在种群内形成重复侵染，对人畜无害，对天敌昆虫安全，不污染环境，苏云金杆菌经害虫食入后，寄生于寄主的中肠内，在肠内合适的碱性环境中生长繁殖，晶体毒素经过虫体肠道内蛋白酶水解，形成有毒效的较小亚单位，它们作用于虫体的中肠上皮细胞，引起肠道麻痹、穿孔、虫体瘫痪、停止进食，随后苏云金杆菌进入血腔繁殖，引起白血症，导致虫体死亡，通过绿僵菌和苏云金杆菌协同增效，具有十分突出的防治效果，可广泛应用于农业生产中，通过加入枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液，进一步有助于各菌种之间协同生长、代谢，协同增效杀虫，提高杀虫效果，以腐殖酸作为保护剂，以亚临界水解产物提供养分，能有效提高微生物菌体的萌发率和存活率，为微生物长效杀虫提供了一定的保障，以分散介质吸附更多的微生物以及微生物代谢产物，延长作用时间
以上所述，仅为本公开的具体实施方式，但本公开的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本公开揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本公开的保护范围之内。因此，本公开的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，包括以下按照重量份的原料：绿僵菌10-20份、苏云金杆菌10-20份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液6-10份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液8-14份、腐殖酸1-3份、亚临界水解产物10-20份、分散介质4-10份、抗氧化剂1-2份、稳定剂1-2份。
2.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，包括以下按照重量份的原料：绿僵菌12-18份、苏云金杆菌12-18份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液7-9份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液9-13份、腐殖酸1.5-2.5份、亚临界水解产物13-17份、分散介质6-8份、抗氧化剂1.2-1.8份、稳定剂1.3-1.7份。
3.根据权利要求2所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，包括以下按照重量份的原料：绿僵菌15份、苏云金杆菌15份、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液8份、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液11份、腐殖酸2份、亚临界水解产物15份、分散介质7份、抗氧化剂1.5份、稳定剂1.5份。
4.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液的制备方法如下：将枯草芽孢杆和阿耶波多芽孢杆菌种子液接种在PDB液体培养基中，并在20-30℃温度条件下进行有氧发酵培养24h，得到所需枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液。
5.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液的制备方法如下：将地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌利用接种环挑取菌落分别接种至LB培养基中进行培养，培养温度为25-35℃，在往复式振荡器中振荡速度为120rpm，培养24-36h后，转接发酵培养基，进行发酵18-24h，接种量为发酵总体积的1-3％。
6.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，所述亚临界水解产物的制备方法为：将米糠、牛粪、鸡粪、蘑菇渣按照重量比为3:1:2:1的比例混合，经亚临界水解反应后进行固液分离后所得的液体，即为亚临界水解产物。
7.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，所述分散介质为改性膨润土和改性滑石粉按照重量比为3：（1-2）混合而成。
8.根据权利要求1所述的杀虫复合微生物菌剂，其特征在于，所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯或特丁基对苯二酚。
9.如权利要求1-8任一所述的杀虫复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：
1）按配比准备各原料；
2）分别取绿僵菌、苏云金杆菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度30-40℃，培养时间20h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌的种子液；将种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，30-40℃条件下培养24-30h，分别得绿僵菌、苏云金杆菌菌液；
3）绿僵菌、苏云金杆菌菌液、枯草芽孢杆菌-阿耶波多芽孢杆菌混合发酵液、地衣芽孢杆菌-植物乳杆菌混合发酵液、腐殖酸、亚临界水解产物、分散介质份、抗氧化剂、稳定剂充分搅拌混合，在温度不高于50℃的条件下通风干燥，使含水量控制在20%以下，然后粉粹得到所需杀虫复合微生物菌剂。
10.如权利要求1-8任一所述的杀虫复合微生物菌剂的应用，其特征在于，将所述的微生物菌剂用水40-50倍稀释，搅拌均匀，得到微生物菌剂溶液,然后灌溉至植物根部土壤中。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113016826A (zh) * 2021-04-19 2021-06-25 北京中农富源集团有限公司 一种多功能微生物有机种衣剂制备工艺
CN113367161A (zh) * 2021-06-10 2021-09-10 中诚国联（河南）生物科技有限公司 一种有效防治土传病害的复合微生物菌剂及其应用
CN113439762A (zh) * 2021-06-16 2021-09-28 中诚国联（河南）生物科技有限公司 一种防虫害的复合微生物菌剂及其应用
CN114644996A (zh) * 2022-02-23 2022-06-21 赤天化科技集团有限公司 一种防治螟虫的微生物复合菌剂及其制备方法和应用
CN114956909A (zh) * 2022-07-11 2022-08-30 博创息壤(深圳)农业科技有限公司 一种微生物促生实现生物防治兼理性优化的土壤改良剂

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108402084A (zh) * 2018-01-24 2018-08-17 上海环垦生态科技股份有限公司 一种防治根部病害的微生物菌剂及制备方法
CN110484470A (zh) * 2019-08-27 2019-11-22 浙江省农业科学院 一株多效植物促生菌及分离筛选方法
CN110495475A (zh) * 2019-09-19 2019-11-26 重庆谷百奥生物研究院有限公司 绿僵菌和细菌复配杀草地贪夜蛾的药剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108402084A (zh) * 2018-01-24 2018-08-17 上海环垦生态科技股份有限公司 一种防治根部病害的微生物菌剂及制备方法
CN110484470A (zh) * 2019-08-27 2019-11-22 浙江省农业科学院 一株多效植物促生菌及分离筛选方法
CN110495475A (zh) * 2019-09-19 2019-11-26 重庆谷百奥生物研究院有限公司 绿僵菌和细菌复配杀草地贪夜蛾的药剂

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113016826A (zh) * 2021-04-19 2021-06-25 北京中农富源集团有限公司 一种多功能微生物有机种衣剂制备工艺
CN113367161A (zh) * 2021-06-10 2021-09-10 中诚国联（河南）生物科技有限公司 一种有效防治土传病害的复合微生物菌剂及其应用
CN113439762A (zh) * 2021-06-16 2021-09-28 中诚国联（河南）生物科技有限公司 一种防虫害的复合微生物菌剂及其应用
CN114644996A (zh) * 2022-02-23 2022-06-21 赤天化科技集团有限公司 一种防治螟虫的微生物复合菌剂及其制备方法和应用
CN114956909A (zh) * 2022-07-11 2022-08-30 博创息壤(深圳)农业科技有限公司 一种微生物促生实现生物防治兼理性优化的土壤改良剂

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