发明内容
本公开的目的是提供一种培养滑膜肉瘤类器官的方法,用于滑膜肉瘤类器官培养的培养基,一种用于构建滑膜肉瘤异种移植模型的移植体及其用途,以及一种生产滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的方法。
为了实现上述目的,第一方面,本公开提供一种培养滑膜肉瘤类器官的方法,该方法包括:
依次利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织细胞进行分离、扩增培养,得到扩增培养产物;其中,所述分离培养基中含有丙戊酸,以所述分离培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为2~3mmol/l,优选为2.4~2.8mmol/l;所述扩增培养基中含有丙戊酸,以所述扩增培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为0.5~1.5mmol/l,优选为0.8~1.2mmol/l;
对所述扩增培养产物进行分离处理,得到细胞沉淀;
利用所述扩增培养基对所述细胞沉淀进行传代培养,得到传代培养产物;
获取所述传代培养产物中的固体部分,得到滑膜肉瘤类器官。
可选地,所述分离培养基中还含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillinG、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、1~20μM的Y-27632、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz,s L-15Medium培养基;
所述扩增培养基中还含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz,s L-15Medium培养基;
可选地,所述依次利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织细胞进行分离、扩增培养,得到扩增培养产物,包括:
将所述滑膜肉瘤组织细胞与所述分离培养基和基质胶混合,得到原代培养物,其中,所述原代培养物中,所述滑膜肉瘤组织细胞的浓度为1×104~5×104个/mL,所述基质胶的含量为分离培养基总体积的5~20%;
对所述原代培养物进行培养24~48h后,将所述扩增培养基补加至所述原代培养物的培养体系中,所述扩增培养基的补加量为所述原代培养物的培养体系的25~50体积%,继续培养所述原代培养物,直至其中60~80%细胞团的直径达到0.1~0.3mm,得到所述扩增培养产物。
可选地,所述利用所述扩增培养基对所述细胞沉淀进行传代培养,得到传代培养产物,包括:
将所述细胞沉淀与所述扩增培养基和基质胶混合,得到传代培养物,其中,所述传代培养物中,所述细胞沉淀的浓度为1×103~5×103个/mL,所述基质胶的含量为扩增培养基总体积的2~10%;
对所述传代培养物进行传代扩增培养,得到所述传代培养产物,其中,在所述传代扩增培养过程中,每隔2~3天,向培养体系中添加培养体系总体积的10-20%的所述扩增培养基。
可选地,所述滑膜肉瘤组织细胞由滑膜肉瘤组织经酶解处理得到,其中,所述滑膜肉瘤组织保存于滑膜肉瘤保护液中,所述滑膜肉瘤保护液中含有Amphotericin B、青链霉素和Leibovitz’s L-15Medium培养基,以所述滑膜肉瘤保护液为基准,所述AmphotericinB的用量为5~20μg/ml,所述青链霉素的用量为80~200μg/ml,余量为所述Leibovitz’s L-15Medium培养基。
优选地,所述酶解处理包括:
将所述滑膜肉瘤组织与酶解液混合,得到待酶解物,其中,所述酶解液中含有FBS、dispase、DNAse、Ⅰ型胶原酶、青链霉素和DMEM培养基,以所述酶解液为基准,所述FBS的含量为1~10体积%,所述dispase的含量为0.1~1体积%,所述DNAse的含量为0.01~1体积%,所述Ⅰ型胶原酶的浓度为0.5~10mg/ml,所述青链霉素的含量为1~5体积%,余量为所述DMEM培养基;
将所述待酶解物进行培养酶解0.5~2h,得到酶解产物;
对所述酶解产物进行分离处理,得到所述滑膜肉瘤组织细胞。
第二方面,本公开提供用于滑膜肉瘤类器官培养的培养基,所述培养基中含有丙戊酸,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为0.3~3mmol/l;
优选地,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为2~3mmol/l或0.5~1.5mmol/l;
更优选地,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为2.4~2.8mmol/l或0.8~1.2mmol/l。
可选地,当所述丙戊酸的浓度为2~3mmol/l时,所述培养基中还含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、1~20μM的Y-27632、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基;
当所述丙戊酸的浓度为0.5~1.5mmol/l时,所述培养基中还含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基。
第三方面,本公开提供一种用于构建滑膜肉瘤异种移植模型的移植体,所述移植体包括滑膜肉瘤类器官,以及包裹在所述滑膜肉瘤类器官表面的包裹层,其中,所述滑膜肉瘤类器官由第一方面中任意一项所述的方法制备得到;
优选地,所述滑膜肉瘤类器官的直径为0.1~0.3mm,所述包裹层的厚度为0.1~0.3mm。
第四方面,本公开提供第三方面所述的移植体在构建滑膜肉瘤异种移植模型中的用途。
第五方面,本公开提供一种生产滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的方法,该方法包括:
将第三方面所述的移植体植入免疫缺陷型小鼠的皮下和/或原位组织中,得到所述滑膜肉瘤异种移植小鼠模型。
通过上述技术方案,本公开实施例中利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织进行分离、扩增培养,然后再利用扩增培养基进行传代培养,得到滑膜肉瘤类器官。滑膜肉瘤组织细胞中含有滑膜肉瘤细胞和其它间质细胞,因此,利用滑膜肉瘤组织细胞培养得到的滑膜肉瘤类器官,能够较好地保留滑膜肉瘤组织的异质性、组织特性及基因突变信息,可以在体外模拟滑膜肉瘤组织的空间形态结构,其生物学特性与滑膜肉瘤组织的生物学特性相似,可以用于构建滑膜肉瘤患者的个体精准化疾病模型,用于疾病治疗方案及抗癌药物的研究和筛选;此外,分离培养基和扩增培养基中均含有特定浓度的丙戊酸(Valproicacid),能够有效促进滑膜肉瘤细胞的体外生长,因此,本公开实施例的方法能够有效提升滑膜肉瘤类器官的培养成功率。
具体实施方式
以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是,此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开,并不用于限制本公开。
本公开的第一方面提供一种培养滑膜肉瘤类器官的方法,该方法包括:依次利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织细胞进行分离、扩增培养,得到扩增培养产物;其中,所述分离培养基中含有丙戊酸,以所述分离培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为2~3mmol/l,优选为2.4~2.8mmol/l;所述扩增培养基中含有丙戊酸,以所述扩增培养基为基准,所述丙戊酸的浓度为0.5~1.5mmol/l,优选为0.8~1.2mmol/l;对所述扩增培养产物进行分离处理,得到细胞沉淀;利用所述扩增培养基对所述细胞沉淀进行传代培养,得到传代培养产物;获取所述传代培养产物中的固体部分,得到滑膜肉瘤类器官。
在本公开实施例中,对所述扩增培养产物进行分离处理,例如可以是使用移液器械吸取所述扩增培养产物,然后将扩增培养产物消化分解成直径<100μm的小细胞团,之后再进行离心处理。
本公开的发明人发现,特定浓度的丙戊酸(Valproic acid)能够有效促进滑膜肉瘤细胞的体外生长,因此,将特定浓度的丙戊酸(Valproic acid)用于滑膜肉瘤类器官的体外培养时,能够显著提升体外培养滑膜肉瘤类器官的成功率,基于此提出本公开。
本公开实施例中利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织细胞进行分离、扩增培养,然后再利用扩增培养基进行传代培养,得到滑膜肉瘤类器官。其中,滑膜肉瘤组织细胞中含有滑膜肉瘤细胞和其它间质细胞,因此,利用滑膜肉瘤组织细胞培养得到的滑膜肉瘤类器官,能够较好地保留滑膜肉瘤组织的异质性、组织特性及基因突变信息,可以在体外模拟滑膜肉瘤组织的空间形态结构,其生物学特性与滑膜肉瘤组织的生物学特性相似,可以用于构建滑膜肉瘤患者的个体精准化疾病模型,用于疾病治疗方案及抗癌药物的研究和筛选;此外,分离培养基和扩增培养基中均含有特定浓度的丙戊酸(Valproic acid),能够有效促进滑膜肉瘤细胞的体外生长,因此,本公开实施例的方法能够有效提升滑膜肉瘤类器官的培养成功率。
根据本公开,所述分离培养基和扩增培养基中还可以含有其它组分,其它组分可以在较宽的范围内选择,有利于滑膜肉瘤组织细胞生长的组分均可用于本公开。示例性地,所述分离培养基中还可以含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、1~20μM的Y-27632、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz,s L-15Medium培养基;所述扩增培养基中还可以含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基。
分离培养基和扩增培养基中涉及的上述各组分均可通过购买获得,各组分的组成、剂型、规格等均是领域内已知的,此处不再赘述。示例性地,Leibovitz’s L-15Medium培养基(货号SH30525.01)、FBS(货号10100147)、penicillin G-链霉素(货号15070063)、EGF(货号SRP3027-500UG)、bFGF(货号PHG0360)和B27(货号17504044)可以购自Gibco,Y-27632(货号146986-50-7)、Valproic acid(货号HY-10585)和Nicotinamide(货号98-92-0)可以购自MCE。
可选地,所述依次利用分离培养基和扩增培养基对滑膜肉瘤组织细胞进行分离、扩增培养,得到扩增培养产物,可以包括:将所述滑膜肉瘤组织细胞与所述分离培养基和基质胶混合,得到原代培养物,其中,所述原代培养物中,所述滑膜肉瘤组织细胞的浓度为1×104~5×104个/mL,所述基质胶的含量为分离培养基总体积的5~20%;对所述原代培养物进行培养24~48h后,将所述扩增培养基补加至所述原代培养物的培养体系中,所述扩增培养基的补加量为所述原代培养物的培养体系的25~50体积%,继续培养所述原代培养物,直至其中60~80%细胞团的直径达到0.2~0.3mm,得到所述扩增培养产物。
可选地,所述利用所述扩增培养基对所述细胞沉淀进行传代培养,得到传代培养产物,可以包括:将所述细胞沉淀与所述扩增培养基和基质胶混合,得到传代培养物,其中,所述传代培养物中,所述细胞沉淀的浓度为1×103~5×103个/mL,所述基质胶的含量为扩增培养基总体积的2~10%;对所述传代培养物进行传代扩增培养,得到所述传代培养产物,其中,在所述传代扩增培养过程中,每隔2~3天,向培养体系中添加培养体系总体积的10-20%的所述扩增培养基。
根据本公开,所述滑膜肉瘤组织细胞可以由滑膜肉瘤组织经酶解处理得到,其中,所述滑膜肉瘤组织可以保存于滑膜肉瘤保护液中,所述滑膜肉瘤保护液中可以含有Amphotericin B、青链霉素和Leibovitz’s L-15Medium培养基,以所述滑膜肉瘤保护液为基准,所述Amphotericin B的用量可以为5~20μg/ml,所述青链霉素的用量可以为50~200μg/ml,余量为所述Leibovitz’s L-15Medium培养基。
优选地,所述酶解处理可以包括:将所述滑膜肉瘤组织与酶解液混合,得到待酶解物;将所述待酶解物进行培养酶解0.5~2h,得到酶解产物;对所述酶解产物进行分离处理,得到所述滑膜肉瘤组织细胞。
具体地,所述酶解液中可以含有FBS、dispase、DNAse、Ⅰ型胶原酶、青链霉素和DMEM培养基,以所述酶解液为基准,所述FBS的含量可以为1~10体积%,所述dispase的含量可以为0.1~1体积%,所述DNAse的含量可以为0.01~1体积%,所述Ⅰ型胶原酶的浓度可以为0.5~10mg/ml,所述青链霉素的含量可以为1~5体积%,余量为所述DMEM培养基。
在本公开实施例中,具体地,滑膜肉瘤组织细胞由滑膜肉瘤组织经酶解处理得到,其中除了含有滑膜肉瘤细胞/干细胞外,还含有其它间质细胞,因此,利用滑膜肉瘤组织细胞培养得到的滑膜肉瘤类器官,能够较好地保留滑膜肉瘤组织的异质性、组织特性及基因突变信息,可以在体外模拟滑膜肉瘤组织的空间形态结构,其生物学特性与滑膜肉瘤组织的生物学特性相似,可以用于构建滑膜肉瘤患者的个体精准化疾病模型,用于疾病治疗方案及抗癌药物的研究和筛选。
本公开的第二方面提供用于滑膜肉瘤类器官培养的培养基,所述培养基中含有丙戊酸,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度可以为0.3~3mmol/l;优选地,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度可以为2~3mmol/l或0.5~1.5mmol/l;更优选地,以所述培养基为基准,所述丙戊酸的浓度可以为2.4~2.8mmol/l或0.8~1.2mmol/l。
可选地,当所述丙戊酸的浓度为2~3mmol/l时,所述培养基中还可以含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、1~20μM的Y-27632、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz,s L-15Medium培养基;当所述丙戊酸的浓度为0.5~1.5mmol/l时,所述培养基中还可以含有5~20体积%的FBS、50~200U/ml的penicillin G、50~200mg/ml的链霉素,1~10体积%的B27、1~10mM的Nicotinamide、10~50μM的EGF、10~50μM的bFGF和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基。
本公开的第三方面提供一种用于构建滑膜肉瘤异种移植模型的移植体,所述移植体包括滑膜肉瘤类器官,以及包裹在所述滑膜肉瘤类器官表面的包裹层,其中,所述滑膜肉瘤类器官由第一方面中任意一项所述的方法制备得到;优选地,所述滑膜肉瘤类器官的直径为0.1~0.3mm,所述包裹层的厚度为0.1~0.3mm。
在本公开实施例中,具体地,所述包裹层例如可以是基质胶层。由于培养类器官所需的组织细胞较少,少量的组织细胞即能培养得到较多的类器官,而且本公开第一方面中所述的方法对滑膜肉瘤类器官的培养成功率较高,因此,利用本公开第一方面所述的方法,可以在较短时间内利用少量的滑膜肉瘤组织获得较多的滑膜肉瘤类器官,相应地,也可以在短期内获得较多数量的上述移植体,这有效克服了现有滑膜肉瘤动物模型构建过程中存在的滑膜肉瘤数量较少,获取难度较大,从而难以大批量构建滑膜肉瘤动物模型的问题。
本公开的第四方面提供第三方面所述的移植体在构建滑膜肉瘤异种移植模型中的用途。
本公开的第五方面提供一种生产滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的方法,该方法包括:将第三方面所述的移植体植入免疫缺陷型小鼠的皮下和/或原位组织中,得到所述滑膜肉瘤异种移植小鼠模型。
下面通过实施例来进一步说明本公开,但是本公开并不因此而受到任何限制。
本公开实施例中涉及的原料、试剂、仪器和设备,如无特殊说明,均可通过购买获得,此外,在本公开实施例中未注明具体实验温度时,实验温度均为室温(20-25℃)。
本公开实施例中使用的滑膜肉瘤保护液包括:1体积%Amphotericin B、1体积%青链霉素混合液和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基。
本公开实施例中使用的组织酶解液包括:2体积%的FBS,0.2体积%的dispase,0.02体积%的DNAse,1.5mg/ml的Ⅰ型胶原酶,1体积%的青链霉素,余量的DMEM培养基。
本公开实施例中所使用的分离培养基包括:
10体积%的FBS、100U/ml的penicillin G、100mg/ml的链霉素、2体积%的B27、5mM的Nicotinamide、10μM的Y-27632、20μM的EGF、20μM的bFGF、2~3mmol/L的丙戊酸和余量的Leibovitz’s L-15Medium培养基。
本公开实施例中所使用的扩增培养基包括:
10体积%的FBS、100U/ml的penicillin G、100mg/ml的链霉素、2体积%的B27、5mM的Nicotinamide、20μM的EGF、20μM的bFGF、0.5~1.5mmol/L的丙戊酸和余量的Leibovitz’sL-15Medium培养基。
本公开实施例中使用的试剂来源如下:
Leibovitz’s L-15Medium培养基(货号SH30525.01)、FBS(货号10100147)、penicillin G-链霉素(货号15070063)、EGF(货号SRP3027-500UG)、bFGF(货号PHG0360)、B27(货号17504044)、Ⅰ型胶原酶(货号C21900)可以购自Gibco,Y-27632(货号146986-50-7)、丙戊酸(货号HY-10585)和Nicotinamide(货号98-92-0)可以购自MCE,Matrigel基质胶(货号356234)购自BD。
实施例1
本实施例用于说明滑膜肉瘤类器官的培养。
(1)滑膜肉瘤组织样本的获取
将滑膜肉瘤患者的手术切除组织或穿刺组织作为滑膜肉瘤组织样本,并将其保存在预冷后的滑膜肉瘤保护液中,于4℃条件下,48小时内运送至操作室。
(2)滑膜肉瘤组织细胞的获取
将滑膜肉瘤组织样本置于无菌培养皿中,利用4℃的PBS清洗两次,然后加入酶解液,其中,1mg滑膜肉瘤组织样本对应加入0.1ml酶解液。使用无菌器械将滑膜肉瘤组织样本剪切为直径小于1mm的组织块,然后将培养皿置于37℃的培养箱中酶解0.5~2小时,得到酶解产物。将酶解产物利用70μm细胞筛过滤,滤液于300g条件下离心5min,去除上清液,离心沉淀利用4℃的PBS清洗两次,然后再次于300g条件下离心5min,去除上清液,离心沉淀即为滑膜肉瘤组织细胞。
(3)扩增培养
将步骤(2)中得到的滑膜肉瘤组织细胞与分离培养基(丙戊酸的浓度为2.6mmol/L)混合,吹打混匀后,制成浓度为3×104个/ml的单细胞悬液,并于低温条件下加入10体积%的Matrigel基质胶,混匀,得到原代培养物。
将上述原代培养物接种至低吸附的24孔板中,接种量为300μl/孔,然后将接种后的24孔板置于80rpm转速的摇床上,并于37℃条件下含5%CO2的培养箱中培养0.5~2h后,待Matrigel基质胶凝固,向每孔中补加100μl的分离培养基继续培养24~48小时,得到原代培养产物。
向含有上述原代培养产物的各培养孔中加入200μl/孔的扩增培养基(丙戊酸的浓度为1mmol/L),继续培养3~5天,得到扩增培养产物。
(4)传代培养
将上述扩增培养产物置于显微镜下观察,选择含有直径为0.1~0.3mm的细胞团达到60-80%的培养孔,吸取其中的悬液部分,并于300g的条件下离心5min,去除上清,消化分解后离心得到细胞沉淀。
将上述得到的细胞沉淀与扩增培养基(丙戊酸的浓度为1mmol/L)和Matrigel基质胶混合,得到传代培养物,使得传代培养物中的细胞浓度为3×103个/ml,Matrigel基质胶的含量为5体积%。
将上述传代培养物接种至低吸附的24孔板中,接种量为300μl/孔,于37℃条件下含5%CO2的培养箱中培养0.5~2h后,待Matrigel基质胶凝固,向每孔中补加200μl的扩增培养基继续培养,培养过程中每隔2~3天向每个培养孔中添加100μL上述扩增培养基,直至培养孔中的细胞团直径为0.1~0.3mm,得到传代培养产物。分离出传代培养产物中的细胞团,即为滑膜肉瘤类器官。
实施例2
本实施例用于说明滑膜肉瘤类器官在构建PDX小鼠模型中的应用。
针对实施例1中得到的培养产物,将直径为0.2mm左右的滑膜肉瘤类器官连同其周围0.2mm厚度范围内的基质胶层一起取出,得到移植体。
采用0.1ml/20g的戊巴比妥钠麻醉小鼠(SPE级雌性SCID小鼠,4周龄,购自北京维通利华实验动物有限公司)。麻醉成功后,将小鼠置于洁净手术台上,使用无菌器械剖开小鼠腋下皮肤,用眼科镊在小鼠肌肉层上作一个3-5mm深的切口。然后轻轻的将其肌肉层拉起,用眼科镊夹取处理好的移植体送入切口内。松开眼科镊,抚平肌肉层,采用无菌器械缝合小鼠皮肤,并对其进行常规消毒处理。
接种完成7周后,采用脱颈法处死小鼠,解剖后取出瘤组织称重,当瘤重>0.5g时,PDX小鼠模型构建成功。
实施例3
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本实施例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为2.4mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为0.8mmol/L。
实施例4
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本实施例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为2.8mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为1.2mmol/L。
实施例5
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本实施例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为2mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为0.5mmol/L。
实施例6
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本实施例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为3mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为1.5mmol/L。
对比例1
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本对比例所使用的分离培养基和扩增培养基中均不含有丙戊酸。
对比例2
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本对比例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为1.5mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为0.1mmol/L。
对比例3
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本对比例所使用的分离培养基中丙戊酸的浓度为5mmol/L,扩增培养基中丙戊酸的浓度为2mmol/L。
对比例4
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本对比例中不进行步骤(4)的传代培养,直接将步骤(3)得到的扩增培养产物中的细胞团作为本对比例的滑膜肉瘤类器官。
对比例5
按照实施例1的方法培养滑膜肉瘤类器官,不同的是:本对比例中不进行步骤(3)的扩增培养,利用滑膜肉瘤组织细胞替换步骤(4)中的细胞沉淀,并按照步骤(4)的操作继续培养,将培养产物中的细胞团作为本对比例的滑膜肉瘤类器官。
测试实施例1
分别按照实施例1、实施例3~6,以及对比例1~5的方法培养滑膜肉瘤类器官,开始培养7天后,于倒置显微镜观察,统计各培养组中直径为0.1mm~0.3mm的类器官的数量,其结果以“M±SD”表示,统计结果见表1。
表1
由表1可以看出,利用本公开提供的方法培养滑膜肉瘤类器官的成功率高。
测试实施例2
按照实施例2的方法构建滑膜肉瘤PDX小鼠模型A。利用2D培养得到的AW982细胞系替换实施例2中的移植体,构建滑膜肉瘤PDX小鼠模型B。利用实施例1中的滑膜肉瘤组织样本替换实施例2中的移植体,构建滑膜肉瘤PDX小鼠模型C。每种滑膜肉瘤PDX小鼠模型各构建20例。
(1)成瘤率检测
7周后,采用脱颈法处死所有小鼠,解剖取出瘤组织并称重,当瘤重>0.5g时,认为滑膜肉瘤PDX小鼠模型构建成功,统计各种滑膜肉瘤PDX小鼠模型的构建成功数,并计算成瘤率,结果见表2。
表2
滑膜肉瘤PDX小鼠模型 |
构建总例数,例 |
构建成功总例数,例 |
成瘤率 |
A |
20 |
17 |
85% |
B |
20 |
4 |
20% |
C |
20 |
12 |
60% |
由表2可知,利用本公开的滑膜肉瘤类器官构建PDX小鼠模型的成功率较高。
(2)SYT-SSX融合基因阳性率检测
分别取上述构建成功的滑膜肉瘤PDX小鼠模型A、B和C,取其部分瘤组织进行SYT-SSX融合基因检测,统计并计算SYT-SSX融合基因阳性率,结果见表3。
其中,SYT-SSX融合基因是存在于滑膜肉瘤中的突变基因,由18号染色体上的SYT基因融合到X染色体上的SSX基因而形成,可用作滑膜肉瘤的诊断指标。
表3
由表3可以看出,利用本公开的滑膜肉瘤类器官构建的PDX小鼠模型,能够较稳定地保持滑膜肉瘤组织的遗传突变特性。
以上详细描述了本公开的优选实施方式,但是,本公开并不限于上述实施方式中的具体细节,在本公开的技术构思范围内,可以对本公开的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合,为了避免不必要的重复,本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外,本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合,只要其不违背本公开的思想,其同样应当视为本公开所公开的内容。