CN112480281A - 一种短穗兔耳草多糖及制备抗肿瘤药物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种短穗兔耳草多糖及制备抗肿瘤药物的用途，该多糖以短穗兔耳草为原料，采用乙醇分级沉淀法制备得到，细胞生物学试验研究证明该乙醇分级多糖具有明显的抗肿瘤活性，可以有效抑制人乳腺癌MCF‑7细胞和人结肠癌HCT‑116细胞的增殖，因此具有开发成抗肿瘤药物的前景。

Description

一种短穗兔耳草多糖及制备抗肿瘤药物的用途
技术领域
本发明属于化学领域，涉及多糖及应用，具体涉及一种短穗兔耳草多糖及制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术
恶性肿瘤是当今威胁人类健康的最主要疾病之一。其发病率持续居高不下，已成为多发病及常见病。多学科综合治疗恶性肿瘤已成为全球共识，手术切除、放射治疗(简称放疗)、化学治疗(简称化疗)和靶向治疗是目前治疗恶性肿瘤的主要方式。
化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一，和手术、放疗一起并称癌症的三大治疗手段。手术和放疗属于局部治疗，只对治疗部位的肿瘤有效，对于潜在的转移病灶(癌细胞实际已经发生转移，但因为目前技术手段的限制在临床上还不能发现和检测到)和已经发生临床转移的癌症就难以发挥有效治疗了。而化疗是一种全身治疗的手段，无论采用什么途径给药(口服、静脉和体腔给药等)，化疗药物都会随着血液循环遍布全身的绝大部分器官和组织。因此，对一些有全身播撒倾向的肿瘤及已经转移的中晚期肿瘤，化疗都是主要的治疗手段。但是，目前常用的西药化疗药物通常具有较为严重的副作用。
植物多糖是从天然植物中提取纯化得到的一种成分，由于与人体相容性较好，毒副作用小，得到越来越多的关注和应用。
发明内容
本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种短穗兔耳草多糖及制备抗肿瘤药物的用途。
实现本发明目的的技术方案为：
一种短穗兔耳草多糖，以短穗兔耳草为原料，先制备总多糖，再将该总多糖用去离子水复溶，依次用50％乙醇、80％乙醇分级沉淀，收集80％乙醇分级沉淀，即得。
上述短穗兔耳草多糖用于制备抗肿瘤药物的用途。
优选地，所述肿瘤为乳腺癌。
优选地，所述肿瘤为结肠癌。
有益技术效果：
本发明从短穗兔耳草制备了一种乙醇分级多糖，细胞生物学试验研究证明该乙醇分级多糖具有明显的抗肿瘤活性，可以有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞和人结肠癌HCT-116细胞的增殖，因此具有开发成抗肿瘤药物的前景。
附图说明
图1为50％乙醇分级多糖精制品(A)、80％乙醇分级多糖精制品(B)SEM观察形貌；
图2为不同浓度50％、80％乙醇分级多糖精制品对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率曲线；
图3为不同浓度50％、80％乙醇分级多糖精制品对人结肠癌HCT-116细胞的抑制率曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例阐述本发明的实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1：乙醇分级多糖的制备
原料为短穗兔耳草，其为玄参科植物短穗兔耳草Lagotis brachystachys Maxim.的干燥全草，将其粉碎过50目筛，备用。
将2kg短穗兔耳草用10L去离子水于85℃加热提取3次，每次2h，合并得到30L提取液，过滤，将提取液浓缩至3L，然后加入无水乙醇至乙醇的体积百分浓度为80％，搅拌均匀后静置3h，过滤，收集沉淀，得到总多糖。采用Sevage法对总多糖脱蛋白，在紫外260～280nm处检测，无明显吸收峰，表明蛋白已脱除，得到脱蛋白总多糖35g。
取脱蛋白总多糖30g，用2L去离子水溶解，先加入无水乙醇至乙醇的体积百分浓度为50％，搅拌均匀后静置3h，过滤，收集沉淀，得到50％乙醇分级多糖；滤液中继续加入无水乙醇至乙醇的体积百分浓度为80％，搅拌均匀后静置3h，过滤，收集沉淀，得到80％乙醇分级多糖。最后将50％乙醇分级多糖、80％乙醇分级多糖分别装入透析袋(1.0kDa)内，活水透析72h，冷冻干燥得到50％乙醇分级多糖精制品、80％乙醇分级多糖精制品。图1中A、B分别为50％乙醇分级多糖精制品、80％乙醇分级多糖精制品的SEM观察形貌。
实施例2：抗肿瘤活性的测定-乳腺癌
取人乳腺癌MCF-7细胞用含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基于37℃、5％CO2、饱和湿度条件培养，待细胞密度达80％～90％时即可消化传代，取对数生长期的细胞用于后续实验。
取对数生长期的MCF-7细胞，胰酶消化，用完全培养基重悬制成密度为5×104/mL的细胞混悬液，接种于96孔板中，每孔200μL。设置对照组、不同浓度的50％、80％乙醇分级多糖精制品给药组(1、2、5、10、20、50μg/mL)和调零组，每组(每个浓度)平行设置3个复孔。培养24h后，给药组更换为含有对应浓度多糖的完全培养基，对照组依然使用不含有药物的完全培养基，调零组为不含有细胞的完全培养基。培养48h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，孵育4h，弃上清液，每孔加入DMSO 150μL，振荡5min，酶标仪在570nm处测吸光度值(A)，根据公式计算细胞抑制率，绘制抑制率曲线。
Figure BDA0002832120500000021
不同浓度50％、80％乙醇分级多糖精制品对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率如表1所示，抑制率曲线如图2所示(横坐标为药物浓度，纵坐标为抑制率)。
表1不同浓度多糖精制品对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制率
Figure BDA0002832120500000031
可见80％乙醇分级多糖精制品对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显的抑制作用，而50％乙醇分级多糖精制品无明显抑制作用。
实施例3：抗肿瘤活性的测定-结肠癌
取人结肠癌HCT-116细胞用含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基于37℃、5％CO2、饱和湿度条件培养，待细胞密度达80％～90％时即可消化传代，取对数生长期的细胞用于后续实验。
取对数生长期的HCT-116细胞，胰酶消化，用完全培养基重悬制成密度为5×104/mL的细胞混悬液，接种于96孔板中，每孔200μL。设置对照组、不同浓度的50％、80％乙醇分级多糖精制品给药组(1、2、5、10、20、50μg/mL)和调零组，每组(每个浓度)平行设置3个复孔。培养24h后，给药组更换为含有对应浓度多糖的完全培养基，对照组依然使用不含有药物的完全培养基，调零组为不含有细胞的完全培养基。培养48h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，孵育4h，弃上清液，每孔加入DMSO 150μL，振荡5min，酶标仪在570nm处测吸光度值(A)，根据公式计算细胞抑制率，绘制抑制率曲线。
Figure BDA0002832120500000032
不同浓度50％、80％乙醇分级多糖精制品对人结肠癌HCT-116细胞的抑制率如表2所示，抑制率曲线如图3所示(横坐标为药物浓度，纵坐标为抑制率)。
表2不同浓度多糖精制品对人结肠癌HCT-116细胞的抑制率
Figure BDA0002832120500000041
可见80％乙醇分级多糖精制品对人结肠癌HCT-116细胞具有明显的抑制作用，而50％乙醇分级多糖精制品无明显抑制作用。
实施例2、3证明实施例1制备的80％乙醇分级多糖具有明显的抗肿瘤活性，可以有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞和人结肠癌HCT-116细胞的增殖，因此具有开发成抗肿瘤药物的前景。

Claims (4)

1.一种短穗兔耳草多糖，其特征在于：以短穗兔耳草为原料，先制备总多糖，再将该总多糖用去离子水复溶，依次用50％乙醇、80％乙醇分级沉淀，收集80％乙醇分级沉淀，即得。
2.权利要求1所述短穗兔耳草多糖用于制备抗肿瘤药物的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，所述肿瘤为乳腺癌。
4.根据权利要求2所述的用途，所述肿瘤为结肠癌。
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