CN110279862B - 一种抗癌组合物及其在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗癌组合物，其包括海洋源性活性物质，所述海洋源性活性物质包括海洋寡糖及其衍生物中的一种或几种。本发明还涉及上述抗癌组合物在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。本发明所述的抗癌组合物种具有抑瘤、抗转移、促自噬及药物增敏多重作用，其主要组分为海洋源性天然小分子物质，来源广泛、资源丰富、价格低廉；该抗癌组合物可显著抑制骨肉瘤的增殖及转移，促进肿瘤细胞自噬达到抑瘤效果，并可显著提高骨肉瘤细胞对顺铂等常规化疗药物的敏感性，减少抗癌药的使用，且对其他脏器无毒副作用，安全性和有效性均优异，降低治疗风险和成本，改善患者生活治疗和经济压力，有望为骨肉瘤治疗提供新的思路和方法。

Description

一种抗癌组合物及其在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用
技术领域
本发明涉及肿瘤治疗技术领域，尤其涉及一种抗癌组合物及其在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。
背景技术
骨肉瘤是骨恶性肿瘤中最多见的一种，是从间质细胞系发展而来，肿瘤迅速生长是由于肿瘤经软骨阶段直接或间接形成肿瘤骨样组织和骨组织。下肢负重骨在外界因素(如病毒)的作用下，使细胞突变，可能与骨肉瘤形成有关。典型的骨肉瘤源于骨内，另一与此完全不同类型的是与骨皮质并列的骨肉瘤，源于骨外膜和附近的结缔组织。后者较少见，预后稍好。
骨肉瘤多发于青少年；极易转移、复发；病因复杂，尚不明确，无靶向药物；对常规治疗药物不敏感，易耐药；患者自身和家庭的精神压力和经济压力均巨大。骨肉瘤的早期发现和及时治疗已经从很大程度上提高了该病的生存率。但40多年来，国际上对骨肉瘤的临床治疗方法和预后已长期处于平台期，无进展或突破。
目前多种海洋活性物质已表现出抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗感染等活性；已有十余种开发为海洋生物药物，另有17种进入不同临床试验阶段；2018年，全球瞩目的阿尔兹海默症治疗新药GV-971便是一种海洋活性物质。
但目前还没有将海洋活性物质用于治疗骨肉瘤的报道。
发明内容
针对骨肉瘤易增殖、易转移、药物不敏感等特点以及目前缺乏有效治疗药物或方案的现状，本发明提供一种抗癌组合物及其在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用，该抗癌组合物主要组分为海洋源性天然小分子物质，可显著抑制骨肉瘤增殖、转移并提高其药物敏感性。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个目的是提供一种抗癌组合物，所述抗癌组合物包括海洋源性活性物质，所述海洋源性活性物质包括海洋寡糖及其衍生物中的一种或几种。
为了进一步优化上述抗癌组合物，本发明采取的技术措施还包括：
进一步地，所述海洋寡糖及其衍生物包括壳寡糖及其衍生物、海藻寡糖及其衍生物、岩藻寡糖及其衍生物物、甘露寡糖及其衍生物物、卡拉胶寡糖及其衍生物的一种或几种。上述海洋寡糖及其衍生物均采用常规方法进行制备，例如：市售的天然海洋生物多糖采用酶解、酸解或氧化降解等方式制备小分子活性寡糖，经粗滤、微滤及膜超滤去除高分子，分离获得2～10个糖单元的组合物，经浓缩后喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥制备寡糖干粉，分装备用。
进一步地，所述海洋寡糖及其衍生物主要为2～10个糖单元的组合物。
进一步地，所述抗癌组合物还包括药剂学上可接受的辅料，例如用于制备固体制剂的淀粉、糊精等；用于制备液体制剂的水、甘油等。
进一步地，所述抗癌组合物的剂型为药剂学领域的常规剂型，包括液体制剂、胶囊制剂、片剂、颗粒剂等。
进一步地，所述抗癌组合物可用于乳腺癌，肝癌，前列腺癌，神经胶质瘤，骨肉瘤等的治疗。
本发明的第二个目的是提供一种任一上述的抗癌组合物在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。
为了进一步优化上述抗癌组合物的应用，本发明采取的技术措施还包括：
进一步地，所述治疗骨肉瘤的药物能抑制骨肉瘤的增殖及转移，促进肿瘤细胞自噬，并可提高骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。
进一步地，所述抗癌组合物与化疗药物联合应用。
进一步地，所述化疗药物包括甲氨蝶类、阿霉素、顺铂、氟尿嘧啶。更能进一步地，所述化疗药物为顺铂。
进一步地，所述抗癌组合物用于抑制U2OS、MG63、MNNGHOS细胞的增殖和转移。
本发明采用上述技术方案，具有如下技术效果：
本发明所述的抗癌组合物种具有抑瘤、抗转移、促自噬及药物增敏多重作用，其主要组分为海洋源性天然小分子物质，其可显著抑制骨肉瘤的增殖及转移，促进肿瘤细胞自噬，并可显著提高骨肉瘤细胞对顺铂等常规化疗药物的敏感性，减少抗癌药的使用，降低治疗风险和成本，改善患者生活治疗和经济压力，具有广阔应用前景。
本发明所述的抗癌组合物中的海洋源性天然活性物质，来源广泛、资源丰富、价格低廉；且该抗癌组合物多重效应协调，可促进骨肉瘤细胞的自噬达到抑瘤效果；对骨肉瘤的增殖、转移均有显著抑制作用；可提高骨肉瘤对常规化疗药物的敏感性；对其他脏器无毒副作用，安全性和有效性均优异；有望为骨肉瘤治疗提供新的思路和方法。
附图说明
图1是本发明一实施例中抗癌组合物对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用的结果示意图。
图2是本发明一实施例中抗癌组合物对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的抑制作用的结果示意图。
图3是本发明一实施例中抗癌组合物对骨肉瘤细胞自噬的促进作用的结果示意图。
图4是本发明一实施例中抗癌组合物对骨肉瘤细胞抗肿瘤药物的增敏性的结果示意图。
图5是本发明一实施例中抗癌组合物对骨肉瘤PDX动物模型的抑瘤及抗转移作用的结果示意图。
具体实施方式
本发明涉及一种抗癌组合物，其包括海洋源性活性物质，所述海洋源性活性物质包括海洋寡糖及其衍生物中的一种或几种。本发明还涉及上述抗癌组合物在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用。
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
本实施例为一较佳的抗癌组合物的制备方法，其包括如下步骤：酶解法分别制备海藻寡糖、壳寡糖、岩藻寡糖，经粗滤、微滤及膜超滤后，冷冻干燥制备精制的2～10个单位的藻寡糖、壳寡糖、岩藻寡糖样品。
取上述不同寡糖，按海藻寡糖：壳寡糖：岩藻寡糖＝1：7：2的比例混匀，可得抗癌组合物。
实施例2
本实施例采用实施例1制备的抗癌组合物对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用进行验证。
抗癌组合物溶于完全培养基(高糖完全培养基，10％胎牛血清，100mg/L链霉素和100mg/L青霉素)配制不同浓度药液(5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml)，过滤除菌后，备用。
取对数生长期的U2OS、MG63、MNNGHOS细胞，0.25％胰蛋白酶消化后，制备细胞悬液，以5000个/孔接种于96孔板。培养24h后，进行给药，每组设6个平行孔。对照组以完全培养基常规培养，平行操作。处理12、24、48h后，分别以CCK-8检测细胞增殖。结果见图1，抗癌组合物对三株骨肉瘤细胞增殖呈显著抑制活性，呈剂量、时间依赖性。
实施例3
本实施例采用实施例1制备的抗癌组合物对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的抑制作用进行验证。
抗癌组合物溶于完全培养基(高糖完全培养基，10％胎牛血清，100mg/L链霉素和100mg/L青霉素)，过滤除菌后，备用。取对数生长期的U2OS、MG63、MNNGHOS细胞，0.25％胰蛋白酶消化后，以不含血清的基础培养基制备细胞悬液。
迁移实验：向transwell小室上室中加入400μl细胞悬液，细胞数量约为5000个/孔；实验组下室中加入600μl配制的药液；对照组加入含10％血清的完全培养基。培养24h后吸除上室内液体，小心取出上室，轻轻擦拭去除上室中未穿膜的细胞，风干后以无水乙醇固定，HE染色，自然风干后小心切下小室膜，置于载玻片上在显微镜下观察计数，计算细胞迁移率。
侵袭实验：细胞接种前一天，将ECM胶铺在transwell小室的上室面，再置于24孔培养板内，超净台内紫外线照射过夜。接下来操作同细胞迁移实验。
结果如图2所示，抗癌组合物可显著抑制U2OS、MG63、MNNGHOS三株骨肉瘤细胞株的迁移和侵袭能力。
实施例4
本实施例采用实施例1制备的抗癌组合物对骨肉瘤细胞自噬的促进作用进行验证。
同实施例2所述步骤操作，加入抗癌组合物药液培养48h后，离心收集细胞。透射电镜观察自噬小体的生成情况；RT-PCR检测自噬相关基因ATG16L、LC3BⅠ、LC3BⅡ表达情况。结果如图3所示，抗癌组合物组细胞自噬小体数量显著增多，线粒体肿胀；RT-PCR结果显示，自噬相关基因表达显著上调，进一步证实抗癌组合物可显著促进骨肉瘤细胞的自噬。
实施例5
本实施例采用实施例1制备的抗癌组合物对骨肉瘤细胞抗肿瘤药物的增敏性进行验证。
实验组添加顺铂和抗癌组合物，对照组仅添加顺铂(DDP)，空白组不添加任何药物。同实施例2所述步骤操作，处理48h后，CCK-8检测骨肉瘤细胞增殖情况。结果如图4所示，抗癌组合物可显著提高骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性，抗癌组合物+顺铂组细胞增殖率显著降低。
实施例6
本实施例采用实施例1制备的抗癌组合物对骨肉瘤PDX动物模型的抑瘤及抗转移作用进行验证。
建立人源性移植骨肉瘤裸鼠模型(即骨肉瘤PDX动物模型)，建模成功并饲养7天后，随机分为2组，实验组灌胃给药抗肿瘤组合物100mg/ml*天，对照组灌胃给药同量0.9％生理盐水，15天后过量麻醉处死。取样，观察骨肉瘤的增长情况及肺部转移情况。结果如图5所示，抗癌组合物可显著减小骨肉瘤增长，瘤体体积明显缩小，且可显著抑制肺部转移；对照组肺部转移发生率100％，且转移瘤体积大、数量多，实验组仅30％肺转移率，且已发生的肺部转移瘤体积小、数量少。此外，抗癌组合物对PDX动物的心、肝、脾、肺、肾均无毒性作用，证实抗癌组合物可在动物模型体内可显著抑制骨肉瘤增殖和转移，而其本身生物安全性高，对主要脏器无毒副作用。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (4)

1.一种抗癌组合物在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抗癌组合物由海藻寡糖、壳寡糖和岩藻寡糖按照比例为1：7：2混匀组成；所述海藻寡糖、壳寡糖和岩藻寡糖为2~10个糖单元的寡糖；
所述治疗骨肉瘤的药物能抑制骨肉瘤的增殖及转移，促进肿瘤细胞自噬，并可提高骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗癌组合物与化疗药物联合应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述化疗药物包括甲氨蝶呤、阿霉素、顺铂、氟尿嘧啶。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗癌组合物用于抑制U2OS、MG63、MNNGHOS细胞的增殖和转移。
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