CN105030798B - 一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。所述抗肿瘤的药物组合物为冻干粉针剂，按重量份计，含有葡磷酰胺10～100份，环磷酰胺0.01～5份；其制备方法包括配液，无菌过滤、灌装，真空冻干，充氮气，胶塞密封、压盖等步骤。该组合物稳定性好，纯度高，副产物低，毒副作用小，用于临床治疗胰腺癌，安全有效，具有更高的社会效益。

Description

一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法和应用，具体涉及葡磷酰胺组合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

胰腺癌是一种比较常见的恶性肿瘤，占全部恶性肿瘤的2％。胰腺有内分泌和外分泌两种细胞，来自内分泌细胞的癌叫内分泌癌，来自外分泌细胞的癌叫外分泌癌，二者恶性程度差异很大。内分泌癌临床比较少见，这种胰腺癌恶性程度不高，患者术后存活时间较长。外分泌癌多数预后效果较差，临床上90～95％的外分泌癌是导管细胞来源的胰腺癌，这种“导管胰腺癌”恶性程度极高，早期诊断率低，疗效欠佳，预后差等特点，患者确诊后一年死亡率高达95～98％。

葡磷酰胺是异磷酰胺氮芥(IPM)连接于β-D-葡萄糖形成的化合物，属于细胞毒性烷化剂，具有重要的实验和临床抗肿瘤活性。葡磷酰胺结构为：

葡磷酰胺极易溶于水和醇(≥200mg/mL)，可溶于乙腈、丙酮，但不易溶于极性较小的有机溶剂，如乙酸乙酰酯，乙酸乙酯，己烷及植物油。对热很不稳定，因此该化合物通常要在2-8℃冷藏保存。葡磷酰胺在水溶液条件下更不稳定，溶液放置24小时后效价损失超过10％，降解生成无效的副产物。葡磷酰胺是一种新型细胞毒类药物，是由异磷酰胺氮芥与β-D-葡萄糖通过糖苷键相连而成。细胞对于葡磷酰胺的摄取是由一种钠依赖性葡萄糖跨膜转运蛋白和其他可能的转运蛋白介导。对于肿瘤患者，癌细胞代谢率升高，葡萄糖跨膜转运蛋白(GLUT)高度表达，从而使葡磷酰胺具有良好选择性。葡磷酰胺在钠依赖性的葡萄糖跨膜转运蛋白SAAT1的作用下转运进入肿瘤细胞，然后在葡萄糖苷酶作用下，释放异磷酰胺氮芥而发挥抗胰腺癌的活性。

葡磷酰胺体内活性代谢物异磷酰胺氮芥(Palifosfamide)对肿瘤抑制作用是异环磷酰胺的10-30倍。比环磷酰胺抗癌活性更强；与多柔比星联合用药比单用多柔比星可使无进展生存期(PFS)由4.4个月增加至7.8个月，缓解率提高1.5倍。葡磷酰胺与环磷酰胺相比，前者吸收好，肿瘤组织浓度高，对胰腺癌细胞有更强的细胞毒活性。原因在于癌细胞要生存，需要依赖葡萄糖，而由于癌细胞消化葡萄糖所产生的能量不到普通细胞的15％，需要通过负载更多的葡萄糖转运蛋白(GLUT1)完成葡萄糖从细胞外转运到细胞内的过程。正常细胞及肿瘤细胞中葡萄糖转运体蛋白含量有很大悬殊，使得含有葡萄糖基的葡磷酰胺比环磷酰胺在葡萄糖跨膜转运蛋白高表达的癌细胞中具有更高的选择性，任何影响葡萄糖转运的因素都将影响葡磷酰胺的效应。通过正电子发射断层扫描显示大多胰腺癌患者都有氟脱氧葡萄糖增加表达，这些发现也证实葡磷酰胺被胰腺癌细胞优先摄取，产生药理学活性。不同的体外试验，包括荷瘤模型、毛细管琼脂模型，葡磷酰胺对动物和人体肿瘤细胞(包括新移植的肿瘤细胞)显示出明显的细胞毒性。

在体内试验中，包括人体肿瘤细胞移植的裸鼠，葡磷酰胺对乳腺癌、小细胞癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤及其它肿瘤细胞在抗肿瘤活性方面显剂量依赖性。鼠L1210\P-388白血病及B16型黑素瘤模型能长期生存和治疗，葡磷酰胺提高了耐环磷酰胺P-388型白血病动物的生存期。

与异环磷酰胺不同，葡磷酰胺在体外直接产生细胞毒性，这种细胞毒性能被跨膜葡萄糖转运体抑制剂(如果树根皮精、根皮素)等调节，表明葡磷酰胺也是这种转运体的底物。相应的，葡磷酰胺在体内的抗肿瘤活性取决于葡磷酰胺中β-D-葡磷酰胺异构体的浓度，葡磷酰胺衍生物β-L-葡磷酰胺(D-23380)和α-D-葡磷酰胺是没有抗肿瘤活性的。正常细胞及肿瘤细胞中葡萄糖转运体表达的不同，导致葡磷酰胺在抗肿瘤方面的选择性。

葡磷酰胺是异环磷酰胺的类似化合物，代谢产生异磷酰胺。与葡磷酰胺相比，异环磷酰胺由初级代谢产物4-羟基异环磷酰胺代谢为环磷酰胺，而开环互变异构体4-羟基异环磷酰胺自然消除会释放出有毒代谢产物丙烯醛。由于葡磷酰胺不经过4-羟基异环磷酰胺代谢，因此不会产生丙烯醛。因此，葡磷酰胺的神经毒性和致出血性也将更低。

葡磷酰胺临床最严重的不良反应是肾毒性，对大鼠进行单次和重复给药后，葡磷酰胺可诱导肾脏副作用。在1348或2697mg/kg的剂量下，分别单次静脉输注1小时或6小时，经处理大鼠的肾脏中鉴别出多个目标：近曲小管(刷状缘酶丧失、尿磷排泄增加、血管变性)、集合管(核固缩、摄入嗜酸性粒细胞、多核细胞、肥大/增生)、尿道上皮(肥大/增生)和内髓部间隙(水肿)。肾毒性是阻碍葡磷酰胺临床应用的主要原因。主要表现为肾小管酸中毒(类似于范可尼综合征)，与血清肌酐增加和肌酐清除率(CrCl)下降有关，肾损害严重者发展为肾衰竭、肾病综合。

显然葡磷酰胺在治疗肿瘤方面具有巨大的应用前景，但鉴于其仍存在严重的肾脏毒性，虽然美国、日本、德国、印度等国研发人员经历了多年的创造性工作，但目前国内外尚未有产品能够通过相关国家药品监督管理部门批准上市，尚达不到用于临床疾病治疗的技术要求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明目的是提供一种抗肿瘤的药物组合物，该组合物包括1)用于临床胰腺癌治疗高度选择性的葡萄糖偶联药物，具体为葡磷酰胺。2)具有抵抗肾毒性的肿瘤抑制药剂，具体为环磷酰胺。

本发明为胰腺癌患者提供了一种高效低毒的抗肿瘤的药物组合物，使葡磷酰胺作为优良的抗胰腺癌药物能够在临床推广应用，为胰腺癌患者带来福音。所述抗肿瘤的药物组合物具体为含有葡磷酰胺和环磷酰胺的药物组合物。葡磷酰胺与环磷酰胺均为抗肿瘤药物，葡磷酰胺比环磷酰胺具有更强的抗胰腺癌活性。一方面，发明人通过实验惊喜的发现，将葡磷酰胺与环磷酰胺合用，会产生更好的细胞毒效果，这是由于两者合用产生协同效果造成的。葡磷酰胺衍生物包括β-D-葡磷酰胺、β-L-葡磷酰胺及α-D-葡磷酰胺，其中β-L-葡磷酰胺及α-D-葡磷酰胺是没有抗肿瘤活性的，体内的抗肿瘤活性取决于葡磷酰胺中β-D-葡磷酰胺异构体的浓度，β-D-葡磷酰胺在大多数的生物样品中较稳定，但在小肠、胰腺和尿样等中不稳定，降解半衰期分别为1.1h、14.4h和15.1h。血药浓度分析显示，单独应用葡磷酰胺后血液中β-L-葡磷酰胺或α-D-葡磷酰胺浓度明显高于应用本发明所述肿瘤的药物组合物。可能是环磷酰胺能够抑制β-D-葡磷酰胺的构型转化。另一方面，环磷酰胺(CTX)做为广谱抗肿瘤药物，同时也作为治疗难治性肾病的首选药物，对于胰腺癌患者，胰腺功能本身分解糖原释放能量的作用显著减弱，如果肾功能损害严重，排泄系统处于紊乱状态，将会加速病人的病情。本发明所述药物组合物中环磷酰胺与葡磷酰胺联合应用协同抑制癌细胞同时，参考药代与药动学确定给药方案，小剂量的环磷酰胺还能够预防肾损害的发生，降低肾病综合征的发生率，提高了肾病综合征的临床完全缓解率。研究显示，本发明所述药物组合物中葡磷酰胺在相同剂量下肾毒性发生率明显降低，从而有利于临床根据患者病情提高临床剂量，增强抗癌效果，在降低毒性的作用下，呈现治疗作用的协同。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗肿瘤的药物组合物，其活性成分为葡磷酰胺和环磷酰胺。

具体地说，一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺10～100份，环磷酰胺0.01～5份。

所述抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，优选含有葡磷酰胺20～90份，环磷酰胺0.1～4份；更优选含有葡磷酰胺30～80份，环磷酰胺1～3份；最优选含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份。

优选地所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

所述抗肿瘤的药物组合物为冻干粉针剂。

所述抗肿瘤的药物组合物中：所述重量份可以是μg、mg、g、kg等医药领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。

所述抗肿瘤的药物组合物的冻干粉针剂处方为：以1000支计，葡磷酰胺300-3000g；环磷酰胺0.3-150g；注射用水1500-315000g。

优选地，所述抗肿瘤的药物组合物的冻干粉针剂处方为：以1000支计，葡磷酰胺1000g；环磷酰胺28.6g；注射用水9000g。

本发明还提供上述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按上述配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺，加入2℃～8℃的注射用水中，搅拌溶解，制成浓度为1％～20％的溶液；所述浓度是指葡磷酰胺与环磷酰胺浓度之和；

2)过滤、灌装；所述过滤优选为将所述溶液用0.22μm-0.45μm微孔滤器或微孔滤膜过滤除菌；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至-2～2℃；于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25～-20℃，真空度10～30pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到25℃～35℃，真空5～15pa、温度25～35℃干燥20小时。

优选地，所述真空冻干参数为：药品预冷至-2～0℃；于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25～-22℃，真空度10～20pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空5～10pa、温度30～35℃干燥20小时。

所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法还包括真空冻干结束后进行充氮气，胶塞密封、压盖等常规操作步骤。

本发明抗肿瘤的药物组合物用具有药效协同作用的环磷酰胺降低葡磷酰胺的肾毒性，保证最大程度将高效低毒药物应用于临床；所述抗肿瘤的药物组合物是通过低温冷冻干燥技术方法制造的，使药物水溶液低温成冰，真空升华除去水分而制成无菌冻干粉末。冻干技术参数经过科学优化，所得产品外观饱满，速溶澄清，储存期稳定，从而实现药物储存期以固态形式存在，使稳定性优于注射液。最大限度地降低了传统制造工艺带来的副产物。本发明所述抗肿瘤的药物组合物稳定性好，纯度高，副产物低，毒副作用小；具有更高的组合物纯度，避免了副产物引起的临床安全隐患。该组合物为临床治疗胰腺癌患者提供了一种更有效的首创药物，具有更高的社会效益。

本发明的优点

本发明提供的抗肿瘤的药物组合物国内外尚未成功用于临床，除了化合物葡磷酰胺本身的创新技术难度外，制备适合储运、流通，利于临床使用的剂型也是发挥本药物临床最佳疗效的关键所在。本发明所述抗肿瘤的药物组合物在疗效协同及降低肾毒性方面取得了显著的效果。本发明所制备的抗肿瘤药物组合物经国际多中心临床试验显示，在治疗胰腺癌方面疗效显著，对胰腺癌患者总体生存期延长18％，服用本发明所述药物组合物中位存活期可达146天，肿瘤抑制率可达42％。显示本发明所述药物组合物临床疗效取得了显著效果，究其原因是因为大多数胰腺癌患者都有氟脱氧葡萄糖增加表达，而葡磷酰胺是通过葡萄糖跨膜转运蛋白介导，因此葡磷酰胺优先选择性富集于胰腺癌细胞，其选择性作用于胰腺癌细胞显示出较强的靶向性。为胰腺癌患者提供了更好的治疗选择和更长的生存周期。一期、二期临床安全性研究也显示本发明所述组合物具有良好的耐受性。本发明的实施必将填补国内外市场应用空白，产生巨大的经济效益和显著的社会效益。

附图说明

图1为本发明抗肿瘤的药物组合物制备流程图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例所提及的葡磷酰胺均为β-D-葡磷酰胺。

实施例1

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺100份，环磷酰胺0.01份。

实施例2

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺3份。

实施例3

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺10份，环磷酰胺2份。

实施例4

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺10份，环磷酰胺0.01份。

实施例5

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺100份，环磷酰胺5份。

实施例6

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份。

实施例7

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺90份，环磷酰胺4份。

实施例8

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺20份，环磷酰胺0.1份。

实施例9

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺80份，环磷酰胺3份。

实施例10

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺30份，环磷酰胺1份。

实施例11

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入2℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.22μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-22℃，真空度20pa下升华，隔板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空度10pa、温度30℃干燥20小时。真空冻干结束后，充氮气，胶塞密封、压盖。

所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同实施例1-10。

实施例12

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入8℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)无菌过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.45μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至-2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25℃，真空度10pa下升华，温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到25℃，真空15pa、温度25℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖。

所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同实施例1-10。

实施例13

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，其制备方法中配液，无菌过滤、灌装，和冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖的步骤同实施例12；其中真空冻干：灌装好的药品预冷至0℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-20℃，真空度30pa下升华，温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到35℃，真空5pa、温度35℃干燥20小时。所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同实施例1-10。

实施例14

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，其配方同实施例3，其制备方法中配液，无菌过滤、灌装，和冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖的步骤同实施例12；其中真空冻干：灌装好的药品预冷至2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-22℃，真空度20pa下升华，温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空15pa、温度30℃干燥20小时。所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同实施例1-10。

实施例15

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；其制备方法中：配成的药液浓度为1％，预冷温度为0℃，升华温度为-20℃、真空度30pa，干燥温度25℃、真空度15pa；其余步骤同实施例11。

实施例16

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；其制备方法中：配成的药液浓度为10％，预冷温度为-2℃，升华温度为-25℃、真空度10pa，干燥温度35℃、真空度5pa；其余步骤同实施例11。

实施例17

本实施例提供一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；其制备方法中：配成的药液浓度为20％，预冷温度为2℃，升华温度为-22℃、真空度20pa，干燥温度30℃、真空度10pa；其余步骤同实施例11。

对比实验1

实验组样品为实施例1-6所述抗肿瘤的药物组合物，对照组1样品为葡磷酰胺(不含环磷酰胺)，对照组2样品为葡磷酰胺与环磷酰胺的组合物(二者重量比10:7)，各供试样品按实施例11方法制备成冻干粉。按以下方法进行检测，结果见表1。

复溶性检测方法：取各供试样品，每1g加10ml水静置，固体物在30秒内溶解完全，视为速溶。

将各供试样品(即按上述方法制备的冻干粉)在40℃条件下放置10天，按以下方法检测葡磷酰胺含量和有关物质。供试样品溶液的制备方法：取各供试样品，每1g，用500ml水溶解。

葡磷酰胺含量检测方法：采用高效液相色谱法。用十八烷基硅烷键合硅胶柱，14％乙腈为流动相，检测波长195nm，流速1.0ml/min，柱温25℃，进样量20ul。

有关物质检测方法：采用TLC法(薄层色谱法)。硅胶-60F254薄层板，展开剂：氯仿-甲醇-水＝70:4:6；显色剂：香草醛试剂、茚三酮试剂。

表1

上表1中“葡磷酰胺/环磷酰胺”是指葡磷酰胺与环磷酰胺重量比。

从上表1可以看出，实验组环磷酰胺对组合物中葡磷酰胺具有明显的稳定作用。

对比实验2

实验组样品为实施例15-17所述抗肿瘤的药物组合物。对照组3-7样品为葡磷酰胺与环磷酰胺的组合物(二者重量比均70:2)；对照组样品制备方法关键参数见下表2，其余步骤同实施例11。

表2

上表2中“药液浓度”是指冻干前药液中原料的浓度。

从上表2可知，本发明优选的冷冻干燥工艺能够在产品外观、水分、可见异物等方面均取得优异的效果。

临床应用实验1

受试样品1：为本发明实施例3抗肿瘤的药物组合物(葡磷酰胺与环磷酰胺重量比为10:2)，制备方法同实施例11。

受试样品2：为本发明实施例6抗肿瘤的药物组合物(葡磷酰胺与环磷酰胺重量比70:2)，制备方法同实施例11。

受试样品3：葡磷酰胺(不含环磷酰胺)。

受试样品4：注射用环磷酰胺市售药品：规格0.2g，批号：04150401，生产企业：山西普德药业股份有限公司。

1、试验方法：受试者纳入标准：年龄大于18岁，血清肌酸酐>2mg/dL，肌酐清除率﹥60mL/min的胰腺癌患者。按以上标准选取受试者240例，随机分为4组：实验组1、实验组2、对照组1、对照组2，每组60例。采取随机、开放研究。各组受试样品编号、剂量、给药方式及给药频率见下表3；直到疾病发生进展，或者发生禁止性毒性。对所有患者进行定期随访，从首次给药开始时收集不良事件，受试者死亡后进行疗效分析。

表3

1.1肌酐清除率计算方法：采用Cockcroft-Gault公式

男性：CrCL(mL/min)＝(140–年龄)(体重[kg])/(72x(血清肌酐[mg/dL]))

女性：CrCL(mL/min)＝0.85x(140–年龄)(体重[kg])/(72x(血清肌酐[mg/dL]))

1.2血清肌酐判定方法：血清肌酸酐>2mg/dL为异常升高

1.3蛋白尿测定方法：收集24小时尿液，采用磺基水杨酸法测定24小时尿蛋白含量(mg/24h)

2、考察内容：药效学、毒性

3、临床试验结果：见下表4和表5。

3.1药效结果：指标为周期持续中位数、中位存活期、肿瘤抑制率。

表4

组别	对照组1	对照组2	实验组1	实验组2
					剂量(mg/m2)	4500	1000	(4500+900)	(4500+128.6)
周期持续中位数	4	3	7	8
					中位存活期	60d	37d	105d	146d
肿瘤抑制率	19％	8％	34％	42％

临床实验结果显示，本发明抗肿瘤的药物组合物对胰腺癌患者具有显著的治疗效果，在不增加总用量的情况下，中位存活期及肿瘤抑制率优于单独使用葡磷酰胺和单独使用环磷酰胺的效果；表明本发明抗肿瘤的药物组合物具有良好的抗胰腺癌协同作用。

3.2肾毒性结果；指标为肌酐清除率、蛋白尿、肾衰竭、范可尼(Fanconi)综合征。

表5

由上表5试验结果显示，本发明抗肿瘤的药物组合物能够降低蛋白尿，恢复肌酐清除率，减少其他Fanconi综合征发生率，降低肾衰竭死亡，与单独使用葡磷酰胺或者环磷酰胺比明显降低肾毒性。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (29)

1.一种抗肿瘤的药物组合物，按重量份计，含有葡磷酰胺10～100份，环磷酰胺0.01～5份。

2.根据权利要求1所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺20～90份，环磷酰胺0.1～4份。

3.根据权利要求2所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺30～80份，环磷酰胺1～3份。

4.根据权利要求3所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份。

5.根据权利要求1-4任一项所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

6.根据权利要求1-4任一项所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为冻干粉针剂，处方为：以1000支计，葡磷酰胺300-3000g；环磷酰胺0.3-150g；注射用水1500-315000g。

7.根据权利要求5所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为冻干粉针剂，处方为：以1000支计，葡磷酰胺300-3000g；环磷酰胺0.3-150g；注射用水1500-315000g。

8.根据权利要求6所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述处方为：以1000支计，葡磷酰胺1000g；环磷酰胺28.6g；注射用水9000g。

9.根据权利要求7所述的抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述处方为：以1000支计，葡磷酰胺1000g；环磷酰胺28.6g；注射用水9000g。

10.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺100份，环磷酰胺0.01份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

11.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺3份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

12.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺10份，环磷酰胺2份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

13.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺10份，环磷酰胺0.01份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

14.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺100份，环磷酰胺5份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

15.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

16.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺90份，环磷酰胺4份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

17.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺20份，环磷酰胺0.1份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

18.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺80份，环磷酰胺3份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

19.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺30份，环磷酰胺1份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺。

20.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计，含有葡磷酰胺10份，环磷酰胺2份；所述葡磷酰胺为β-D-葡磷酰胺；

所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入8℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)无菌过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.45μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-22℃，真空度20Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空度15Pa、温度30℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖。

21.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；

所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入2℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为1％的溶液；

2)过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.22μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至0℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-20℃，真空度30Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到25℃，真空度15Pa、温度25℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖。

22.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；

所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入2℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.22μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至-2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25℃，真空度10Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到35℃，真空度5Pa、温度35℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖。

23.根据权利要求1所述抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，按重量份计含有葡磷酰胺70份，环磷酰胺2份；

所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入2℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为20％的溶液；

2)过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.22μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-22℃，真空度20Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空度10Pa、温度30℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖。

24.权利要求1-19任一项所述抗肿瘤的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺，加入2℃～8℃的注射用水中，搅拌溶解，制成浓度为1％～20％的溶液；

2)过滤、灌装；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至-2～2℃；于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25～-20℃，真空度10～30Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到25℃～35℃，真空度5～15Pa、温度25～35℃干燥20小时。

25.根据权利要求24所述的制备方法，其特征在于，所述过滤为将所述溶液用0.22μm-0.45μm微孔滤器或微孔滤膜过滤除菌。

26.根据权利要求24或25所述的制备方法，其特征在于，所述真空冻干参数为：灌装好的药品预冷至-2～0℃；于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25～-22℃，真空度10～20Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空度5～10Pa、温度30～35℃干燥20小时。

27.一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入2℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.22μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-22℃，真空度20Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到30℃，真空度10Pa、温度30℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖；

所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同权利要求10-19任一项。

28.一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入8℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)无菌过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.45μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至-2℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-25℃，真空度10Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到25℃，真空度15Pa、温度25℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖；

所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同权利要求10-19任一项。

29.一种抗肿瘤的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配液：按配比称取葡磷酰胺、环磷酰胺加入8℃的注射用水中，搅拌溶解，加注射用水至最终体积，制成浓度为10％的溶液；

2)无菌过滤、灌装：在洁净室内将所得溶液用0.45μm微孔滤器过滤除菌，灌装于西林瓶中；盖上无菌胶塞；

3)真空冻干：灌装好的药品预冷至0℃，于-45℃，保持冷冻5小时；首次干燥：1h温度升至-20℃，真空度30Pa下升华，搁板温度达到20℃，保持4小时；二次干燥：30min搁板温度升到35℃，真空度5Pa、温度35℃干燥20小时；

4)冻干结束，充氮气，胶塞密封、压盖；

所述抗肿瘤的药物组合物的原料配比同权利要求10-19任一项。