CN112449997B - 杀虫剂对食用菌安全性的测定方法 - Google Patents

Abstract

杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，包括以下步骤：步骤1，准备大于等于4份相同的干物料；步骤2，将干物料制备为湿物料；步骤3，对湿物料进行灭菌；步骤4，将食用菌菌株接种在湿物料上；步骤5，对接种的食用菌进行培养；步骤6，对各个湿物料上的食用菌菌株进行药害评价。本发明准确的评价不同剂量杀虫剂的使用对食用菌安全性的影响，避免了在食用菌生产过程中受到蝇蛆等害虫的侵染，同时保证了食用菌的正常生产。

Description

杀虫剂对食用菌安全性的测定方法

技术领域

本发明涉及杀虫剂安全性的测定领域，更具体的说，特别涉及一种杀虫剂对食用菌安全性的测定方法。

背景技术

在食用菌生产过程中，因栽培基质中容易受到蝇蛆等害虫的侵染，常常需要使用灭蝇胺等杀虫剂来灭杀害虫，保护食用菌的正常生产。但是杀虫剂过量容易导致对食用菌的本身的伤害，产生药害。因此，评价不同剂量杀虫剂的使用对食用菌安全性非常重要，是防治食用菌害虫药剂登记的重要依据。

发明内容

(一)发明目的：为解决上述现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种杀虫剂对食用菌安全性的测定方法。

(二)技术方案：为了解决上述技术问题，本技术方案提供杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，包括以下步骤：

步骤1，准备大于等于4份相同的干物料；

步骤2，将干物料制备为湿物料；

步骤3，对湿物料进行灭菌；

步骤4，将食用菌菌株接种在湿物料上；

步骤5，对接种的食用菌进行培养；

步骤6，对各个湿物料上的食用菌菌株进行药害评价。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤1中的干物料每份为1500～3500克，所述干物料成分包括棉籽皮、麦麸、石膏和石灰。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述干物料中棉籽皮为85～90％、麦麸为(8～12％)、石膏为(0.8～1.2％)、石灰为(0.8～1.2％)。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤2包括以下步骤，

步骤2.1：准备所述干物料份数减1份份数的不同浓度的杀虫剂溶液；

步骤2.2：将上述杀虫剂溶液分别加入不同的干物料内，并充分混合，形成所述干物料份数减1份数量的处理，另外余下未添加杀虫剂溶液的干物料为空白对照处理；

步骤2.3：在上述处理中各自加入蒸馏水，并搅拌均匀。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤2.3中各处理中加入蒸馏水的数量为3.3～4升，使料水比为1:1.2～1:1.8。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤3包括以下步骤，

步骤3.1：将所述干物料份数减1份数量的处理，以及空白对照处理分别装入玻璃瓶内；

步骤3.2：用直径为1～3厘米的木棒在瓶内物料中央打一个深至瓶底的倒圆锥形圆孔；

步骤3.3：将瓶口分别进行密封；

步骤3.4：通过高压湿热对加入湿物料的玻璃瓶进行灭菌。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤3.1中，每个玻璃瓶装入的湿物料为300～500克，每处理湿物料装10～20瓶。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤3.3包括，将耐高温封口膜覆盖在瓶口后，通过线绳捆绑在瓶口，使瓶口密封。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤3.4中，灭菌温度在120～130℃，最优温度为121℃，压强范围在103-105千帕，灭菌时长为2～3小时。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤4包括以下步骤，

步骤4.1：将接种超净台进行灭菌；

步骤4.2：将菌种进行试管斜面活化；

步骤4.3：将经过步骤3的物料瓶在经过灭菌的接种超净台内接种食用菌菌株。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤4.1中，接种超净台经过紫外灯灭30分钟以上灭菌。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，步骤4.2具体包括，试管斜面活化需要在接种前进行，具体说将菌种接入到试管内PDA培养基上，放入温度37℃霉菌培养箱内进行一次培养，以提高接种的食用菌成活率。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，步骤4.3具体包括，接种菌株时在经过灭菌的接种超净台内将试管内菌种切成0.5～2平方厘米大小的菌块，然后将菌块接到灭菌后的物料瓶内物料锥形孔中，每瓶1块；接种位置为瓶内物料上统一位置。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，接种的食用菌菌株为目前市场上常见的具代表性且易繁殖的品种，可以是平菇等。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤5还包括，接菌后用原封口膜和橡皮筋将物料瓶密封，按顺序放于温度23～25℃、相对湿度60～70％、避光条件下的人工气候箱内培养。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤6包括以下步骤，

步骤6.1：记录接菌后菌丝增长数据；

步骤6.2：计算各处理菌丝在接菌后不同时间的增长速率、生长速率抑制率，统计与空白对照统计相比的差异显著性；

步骤6.3：统计分析采用最小显著性法(LSD法)进行两两比较，观察各个时期菌丝颜色、状态等性状差异并对各个时期进行拍照记录；

步骤6.4：对生长停滞的药害程度进行描述、评价。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤6.1包括，接菌后第8～12天，记录菌丝萌发边缘，每隔固定时间分别测量记录各处理的菌丝在瓶壁增长距离，并记录菌丝满瓶时间。

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤6.2中生长速率、生长速率抑制率、满瓶抑制率计算方式为，

生长速率＝食用菌菌丝在瓶壁新发展长度(cm)/接菌时间(d)

所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其中，所述步骤6.4使用生长速率抑制率法：施药后三周(21d)内生长速率抑制率10％以内为安全；施药后21d内生长速率抑制率11～20％为轻微药害；施药后21d内生长速率抑制率21～50％为中度药害；施药后21d内生长速率抑制率50％以上为严重药害。

(三)有益效果：本发明提供的杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，准确的评价不同剂量杀虫剂的使用对食用菌安全性的影响，避免了在食用菌生产过程中受到蝇蛆等害虫的侵染，同时保证了食用菌的正常生产。

附图说明

图1是本发明杀虫剂对食用菌安全性的测定方法步骤示意图；

图2是本发明杀虫剂对食用菌安全性的测定方法一个优选实施例中各个时期食用菌图片。

具体实施方式

下面结合优选的实施例对本发明做进一步详细说明，在以下的描述中阐述了更多的细节以便于充分理解本发明，但是，本发明显然能够以多种不同于此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下根据实际应用情况作类似推广、演绎，因此不应以此具体实施例的内容限制本发明的保护范围。

附图是本发明的实施例的示意图，需要注意的是，此附图仅作为示例，并非是按照等比例的条件绘制的，并且不应该以此作为对本发明的实际要求保护范围构成限制。

下面结合本发明提供的一种杀虫剂对食用菌安全性的测定方法一个优选实施例进行详细说明。

1、准备若干份相同的干物料，具体份数可以根据杀虫剂测定浓度而确定，这里以准备4份为例。

每份干物料为1500克～3500克，其成分为棉籽皮(85～90％)、麦麸(8～12％)、石膏(0.8～1.2％)和石灰(0.8～1.2％)。

2、将干物料制备为湿物料。

其中步骤一中的3份干物料分别加入不同浓度的杀虫剂溶液，另外1份加入与杀虫剂溶液升数相同的蒸馏水，作为空白对照，并将其各自充分混合均匀。其中，杀虫剂溶液浓度根据具体杀虫剂的使用浓度来确定，可以是包括大于使用浓度一份，等于使用浓度一份，小于使用浓度一份，这里不做具体限制。

然后将分别加入杀虫剂溶液的三份干物料、未加入杀虫剂溶液的一份干物料，分别加入蒸馏水，加入蒸馏水的数量为3.3～4升蒸馏水，使得到的4份处理的料水比为1:1.2～1:1.8，并搅拌均匀。

3、对湿物料进行灭菌。将步骤2中得到的4份加入蒸馏水的处理(湿物料)分别装入规格为高10～15cm、口径5～10cm的玻璃瓶，其中每瓶装入300克～500克湿物料，每处理湿物料可以装入10～20瓶，需要说明的是玻璃瓶为透明瓶体，方便菌丝的观察；然后用直径为1～3厘米的木棒在瓶内湿物料中央打一个深至瓶底的倒圆锥形圆孔，以满足接种菌丝生长的需要，并便于观察评价；将瓶口使用耐高温封口膜和线绳捆绑密封瓶口；通过高压湿热对加入湿物料的玻璃瓶进行灭菌，其中，灭菌时长为2～3小时；灭菌温度在120～130℃，优选温度在121～125℃，最优温度为121℃；压强范围在103～105千帕。

4、将食用菌菌株接种在湿物料上。将步骤3中灭菌后的物料瓶在经过紫外灯灭菌30分钟以上的接种超净台内接食用菌菌株，其中，菌种选用目前市场上常见的代表性且易繁殖的品种，例如平菇等，这里不做具体限制；接菌前需要利用PDA培养基将菌种经过一次试管斜面活化，培养方法具体包括：将菌种接入到试管内PDA培养基上，放入温度37℃霉菌培养箱内进行培养，以提高接种的食用菌成活率；接菌时在经过灭菌的接种超净台内将试管内菌种切成0.5～2平方厘米大小的菌块，然后将接到灭菌后的物料瓶内物料锥形孔中，每瓶1块，为便于培养过程中观察和测量，接种位置可以统一位于瓶内物料上沿瓶肩部，接种位置也可以是瓶内物料上其它统一位置，这里不做具体限制。

5、对接种的食用菌进行培养。具体说，接菌后用原封口膜和橡皮筋密封，按编号顺序放于温度23～25℃、相对湿度60～70％、避光条件下的人工气候箱内培养。

6、对各个湿物料上的食用菌菌株进行药害评价。

记录接菌后菌丝增长数据。接菌后第8～12天，记录菌丝萌发边缘，可以使用记号笔在菌瓶外壁沿菌丝萌发边缘画一条线，如图2所示(图2中a、b、c分别代表不同药剂浓度处理水平，CK代表空白对照处理)；此后每隔固定时间段用直尺分别测量记录菌丝在瓶壁增长距离，一般时间间隔为4～6天，并记录菌丝满瓶时间。

计算各处理菌丝在接菌后不同时间的增长速率、生长速率抑制率，统计与空白对照统计相比的差异显著性。

统计分析采用最小显著性法(LSD法)进行两两比较，具体说，分别将图2中a、b、c处理与空白处理(ck处理)进行两两比较，随时观察各个时期菌丝颜色、状态等性状差异，并对各个时期进行拍照记录。

对生长停滞的药害程度进行描述、评价。可以通过生长速率抑制率法进行判断：施药后三周(21天)内生长速率抑制率10％以内为安全；施药后21天内生长速率抑制率11～20％为轻微药害；施药后21天内生长速率抑制率21～50％为中度药害；施药后21天内生长速率抑制率50％以上为严重药害。

也可以通过目测法进行判断：根据食用菌菌丝受害症状，0表示无明显药害，11～30表示轻微药害，31～50表示中度药害，51～100表示严重药害。

其中，生长速率、生长速率抑制率、满瓶抑制率计算公式如下：

生长速率＝食用菌菌丝在瓶壁新发展长度(cm)/接菌时间(d)

杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，准确的评价不同剂量杀虫剂的使用对食用菌安全性的影响，避免了在食用菌生产过程中受到蝇蛆等害虫的侵染，同时保证了食用菌的正常生产。

以上内容是对本发明创造的优选的实施例的说明，可以帮助本领域技术人员更充分地理解本发明创造的技术方案。但是，这些实施例仅仅是举例说明，不能认定本发明创造的具体实施方式仅限于这些实施例的说明。对本发明创造所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干简单推演和变换，都应当视为属于本发明创造的保护范围。

Claims (4)

1.杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，准备大于等于4份相同的干物料；

步骤2，将干物料制备为湿物料；

步骤3，对湿物料进行灭菌；

步骤4，将食用菌菌株接种在湿物料上；

步骤5，对接种的食用菌进行培养；

步骤6，对各个湿物料上的食用菌菌株进行药害评价；

所述步骤1中的干物料每份为1500~3500克，所述干物料由棉籽皮、麦麸、石膏和石灰组成；

所述步骤2包括以下步骤，

步骤2.1：准备所述干物料份数减1份份数的不同浓度的杀虫剂溶液；

步骤2.2：将上述杀虫剂溶液分别加入不同的干物料内，并充分混合，形成所述干物料份数减1份数量的处理，另外余下未添加杀虫剂溶液的干物料为空白对照处理；

步骤2.3：在上述处理中各自加入蒸馏水，并搅拌均匀；

所述步骤3包括以下步骤，

步骤3.1：将所述干物料份数减1份数量的处理，以及空白对照处理分别装入玻璃瓶内；

步骤3.2：用直径为1~3厘米的木棒在瓶内物料中央打一个深至瓶底的倒圆锥形圆孔；

步骤3.3：将瓶口分别进行密封；

步骤3.4：通过高压湿热对加入湿物料的玻璃瓶进行灭菌；

所述步骤4包括以下步骤，

步骤4.1：将接种超净台进行灭菌；

步骤4.2：将菌种进行试管斜面活化；

步骤4.3：将经过步骤3的物料瓶在经过灭菌的接种超净台内接种食用菌菌株；

步骤4.3具体包括，接种菌株时在经过灭菌的接种超净台内将试管内菌种切成0.5~2平方厘米大小的菌块，然后将菌块接到灭菌后的物料瓶内物料锥形孔中，每瓶1块；接种位置为瓶内物料上统一位置；

所述步骤6包括以下步骤，

步骤6.1：记录接菌后菌丝增长数据；

步骤6.2：计算各处理菌丝在接菌后不同时间的增长速率、生长速率抑制率，统计与空白对照统计相比的差异显著性；

步骤6.3：统计分析采用最小显著性法进行两两比较，观察各个时期菌丝颜色、状态性状差异并对各个时期进行拍照记录；

步骤6.4：对生长停滞的药害程度进行描述、评价。

2.根据权利要求1所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其特征在于，所述步骤2.3中各处理中加入蒸馏水的数量为3.3~4升，使料水比为1:1.2~1:1.8。

3.根据权利要求1所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其特征在于，步骤4.2具体包括，试管斜面活化需要在接种前进行，以提高接种的食用菌成活率。

4.根据权利要求1所述杀虫剂对食用菌安全性的测定方法，其特征在于，所述步骤6.1包括，接菌后第8~12天，记录菌丝萌发边缘，每隔固定时间分别测量记录各处理的菌丝在瓶壁增长距离，并记录菌丝满瓶时间。

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