CN101822172A - 一种金针菇出菇育种方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金针菇出菇育种方法，使用该方法选育金针菇菌株具有选育速度快、周期短、能耗少、效率高、遗传稳定、可控性强等特点。

Description

一种金针菇出菇育种方法

技术领域：

本发明属于食用菌育种领域，具体的说涉及一种用试管出菇育种方法选育金针菇菌种的过程。

背景技术：

金针菇是我国工厂化生产发展最快的食用菌种类。几十年来，为了跟上产业发展的要求，国内同行一直致力于金针菇新品种的选育。品种选育必然需要进行栽培出菇试验，以确定其子实体性状的优劣，进而选择优质的菌种。其中最常规的栽培出菇方法就是工厂化瓶栽和传统袋料栽培。然而，这两种方法的缺点在于，对于能源的消耗量非常大，而且人力方面的需求也很大，另外也比较容易造成不同菌株孢子间的相互附着，造成菌种遗传表现的不稳定。这些缺点会导致资源方面的浪费，及研究经费的约束，大大降低了育种效率。所以，我们亟需寻找金针菇菌种选育中栽培出菇的新方法。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种金针菇试管出菇育种方法，应用于金针菇优秀新菌种的选育中。

本发明的金针菇试管出菇育种方法，包括以下步骤：

(1)制备培养基及培养料；

(2)培养料装填：将培养料填入试管，压紧，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧；

(3)金针菇菌种的制备：将要选育的金针菇菌种，由母种转接为原种，原种再转接为栽培种；

(4)菌种接入：在超净工作台上将金针菇栽培种接入试管中培养料上，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧，贴上标签；

(5)搔菌：菌丝长满试管时，将培养基表面的栽培种及老化菌丝挖去；

(6)出菇、采收；筛选优质品种。

所述的试管为30×250mm的试管，玻璃试管为佳(购自上海沪华玻璃仪器有限公司)。所述的透气性薄膜是16×16cm的封口膜(购自上海鼎国生物技术有限公司)。

在这一过程中还可以做生长速度的测量：菌丝生长环境下，菌种接入7~10天后，在试管上菌丝生长处划一条线，再经过7~10天，划第二条线，测量两条线间的距离，除以天数即可得到日平均菌丝生长速度；按实验需要可以继续划线测量速度，得到不同时间段的生长速度。

金针菇子实体特征是：1.相对其它食用菌子实体，例如香菇，金针菇子实体菌柄细长，菌柄直径约为1~3毫米，长度为10~20厘米；2.金针菇子实体菌盖较小，菌盖直径约为10~20毫米；3.金针菇子实体颜色分为白色和黄色，表现为不同部位、不同层次的颜色差别。4.金针菇在子实体成熟后产生孢子，孢子弹射容易造成菌株间相互污染，从而破坏遗传稳定；如果用试管进行栽培，则可以避免这一污染，有助于遗传稳定。所以，金针菇子实体的尺寸与30×250mm玻璃试管较为合适，利用试管出菇是非常适合于考察金针菇子实体性状的栽培方法。

试管出菇栽培在金针菇菌种选育中有以下重要作用：1.节约能源消耗，节省人力；2.栽培周期短，提高育种效率；3.稳定遗传性状；4.实验操作可控性强。目前还未见将试管栽培出菇的方法应用到金针菇的选育研究。

具体方法步骤为：

(1)培养基与培养料制备：按育种需要制备培养基与培养料；

培养基为PDA培养基。配方：去皮马铃薯200g煮汁，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7。置于15×150mm小试管中，管口用硅胶塞塞住。PDA培养基采用高压灭菌，灭菌温度为121℃，保持30分钟。

栽培种培养料配方：木屑30％，玉米芯20％，棉籽壳20％，麸皮15％，米糠15％，含水量61％～62％。初始pH6.5。木屑一般使用阔叶树木屑，其它原料必须保持新鲜、干燥，无虫蛀和霉变现象，颗粒度符合设备和工艺要求。原料保存过程中应通风换气，保持储藏环境干燥。原料混合时，按配方要求准确定量，使物料充分搅拌均匀，加水至含水量达到61％～62％。根据季节变化调整搅拌时间，防止混合料酸败。培养料在装填后立即进行灭菌处理，一般采用高压灭菌。灭菌时间为料的中心温度必须达到121℃，并保持120分钟，必须彻底杀灭培养料中的所有微生物。灭菌后冷却至管内温度25℃以下，方可接种。

(2)培养料装填：将制备好的培养料填入试管，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧；

使用30×250mm玻璃试管，要求装料紧实度均匀，料面距离试管底部约8~10厘米长，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧。

(3)金针菇菌种的制备：将要选育的金针菇菌种，由母种转接为原种，原种再转接为栽培种；

菌种均转接于灭过菌的斜面上，选用15×150mm试管，试管口用硅胶塞塞住。培养基为PDA培养基。

(4)菌种接入：在超净工作台上将金针菇栽培种接入试管中培养料上，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧，贴上标签；

接种时按无菌操作程序进行。将经过灭菌的30×250mm试管放进接种室，超净工作台上，紫外灭菌20min，然后将菌种带入接种室。先将的试管口移向酒精灯火焰上，去掉皮筋和透气性薄膜，转动试管口，使试管口的周围都得到火焰灭菌。再靠近酒精灯火焰，去掉15×150mm试管口的硅胶塞，用镊子或接种勺取菌种快，接到30×250mm试管培养料上。接种量要求盖满培养料表面至瓶口，这样能使菌丝生长均匀，并能有效防止杂菌污染。试管口盖上透气性薄膜，箍上皮筋，贴上标签，送进培养室培养。培养室温度控制在20℃～22℃，湿度维持在60％～70％。

(5)生长速度的测量：菌丝生长环境下，菌种接入7~10天后，在试管上菌丝生长处划一条线，再经过7~10天，划第二条线，测量两条线间的距离，除以天数即可得到日平均菌丝生长速度；按实验需要可以继续划线测量速度，得到不同时间段的生长速度。

(6)搔菌：待菌丝长满试管中的培养料后，去掉试管口透气性薄膜，使用合适的搔菌工具，去掉表面接种块及老化菌丝并使出菇表面平整，向瓶中注入1~2毫升水。催蕾控制温度为13℃～15℃，湿度为90％～95％，直到形成鱼籽般的菇蕾。

(7)出菇栽培：将试管至于金针菇出菇的适宜环境下出菇，采收及记录，以便筛选优质品种。

所述的适宜环境为温度控制为4℃～8℃，湿度为90％以上，CO₂浓度为3000～3500ppm。

子实体成熟时采收，并拍照。记录子实体颜色、菌柄长度、直径、菌盖直径及出菇期、栽培周期等数据。按照性状筛选优良菌株。

运用本发明的方法选育出的金针菇菌种具有选育速度快、周期短、能耗少、效率高、遗传稳定、可控性强等特点。

实施例一：

菌株F3为中国农业微生物菌种保藏中心上海食用菌分中心保藏。(保藏号为4150)

选用F3菌株，分别进行工厂化栽培出菇和试管栽培出菇。

从培养基和培养料的制备到菌种制备，以及菌丝培养和出菇栽培，条件步骤相同。不同点在于：工厂化栽培出菇选用的是1100mL耐高温塑料瓶，装料至瓶口2cm左右，约800g，中间打孔至瓶底，接种时使用的是自动接种机接种；搔菌后去掉瓶盖，子实体在瓶口上方生长；试管栽培出菇选用的是30×250mm玻璃试管，料面距离试管底部约8~10厘米长，用透气性薄膜包上试管口；接种使用手工接种；搔菌后去掉透气性薄膜，子实体还在试管中生长。

然后在菌丝生长速度、子实体外观、栽培周期、抗逆性等方面进行观察记录，评价其菌种特性。

金针菇试管栽培出菇与传统工厂化金针菇栽培出菇方法的比较：

选育方法	传统栽培出菇方法	试管栽培出菇方法
			代表菌种	F3	F3
栽培工具	1100mL塑料瓶	30×250mm玻璃试管
			每瓶/试管培养料重量(g)	800	12
所需栽培空间比	10	1
			瓶/试管能见度(菌丝观察测量时)	不透明	透明
密封材料	塑料瓶盖	透气性薄膜
			出菇位置	瓶口上方	试管中

选育方法	传统栽培出菇方法	试管栽培出菇方法
			栽培周期(d)	45	42
遗传性状稳定性	一般	好

Claims (1)

1.一种金针菇出菇育种方法，包括以下步骤：

(1)制备培养基及培养料；

(2)培养料装填：将培养料填入试管，压紧，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧；

(3)金针菇菌种的制备：将要选育的金针菇菌种，由母种转接为原种，原种再转接为栽培种；

(4)菌种接入：在超净工作台上将金针菇栽培种接入试管中培养料上，用透气性薄膜包上试管口，皮筋箍紧，贴上标签；

(5)搔菌：菌丝长满试管时，将培养基表面的栽培种及老化菌丝挖去；

(6)出菇、采收；筛选优质品种。