CN112362768A - 利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法 - Google Patents

利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法，包括：A、配制不同浓度的Berol 185标准品溶液，进行液相色谱串联质谱检测；并根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出定量离子；B、分别提取不同浓度标准品溶液的定量离子峰的峰面积，绘制峰面积‑浓度标准曲线；C、对样品进行预处理，然后采用A中的方法进行液相色谱串联质谱检测；D、根据样品的检测结果，对照标准曲线，获得样品中Berol 185的浓度。本方法样品前处理简单，进样快，可实现对Berol 185含量进行简单、快速、准确分析的目的，且该方法灵敏度好，回收率高，精密度和重现性好。

Description

利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法
技术领域
本发明涉及生物制品检测领域，具体地说，涉及一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法。
背景技术
Berol 185，化学名C10-16脂肪醇聚氧乙烯聚氧丙烯醚，分子式为R-O-(C2H4O)n-(C3H6O)m-H：R＝CnH2n+1(n＝10-16)，是一种亲水性非离子表面活性剂，无紫外吸收，无荧光性，澄清液体，在1％水中的pH范围为5-7，溶于水、异丙醇、甲醇、乙醇。
一方面，Berol 185在百日咳疫苗生产过程中，加入该表面活性剂后内毒素含量的控制上效果显著；另一方面，Berol 185对水生生物有毒。因此，建立一种能快速、准确、灵敏且可靠地检测出疫苗中Berol 185残留量对于疫苗的安全生产尤为重要。液质联用技术是以高效液相色谱为分离手段，以质谱为鉴定工具的一种分离分析技术。目前，未见将LC-MS/MS技术应用于Berol 185含量分析或检测方面的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法，包括以下步骤：
A、配制不同浓度的Berol 185标准品溶液，进行液相色谱串联质谱检测；并根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出定量离子；
根据质谱图中的出峰位置确定保留时间(RT)，不同浓度标准品溶液的RT值相同；
B、分别提取不同浓度标准品溶液的定量离子峰并记录峰面积；以标准品溶液的浓度作为横坐标，以定量离子对应的峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线；
C、对待测样品进行预处理，然后采用与步骤A相同的方法进行液相色谱串联质谱检测；
D、根据待测样品的检测结果，对照标准曲线，获得待测样品中Berol 185的浓度，从而实现对样品中Berol 185的定量检测。
前述的方法，步骤A中用甲醇配制不同浓度的Berol 185标准品溶液。
前述的方法，步骤C对待测样品进行预处理的方法包括：将待测样品与甲醇按体积比1∶2-1∶9混合，离心后取上清液进行液相色谱串联质谱检测。
优选地，液相色谱采用Bio C18反向色谱柱(GL Science Bio C18色谱柱，100×2.1mm，1.7μm)；流动相A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；流速为0.25-0.35ml/min；柱温为25-35℃；进样量优选为10μL。
采用梯度洗脱：0.00-1.00min 5％B(其余组分为流动相A)，2.01-5.00min 40％B(其余组分为流动相A)，5.01-7.00min 99％B(其余组分为流动相A)，7.01-9.00min99％B(其余组分为流动相A)，9.01-9.10min 40％B(其余组分为流动相A)，9.11-15.00min 5％B(其余组分为流动相A)。
优选地，质谱检测条件如下：
利用三重四级杆质谱系统进行质谱检测；ESI电离源；正离子检测模式；雾化气流量：2.5-3L/min；接口温度：250-350℃；DL温度：200-280；加热块温度：350-450℃。
本发明中，Berol 185标准品在质谱中所产生的检测信号的母离子具有630.05(M+NH4)的质荷比，子离子包含质荷比为89.10、133.10和613.40的子离子。其中，母离子630.05和子离子89.10可作为定量离子对，母离子630.05和子离子613.40、子离子133.10可作为两组定性离子对。
前述的方法，样品中Berol 185的线性检测范围为5-120ppb，检出限为1ppb。
本发明中，所述样品包括但不限于生物制品，优选疫苗产品，更优选含有百日咳杆菌抗原的疫苗。
第二方面，本发明提供上述方法在生物制品(特别是含有百日咳杆菌抗原的疫苗产品)质量控制中的应用。
本发明中所述含有百日咳杆菌抗原的疫苗是指疫苗组分中含有丝状血凝素(FHA)、百日咳毒素(PT)任意一种或其组合。
本发明首次建立一种利用液质联用仪分析Berol 185的方法。Berol 185为聚合物，分子结构相对复杂，分子量较大，且极性较低，利用一般的检测方法很难实现微量Berol185的定量检测。本发明通过系统研究和大量实验验证，建立了一种可以检测样品中Berol185含量的方法。该方法至少具有以下优点：
(一)液质联用兼具色谱的高分离度和色谱的高专属性、高灵敏度的特点，进而实现快速、准确地对样品Berol 185定量测试的研究；
(二)前处理方法简单，便于操作，从而实现简单、快速对样品中Berol 185含量进行分析；
(三)本发明使用的提取试剂为甲醇，成本低、污染小，毒性小；
(四)本发明具有精密度好，回收率高，重现性好的特点，检出限可达1ppb。
附图说明
图1a～图1c为本发明较佳实施例中样品中Berol 185液质联用测定质谱图；其中，图1a：空白样品质谱图；图1b：空白中加入Berol 185标准品质谱图；图1c：实测样品质谱图。
图2为本发明较佳实施例中实测样品质谱图及峰值最高点提取离子谱图。
图3a～图3c为本发明较佳实施例中Berol 185标准曲线。
具体实施方式
本发明提供一种Berol 185非离子表面活性剂的液质联用检测方法。具体步骤包括：
1、含Berol 185的待测物样品预处理，取待测样品(如百日咳疫苗)加入甲醇进行蛋白沉淀，待测样品与甲醇的体积比为1∶4，离心后取上清液为检测样品。
2、色谱分离
色谱柱为Bio C18反向色谱柱；流动相A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；流速：0.3ml/min；柱温箱温度35℃；色谱梯度洗脱条件为：0.00-1.00min 5％B，2.01min-5.00min 40％B，5.01-7.00min 99％B，7.01-9.00min 99％B，9.01-9.10min 40％B，9.11-15.00min 5％B，其余组分均为A；进样量为10μL。
3、质谱检测
ESI电离源；正离子检测模式；雾化气流量：2.5-3L/min；接口温度：250-350℃；DL温度：200-280℃；加热块温度：350-450℃；定量离子：母离子630.05和子离子89.10，CE：-30.0V，定性离子：母离子630.05和子离子613.45，CE：-18.0V，母离子630.05和子离子133.10，CE：-26.0V。
4、标准曲线的绘制
分别配制Berol 185不同浓度的标准溶液，采用上述的色谱和质谱条件对不同浓度的标准溶液进行测定。具体如下：
量取20mg Berol 185于10ml容量瓶中，加入10ml甲醇定容，涡旋待样品充分溶解后，得浓度为2000ppm的一级标准溶液，取50μL一级标准液于100ml容量瓶中，加入甲醇定容至100ml，得到二级标准溶液1ppm；分别取二级标准液50、100、200、400、600、800、1000、1200μL二级标准液于10ml容量瓶中，用甲醇分别定容至10ml，得到5、10、20、40、60、80、100、120ppb的系列标准液，再分别取上述标准液1ml于1.5ml进样瓶中，采用上述的色谱和质谱条件对不同浓度的标准液进行测定，分别提取不同浓度标准液的定量离子峰，并记录峰面积，绘制峰面积-浓度标准曲线；根据定量离子对应的提取离子峰面积与不同标准溶液浓度进行回归分析，得到线性方程：y＝11579.8x+47832.2，R2＝0.9986953；其中，x为Berol 185浓度(ppb)，y为提取离子峰面积。
5、回收率考察。
6、精密度考察。
7、待测样品检测
取待测样品2.0ml于15ml离心管中，再加入8.0ml甲醇，涡旋30s后，取1.0ml混合液于1.5ml离心管中，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中，采取上述色谱和质谱条件对处理后的样品进行测定；通过标准曲线所得方程即可计算出目标物的浓度。
本发明所用液质联用检测系统为超高效液相色谱串联三重四级杆质谱。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。实施例1利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法
1、分析仪器与试药
分析仪器：SHIMADZU-8050型三重四级杆质谱仪，配ESI电喷雾离子源，分析软件为Labsolutions 5.93数据处理系统；岛津LC20AD XR高效液相色谱仪，搭载岛津Nexera X2自动进样器；色谱柱为GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)。
实验试剂如表1所示：
表1
Figure BDA0002740513460000041
注：NA表示不适用。
2、实验方法与结果
2.1含Berol 185样品的预处理
取待测样品2.0ml于15ml离心管中，再加入8.0ml甲醇，涡旋30s后，取1.0ml混合液于1.5ml离心管中，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中，上样分析。
2.2色谱分离
色谱柱；GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)；流动相：A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；B为100％甲醇；流速为0.3ml/min；柱温箱温度35℃；色谱梯度洗脱条件为：0.00-1.00min 5％B,2.01min-5.00min 40％B,5.01-7.00min 99％B,7.01-9.00min 99％B,9.01-9.10min 40％B,9.11-15.00min 5％B；其余组分均为A；进样量为10μL。
2.3质谱检测
质谱条件：ESI电离源，正离子检测模式，雾化气流量：3L/min，接口温度：300℃；DL温度：250℃，加热块温度：400℃，离子通道如表2所示：
表2
Figure BDA0002740513460000051
2.4标准曲线的建立
量取Berol 185(批号：1576960)标准品20mg于10ml容量瓶中，加入10ml甲醇定容，涡旋待样品充分溶解后，得浓度为2000ppm的一级标准溶液，取50μL一级标准液于100ml容量瓶中，加入甲醇定容至100ml，得到二级标准溶液1ppm；分别取二级标准液50、100、200、400、600、800、1000、1200μL二级标准液于10ml容量瓶中，用甲醇分别定容至10ml，得到5、10、20、40、60、80、100、120ppb的系列标准液，再分别取上述标准液1ml于1.5ml进样瓶中，采用上述的色谱和质谱条件对不同浓度的标准液进行测定，分别提取不同浓度的定量离子峰，并记录峰面积，绘制峰面积-浓度标准曲线；根据定量离子对应的提取离子峰面积与不同待测物浓度进行回归分析(表3)，得到线性方程：y＝31175.8x+348341，R2＝0.9951452；其中，x为Berol 185浓度(ppb)，y为提取离子峰面积。
本方法测得Berol 185含量的最低限值为1ppb，Berol 185的线性检测范围为5-120ppb。
表3
样品名称 保留时间(min) 峰面积 浓度ppb
S1 9.378 488,806 4.506
S2 9.384 664,491 10.141
S3 9.388 917,781 18.265
S4 9.39 1,511,772 37.318
S5 9.39 2,349,253 64.182
S6 9.383 2,977,844 84.344
S7 9.394 3,473,185 100.233
S8 9.384 3,965,054 116.01
2.5准确度和回收率考察
取上述二级标准液0(对照)，200，400，600μL并分别加入样品(百日咳疫苗FHA精制液(20200520))2000μL，再分别用甲醇定容至10ml，涡旋30s后，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对样品基质及四种不同浓度样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值，根据以下公式计算回收率：
Figure BDA0002740513460000061
计算结果如表4所示：
表4
Figure BDA0002740513460000062
注：NA表示不适用。
2.6精密度考察
取上述二级标准液400μL(5份)，用甲醇定容至10ml，涡旋30s后取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对5个样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值并计算5个样品的相对偏差，计算结果如表5所示：
表5
样品名称 1 2 3 4 5 RSD(％)
含量(ppb) 41.565 40.893 41.387 41.131 41.419 1％
2.7结论
由以上结果可知，该检测方法回归方程R2大于0.995，三点加标回收均在80％-120％之间，且RSD＝1％，说明该方法不仅灵敏度好，精密度好，且回收率高。
样品中Berol 185液质联用测定质谱图见图1a～图1c；其中，图1a：空白样品质谱图；图1b：空白中加入Berol 185标准品质谱图；图1c：实测样品质谱图。
实测样品质谱图及峰值最高点提取离子谱图见图2。
Berol 185标准曲线分别见图3a～图3c。
实施例2实际样品检测
1、分析仪器与试药
分析仪器：SHIMADZU-8050型三重四级杆质谱仪，配ESI电喷雾离子源，分析软件为Labsolutions 5.93数据处理系统；岛津LC20AD XR高效液相色谱仪，搭载岛津Nexera X2自动进样器；色谱柱为GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)。
实验试剂如表6所示：
表6
Figure BDA0002740513460000071
2、实验方法与结果
2.1含Berol 185样品的预处理
取待测样品2.0ml于15ml离心管中，再加入8.0ml甲醇，涡旋30s后，取1.0ml混合液于1.5ml离心管中，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中，上样分析。
2.2色谱分离
色谱柱；GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)；流动相：A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；B为100％甲醇；流速为0.3ml/min；柱温箱温度35℃；色谱梯度洗脱条件为：0.00-1.00min 5％B,2.01min-5.00min 40％B,5.01-7.00min 99％B,7.01-9.00min 99％B,9.01-9.10min 40％B,9.11-15.00min 5％B；其余组分均为A；进样量为10μL。
2.3质谱检测
质谱条件：ESI电离源，正离子检测模式，雾化气流量：3L/min，接口温度：300℃；DL温度：250℃，加热块温度：400℃；离子通道如表7所示：
表7
Figure BDA0002740513460000081
2.4标准曲线的建立
量取Berol 185(批号：1576973)标准品20mg于10ml容量瓶中，加入10ml甲醇定容，涡旋待样品充分溶解后，得浓度为2000ppm的一级标准溶液，取50μL一级标准液于100ml容量瓶中，加入甲醇定容至100ml，得到二级标准溶液1ppm；分别取二级标准液50、100、200、400、600、800、1000、1200μL二级标准液于10ml容量瓶中，用甲醇分别定容至10ml，得到5、10、20、40、60、80、100、120ppb的系列标准液，再分别取上述标准液1ml于1.5ml进样瓶中，采用上述的色谱和质谱条件对不同浓度的标准液进行测定，分别提取不同浓度的定量离子峰，并记录峰面积，绘制峰面积-浓度标准曲线；根据定量离子对应的提取离子峰面积与不同待测物浓度进行回归分析(表8)，得到线性方程：y＝35828.9x+321161，R2＝0.9950273；其中，x为Berol 185浓度(ppb)，y为提取离子峰面积。
本方法测得Berol 185含量的最低限值为1ppb。Berol 185的线性检测范围为5-120ppb；
表8
样品名称 保留时间(min) 峰面积 浓度ppb
S1 9.316 497,536 4.923
S2 9.312 656,612 9.363
S3 9.302 974,863 18.245
S4 9.300 1,687,199 38.127
S5 9.297 2,592,997 63.408
S6 9.307 3,330,267 83.986
S7 9.304 3,976,510 102.022
S8 9.296 4,438,858 114.927
2.5准确度和回收率考察
取上述二级标准液0(对照)，100，200，300μL并分别加入样品(百日咳疫苗FHA精制液，批号20200730)2000μL，再分别用甲醇定容至10ml，涡旋30s后，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对样品基质及四种不同浓度样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值，根据以下公式计算回收率：
Figure BDA0002740513460000091
计算结果如表9所示：
表9
Figure BDA0002740513460000092
注：NA表示不适用。
2.6精密度考察
取上述二级标准液400μL(5份)，用甲醇定容至10ml，涡旋30s后取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对5个样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值并计算5个样品的相对偏差，计算结果如表10所示：
表10
样品名称 1 2 3 4 5 RSD(％)
含量(ppb) 29.114 28.068 29.725 29.723 30.268 3％
2.7结论
由以上结果可知，该检测方法回归方程R2大于0.995，三点加标回收均在80％-120％之间，且RSD＝3％，说明该方法不仅灵敏度好，精密度好，且回收率高。
实施例3实际样品检测
1、分析仪器与试药
分析仪器：SHIMADZU-8050型三重四级杆质谱仪，配ESI电喷雾离子源，分析软件为Labsolutions 5.93数据处理系统；岛津LC20AD XR高效液相色谱仪，搭载岛津Nexera X2自动进样器；色谱柱为GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)。
实验试剂如表11所示：
表11
Figure BDA0002740513460000101
注：NA表示不适用。
2、实验方法与结果
2.1含Berol 185样品的预处理
取待测样品2.0ml于15ml离心管中，再加入8.0ml甲醇，涡旋30s后，取1.0ml混合液于1.5ml离心管中，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中，上样分析。
2.2色谱分离
色谱柱；GL Science Bio C18色谱柱(100×2.1mm,1.7μm)；流动相：A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；B为100％甲醇；流速为0.3ml/min；柱温箱温度35℃；色谱梯度洗脱条件为：0.00-1.00min 5％B,2.01min-5.00min 40％B,5.01-7.00min 99％B,7.01-9.00min 99％B,9.01-9.10min 40％B,9.11-15.00min 5％B；其余组分均为A；进样量为10μL。
2.3质谱检测
质谱条件：ESI电离源，正离子检测模式，雾化气流量：3L/min，接口温度：300℃；DL温度：250℃，加热块温度：400℃；离子通道如表12所示：
表12
Figure BDA0002740513460000102
2.4标准曲线的建立
量取Berol 185(批号：1576978)标准品20mg于10ml容量瓶中，加入10ml甲醇定容，涡旋待样品充分溶解后，得浓度为2000ppm的一级标准溶液，取50μL一级标准液于100ml容量瓶中，加入甲醇定容至100ml，得到二级标准溶液1ppm；分别取二级标准液50、100、200、400、600、800、1000、1200μL二级标准液于10ml容量瓶中，用甲醇分别定容至10ml，得到5、10、20、40、60、80、100、120ppb的系列标准液，再分别取上述标准液1ml于1.5ml进样瓶中，采用上述的色谱和质谱条件对不同浓度的标准液进行测定，分别提取不同浓度的定量离子峰，并记录峰面积，绘制峰面积-浓度标准曲线；根据定量离子对应的提取离子峰面积与不同待测物浓度进行回归分析(表13)，得到线性方程：y＝32684.6x+419135，R2＝0.9961489；其中，x为Berol 185浓度(ppb)，y为提取离子峰面积。
本方法测得Berol 185含量的最低限值为1ppb，Berol 185的线性检测范围为5-120ppb。
表13
样品名称 保留时间(min) 峰面积 浓度ppb
S1 9.318 557,300 4.227
S2 9.31 723,156 9.302
S3 9.312 975,404 17.019
S4 9.319 1,785,453 41.803
S5 9.322 2,485,221 63.213
S6 9.322 3,120,307 82.643
S7 9.327 3,721,928 101.05
S8 9.321 4,202,125 115.742
2.5准确度和回收率考察
取上述二级标准液0(对照)，100，500，900μL并分别加入样品(百日咳疫苗FHA精制液，批号：20200925)2000μL，再分别用甲醇定容至10ml，涡旋30s后，14000g离心10min，取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对样品基质及四种不同浓度样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值，根据以下公式计算回收率：
Figure BDA0002740513460000111
计算结果如表14所示：
表14
Figure BDA0002740513460000112
Figure BDA0002740513460000121
注：NA表示不适用。
2.6精密度考察
取上述二级标准液200μL(5份)，用甲醇定容至10ml，涡旋30s后取上清于1.5ml进样瓶中并采取上述色谱和质谱条件分别对5个样品进行分析，根据标准曲线方程得到检测含量值并计算5个样品的相对偏差，计算结果如表15所示：
表15
样品名称 1 2 3 4 5 RSD(％)
含量(ppb) 20.131 20.939 20.326 20.552 19.085 3％
2.7结论
由以上结果可知，该检测方法回归方程R2大于0.995，三点加标回收均在80％-120％之间，且RSD＝3％，说明该方法不仅灵敏度好，精密度好，回收率高。
综上，本发明提供的液质联用分析Berol 185含量的方法，该方法前处理简单，精密度好，回收率高，重现性好，检出限低，可实现简单、快速、准确地对样品中Berol 185的含量进行分析。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.利用液相色谱串联质谱测定样品中Berol 185含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、配制不同浓度的Berol 185标准品溶液，进行液相色谱串联质谱检测；并根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出定量离子；
B、分别提取不同浓度标准品溶液的定量离子峰，并记录峰面积；以标准品溶液的浓度作为横坐标，以定量离子对应的峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线；
C、对待测样品进行预处理，然后采用与步骤A相同的方法进行液相色谱串联质谱检测；
D、根据待测样品的检测结果，对照标准曲线，获得待测样品中Berol 185的浓度，从而实现对样品中Berol 185的定量检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中用甲醇配制不同浓度的Berol 185标准品溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C对待测样品进行预处理的方法包括：将待测样品与甲醇按体积比1:2-1:9混合，离心后取上清液进行液相色谱串联质谱检测。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱采用Bio C18反向色谱柱；流动相A为体积百分数为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；流速为0.25-0.35ml/min；柱温为25-35℃；
采用梯度洗脱：0.00-1.00min 5％B，2.01-5.00min 40％B，5.01-7.00min 99％B，7.01-9.00min 99％B，9.01-9.10min 40％B，9.11-15.00min 5％B。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，质谱检测条件如下：
利用三重四级杆质谱系统进行质谱检测：ESI电离源；正离子检测模式；雾化气流量：2.5-3L/min；接口温度：250-350℃；DL温度：200-280℃；加热块温度：350-450℃。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，Berol 185标准品在质谱中所产生的检测信号的母离子具有630.05的质荷比，子离子包含质荷比为89.10、133.10和613.40的子离子。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，样品中Berol 185的线性检测范围为5-120ppb，检出限为1ppb。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包括生物制品，优选疫苗产品，更优选含有百日咳杆菌抗原的疫苗。
9.权利要求1-8任一项所述方法在生物制品质量控制中的应用。
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