CN112294959A - C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用。本发明证明过表达、干扰C20orf112能够分别促进、抑制结直肠癌的增殖，因此可作为靶点应用于制备治疗结直肠癌的药物或促进癌细胞增殖的产品，具有广阔的应用前景。

Description

C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用
技术领域
本发明涉及于医药技术领域，特别涉及C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用。
背景技术
癌症是世界上最难治疗的疾病之一。结直肠癌(CRC)在全球恶性肿瘤死亡率居第二位。在我国，结直肠癌死亡率已位于第五位。目前肿瘤干细胞(CSCs)被认为与结直肠癌(CRC)的进展和复发有关，但其潜在机制尚不清楚。
人类未知功能蛋白组是由功能上未被鉴定的蛋白组成，含有丰富的肿瘤相关新蛋白，可用于深度挖掘。人类染色体蛋白质组计划(Chromosome-Centric Human ProteomeProject,C-HPP)是由人类蛋白质组组织(Human Proteome Organization,HUPO)于2010年9月在悉尼召开的第九届国际蛋白质组学大会上正式提出的大型国际合作计划，旨在10年内(2012.09-2022.09)完成人类24条染色体和线粒体上蛋白质编码基因产物本身及其修饰产物的检测、验证和确认，注销可能过度注释的编码基因，绘制基因图谱并实现人类基因组的重注释。
发明人关注于人类20号染色体上的未知功能蛋白C20orf112，首次发现该蛋白与结直肠癌增殖生长有密切关系。目前尚未有文章表明C20orf112和结直肠癌癌细胞具有生长方面的联系。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用。
所述的癌细胞为结直肠癌细胞。
所述的C20orf112作为靶点。
所述的C20orf112为C20orf112蛋白和/或编码C20orf112蛋白的核苷酸。
所述的C20orf112蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
所述的编码C20orf112蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
所述的产品为增殖能力增强的结直肠癌细胞模型，或是制备增殖能力增强的结直肠癌细胞模型的物质。
C20orf112在制备抗结直肠癌药物中的应用。
C20orf112的抑制剂在制备结直肠癌药物中的应用。
所述的结直肠癌药物抑制结直肠癌细胞增殖。
所述的抑制剂为干扰C20orf112转录和/或表达的shRNA。
所述的shRNA序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明证明过表达、干扰C20orf112能够促进、抑制结直肠癌的增殖，因此可作为靶点应用于制备治疗结直肠癌的药物或促进癌细胞增殖的产品，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1是分别使用不同肠癌细胞株构建的过表达和干扰C20orf112的稳转细胞株中的western blot检测结果图。
图2是不同肠癌细胞株构建的过表达和干扰C20orf112的稳转细胞株的细胞成活率统计图；其中，A为RKO，B为HCT116。
图3是分别过表达和干扰C20orf112的RKO、HCT116细胞克隆形成实验结果图；其中，A为RKO细胞的克隆照片图和克隆数统计图，B为HCT116细胞的克隆照片图和克隆数统计图。
图4是分别过表达和干扰C20orf112的RKO、HCT116细胞对裸鼠体内成瘤能力的影响结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。C20orf112蛋白的氨基酸序列GenBank登录号为AAH65370.1。编码C20orf112蛋白的核苷酸GenBank登录号为NM_001351680。
人结直肠癌细胞RKO、HCT116购于中国科学院上海生科院细胞资源中心。anti-C20orf112一抗购于abcam公司(Cat#ab237758)。
实施例1
1、体外实验：对不同结直肠癌细胞系(RKO和HCT116)分别做C20orf112过表达和干扰的稳转细胞株，然后通过WST-1(试剂盒购自碧云天生物技术有限公司)实验检测细胞生长速度，分别研究过表达和干扰C20orf112对肠癌细胞增殖的影响。
(1)过表达和干扰C20orf112的稳转细胞株Western blot检测
C20orf112过表达实验如下：
pLVX-Puro-C20orf112重组质粒的构建：在pLVX-Puro载体(Clontech,Cat#632159)的骨架上构建pLVX-Puro-C20orf112的重组质粒，利用同源重组方法，采用C112-ClonExpress II One Step Cloning Kit试剂盒(诺唯赞，Cat#C112-01)，将C20orf112基因片段(SEQ ID NO.2)插入到pLVX-Puro载体中，具体步骤如下：
1)提取人类结直肠癌HCT116细胞总RNA，将其反转录产物作为cDNA模板；通过PCR扩增实验、胶回收纯化获得C20orf112基因片段；PCR引物为C20orf112 UP和C20orf112 DW。
C20orf112 UP：5’-ttctagagcggccgcggatccatgagcgactccaca-3’；
C20orf112 DW：5’-gagggagagggggcgggatcctcatgctgaggtccg-3’。
PCR反应体系为：浓度为1μg/uL的cDNA模板1μL、浓度为10μM的C20orf112 UP 1μL、浓度为10μM的C20orf112 DW1μL、PCR Mix(2×)25μL、灭菌纯水(ddH2O)至50μL。
PCR反应条件如下：98℃5min；98℃10s、60℃30s、72℃90s，共35个循环；最后，72℃10min；4℃30min。
2)将pLVX-Puro载体进行BamHI(Takara,Cat#1650)单酶切反应，酶切体系如表1所示，37℃金属浴中静置15min，然后分别进行胶回收纯化，得到带限制性内切酶粘性末端的pLVX-Puro线性化载体。
表1 pLVX-Puro载体的酶切体系
Figure BDA0002750787020000031
3)将C20orf112基因片段和pLVX-Puro线性化载体通过同源重组连接酶连接，连接体系如表2所示。连接条件如下：37℃连接30min。
表2 C20orf112基因片段和pLVX-Puro线性化载体的连接体系
Figure BDA0002750787020000041
4)将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，具体如下：取连接产物20μL与50μL大肠杆菌DH5α感受态细胞(OD值为0.5)轻轻混合，冰上静置30min；42℃水浴90s，冰上静置2min；加入400μL LB培养基，37℃、180rpm摇瓶培养60min。
5)取200μL菌液涂在LB固体培养基平板上，挑选6个单克隆，接种于加有氨苄青霉素的LB培养基的12孔板中，37℃摇菌4～5h；然后进行菌液PCR筛选阳性单克隆：以菌液为模板，C20orf112 UP和C20orf112 DW为菌落PCR引物，进行PCR扩增；接着进行凝胶电泳，筛选阳性单克隆；最后将阳性单克隆扩大培养，一部分提取质粒，送公司测序，另一部分保种：-80℃液氮罐中保存。
C20orf112干扰实验如下：
构建质粒pLKO.1-Puro、pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1和
pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2(构建过程见pLKO.1-TRC(Addgene,Cat#10878)说明书)，pLKO.1-Puro为不干扰C20orf112的对照组，pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1和pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2为构建的干扰重组质粒，其中，干扰C20orf112的两个干扰序列(shRNA)如下：
C20orf112-sh1：5′-gtgagcagaattgcatattta-3′(SEQ ID NO.3)；
C20orf112-sh2：5′-gtctagagatctaccagtcct-3′(SEQ ID NO.4)。
酶切位点为AgeI(New England Biolabs(NEB)#R0552S)和EcoRI(NEB#R0101S)。
慢病毒载体构建稳转细胞系，实验如下：
1)复苏HEK 293T(购于中国科学院上海生科院细胞资源中心)，以常规传代培养方法进行传代3次后准备用于共转染病毒包装实验；共转染前一天(约24小时)在六孔板中铺HEK-293T进行传代，每个孔中大约有60％左右的细胞量；转染当天HEK-293T细胞汇合度接近90％；
2)将质粒pLVX-Puro(过表达C20orf112的对照组)、pLVX-Puro-C20orf112、pLKO.1-Puro(过表达C20orf112的对照组)、pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1和pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2分别与包装质粒(pMD2.G和psPAX2，均购自权阳生物科技有限公司)各2μg，加入适量的无血清DMEM培养基(Thermo Fisher Scientific)中，轻轻混匀，随后加入Lip3000 4μL，轻轻混匀，室温静置15min,得到混合液，然后将混合液分别加入待转染的HEK293T细胞中，37℃、5％CO2培养箱中孵育，得到病毒液1(pLVX-Puro、pMD2.G及psPAX2转染HEK 293T)、病毒液2(pLVX-Puro-C20orf112、pMD2.G及psPAX2转染HEK 293T)、病毒液3(pLKO.1-Puro、pMD2.G及psPAX2转染HEK 293T)、病毒液4(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1、pMD2.G及psPAX2转染HEK 293T)及病毒液5(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2、pMD2.G及psPAX2转染HEK 293T)。
3)转染48h后，移除上清液，在216g速度下离心3min，去除细胞碎片；
4)感染目的细胞RKO和HCT116：病毒感染前一天，分别对待感染目的细胞RKO和HCT116贴壁细胞进行传代，感染当天，RKO和HCT116细胞汇合度达到90％，所用的培养基为DMEM完全培养基；吸取目的细胞培养上清液，用0.45μM的滤器将病毒过滤以除去细胞碎片，然后分别将2mL病毒液1、病毒液2分别加入目的细胞RKO，病毒液3、病毒液4、病毒液5分别加入目的细胞HCT116中；
5)抗性筛选：感染两天后换液(2mL DMEM完全培养基)，然后加嘌呤霉素至终浓度为1μg/mL，用于结直肠癌RKO和HCT116细胞系的筛选，直至细胞数量无明显变化后撤药，得到细胞株1(pLVX-Puro感染RKO，NC)、细胞株2(pLVX-Puro-C20orf112感染RKOM，C20orf112)、细胞株3(pLKO.1-Puro感染HCT116，NC)、细胞株4(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1感染HCT116，SH1)、细胞株5(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2感染HCT116，SH2)
6)蛋白印迹实验检测干扰效果：撤药3天后，收细胞，做蛋白质印迹实验，以确定目的蛋白的表达效率，具体如下：
①本次所检测蛋白裂解液来自细胞株1、细胞株2、细胞株3、细胞株4、细胞株5，每种细胞株取约100万个细胞；
②裂解细胞：分别用预冷的PBS(0.01M、pH＝7.4)洗三遍，加入100μL的RIPA细胞裂解液(碧云天，P0013B)，冰上裂解30min，每隔10min轻轻颠倒混匀一次；4℃、13200rpm离心30min，取上清进行蛋白浓度测定，细胞株1-5的浓度分别为1.6、1.7、1.6、2.0、1.8ng/μL；
③制样：分别取30μg的蛋白加入20uL 1×蛋白上样缓冲液(碧云天，P0015)，混匀，在沸水浴中煮10min，得到样品；
④制胶：配制12％的分离胶(5mL)：1.5mM Tris-HCl(pH8.8)1.9mL，ddH2O1mL，30％丙烯酰胺2mL，10％SDS(十二烷基硫酸钠)50μL，10％过硫酸胺50μL，TEMED(四甲基乙二胺)2μL(加入后混匀，快速制胶)；配制5％浓缩胶(3mL)：1.5mM Tris-HCl(pH8.8)0.38mL，ddH2O2.1mL，30％丙烯酰胺0.5mL，10％SDS(十二烷基硫酸钠)30μL，10％过硫酸胺30μL，TEMED(四甲基乙二胺)6μL(加入后混匀，快速制胶)；
⑤将上述的样品沸水中煮5min后，冰上放置2min，离心10s使侧壁上的液体回到EP管底部，准备上样；
⑥装好电泳仪(美国Bio-RAD公司)，加入电泳缓冲液并且上样；
⑦上样完后，先使用80V电压跑30min，再使用120V电压，直至溴酚蓝条带接近末端，结束电泳，裁剪相应大小的PVDF膜(美国Bio-RAD公司)；
⑧将PVDF膜用甲醇浸润活化至变色，按照滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸的顺序摆好，接入转膜电源，235mA恒电流冰上转膜90min；
⑨转膜完后，取出PVDF膜，用TBST润洗去除残留的转膜缓冲液，然后用5％的脱脂牛奶室温封闭1h；
⑩封闭完后用TBST润洗去除残留的牛奶，根据蛋白指示带剪膜，加入anti-C20orf112(稀释比例1:3000)，4℃孵育过夜(16h)；回收一抗，用TBST洗膜30min，每隔十分钟换一次液，加入稀释1:4000的相应二抗(HS101-01、HS201-01，全式金公司)，室温孵育2h；回收二抗，用TBST洗膜30min，每隔十分钟换一次液；合理控制曝光时间显影，并用Photoshop裁剪图片，并用ImageJ计算灰度值。
结果如图1所示：表明C20orf112在RKO细胞系中的重组过表达质粒和干扰C20orf112在HCT116细胞系中表达的重组质粒构建成功。同时，将构建成功的细胞株冻存于-80℃。
(2)细胞生长速度检测
1)分别将细胞株1-5铺入96孔板内，每孔3000个细胞；
2)每隔24小时用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(购自碧云天生物技术有限公司)检测细胞活性，连续检测7天(图2)。以上实验步骤进行3次生物学重复。
图2说明C20orf112过表达可以促进结直肠癌细胞RKO的增殖，干扰C20orf112表达可抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖。
(3)克隆形成能力检测实验步骤如下：
1)制备细胞株
①pLVX-Puro-C20orf112重组质粒转染到人结肠癌-RKO细胞株。将上述制备得到的pLVX-Puro-C20orf112重组质粒用Lip3000(InvitrogenTMCat#L3000008)按照Lip3000说明书分别转染到人结肠癌RKO细胞株(购于中国科学院上海生科院细胞资源中心)，得到细胞株1(pLVX-Puro-C20orf112重组质粒转染RKO)。
②C20orf112干扰(C20orf112-sh)重组质粒转染到人结肠癌-HCT116细胞株，本步骤与步骤①相同，区别仅在于：质粒为pLKO-Puro-C20orf112-sh1和pLKO-Puro-C20orf112-sh2重组质粒，得到细胞株2(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh1重组质粒转染HCT116)、细胞株3(pLKO.1-Puro-C20orf112-sh2重组质粒转染HCT116)。
③空载质粒pLVX-Puro转染到人结肠癌-RKO细胞株、空载质粒pLKO.1-Puro转染到人结肠癌HCT116细胞株，本步骤与步骤①相同，区别仅在于：质粒为空载质粒pLVX-Puro、pLKO.1-Puro，得到细胞株4(空载质粒pLVX-Puro转染RKO)、细胞株5(空载质粒pLKO.1-Puro转染HCT116)。
2)用细胞消化液(0.25％胰酶，GIBCO，每100万细胞用1mL)将生长良好的细胞株1-5消化成单细胞，重悬混匀，并用血球计数板计数；
3)在6孔板中铺板，每个孔铺500个细胞，每个样品铺3个复孔，加入2mL DMEM完全培养基混匀，隔3天更换一次新鲜的DMEM完全培养基；
4)10～14天后，去除6孔板中的培养基，用PBS溶液(0.01M、pH＝7.4)洗一次；
5)去除PBS溶液，加入1mL的无水甲醇，将细胞固定10min；
6)去除无水甲醇，加入1mL0.1％结晶紫溶液，染色10min；
7)去除结晶紫溶液，用PBS(0.01M、pH＝7.4)清洗3次，使背景降低；
8)晾干后，于扫描仪中扫描成高分辨率图片并保存，结果如图3所示，C20orf112的高表达能够促进结直肠癌细胞增殖。
克隆形成能力检测结果如图3所示，过表达C20orf112的RKO稳转细胞株克隆数显著增加，干扰C20orf112表达的HCT116稳转细胞株克隆数显著减少，结果进一步说明C20orf112可以调控人肠癌细胞的增殖。
2、体内实验：选取30只6周龄雄性裸小鼠(balb/c-nu/nu，购于江苏集粹药康生物科技有限公司)，过表达对照组6只、过表达组6只、干扰对照组6只、干扰1组(SH1)6只和干扰2组(SH2)6只。构建皮下成瘤模型：(1)肠癌细胞RKO-Nc、RKO-C20orf112、HCT116-Nc、HCT116-sh1、HCT116-sh2(细胞C20orf112过表达和干扰的方法同步骤(1)重悬于1×PBS缓冲液中，并按体积比1:1与基质胶混合，每只裸鼠皮下注射2×106个细胞；(2)在实验之前对裸鼠进行麻醉，通过无痛及有痛刺激来评估麻醉程度，确定裸鼠处于麻醉状态；(3)用25G针头的微注射器取重悬细胞对裸鼠进行皮下注射；(4)皮下注射3周后测量肿瘤大小及裸鼠体重，随后将裸鼠安乐死并将肿瘤取出，拍照并称重。
裸鼠体内皮下成瘤实验结果如图4所示，过表达可以显著促进结直肠癌细胞RKO的增殖，干扰C20orf112可显著抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120> C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> C20orf112蛋白的氨基酸序列
<400> 1
Met Ser Asp Ser Thr Trp Met Ser Ala Asp Pro His Leu Ala Ser Ser
1 5 10 15
Leu Ser Pro Ser Gln Asp Glu Arg Met Arg Ser Pro Gln Asn Leu His
20 25 30
Ser Gln Glu Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Ser Gly Ser Gly Asn Gly
35 40 45
Ser Ser Thr Leu Asn Pro Ser Thr Ser Ser Ser Thr Gln Gly Asp Pro
50 55 60
Ala Phe Pro Glu Met Asn Gly Asn Gly Ala Val Ala Pro Met Asp Phe
65 70 75 80
Thr Thr Ala Ala Glu Asp Gln Pro Ile Asn Leu Cys Asp Lys Leu Pro
85 90 95
Pro Ala Thr Ala Leu Gly Thr Ala Ser Tyr Pro Ser Asp Gly Cys Gly
100 105 110
Ala Asp Gly Leu Arg Ser Arg Val Lys Tyr Gly Val Lys Thr Thr Pro
115 120 125
Glu Ser Pro Pro Tyr Ser Ser Gly Ser Tyr Asp Ser Ile Lys Thr Glu
130 135 140
Val Ser Gly Cys Pro Glu Asp Leu Thr Val Gly Arg Ala Pro Thr Ala
145 150 155 160
Asp Asp Asp Asp Asp Asp His Asp Asp His Glu Asp Asn Asp Lys Met
165 170 175
Asn Asp Ser Glu Gly Met Asp Pro Glu Arg Leu Lys Ala Phe Asn Met
180 185 190
Phe Val Arg Leu Phe Val Asp Glu Asn Leu Asp Arg Met Val Pro Ile
195 200 205
Ser Lys Gln Pro Lys Glu Lys Ile Gln Ala Ile Ile Glu Ser Cys Ser
210 215 220
Arg Gln Phe Pro Glu Phe Gln Glu Arg Ala Arg Lys Arg Ile Arg Thr
225 230 235 240
Tyr Leu Lys Ser Cys Arg Arg Met Lys Lys Asn Gly Met Glu Met Thr
245 250 255
Arg Pro Thr Pro Pro His Leu Thr Ser Ala Met Ala Glu Asn Ile Leu
260 265 270
Ala Ala Ala Cys Glu Ser Glu Thr Arg Lys Ala Ala Lys Arg Met Arg
275 280 285
Leu Glu Ile Tyr Gln Ser Ser Gln Asp Glu Pro Ile Ala Leu Asp Lys
290 295 300
Gln His Ser Arg Asp Ser Ala Ala Ile Thr His Ser Thr Tyr Ser Leu
305 310 315 320
Pro Ala Ser Ser Tyr Ser Gln Asp Pro Val Tyr Ala Asn Gly Gly Leu
325 330 335
Asn Tyr Ser Tyr Arg Gly Tyr Gly Ala Leu Ser Ser Asn Leu Gln Pro
340 345 350
Pro Ala Ser Leu Gln Thr Gly Asn His Ser Asn Gly Tyr Ser Ala Gln
355 360 365
Met Gly His Arg Pro Leu Glu Glu Thr Ala Pro Glu Glu Thr Glu Ala
370 375 380
Ser Ser Trp Ser Gln Gly Pro Arg Thr Ser Ala
385 390 395
<210> 2
<211> 1188
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 编码C20orf112蛋白的核苷酸序列
<400> 2
atgagcgact ccacatggat gtcagctgac ccgcacctgg cctccagcct gagccccagc 60
caggacgaga ggatgcggag cccgcagaac ctccacagtc aagaggacga tgactcctcc 120
tctgagagtg gcagcggcaa tggctcctcc accctgaacc catccacgtc gagcagcacg 180
cagggcgacc ctgccttccc cgagatgaat ggcaacggcg ccgtggcccc catggacttc 240
accacggccg ccgaggatca gcccatcaac ctgtgtgaca agctcccgcc ggccacggca 300
cttggcacag cctcctaccc ctcggatggc tgcggtgccg acgggctgcg gagccgcgtc 360
aaatacgggg tgaagaccac ccccgagtcc cccccctaca gctctgggag ctacgattcc 420
atcaagaccg aggtcagcgg ctgccctgag gacctgacag tgggccgggc cccgacggca 480
gatgatgacg acgatgacca cgatgaccat gaggacaatg acaagatgaa cgactctgaa 540
ggcatggacc ctgagcgtct taaggccttc aacatgtttg tgcgtctctt tgtggacgag 600
aacctggacc gcatggtgcc catctccaag cagcccaagg agaagatcca ggccatcatc 660
gagtcctgca gccggcagtt ccctgagttc caggagcggg cccgcaagcg catccgcacg 720
tacctcaagt cctgccgtcg catgaagaag aacggcatgg agatgaccag acccacgcca 780
ccccatctga cctcggccat ggcagaaaac atcctggcag ctgcctgtga gagcgagaca 840
agaaaggcag ccaagcggat gcgtctagag atctaccagt cctcacagga tgagcccata 900
gccctggaca agcagcactc gcgggactcc gcagccatca cccactccac ctactcactg 960
ccagcctcct cctactccca ggaccctgtg tacgccaacg gcggcctcaa ctacagttac 1020
cgcgggtacg gggccttgag cagcaacctg cagccccctg cctccctcca aacaggaaac 1080
cacagtaatg gctactctgc gcagatgggg cacagaccat tagaggagac agcccccgaa 1140
gagacagagg cttcctcatg gagtcagggc ccacggacct cagcatga 1188
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> shRNA序列1
<400> 3
gtgagcagaa ttgcatattt a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> shRNA序列2
<400> 4
gtctagagat ctaccagtcc t 21
<210> 5
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> C20orf112 UP
<400> 5
ttctagagcg gccgcggatc catgagcgac tccaca 36
<210> 6
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> C20orf112 DW
<400> 6
gagggagagg gggcgggatc ctcatgctga ggtccg 36

Claims (10)

1.C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用，其特征在于，所述的癌细胞为结直肠癌细胞。
2.根据权利要求1所述的C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用，其特征在于，
所述的C20orf112作为靶点；
所述的C20orf112为C20orf112蛋白和/或编码C20orf112蛋白的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用，其特征在于，所述的C20orf112蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求3所述的C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用，其特征在于，所述的编码C20orf112蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求1-4任一项所述的C20orf112在制备促进癌细胞增殖产品中的应用，其特征在于，所述的产品为增殖能力增强的结直肠癌细胞模型，或是制备增殖能力增强的结直肠癌细胞模型的物质。
6.C20orf112在制备抗结直肠癌药物中的应用。
7.C20orf112的抑制剂在制备结直肠癌药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的C20orf112的抑制剂在制备结直肠癌药物中的应用，其特征在于，所述的结直肠癌药物抑制结直肠癌细胞增殖。
9.根据权利要求7或8所述的C20orf112的抑制剂在制备结直肠癌药物中的应用，其特征在于，所述的抑制剂为干扰C20orf112转录和/或表达的shRNA。
10.根据权利要求9所述的C20orf112的抑制剂在制备结直肠癌药物中的应用，其特征在于，所述的shRNA序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
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