CN112294830A - 一种富集稀有人参皂苷的西洋参叶产品 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用西洋参叶制备的富含稀有人参皂苷的产品、制备方法和用途。该产品中稀有人参皂苷含量高，基本不含常见人参皂苷。制备方法简单、无需使用有机溶剂、无溶剂残留。同时还提供一种具有优异抗肿瘤效果的稀有人参皂苷组合物。

Description

一种富集稀有人参皂苷的西洋参叶产品
技术领域
本发明涉及一种以西洋参叶为原料制备的产品，特别是一种富集稀有人参皂苷的西洋参叶产品。
背景技术
西洋参(Panax quinquefolium L.)为五加科人参属多年生草本植物，主要药用部位为植物的根部，主要的活性成分为人参皂苷类物质。研究表明，人参皂苷具有多种生物活性。西洋参茎叶中具有与根部药理活性相同的人参皂苷成分。因此，西洋参茎叶中的人参皂苷提取方法研究也成为西洋参研究的热点之一。
20世纪60年代，研究发现，人参皂苷具有抗癌活性，人参皂苷成为抗癌天然药物研究的一个热门领域。后来，研究发现，人参皂苷经过转化后的次级代谢衍生物具有更强的生物活性(刘蓉：生物转化技术制备稀有人参皂苷的研究进展)。这种次级代谢衍生物被命名为“稀有人参皂苷”，目前，已经发现了60多种稀有人参皂苷，其中包括Rk2、Rg3、Rh2、Rg5、Rh1、Rh3、Rk1等多种具备不同抗癌活性的稀有人参皂苷。与此相对应人们把直接从五加科植物中提取出来的人参皂苷称为“原型人参皂苷”，其中含量较高的被称为常见人参皂苷。经常被提及的常见人参皂苷一般包括人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd等。
大量研究表明，相对于常见人参皂苷，稀有人参皂苷往往具有更好的药理学活性，研究表明，稀有人参皂苷除了具有较强的抗肿瘤活性外还具有降血压、提高免疫力、抗炎等药理活性。因此制备稀有人参皂苷，具有重要意义。
与人参叶、三七叶等其它人参属植物地上部分一样，西洋参叶中含有较大量的常见人参皂苷，而稀有人参皂苷的含量却很少或不含。到目前为止人们从西洋参叶中分得多种人参皂苷，包括人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd等二醇组人参皂苷和人参皂苷Re、人参皂苷Rg1等三醇组人参皂苷以及拟人参皂苷F11，其中人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re以及拟人参皂苷F11含量较高。
2000年，我国已经批准人参皂苷Rg3为处方药，2006年，我国研发的人参皂苷Rh2药品也已批准上市。但在稀有人参皂苷的产业化方面仍处于起步阶段，国内产业化生产高纯度人参皂苷单体的企业严重不足，具备稀有人参皂苷产业化生产能力的企业更少。主要原因是：由于稀有人参皂苷为人参皂苷的次级代谢产物，在人参、西洋参、三七等人参属植物中含量非常低，只能通过诸如化学反应、生物转化等手段获得这些皂苷，而且制备困难，分离工艺复杂，收率低。未来积极开展稀有人参皂苷的转化研究，抢先具备产业化生产稀有人参皂苷能力的企业必然具有市场话语权。
人参皂苷的转化方法主要包括化学法、微生物转化法和酶法。微生物法和酶法因其环境友好、专一性强、转化效率高等优点被科研人员广泛使用。
化学法：由于人参皂苷连接的糖基在遇到酸或碱时糖苷键会发生断裂。在较温和的条件下，人参皂苷的糖苷键依次断裂，得到相应的次生人参皂苷，但若是水解反应的条件过于剧烈，例如使用硫酸或盐酸等强酸作为反应试剂时，人参皂苷的糖链部分会发生完全水解，糖苷键会全部断裂得到人参皂苷元甚至苷元的结构也会发生改变。郭迎迎等将人参皂苷Rd溶解于pH为2.0的甲酸溶液中，60℃水浴加热5h，利用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术对人参皂苷Rd酸水解产物进行分离鉴定，通过水解产物的鉴定推断了人参皂苷Rd的化学转化方式。宋长春等将西洋参叶茎叶总皂苷溶于氢氧化钠水溶液中在高温高压下进行转化，并辅之以乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析以及重结晶等方法，从而得到了纯度较高的人参皂苷Rh1和Rh2。
微生物转化法：微生物转化人参皂苷是指利用微生物在适宜的条件下，将底物经过特殊的代谢途径转化为目标产物的过程。近年来，利用微生物转化人参皂苷而提高其药理活性越来越受到人们的关注。微生物转化法具有操作简单，条件温和，人参皂苷的转化效率高，无需提纯粗酶和不会带来二次污染等优点。利用微生物法或酶法对常见人参皂苷的糖基侧链进行修饰，能够获得多种稀有人参皂苷单体。自1987年至今已经对89种天然来源的人参皂苷单体进行了生物转化的研究。蔡小雨等通过药用真菌发酵，显著提高了西洋参叶总皂苷中稀有人参皂苷的含量，稀有人参皂苷总皂苷含量增加了20-150％，各种稀有人参皂苷F1、C-K和Rg2等人参皂苷含量也有明显升高。明有山等筛选出一株霉菌，水解人参皂苷Re生成Rg1，经过制备柱纯化得到纯度为81.98％的人参皂苷Rg1，产率为71.83％。于珊珊等从土壤中筛选出了一株TH-20菌株，能够同时转化二醇型和三醇型人参皂苷，可分别将Rb1、Re和Rg1转化为Rd、Rg2和PPT。金艳等从橙汁中分离到的菌株CZ2能够转化人参皂苷Rb1生成F2和Gyp-XVII。张丽娜等以西洋参叶提取物为底物进行微生物转化研究，利用高效液相色谱(HPLC)法对人参皂苷Re及其发酵产物进行分析，结果表明，高效菌株S329可以将人参皂苷Re转化人参皂苷Rh1，转化率为27.65％。Cui Lei等利用内生菌JG09将人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1转化为相应稀有人参皂苷F2、C-K和Rh1；人参皂苷F2和C-K的最大转化率分别可达到94.53％和66.34％。
酶转化法：由于酶法具有专一性强，反应条件温和，转化效率高，无污染等优点，在人参皂苷的结构修饰和代谢研究中被认为是最有效的工具。利用糖苷酶对糖链进行结构修饰来改善化合物的生物活性，以满足医药行业的发展，也是目前人参皂苷研究的重点。Shin等发现热解纤维菌中的葡萄糖苷水解酶能够水解皂苷C-20位外侧的L-阿拉伯糖和D-葡萄糖，因此，含有L-阿拉伯糖的人参皂苷Rc可以通过这种酶转化成C-K。童庆宣等利用一种蜗牛酶，转化西洋参叶二醇组人参皂苷制备稀有人参皂苷C-K，经硅胶柱分离得到纯度高于98％的人参皂苷C-K。王宇等利用糖苷酶对西洋参叶三醇型人参皂苷进行转化，制备了稀有人参皂苷F1和Rh1。目前，以自然界大量存在的常见人参皂苷作为底物并对其进行修饰，是稀有人参皂苷制备的有效途径。以人参皂苷Rb2、Rb3和Rc为底物，对其进行C-3位和C-20位的修饰，能够获得稀有人参皂苷Rg3、Rh2、F2和PPD等产物。这些稀有人参皂苷能够进行大量制备，其药理活性研究也日趋活跃。
上述三种转化方法虽然可以利用常见人参皂苷获得稀有人参皂苷，但化学法转化法存在反应条件难以控制、产物复杂、污染环境的弊端；酶法存在对温度敏感，容易失活，对反应条件具有较高要求的缺点；微生物转化法普遍存在选择性差、微生物不易获得以及有些微生物不可以应用到食品工业中等缺点。
更为重要的是上述三种方法中无论是化学法、微生物法还是酶法，获得的是皂苷元结构未发生改变的次级人参皂苷，主要是20(S)/R-Rg2、20(S)/R-Rh1、20(S)/R-Rh2、20(S)/R-Rg3、PPD、PPT、C-K、C-Y等，并不能获得人参皂苷的皂苷元结构发生改变了的Δ20(21)-和Δ20(22)稀有人参皂苷Rg6、F4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等稀有人参皂苷。
通过文献检索还可以发现，通过长时间加热或高温高压加热人参属植物可以获得同时含有常见人参皂苷和稀有人参皂苷产品，但是转化率低，其中稀有人参皂苷总含量并不高，总含量最高的仍然是常见人参皂苷。
现有技术中研究西洋参叶中稀有人参皂苷的文献很少，更没有关于如何提高其中稀有人参皂苷含量从而获得高含量稀有人参皂苷的西洋参叶产品的文献报道。
现有技术中急需一种简便、容易实施、污染小、有机溶剂使用少、溶剂残留少、纯天然的西洋参叶加工方法，其可以增加稀有人参皂苷的含量，提高西洋参叶的生物活性。
发明内容
现有技术中西洋参叶的加工产品，有药材西洋参叶、西洋参叶提取物、西洋参叶总皂苷以及由此获得的有效部位或单体等。西洋参叶提取物的制备方法一般是用水或乙醇水进行提取，弃掉药渣，提取液直接回收溶剂，真空干燥后获得提取物；西洋参叶总皂苷的制备方法一般是用水进行提取，提取液利用大孔吸附树脂吸附其中的人参皂苷，再用乙醇将人参皂苷洗脱下来后减压回收乙醇，真空干燥，获得西洋参叶总皂苷。有效部位或单体一般是进一步利用柱层析等方法从总皂苷中获得。CN101032535A中将西洋参叶、人参叶按1∶0.3比例共同进行水提取，经处理后的水提取液上大孔吸附树脂柱吸附，用水洗脱除杂质，再用乙醇将人参皂苷洗脱下来，再经精制纯化获得总皂苷。
本课题组长期从事西洋参叶中人参皂苷的提取分离以及含量测定、有效部位的制备等研究工作。在深入研究用水做提取溶剂，回流提取西洋参叶中人参皂苷的最佳工艺条件时，意外地发现，在回流提取的起始阶段水液中的常见人参皂苷的含量逐渐增加，符合预期地药渣中的常见人参皂苷含量也逐渐降低。然而随着加热回流时间的延长，不可思议地水液(提取液)中的常见人参皂苷含量不升反降并最终消失。在分析其原因的过程中更加意外地发现，水液尤其是药渣中开始出现稀有人参皂苷且其含量逐渐升高。接下来发现，随着加热回流时间的进一步延长，尤其是常压48小时后，水相和药渣中基本不含常见人参皂苷，同时水液中的稀有人参皂苷也最终消失。但是药渣中的稀有人参皂苷并不消失，加热回流至一定时间后其含量达到一个最高值，然后在最高值附近小幅波动。
鉴于上述意外发现，在弄清楚出现上述反常现象的机理的基础上，经过反复考察煎煮温度、煎煮时间、料液比等因素对药渣及水液中稀有人参皂苷含量的影响，最终完成了本发明。
稀有人参皂苷包括20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。
本申请提供了一种以西洋参叶为原料制备的产品，包含比天然西洋参叶具有更高含量的稀有人参皂苷，基本不含有常见人参皂苷。
上述产品中包括多种稀有人参皂苷，具体的可以为20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3中的一种或多种，上述产品中基本不含有常见人参皂苷，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。
优选的稀有人参皂苷的总量高于5％，优选的为高于6％或7％或8％。
优选的稀有人参皂苷中Rg3含量高于2％，更优选的高于3％。
优选的稀有人参皂苷中Rg5含量高于1％，更优选的高于1.5％。
优选的稀有人参皂苷中Rh2含量高于0.6％。
优选的稀有人参皂苷中Rk1含量高于0.9％或1.0％。
优选的常见人参皂苷总含量低于1％，更优选的低于0.8％或0.6％，最优选的低于0.4％和0.3％。
优选的常见人参皂苷Rc含量低于1％，更优选的低于0.8％或0.6％，最优选的低于0.4％和0.3％。
优选的常见人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rd各自的含量低于0.5％，更优选的低于0.4％或0.3％，最优选的低于0.2％、0.1％或0.05％。
本申请还涉及一种制备高含量稀有人参皂苷的产品的制备方法，其制备方法为以下的任一一种：
A：将西洋参叶干燥粉碎，加入适量水，在常压下加热回流48小时以上，优选的为60小时、72小时、84小时、96小时或108小时以上；更优选的为90小时；过滤，将药渣干燥，得到所需产品；
B：将西洋参叶干燥粉碎，加入适量水，高温高压下煎煮2小时或4小时以上，优选的为6小时以上、8小时以上、10小时以上、12小时以上、14小时以上、16小时以上、18小时以上、20小时以上、22小时以上、24小时以上、28小时以上、30小时以上、32小时以上、34小时以上、36小时以上、38小时以上、40小时以上、42小时以上、44小时以上、48小时以上或者50小时以上，过滤，将药渣干燥，得到所需产品。
在制备方法A中，液料比可以为(30-5):1，优选的为(25-8):1，更优选的为(20-9):1或(15-10):1，优选为10:1。
在制备方法B中，液料比可以为(30-5):1，优选的为(25-6):1，更优选的为(20-7):1或(18-10):1，优选为15:1。
所述的高温优选的不低于110℃、115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃、145℃或150℃。
在制备方法A中，优选的为将西洋参叶先用水浸泡；更优选的为将西洋参叶浸泡6小时以上、8小时以上、10小时以上、12小时以上或24小时以上，然后进行加热回流；同时煎煮结束后趁热过滤，最优选的为煎煮结束后立即趁热过滤。
在制备方法B中，优选的为先将水加热后投料，优选的为先将水加热至60℃以上后投料，更至优选的为先将水加热至90℃后加料；最优选的为先将水加热至100℃后加料。同时煎煮结束后趁热过滤，最优选的为煎煮结束后立即趁热过滤。
优选的，所述药渣中20(S)-Rg2的含量范围为0.05％-0.5％；20(S)-Rh1含量范围为0.1％-0.5％；20(R)-Rh1含量范围为0.1％-0.4％；Rg6含量范围为0.05％-0.3％；F4含量范围为0.1％-0.4％；Rk3含量范围为0.05％-0.4％；Rh4含量范围为0.05％-0.5％；20(S)-Rg3含量范围为0.8％-2.5％；20(R)-Rg3含量范围为0.8％-2.5％；Rk1含量范围为0.5％-1.5％；Rg5含量范围为0.5％-2％；20(S)-Rh2含量范围为0.1％-0.5％；20(R)-Rh2含量范围为0.1％-0.5％；Rk2含量范围为0.05％-0.3％；Rh3含量范围为0.05％-0.5％。
任选的对药渣进行进一步制备，可以为粉剂、散剂、饮片、糖浆、口服液、混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、缓释剂、速释剂、控释剂、注射液、注射粉针剂、贴剂、栓剂、滴剂。
任选的对药渣进一步地有机溶剂或含水有机溶剂提取，得到具有高含量稀有人参皂苷的提取物。
优选的提取物中含有1种或多种稀有人参皂苷，具体的可以为20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3中的一种或多种，稀有人参皂苷的总含量超过15％、20％、30％、35％，优选的不低于35％。优选的，提取物中Rg3的含量不低于9％、10％、12％、14％、或16％；Rg5的含量不低于3％或4％；和/或Rh2的含量不低于2％、3％、或4％；和/或F4的含量不低于0.9％或1％；和/或Rk1的含量不低于2％、3％。
更优选的，提取物中基本不含有常见人参皂苷，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。常见人参皂苷的含量低于10％，优选的低于8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。更优选的，低于0.8％、0.6％、0.5％、或0.1％。
所述有机溶剂可以为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、丙酮、异丙醇。
优选的，所述提取物中20(S)-Rg2的含量范围为0.1％-1.8％；20(S)-Rh1含量范围为0.5％-2％；20(R)-Rh1含量范围为0.3％-1.2％；Rg6含量范围为0.2％-1％；F4含量范围为0.8％-2％；Rk3含量范围为0.3％-0.8％；Rh4含量范围为0.4％-1％；20(S)-Rg3含量范围为4％-10％；20(R)-Rg3含量范围为4％-10％；Rk1含量范围为2.5％-5％；Rg5含量范围为3.5％-6％；20(S)-Rh2含量范围为0.8％-2.5％；20(R)-Rh2含量范围为0.8％-2.5％；Rk2含量范围为0.3％-1.2％；Rh3含量范围为0.6％-1.5％。
本申请还提供了一种组合物，该组合物中包含稀有人参皂苷，优选的，该组合物具有协同抗肿瘤活性。
优选的，包含Rg3和Rg5的组合物，其重量比为(1-20)：(1-20)，优选的为(1-10)：(1-10)、(5-9)：(2-5)、或(7-10)：(3-6)；
优选的，包含F4和Rh2的组合物，其重量比为(1-10)：(1-10)，优选的为(5-9)：(4-9)、或(2-5)：(5-7)；
优选的，包含Rh2和Rg5的组合物，其重量比为(1-10)：(1-10)，优选的为(2-5)：(3-6)、或(1-3)：(6-9)。
组合物中的稀有人参皂苷，任选的还包括20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3中的一种或多种稀有人参皂苷。
优选的，还包括20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2；和/或Rh3。
优选的，所述组合物中，基本不包含常见人参皂苷，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。常见人参皂苷的含量低于10％，优选的低于8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。更优选的，低于0.8％、0.6％、0.5％、或0.1％。
本发明中所述的Rg3、Rh1、或Rh2包括20R构型和/或20S构型，20R构型和20S构型的比例为1:100-100:1，优选的为1:10-10:1，更优选的为1:1。
本发明中所述的Rg3包括20(S)-Rg3和/或20(R)-Rg3；Rh2包括20(S)-Rh2和/或20(R)-Rh2。
本申请还提供了一种包含上述任意一项组合物的西洋参叶产品，优选的，其是以天然西洋参叶为原料制备的产品，优选的为药渣或提取物。
优选的，该产品的性能和参数，具备上述任一一项的特征。
上述所述西洋参叶，包括干燥或新鲜的西洋参叶。
本申请还提供了上述产品或组合物在治疗和/或预防肿瘤中的用途，所述肿瘤可以为肺癌、结肠癌、神经胶质瘤。
本申请的上述任一产品或组合物，在制备食品、保健食品或者药品中的应用,具体应用于现有技术已知的降血糖、抗疲劳、抗病毒、治疗糖尿病、心血管、中枢神经、生物代谢、生殖功能、免疫功能、肾功能等疾病的食品、保健食品或者药品中的应用；其中可以包含药学或者食品上可接受的载体或者添加剂。
本申请的上述任一产品或组合物，其中可以包含药学上可接受的载体。
任选的，产品或组合物的给药途径可以为口服、注射或经皮给药。
任选的，产品或组合物的剂型为粉剂、散剂、饮片、糖浆、口服液、混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、缓释剂、速释剂、控释剂、注射液、注射粉针剂、贴剂、栓剂、滴剂。
附图说明
图1：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中Rg3含量变化；
图2：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中Rg3和Rh2总量变化；
图3：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中Rk1和Rg5总量变化；
图4：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中Rg6和F4总量变化；
图5：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中15种稀有人参皂苷总量变化；
图6：100℃煎煮西洋参叶药渣和水中7种常见人参皂苷总量变化；
图7A和7B分别为115℃、120℃下药渣中15种稀有人参皂苷总量变化；
图8A和8B分别为125℃、130℃下药渣中15种稀有人参皂苷总量变化；
图9A和9B分别为135℃，140℃下药渣中15种稀有人参皂苷总量变化；
图10为145℃下药渣中15种稀有人参皂苷总量变化；
图11：115℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图12：120℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图13：125℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图14：130℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图15：135℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图16：140℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图17：145℃药渣中Rg3以及Rh2含量变化
图18A和18B分别为115℃、120℃下药渣中7种常见人参皂苷总量变化；
图19A和19B分别为125℃、130℃下药渣中7种常见人参皂苷总量变化；
图20A和20B分别为：135℃，140℃下药渣中7种常见人参皂苷总量变化；
图21为145℃下药渣中7种常见人参皂苷总量变化；
具体实施方式
以下结合实施例，对本发明作进一步说明。
高效液相色谱法测定常见人参皂苷含量：
色谱条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，柱温为25℃，流速1ml/min，检测波长203nm，进样量20μL。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～35 19.5 80.5
35～35.1 19.5→20 80.5→80
35.1～55 20 80
55～55.1 20→29 80→71
55.1～84 29→36 27→64
84～90 36 64
对照品溶液的制备：
取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3对照品、人参皂苷Rd对照品适量，精密称定，加甲醇制成如下浓度的混标溶液：
人参皂苷Rg1浓度为0.201mg/ml
人参皂苷Re浓度为0.205mg/ml
人参皂苷Rb1浓度为0.121mg/ml
人参皂苷Rc浓度为0.156mg/ml
人参皂苷Rb2浓度为0.174mg/ml
人参皂苷Rb3浓度为0.111mg/ml
人参皂苷Rd浓度为0.201mg/ml
供试品溶液的制备：
1、药渣
取供试品(人参叶药渣)3.0g，精密称定，甲醇回流提取两次，每次2小时，甲醇用量均为250ml，过滤，药渣弃去，滤液减压回收甲醇，残渣用甲醇溶解，定容至100ml容量瓶。
2、水液
取25ml水液，减压回收溶剂，残渣加甲醇溶解，定容到25ml容量瓶。
高效液相色谱法测定稀有人参皂苷含量：
色谱条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)为填充物(柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm)，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，柱温25℃，流速0.8ml/min，检测波长203nm，进样量20μL。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～10 29 71
10～25 29→40 71→60
25～50 40→60 60→40
50～60 60→73 40→27
60～75 73 27
对照品溶液的制备：
取人参皂苷(20)S-Rg2、人参皂苷(20)S-Rh1、(20)人参皂苷R-Rh1、人参皂苷Rg6、人参皂苷F4、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rh4、人参皂苷(20)S-Rg3、人参皂苷(20)R-Rg3、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rg5、人参皂苷(20)S-Rh2、人参皂苷(20)R-Rh2、人参皂苷Rk2、人参皂苷Rh3对照品适量，精密称定，加甲醇制成含如下浓度的混标溶液：
人参皂苷(20)S-Rg2浓度为0.2268mg/ml
人参皂苷(20)S-Rh1浓度为0.1792mg/ml
人参皂苷(20)R-Rh1浓度为0.1692mg/ml
人参皂苷Rg6浓度为0.1632mg/ml
人参皂苷F4浓度为0.1240mg/ml
人参皂苷Rk3浓度为0.1248mg/ml
人参皂苷Rh4浓度为0.1256mg/ml
人参皂苷(20)S-Rg3浓度为0.1296mg/ml
人参皂苷(20)R-Rg3浓度为0.0596mg/ml
人参皂苷Rk1浓度为0.1580mg/ml
人参皂苷Rg5浓度为0.1560mg/ml
人参皂苷(20)S-Rh2浓度为0.1388mg/ml
人参皂苷(20)R-Rh2浓度为0.1324mg/ml
人参皂苷Rk2浓度为0.1324mg/ml
人参皂苷Rh3浓度为0.0688mg/ml
供试品溶液的制备：
1、药渣
取供试品(人参叶药渣)3.0g，精密称定，甲醇回流提取两次，每次2小时，甲醇用量均为250ml，过滤，药渣弃去，滤液减压回收甲醇，残渣用甲醇溶解，定容至100ml容量瓶。
2、水液
取25ml水液，减压回收溶剂，残渣加甲醇溶解，定容到25ml容量瓶。
实施例1：常压下煎煮西洋参叶—水液和药渣中人参皂苷分布
以干燥西洋参叶为原料，称取1200g西洋参叶，粉碎，加入10倍量的水浸泡12小时，100℃(常压)加热回流提取，在0小时(浸泡12小时开始加热回流前)、开始加热后30min、60min、A(90min，刚开始沸腾)、沸腾后1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时、108小时、120小时、132小时、144小时、156小时、168小时、180小时、192小时、204小时、216小时、228小时、240小时、252小时取样，过滤，得水液和药渣，药渣烘干得干燥药渣。以15种稀有人参皂苷和7种常见人参皂苷为标准品，通过HPLC法分析水液和药渣中稀有人参皂苷和常见人参皂苷的含量。120g人参叶加热回流84小时获得干燥药渣66g，得离心水1910ml。
I、水液中稀有人参皂苷含量变化
表1 100℃常压回流西洋参叶252小时水液中常见人参皂苷含量变化(mg/ml，72小时之后均为0)
Figure DA00027079002859303
Figure BDA0002707900280000101
Figure BDA0002707900280000111
表2 100℃常压回流西洋参叶252小时药渣中常见人参皂苷含量变化(％，120小时后均为0)
Figure DA00027079002859375
Figure DA00027079002859435
通过上表可以看出，回流12小时以内，水液中常见人参皂苷的含量保持逐渐升高。但是12小时之后，常见人参皂苷含量明显下降，60小时后仅有1种常见人参皂苷检出，仅为0.04％，72小时后无常见人参皂苷检出。与其相应的西洋参叶药渣中常见人参皂苷也逐渐降低，132小时开始常见人参皂苷含量为0。
表3 100℃常压回流西洋参叶252小时水液中15种稀有人参皂苷的含量(mg/ml)
Figure BDA0002707900280000121
Figure BDA0002707900280000131
表4 100℃常压回流西洋参叶252小时药渣中15种稀有人参皂苷的含量(％)
Figure DA00027079002859533
Figure BDA0002707900280000141
Figure BDA0002707900280000151
通过上表可以看出，水液中稀有人参皂苷呈现一个由升到降的变化过程，24小时时含量达到最高，之后含量开始下降，60小时常见皂苷含量降至0.004％，72小时开始为0。与其相应的西洋参叶药渣中稀有人参皂苷则逐渐增加，84小时稀有人参皂苷含量达到8.7％，之后在这个值附近波动。
稀有人参皂苷Rg3和Rh2，在回流12小时之前，水液中的含量都是增高的，在48小时之后明显降低，至156小时之后含量很低，可以忽略不计。与之相对的是，药渣中Rg3和Rh2的含量逐渐升高，尤其是72小时之后，最高可以达到4.2％。
药渣中稀有人参皂苷中Rg3含量可以达到3.0％以上；Rg3和Rh2的总量可以达到4％以上，甚至4.2％；稀有人参皂苷中Rk1和Rg5总量可以达到2.0％以上。稀有人参皂苷中Rg5的含量可以达到1％以上。Rk1可以达到0.9％以上。
为了最大限度富集稀有人参皂苷、减少水液中稀有人参皂苷的含量、缩短制备时间，又以西洋参叶为原料，进行了高温高压煎煮实验。
实施例2：高温高压下煎煮西洋参叶—水液和药渣中人参皂苷分布
以西洋参叶为原料，称取西洋参叶，粉碎，加入水，高温高压煎煮，在设定时间点取样，离心，得水液和药渣，药渣烘干，得干燥药渣。利用HPLC分析水液和药渣中稀有人参皂苷和常见人参皂苷的含量。
温度分别设计为130℃、135℃、140℃，液料比设计为、10:1、15:1和20:1，煎煮时间设计为3,5,7小时，进行正交试验，筛选最佳制备工艺。
通过试验发现，高温高压煎煮获得的药渣中稀有人参皂苷的含量与100℃常压回流基本一致，但是高温高压具有煎煮时间更短的优点。
以下针对115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃和145℃，液料比设计为15:1下的实验数据进行整理和分析。
表5：115℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中7种常见人参皂苷含量(％)
Figure DA00027079002859616
表6：115℃高温高压煎煮西洋参叶水中7种常见人参皂苷含量(mg/ml，1h、3h和44小时三个时间点为例)
1h 3h 44h
Rg<sub>1</sub> 0.025 0.000 0.000
Re 0.157 0.000 0.000
Rb<sub>1</sub> 0.066 0.031 0.000
Rc 0.023 0.018 0.000
Rb<sub>2</sub> 0.103 0.032 0.000
Rb<sub>3</sub> 0.454 0.198 0.000
Rd 0.332 0.186 0.000
总量(mg/ml) 1.160 0.465 0.000
表7：115℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中15种稀有人参皂苷含量(％)
Figure BDA0002707900280000161
Figure BDA0002707900280000171
表8：115℃高温高压煎煮西洋参叶水液中15种稀有人参皂苷含量(mg/ml)
1h 3h 44h
S-Rg<sub>2</sub> 0.070 0.074 0.006
S-Rh<sub>1</sub> 0.127 0.107 0.011
R-Rh<sub>1</sub> 0.012 0.023 0.008
Rg<sub>6</sub> 0.017 0.021 0.001
F<sub>4</sub> 0.029 0.037 0.004
Rk<sub>3</sub> 0.006 0.007 0.002
Rh<sub>4</sub> 0.007 0.012 0.002
S-Rg<sub>3</sub> 0.121 0.189 0.009
R-Rg<sub>3</sub> 0.076 0.099 0.002
Rk<sub>1</sub> 0.043 0.076 0.004
Rg<sub>5</sub> 0.047 0.073 0.006
S-Rh<sub>2</sub> 0.012 0.021 0.001
R-Rh<sub>2</sub> 0.006 0.012 0.000
Rk<sub>2</sub> 0.003 0.007 0.000
Rh<sub>3</sub> 0.005 0.008 0.001
Rg<sub>3</sub>总量 0.197 0.288 0.011
Rh<sub>2</sub>总量 0.018 0.033 0.001
Rg<sub>3</sub>+Rh<sub>2</sub> 0.215 0.321 0.012
Rk<sub>1</sub>+Rg5 0.090 0.149 0.010
Rg<sub>6</sub>+F<sub>4</sub> 0.046 0.058 0.005
总量(mg/ml) 0.581 0.766 0.057
通过表5-表8可以看出，在115℃高温高压煎煮下，其常见人参皂苷情况与100℃煎煮相似，随着时间的进展，水中和药渣中的常见人参皂苷含量逐渐降低，直至检测不出含量。水中的稀有人参皂苷含量也逐渐降低，直至无法检测出来；；药渣中的稀有人参皂苷含量逐渐增加，达到最高值之和基本不发生大的改变。在此后的120℃、125℃、130℃、135℃、140℃和145℃观察到同样的趋势，只是随着温度的升高，时间不断缩短。
表9：130℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中15种稀有人参皂苷含量(％)
10min 30min 45min 6h 8h 10h 12h 16h 20h 24h
S-Rg<sub>2</sub> 0.130 0.223 0.195 0.151 0.106 0.079 0.059 0.043 0.033 0.025
S-Rh<sub>1</sub> 0.170 0.248 0.200 0.251 0.217 0.177 0.142 0.107 0.086 0.072
R-Rh<sub>1</sub> 0.022 0.029 0.044 0.098 0.153 0.145 0.143 0.128 0.119 0.113
Rg<sub>6</sub> 0.039 0.066 0.064 0.118 0.099 0.096 0.084 0.068 0.050 0.038
F<sub>4</sub> 0.083 0.140 0.127 0.352 0.358 0.340 0.309 0.272 0.232 0.184
Rk<sub>3</sub> 0.020 0.025 0.021 0.106 0.134 0.146 0.162 0.173 0.195 0.199
Rh<sub>4</sub> 0.021 0.032 0.029 0.148 0.194 0.226 0.249 0.298 0.351 0.357
S-Rg<sub>3</sub> 0.244 0.545 0.548 1.509 1.494 1.413 1.350 1.271 1.193 1.068
R-Rg<sub>3</sub> 0.169 0.378 0.600 1.295 1.330 1.363 1.419 1.524 1.668 1.699
Rk<sub>1</sub> 0.112 0.247 0.237 0.846 0.904 0.928 0.911 1.009 1.069 1.065
Rg<sub>5</sub> 0.225 0.391 0.366 1.208 1.304 1.367 1.345 1.558 1.714 1.729
S-Rh<sub>2</sub> 0.052 0.093 0.098 0.319 0.327 0.324 0.306 0.321 0.318 0.300
R-Rh<sub>2</sub> 0.041 0.076 0.124 0.283 0.293 0.300 0.300 0.329 0.349 0.358
Rk<sub>2</sub> 0.007 0.021 0.023 0.139 0.148 0.153 0.139 0.157 0.162 0.164
Rh<sub>3</sub> 0.031 0.056 0.056 0.223 0.243 0.256 0.254 0.298 0.334 0.345
Rg<sub>3</sub>总量 0.413 0.923 1.148 2.804 2.824 2.776 2.769 2.795 2.861 2.767
Rh<sub>2</sub>总量 0.093 0.169 0.222 0.602 0.620 0.624 0.606 0.650 0.667 0.658
Rg<sub>3</sub>+Rh<sub>2</sub> 0.506 1.092 1.370 3.406 3.444 3.400 3.375 3.445 3.528 3.425
Rk<sub>1</sub>+Rg<sub>5</sub> 0.337 0.638 0.603 2.054 2.208 2.295 2.256 2.567 2.783 2.794
Rg<sub>6</sub>+F<sub>4</sub> 0.122 0.206 0.191 0.470 0.457 0.436 0.393 0.340 0.282 0.222
总量(％) 1.366 2.570 2.732 7.046 7.304 7.313 7.172 7.556 7.873 7.716
表10：140℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中15种稀有人参皂苷含量(％)
Figure BDA0002707900280000181
Figure BDA0002707900280000191
表11 145℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中15种稀有人参皂苷含量(％)
Figure BDA0002707900280000192
Figure BDA0002707900280000201
表12 130℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中7种常见人参皂苷含量(％)
10min 30min 45min 6h 8h 10h 12h 16h 20h 24h
Rg<sub>1</sub> 0.015 0.008 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Re 0.100 0.055 0.020 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>1</sub> 0.030 0.027 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rc 0.034 0.050 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>2</sub> 0.121 0.100 0.041 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>3</sub> 0.546 0.504 0.236 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rd 0.405 0.435 0.268 0.019 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
总量(％) 1.251 1.179 0.565 0.019 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
表13 135℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中7种常见人参皂苷含量(％)
0min 10min 20min 30min 45min 1h 2h 3h 4h 5h 6h 7h 8h
Rg<sub>1</sub> 0.017 0.009 0.000 0.000 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Re 0.122 0.068 0.023 0.000 0.000 0.015 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>1</sub> 0.039 0.026 0.010 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rc 0.057 0.035 0.013 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>2</sub> 0.167 0.106 0.040 0.018 0.007 0.023 0.009 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>3</sub> 0.737 0.493 0.212 0.103 0.048 0.120 0.028 0.008 0.008 0.000 0.000 0.000 0.000
Rd 0.530 0.412 0.251 0.163 0.100 0.205 0.076 0.015 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
总量(％) 1.669 1.149 0.549 0.284 0.155 0.366 0.113 0.023 0.008 0.000 0.000 0.000 0.000
表14 140℃高温高压煎煮西洋参叶药渣中7种常见人参皂苷含量(％)
0min 10min 20min 30min 45min 3h 4h 5h 6h 8h 10h
Rg<sub>1</sub> 0.006 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Re 0.039 0.015 0.007 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>1</sub> 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rc 0.026 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>2</sub> 0.053 0.024 0.009 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rb<sub>3</sub> 0.286 0.137 0.065 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
Rd 0.285 0.183 0.119 0.072 0.029 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
总量(％) 0.695 0.361 0.200 0.072 0.029 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
通过表9-表14可以看出，在药渣中不包含常见人参皂苷，其含量为0；在药渣中富集了稀有人参皂苷，其含量逐渐上升。
在140℃条件下，药渣中稀有人参皂苷的总量达到最大值，可以达到8％以上，其最佳煎煮时间分别为3小时或以上。
实施例3：降低水中稀有人参皂苷含量的实验条件筛选
考察了煎煮结束后立即离心与次日离心，以及提前浸泡与否对水中Rg3含量的影响。
结果表明，当日立即趁热离心优于次日离心，水中Rg3含量降低，药渣中的Rg3含量升高，其差值在0.3％左右，差异较大。
西洋参叶提前浸泡，优选提前浸泡4小时、5小时、6小时、7小时或8小时及以上，水中稀有人参皂苷含量降低，药渣中的稀有人参皂苷含量升高。
实施例4：从药渣中制备提取物
取一定量西洋参叶浸泡一夜，液料比设定为15:1，高温高压煎煮，过滤，弃去水液，得到药渣，药渣干燥，得干燥药渣。取干燥药渣200g，乙醇回流提取，减压回收乙醇，真空干燥，获得提取物。利用HPLC法测定提取物中稀有人参皂苷的含量。
药渣产率＝药渣重量/西洋参叶重量×100％
提取物产率＝提取物重量/药渣重量×100％
表15：煎煮获得药渣和提取物质量
煎煮温度(℃) 煎煮时间(h) 西洋参叶重量(g) 药渣重量(g) 药渣产率(％) 提取物重量(g) 提取物产率(％)
145 2 500 269 53.79 76 28.25
140 3 1000 593 59.30 109.1 18.39
135 5 1000 587.6 58.76 116.5 19.83
130 8 1000 562.1 56.21 155.5 27.67
125 8 1000 567.5 56.75 92.7 16.34
120 20 1000 609 60.90 93.3 15.32
115 44 500 275.3 55.05 74.5 27.07
表16：提取物中稀有人参皂苷的含量(％)：
Figure BDA0002707900280000211
Figure BDA0002707900280000221
由此可见，提取物的稀有人参皂苷的含量均可以达到25％以上，这是令人惊讶的。且在120℃至140℃时，其含量可以达到30％以上，Rg3的总量可以达到9％以上，甚至10％、12％、14％或16％以上；Rk1+Rg5的总量达到6％以上，甚至达到8％以上。
实施例5：鲜西洋参叶高温高压煎煮实验
以鲜西洋参叶为原料，100℃加热回流或高温高压煎煮，获得的实验结果两者相似。水液和药渣中的常见人参皂苷含量逐渐降低，而药渣中的稀有人参皂苷含量逐渐升高。只是鲜西洋参叶煎煮出来的药渣中稀有人参皂苷的含量明显偏低。
实施例6：不同比例稀有人参皂苷类成分对于癌细胞的抑制作用
在96孔板中接种A549人肺癌细胞悬液100μL，接种密度为8000个/孔。将96孔细胞培养板置于细胞培养箱中(培养条件37℃，5％CO2)培养24h。不同比例稀有人参皂苷类组分和提取物用DMSO配制成高浓度储备液。在细胞处于对数生长情况下，用储备液配制适当浓度梯度样本，将不同浓度的24组待测样本与细胞共培养24h。检测细胞活性时，弃去96孔板各组细胞上清液，配制含10％CCK-8检测试剂的培养基，向每反应孔加入100μL，并将培养板放于培养箱孵育1h左右。用酶标仪测定450nm处吸光度。样本对A549肿瘤细胞IC50值如表17所示。
在96孔板中接种DLD1人结肠癌细胞悬液100μL，接种密度为8000个/孔。将96孔细胞培养板置于细胞培养箱中(培养条件37℃，5％CO2)培养24h。不同比例稀有人参皂苷类组分和提取物用DMSO配制成高浓度储备液。在细胞处于对数生长情况下，用储备液配制适当浓度梯度样本，将不同浓度的24组待测样本与细胞共培养24h。检测细胞活性时，弃去96孔板各组细胞上清液，配制含10％CCK-8检测试剂的培养基，向每反应孔加入100μL，并将培养板放于培养箱孵育1h左右。用酶标仪测定450nm处吸光度。样本对DLD1肿瘤细胞IC50值如表17所示。
在96孔板中接种U251人胶质瘤细胞悬液100μL，接种密度为8000个/孔。将96孔细胞培养板置于细胞培养箱中(培养条件37℃，5％CO2)培养24h。不同比例稀有人参皂苷类组分和提取物用DMSO配制成高浓度储备液。在细胞处于对数生长情况下，用储备液配制适当浓度梯度样本，将不同浓度的24组待测样本与细胞共培养24h。检测细胞活性时，弃去96孔板各组细胞上清液，配制含10％CCK-8检测试剂的培养基，向每反应孔加入100μL，并将培养板放于培养箱孵育1h左右。用酶标仪测定450nm处吸光度。24组样本对U251肿瘤细胞IC50值如表17所示。
表17不同比例稀有人参皂苷类成分对于癌细胞的抑制作用
(IC<sub>50</sub>,μg/mL) A549 DLD1 U251
Rg<sub>5</sub> 116.30 236.18 108.96
Rg<sub>3</sub> 216.23 169.36 90.65
F<sub>4</sub> 135.62 265.58 186.42
Rh<sub>2</sub> 105.85 296.81 189.78
Rh<sub>4</sub> 302.63 198.28 109.49
Rk<sub>3</sub> 264.15 >500 199.35
Rg<sub>5</sub>:Rg<sub>3</sub>＝10:1 47.26 51.62 46.95
Rg<sub>5</sub>:Rg<sub>3</sub>＝1:10 60.14 43.59 31.29
F<sub>4</sub>:Rh<sub>2</sub>＝1:10 32.43 38.42 28.72
F<sub>4</sub>:Rh<sub>2</sub>＝1:1 79.23 90.36 80.22
F<sub>4</sub>:Rh＝＝10:1 51.79 60.19 70.31
Rh<sub>2</sub>:Rg<sub>5</sub>＝15:1 51.33 50.13 47.83
Rh<sub>2</sub>:Rg<sub>5</sub>＝1:10 69.5 56.34 73.45
135℃提取物 91.11 139.75 122.19
通过筛选试验，筛选出了不同稀有人参皂苷组合中对癌细胞抑制活性较好的组合，其对于三种癌细胞均显示出协同的抗肿瘤活性。
以上描述是本发明的一般性描述。根据情况或实际需要，可进行形式的变化和等值的替代，虽然本文采用特定的术语，但这些术语意在描述，而不是为了限制的目的。本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围之内。

Claims (10)

1.一种组合物，该组合物中包括稀有人参皂苷，其包含以下任一项所述的组合物：
Rg3和Rg5的组合物，其重量比为(1-20)：(1-20)，优选的为(1-10)：(1-10)、(5-9)：(2-5)、或(7-10)：(3-6)；
F4和Rh2的组合物，其重量比为(1-10)：(1-10)，优选的为(5-9)：(4-9)、或(2-5)：(5-7)；
Rh2和Rg5的组合物，其重量比为(1-10)：(1-10)，优选的为(2-5)：(3-6)、或(1-3)：(6-9)。
2.一种包含权利要求1所述组合物的西洋参叶产品。
3.如权利要求2所述的西洋参叶产品，其特征在于为以西洋参叶为原料制备的药渣或提取物。
4.一种制备高含量稀有人参皂苷产品的方法，其特征在于，其制备方法为A或B：
A：将西洋参叶干燥粉碎，加入适量水，在常压下加热回流48小时以上，优选的为60小时、72小时、84小时、96小时或108小时以上；更优选的为90小时；过滤，将药渣干燥，得到所需产品；
B：将西洋参叶干燥粉碎，加入适量水，高温高压下煎煮2小时或4小时以上，优选的为6小时以上、8小时以上、10小时以上、12小时以上、14小时以上、16小时以上、18小时以上、20小时以上、22小时以上、24小时以上、28小时以上、30小时以上、32小时以上、34小时以上、36小时以上、38小时以上、40小时以上、42小时以上、44小时以上、48小时以上或者50小时以上，过滤，药渣干燥，得到所需产品；所述高温高压为100℃以上，优选的为不低于110℃、115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃、145℃或150℃。
5.如权利要求4中的制备方法，其特征在于：
在制备方法A中，液料比可以为(30-5):1，优选的为(25-8):1，更优选的为(20-9):1或(15-10):1，优选为10:1。
在制备方法B中，液料比可以为(30-5):1，优选的为(25-6):1，更优选的为(20-7):1或(18-10):1，优选为15:1。
6.如权利要求4或5中的制备方法，其特征在于：任选的对药渣进一步地用有机溶剂或含水有机溶剂提取，得到具有高含量稀有人参皂苷的提取物。
7.如权利要求4-6任一项中的制备方法，其特征在于：
提取物或药渣中含有15种稀有人参皂苷，具体的可以为20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3，基本不含常见人参皂苷，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd；
药渣中稀有人参皂苷的总含量高于5％、6％、7％、或8％，常见人参皂苷总含量低于1％；
提取物中稀有人参皂苷的总含量不低于15％、20％、25％、30％或35％，常见人参皂苷的总含量低于10％，优选的低于8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。
8.一种以西洋参叶为原料制备的产品，包含高含量的稀有人参皂苷，基本不含有常规人参皂苷；其中稀有人参皂苷包括：20(S)-Rg2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rg6、F4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3，常见人参皂苷包括Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd。
9.如权利要求8所述的以西洋参叶为原料制备的产品，稀有人参皂苷的总含量高于5％，常见人参皂苷总含量低于1％。
10.权利要求1-3和8-9中任一项所述的产品或组合物在制备抗肿瘤产品中的应用。
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