CN107823235B - 一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 - Google Patents
一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107823235B CN107823235B CN201711113589.6A CN201711113589A CN107823235B CN 107823235 B CN107823235 B CN 107823235B CN 201711113589 A CN201711113589 A CN 201711113589A CN 107823235 B CN107823235 B CN 107823235B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginseng
- solid fermentation
- fermentation
- pseudo
- ginsenoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,人参、西洋参和三七通过裂褶菌的发酵和生物转化,不但使这3种药材中的人参皂苷转化成了稀有人参皂苷,而且其木质纤维素也被裂褶菌分解利用,产生了大量的裂褶菌多糖等生物活性物质,显著地提高了人参、西洋参和三七的功效;解决了人参、西洋参和三七的传统加工品中人参稀有皂苷含量低、生物利用率低等缺点。
Description
技术领域
本发明涉及一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,涉及利用裂褶菌固体发酵人参、西洋参和三七的加工方法,属于食药用真菌固体发酵技术领域。
背景技术
人参、西洋参和三七是目前世界上最受欢迎的中草药,在我国有悠久的药用和滋补保健历史,具有极高的药用价值和经济价值。作为中药的代表性滋补药物,目前这3种中草药在我国以及东南亚和欧美等经济发达的国家和地区的需求量在逐年增加。我国是这3种中药材的生产和出口大国,近年来,我国人参的年产量约为1-2万吨(占世界80%),西洋参约为0.2万吨(占世界30%),三七约为2-3万吨(全部产于中国)。然而长期以来,我国人参、西洋参和三七对外出口主要以原料为主,缺少具有自主知识产权的新产品和市场的深度开发,人参深加工制品高端市场主要被日本、韩国和欧洲所占有。因而加快人参、西洋参和三七产品的开发与利用,对其产业的发展具有重大的意义。
人参皂苷是人参、西洋参和三七的主要活性成分,主要包括人参二醇型皂苷(人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rc和 -Rd)和人参三醇型皂苷(人参皂苷-Re 和 -Rg1)。人参皂苷的代谢研究表明,人参皂苷经口服后,在消化系统酶和肠道微生物的作用下转化为人参稀有皂苷后,被吸收起到药效。Odani等报道了人参皂苷Rb1、Rb2、Rg1在肠道中的直接吸收率非常低,分别为0.1%、3.7%、1.9%。采用放射性同位素标识人参皂苷,结果在血清中测定出3倍以上的放射活性,这说明人参皂苷主要是以代谢物的形式吸收进入血液。冯亮等研究了人参皂苷Rg1大鼠口服代谢实验, 结果人参皂苷Rg1在体内的消除速率和分布均较快, 生物利用度仅为10.82%;但其经肠道菌降解掉的代谢产物被吸收进血液后, 消除速率相对缓慢;Kobashi等发现了人参皂苷Rb1和Rg1口服后, 经消化系统的微生物转化为稀有人参皂苷后被人体吸收。其主要代谢途径为Rb1→Rd→F2→C-K→苷元; Rg1→Rh1(或F1)→苷元。以后又相继发现原人参二醇类皂苷Rb2、Rc等口服后被肠道菌水解为F2、C-K 等。由此可见,人参皂苷很难被胃肠道直接吸收, 生物利用率低, 但人参皂苷经过肠道菌代谢去糖基化后生成的人参稀有皂苷吸收率大大增加。最新药理学研究表明,稀有人参皂苷,如人参皂苷Rg3、F2、compoundK、Rh2、Rh3 等,展示出了更好的抗癌、抗糖尿病、抗氧化和提高免疫力等药理活性。这些稀有人参皂苷才是人参真正发挥药效的物质,但其在人参中微量存在或不存在。
人参、西洋参和三七中有效成分通常包裹在细胞壁内,这些植物的细胞壁是由纤维素、半纤维素、木质素、果胶质等物质构成的致密结构。在其有效成分提取时,存在于植物细胞内的有效成分向提取溶剂扩散时,须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力;因此人参有效成分的提取率和利用率较低。另外,人参、西洋参和三七的有效成分主要集中在表皮和韧皮部,其木质部主要由木质纤维素组成,其有效成分含量较少,重量约为人参的一半;然而人参木质部几乎不能被利用。
食药用菌是一种重要的生物资源,其种源十分丰富,在我国被用于食品和药品已有上千年的历史。食药用菌在发酵过程中可分泌蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶等几十种胞外酶进入培养基,这些酶有的可水解植物细胞壁的纤维素、半纤维素、果胶质等,致使植物细胞破裂,有利于有效成分溶出,有的可以将人参有效成分分解转化成新的化合物。另外,食药用菌在发酵过程中常产生多种代谢产物,如:多糖、多肽、生物碱、萜类、酚类、甾醇、酶、核酸、氨基酸、维生素等,这些物质具有抗炎、抗菌、抗癌、抗衰老、抗溃疡、提高免疫力及防辐射等医疗保健功效。食药用菌的营养和药用价值对人类的健康是有益的、安全的。
目前已经有使用食药用真菌与人参进行双向固体发酵的报道,Hsu等研究了使用灵芝发酵人参提取后的残渣,结果表明人参皂苷Rb1,Rc和Rb2被大量的转化生成了Rd,而生成稀有皂苷的量是非常少的。申请号为201010176053.0和201010176115.8的中国专利文献公开了一种使用灵芝与人参进行双向固体发酵的方法及其药物制剂、药物组合物和食品组合物,结果表明最终的发酵产物中人参皂苷变化较小,且无稀有皂苷被检出。然而由于这些方法不能将人参的主要有效成分人参皂苷转化成稀有皂苷,因此不能明显的提高人参的药用价值。如能从食药用菌中筛选出既可以双向固体发酵人参,又能高效生物转化人参皂苷生成稀有皂苷的菌种,开发出可以食用或药用的人参新产品,是研制具有自主知识产权的人参新产品的有效途径。
发明内容
本发明公开一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,人参、西洋参和三七通过裂褶菌的发酵和生物转化,不但使这3种药材中的人参皂苷转化成了稀有人参皂苷,而且其木质纤维素也被裂褶菌分解利用,产生了大量的裂褶菌多糖等生物活性物质,显著地提高了人参、西洋参和三七的功效;解决了人参、西洋参和三七的传统加工品中人参稀有皂苷含量低、生物利用率低等缺点。
本发明所述的裂褶菌种为本领域常用的裂褶菌,如可以是购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的CGMCC No. 5.396。
本发明的技术解决方案包括以下步骤:
以人参、西洋参和三七分别作为固体发酵基质,灭菌后将培养好的裂褶菌发酵菌种按10% 的接种量接种到固体发酵培养基中,在20-32℃条件下避光培养10-30 天;发酵后的发酵产品于40-60℃下烘干即得。
优选的,所述双向固体发酵的温度为24-28℃。
优选的,所述双向固体发酵的时间为20-30天。
优选的,人参作为固体发酵基质,其含水量为40%-80%。
优选的,所述扩大培养的方法为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
优选的,所述人参为鲜人参、生晒参、红参或林下人参。即可用整根人参作为发酵基质,也可以用人参切片或粉末作为发酵基质。
本发明中,种子液获得过程可如下:
(a)菌种活化:将裂褶菌菌种接种于PDA斜面培养基,在22~26℃恒温培养7d,置4℃冰箱备用;PDA斜面培养基组成如下:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,琼脂20g/L,余量为自来水,pH自然,121℃灭菌20~30min ;
(b)种子培养:将活化的斜面菌丝体接入种子培养液,在24~28℃、150r/min下振荡培养5~7d,得种子液;种子培养液组成如下:葡萄糖30g/L,酵母浸膏3g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁0.5g/L,余量为自来水,pH自然,121℃灭菌20~30min。
本发明产品及其提取物可以制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或口服液等药物学上的任何剂型,用于治疗癌症,肿瘤,糖尿病,高血脂症,心肌或脑缺血,机体免疫功能受损,以及消化系统等疾病。
本发明的积极效果在于:
采用裂褶菌对人参、西洋参和三七进行了双向固体发酵,在发酵过程中,人参、西洋参和三七为裂褶菌提供其生长必需的营养物质;而裂褶菌在生长过程中分泌的酶不但降解人参皂苷生成大量稀有皂苷,同时还降解了其木质纤维素和细胞壁,产生了大量的裂褶菌多糖等生物活性物质,最大限度地提高了人参、西洋参和三七的保健和药用功效。达到简单、高效、低成本的加工目的,为研制具有自主知识产权的人参、西洋参和三七新产品提供方法保证;解决了人参、西洋参和三七的传统加工品中人参稀有皂苷含量低、生物利用率低等缺点。
附图说明
图1:人参样品中人参皂苷的HPLC色谱图;
图2:人参固体发酵物中人参皂苷的HPLC色谱图;
图3:人参发酵物中可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量;
图4:西洋参样品中人参皂苷的HPLC色谱图;
图5:西洋参固体发酵物中人参皂苷的HPLC色谱图;
图6:西洋参发酵物中可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量;
图7:三七样品中人参皂苷的HPLC色谱图;
图8:三七固体发酵物中人参皂苷的HPLC色谱图;
图9:三七发酵物中可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量;
图10:人参固体发酵物;
图11:不同发酵时间对人参固体发酵产物提取率的影响;
图12:人参固体发酵过程中糖类成分的含量变化;
图13:人参固体发酵过程中蛋白质和脂溶性成分的含量变化。
具体实施方式
通过以下实施例进一步举例描述本发明,并不以任何方式限制本发明,在不背离本发明的技术解决方案的前提下,对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
以整根鲜人参作为固体发酵基质,鲜人参含水量为40%,121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按10%的接种量接种到固体发酵培养基中,在25℃条件下避光培养20天;发酵后的发酵产品于40℃下烘干即得。发酵产物中原有的人参皂苷发生了降解,生成了大量的人参稀有皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5、Rk1、F2、compound K、compound O、compoundY、compound Mc1、compound Mc、 C-Mx1和C-Mx(见图1和2);同时发酵物中的可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量均明显增加(见图3)。
实施例2
以林下人参粉末作为固体发酵基质,加入适量的水,使其含水量为60%,121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按15%的接种量接种到固体发酵培养基中,在28℃条件下避光培养10天;发酵后的发酵产品于50℃下烘干即得。
实施例3
以整根鲜西洋参作为固体发酵基质,西洋参含水量为50%,121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按20%的接种量接种到固体发酵培养基中,在30℃条件下避光培养25天;发酵后的发酵产品于60℃下烘干即得。发酵产物中原有的人参皂苷发生了降解,生成了大量的人参稀有皂苷F2和compound K(见图4和5);同时发酵物中的可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量均明显增加(见图6)。
实施例4
以西洋参粉末作为固体发酵基质,加入适量的水,使其含水量为80%,121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按25%的接种量接种到固体发酵培养基中,在32℃条件下避光培养15天;发酵后的发酵产品于30℃下烘干即得。
实施例5
以整根鲜三七作为固体发酵基质,三七含水量为65%,121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按30%的接种量接种到固体发酵培养基中,在35℃条件下避光培养30天;发酵后的发酵产品于45℃下烘干即得。发酵产物中原有的人参皂苷发生了降解,生成了大量的人参稀有皂苷F2和compound K(见图7和8);同时发酵物中的可溶性总糖、蛋白质、脂溶性成分、总皂苷和总提取物的含量均明显增加(见图9)。
实施例6
以三七粉末作为固体发酵基质,加入适量的水,使其含水量为100%, 121℃灭菌30min后,将培养好的裂褶菌发酵菌种按40%的接种量接种到固体发酵培养基中,在20℃条件下避光培养60天;发酵后的发酵产品于55℃下烘干即得。
为了进一步说明本发明方法中人参双向固体发酵的最佳条件和化学成分变化,以下采用高效液相色谱法对人参固体发酵产物中皂苷的转化过程和转化产物进行了定量分析实验。
1 实验材料和试剂
鲜人参采自靖宇县,经吉林农业大学中药材学院郑毅男教授鉴定。色谱级乙腈(美国Fisher公司),其他试剂为分析纯。人参皂苷标准品F2、compound K、compound O、compound Y、compound Mc1、compound Mc、C-Mx1和C-Mx(为自制,经IR、MS、NMR鉴定, HPLC测定其纯度在99 %以上);人参皂苷 Rb1、Rb2、Rc、Rd、20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rk1标准品(中国药品生物制品检验所)。
2 实验方法
2.1菌种的采集与分离
裂褶菌采集于长春市净月潭国家公园,将裂褶菌子实体先用自来水冲洗表面的泥土,再用无菌水漂洗后于无水乙醇中浸泡3分钟,取出用无菌水漂洗,放入1%升汞浸泡3分钟,无菌水漂洗干净后,按无菌操作取一块子实体的组织块移入PDA培养基斜面中央,25℃下培养箱中培养7天左右,当菌丝布满斜面,挑选长势好的斜面进行转管纯化,纯化后的菌种留作母种放入冰箱中进行储存,同时经子实体复栽试验确认无误。
2.2培养方法
菌种的活化:取储藏于冰箱中的菌种,按无菌操作要求转接至PDA斜面培养基上,25℃培养7天,然后再转接于PDA平板培养基上,25℃下培养,待菌丝长满平板后储藏备用。
固态发酵培养基:鲜人参碎块或整根鲜人参
发酵培养:鲜人参碎块或整根人参经121℃灭菌30min作为培养基质,接种量为每10g鲜人参重接3块直径为1cm菌种,25℃下恒温培养10-30天。
2.3人参固体发酵条件的优化
2.3.1温度对人参固体发酵的影响
在相同接种量的前提条件下,以菌丝的生长情况和发酵物的总提取率为指标,考察不同温度(22℃,25℃,28℃和31℃)对人参固体发酵的影响。
2.3.2基质含水量对人参固体发酵的影响
将鲜人参在40℃下烘干,分别加入一定比例的水,使人参的含水量分别达到20%、40%、60%和80%,在相同接种量的前提条件下,以菌丝的生长情况和发酵物的总提取率为指标,考察基质不同含水量对人参固体发酵的影响。
2.3.3发酵时间的影响
在相同接种量的前提条件下,以菌丝的生长情况和发酵物的总提取率为指标,考察不同时间(5d,10d,15d,20d,25d和30d)对人参固体发酵的影响。
2.4 人参固体发酵物中人参皂苷的HPLC检测方法
色谱柱:Kromasil 5C18(5μm,250mm×4.6mm );流动相:乙腈(A)-水(B);0-20min, 22%(A),78%(B);22-25min,22%-30%(A), 78%-70%(B); 25-45min, 30%-46%(A),70%-54%(B); 45-55min, 46%-64%(A), 54%-36%(B); 55-70min, 64%-66%(A), 36%-34%(B);70-90min, 66%-100%(A), 34%-0%(B)。柱温:25℃;检测波长:203nm;流速:1ml/min;进样量:20μl,所有组分均在90min内出完。
2.5 人参固体发酵物中还原糖的检测方法
3,5-二硝基水杨酸试剂的配制:将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH溶液,加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g亚硫酸钠和5g结晶酚,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容于1000ml,贮于棕色瓶中备用。
葡萄糖标准溶液(1mg/ml)的配置:精密秤取100mg分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水定容于100mL容量瓶中,摇匀,冰箱保存备用。
葡萄糖标准曲线的制作:取7支试管,配置不同浓度梯度的葡萄糖标准溶液,分别加入1.5mL的3,5-二硝基水杨酸试剂,混匀后,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即冷却至室温,用蒸馏水定容于25ml容量瓶中,摇匀,在540nm波长下比色法测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,葡萄糖的质量为横坐标,绘制标准曲线。以相同方法测定样品光密度值,查标准曲线,计算还原糖含量。
2.6 人参固体发酵物中可溶性总糖的检测方法
蒽酮试剂的配置:取0.1g蒽酮,溶于100ml80%硫酸中,现配现用。
蔗糖标准溶液的配置:准确称取100mg蔗糖,用蒸馏水定容于100ml容量瓶中,使用前稀释10倍。
标准曲线的制作:取6只试管,配置不同浓度梯度的蔗糖标准溶液,分别加入5mL的蒽酮试剂,混匀后,在沸水浴中加热5分钟,冷却,在620nm波长下比色法测定吸光度值,以蔗糖含量作为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。以相同方法测定样品光密度值,查标准曲线,计算可溶性总糖含量。
2.7 人参固体发酵物中蛋白质的检测方法
考马斯亮蓝G250溶液的配制:秤取CBB-G250 100mg溶于50ml 95%的乙醇溶液中,然后加入100ml 85%的磷酸,最后加蒸馏水定容至1000ml。
标准蛋白质溶液(1mg/mL)的配制:精确秤取100mg牛血清蛋白,用0.9%氯化钠定容于100mL容量瓶中,摇匀备用。
取6只试管,配置不同浓度梯度的蛋白质标准溶液,分别加入5mL的CBB-G250溶液,混匀,放置2min,于595nm处比色,记录光密度值(OD值)。以蛋白质含量为横坐标,光密度值(OD值)为纵坐标,绘制标准曲线。以相同方法测定样品光密度值,查标准曲线,计算蛋白质含量。
3 实验结果
3.1人参固体发酵条件的优化
3.1.1温度对人参固体发酵的影响
通常情况下,真菌可以在一定的温度范围内正常生长,然而当使用药用植物作为培养基时,由于药用植物中存在一些抑制真菌生长的物质,导致真菌生长的不适。因而以菌丝的生长情况和发酵物的总提取率为指标,考察不同温度(22℃,25℃,28℃和31℃)对人参固体发酵的影响,有利于发酵条件的进一步优化。结果见表1, 25℃时菌株长势最好,菌丝洁白而浓密,仅用10天就可以长满整根人参,80%乙醇超声提取的发酵物总提取率可达35.6%。
表1不同温度对人参固体发酵的影响
温度℃ | 长满天数(d) | 长势 | 菌丝外观 | 提取率(%) |
22 | 15 | + | 淡黄稀疏 | 28.9 |
25 | 10 | +++ | 洁白浓密 | 35.6 |
28 | 11 | +++ | 白色密集 | 33.3 |
31 | 13 | ++ | 淡黄密集 | 31.5 |
注:“+”表示菌丝长势一般,“++”表示菌丝长势较强,“+++”表示菌丝长势强
3.1.2基质含水量对人参固体发酵的影响
基质的含水量对真菌尤其是食药用菌的生长影响较大,含水量偏高,导致基质内气体交换受阻碍,而含水量低,菌体生长及蒸发造成基质较干,则造成菌体生长受到抑制,影响正常发酵及产物质量。我们通过人参基质的不同含水量(20%、40%、60%和80%)对菌丝的生长情况和发酵物的总提取率的研究,考察了基质不同含水量对人参固体发酵的影响。结果见表2, 结果表明人参基质含水量在60%时菌株长势最好,菌丝洁白而浓密,仅用9天就可以长满整根人参,发酵物总提取率可达36.8%。
表2不同含水量对人参固体发酵的影响
含水量(%) | 长满天数(d) | 长势 | 菌丝外观 | 提取率(%) |
20 | 18 | + | 淡黄稀疏 | 28.6 |
40 | 12 | ++ | 淡黄密集 | 32.1 |
60 | 9 | +++ | 洁白浓密 | 36.8 |
80 | 11 | +++ | 白色密集 | 34.5 |
注:“+”表示菌丝长势一般,“++”表示菌丝长势较强,“+++”表示菌丝长势强
3.1.3发酵时间的影响
真菌发酵都有最佳的时间阶段,时间过短,发酵不完全,不能获得所需的目的产物; 而时间过长,由于营养成分匮乏,不利于菌体生长,往往造成菌体自溶。我们除了把菌体的生长情况作为发酵终点的考察指标以外,还引进了发酵物的总提取率作为评价指标,因为人参中木质纤维素占人参重的40-60%左右,一般情况下,人参的总提取率仅有25%左右,食药用菌属于大型真菌,具有很强的利用木质纤维素的能力,因而发酵物的总提取率可以反映出菌株对发酵基质的利用情况。
试验结果表明,以人参作为培养基质的条件下,裂褶菌的生长明显分为四个时期,适应期为接种1-5天,菌丝开始在人参上生长,白色、疏松。生长期为6-15天,菌体迅速生长,至第10天左右菌丝长满整个人参表面,此时菌丝已深入到人参木质部,菌丝洁白而浓密,说明菌体代谢旺盛,但发酵产物的总提取率不高。稳定期为16-30天,随着菌体迅速生长,人参的营养物质被大量消耗,此时菌丝布满整个培养体,发酵产物总提取率不断增加,且达到了最高值。衰老期为30天以后,此时人参中的营养成分耗损巨大,菌体不在生长,菌丝发黄且有自溶现象发生,发酵产物总提取率不再增加。另外发酵物终点的判断还得需要参考化学成分的分析。综合多种指标,最终确定发酵30d为最佳发酵时间,收获时人参已完全被菌丝包裹,色泽洁白,带有菌体本身具有的淡淡香味,比重小,形成菌参一体(图10-11)。
3.2人参固体发酵化学成分变化的研究
3.2.1人参固体发酵过程中人参皂苷化学成分的变化
采用了HPLC法对发酵不同时间的发酵物进行了含量测定,结果发酵10天后人参皂苷转化量较少;发酵20天后,人参皂苷Rb1已经完全转化,Rb2和Rc的转化量仍较少,而人参皂苷Rd的含量最高,同时人参稀有皂苷F2、compound K、compound O、compound Y、compoundMc1、compound Mc的含量在不断的增加。发酵30天,Rb2和Rc也几乎被转化掉,此时人参稀有皂苷的含量达到了最高值(表3)。根据人参皂苷的结构我们可以推断出其可能的转化途径为:Rbl→ Rd → F2 → C-K,Rb2→ C-O→C-Y,Rc→ C-Mc1→C-Mc,Rd → F2 → C-K。
表3 人参固体发酵物中人参皂苷的含量
发酵10d | 发酵20d | 发酵30d | |
Rb<sub>1</sub> | 0 | 0 | 0 |
Rc | 0.167 | 0.102 | 0.037 |
Rb<sub>2</sub> | 0.186 | 0.128 | 0.063 |
Rd | 0.445 | 0.308 | 0.212 |
C-Mc1 | 0.044 | 0.082 | 0.148 |
C-O | 0.042 | 0.075 | 0.132 |
F<sub>2</sub> | 0.106 | 0.103 | 0.084 |
20S-Rg<sub>3</sub> | 0.152 | 0.112 | 0.118 |
20R-Rg<sub>3</sub> | 0.113 | 0.109 | 0.103 |
C-Mc | 0.021 | 0.107 | 0.132 |
C-Y | 0.027 | 0.104 | 0.125 |
Rk<sub>1</sub> | 0.274 | 0.205 | 0.209 |
Rg<sub>5</sub> | 0.255 | 0.202 | 0.196 |
C-K | 0.091 | 0.176 | 0.326 |
3.2.2发酵过程中糖类成分的变化
如图12,还原糖的含量在发酵过程中逐渐降低,而多糖和可溶性总糖的含量是先降低,后又逐渐增加。真菌在发酵时先大量的利用还原糖,同时不断的分解人参多糖等大分子的可溶性糖,因而发酵的前期还原糖、多糖和可溶性总糖的含量都是不断降低的;发酵中期大量的可溶性总糖被水解掉,同时真菌又开始大量的水解纤维素和半纤维素等水不容性糖,使可溶性总糖的含量又逐渐增加,并且真菌不断的分泌出真菌多糖,多糖的含量也不断的增加。
3.2.3发酵过程中蛋白质和脂溶性成分含量的变化
结果见图13,蛋白质的含量随着发酵时间的延长逐渐降低,到了发酵的中后期蛋白质含量又有所增加。说明人参中的蛋白质完全可以满足发酵的需求,中后期由于人参细胞壁或组织中的一些蛋白被降解,使蛋白的含量又有所增加。发酵过程中人参脂溶性成分的含量逐渐减少,但到了发酵后期脂溶性成分的含量也有所增加。原因可能是真菌在发酵过程中先利用了大量的脂肪导致脂肪含量逐渐降低,但到了发酵的后期大量的物质发生了降解,产生了一些低极性的物质,如人参稀有皂苷、木质素的降解产物等。
Claims (5)
1.一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,包括以下步骤:
以人参、西洋参或三七作为固体发酵基质,灭菌后将培养好的裂褶菌发酵菌种按10%的接种量接种到固体发酵培养基中,在20-32℃条件下避光培养10-30天;发酵后的发酵产品于40-60℃下烘干即得。
2.根据权利要求1所述的人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,其特征在于:固体发酵的温度为24-28℃。
3.根据权利要求1所述的人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,其特征在于:固体发酵的时间为20-30天。
4.根据权利要求1所述的人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,其特征在于:人参、西洋参和三七作为固体发酵基质,其含水量为40%-80%。
5.根据权利要求1所述的人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法,其特征在于:发酵菌种为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711113589.6A CN107823235B (zh) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | 一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711113589.6A CN107823235B (zh) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | 一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107823235A CN107823235A (zh) | 2018-03-23 |
CN107823235B true CN107823235B (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=61655301
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711113589.6A Active CN107823235B (zh) | 2017-11-13 | 2017-11-13 | 一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107823235B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109456383B (zh) * | 2018-12-04 | 2021-06-22 | 长春中医药大学 | 一种20(R)-人参皂苷Rh1的制备方法 |
CN111939186B (zh) * | 2020-07-03 | 2021-11-12 | 北京金崇光药业有限公司 | 一种抗肿瘤组合物及其生产工艺和应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102234677A (zh) * | 2011-04-28 | 2011-11-09 | 王英平 | 一种串珠镰孢菌发酵转化人参二醇组皂苷的方法 |
CN105420119A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-23 | 中国人民解放军第二军医大学 | 人参内生真菌及其应用 |
-
2017
- 2017-11-13 CN CN201711113589.6A patent/CN107823235B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102234677A (zh) * | 2011-04-28 | 2011-11-09 | 王英平 | 一种串珠镰孢菌发酵转化人参二醇组皂苷的方法 |
CN105420119A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-03-23 | 中国人民解放军第二军医大学 | 人参内生真菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
真菌Z4-10发酵生产人参皂苷的工艺;杜志琳等;《吉林农业大学学报》;20141231;第36卷(第3期);第282-288页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107823235A (zh) | 2018-03-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104013657B (zh) | 一种西洋参药材提取皂苷后微生物发酵再提取方法 | |
CN1982438A (zh) | 一株芽孢杆菌及用其制备单糖链人参皂苷及苷元的方法 | |
CN111617120B (zh) | 一种人参虫草发酵提取物的制备方法 | |
CN107823235B (zh) | 一种人参、西洋参和三七固体发酵的加工方法 | |
Gao-Sheng et al. | Accumulation of biomass and four triterpenoids in two-stage cultured Poria cocos mycelia and diuretic activity in rats | |
CN102676627B (zh) | 三七总皂苷的微生物发酵提取方法 | |
CN1435179A (zh) | 生物转化人参组合物及其制备方法 | |
CN104087645B (zh) | 一种固体发酵人参花及制备方法 | |
CN110755344A (zh) | 灵芝-黄精双向发酵工艺及组合物 | |
CN112294830B (zh) | 一种富集稀有人参皂苷的西洋参叶产品 | |
CN106119333A (zh) | 一种利用脂肪酸诱导从桦褐孔菌中提取白桦脂酸的方法 | |
CN103113489B (zh) | 一种新疆骏枣多糖提纯的方法 | |
CN113349368A (zh) | 猴头菌-人参发酵菌质酵素口服液的制备工艺及应用 | |
CN102669320A (zh) | 一种甜灵芝发酵茶的制备方法及甜灵芝发酵茶 | |
CN105766377B (zh) | 一种提高黑木耳黄酮含量和种类的培养方法 | |
JP2008212137A (ja) | 生物転換法を利用したペリヌスリンテウス菌糸体の液体培養による人参からの新規のジンセノサイド製造方法 | |
CN109468359A (zh) | 一种人参皂苷Rk6的制备方法 | |
CN113249235B (zh) | 一株产β-D-葡萄糖苷酶的费比恩毕赤酵母及其应用 | |
CN104087647B (zh) | 一种用于发酵人参花的固体培养基c-y-2 | |
CN111763705B (zh) | 一种人参皂苷组合物的制备方法及其应用 | |
CN107893035A (zh) | 一种猴头菌的培养基、黄精生物转化菌丝体、黄精生物转化菌丝体的提取物及其用途 | |
CN105481932A (zh) | 三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途 | |
CN105925655A (zh) | 一种利用松杉灵芝液体发酵得到稀有人参皂苷的方法 | |
CN112315989B (zh) | 一种富集稀有人参皂苷的西洋参产品 | |
KR20120035472A (ko) | 컴파운드 케이의 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230425 Address after: 130000 no.8000 beiyuanda street, high tech Development Zone, Changchun City, Jilin Province Patentee after: Jilin Yatai Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: Xincheng Street Jingyue Development Zone in Jilin province 130118 Changchun No. 2888 Patentee before: JILIN AGRICULTURAL University |
|
TR01 | Transfer of patent right |