CN112275265A - 一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法，该方法以紫丁香苷为模板，加入聚乙二醇400、异丙醇和甲醇溶解模板，以低共熔溶剂氯化胆碱‑衣康酸为功能单体，再加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，致孔剂1‑丁基‑3‑甲基咪唑四氟硼酸盐和引发剂偶氮二异丁腈，进行聚合反应后得到具有选择性的紫丁香苷分子印迹整体柱。本发明所述方法中以低共熔溶剂氯化胆碱‑衣康酸为功能单体，与传统功能单体4‑乙烯基吡啶相比绿色环保，同时也降低了紫丁香苷的印迹成本，在不锈钢管柱中成功合成紫丁香苷印迹整体柱，以及空白对照柱并对其进行色谱条件优化。实验结果表明，印迹因子最大可以达到3.11。该方法制备简单，且紫丁香苷印迹整体柱的耐用性好，为紫丁香苷的分离纯化提供了一种节约成本的方法。

Description

一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法
技术领域
本发明涉及一种以低共熔溶剂作为功能单体的紫丁香苷印迹整体柱的制备方法，该印迹聚合物对紫丁香苷表现出良好的选择性，可用于紫丁香苷的分离纯化。
背景技术
紫丁香甘是一种苯丙醇苷类化合物，近年来的药理研究表明它是一种强的抗肝毒药物，具有恢复微粒体酶系统的酶活性及抑制脂质过氧化作用，可以促进肝毒物代谢，并改善肝功能，使之正常化，因此紫丁香苷具有很大的药用价值，市场对紫丁香苷的需求较大。因为紫丁香苷在植物中含量较低，无法直接使用，因此如何获得高纯度的紫丁香苷就显得尤为重要。
目前，传统的分离和制备纯化紫丁香苷的方法主要有超声波辅助提取法，大孔富集纯化，制备高效液相色谱法等。CN108912186A报道了通过将中药材铁冬青干燥，粉粹，过筛，溶剂回流，脱色过滤杂质，最后经结晶精制处理得到含量高的紫丁香苷样品，但操作复杂且纯度不高。CN106188173A报道了提取物用大孔树脂，用70％乙醇洗脱，之后上硅胶层析，以乙酸乙酯洗脱，进而采用冰乙醇/水重结晶操作得到纯度为90-98％的紫丁香苷，该方法制备过程也比较繁琐。赵等人在“Ultrasound-assisted extraction of Syringin fromthe bark of Ilex rotunda Thumb using response surface methodology”中采用超声波辅助提取法，提取溶剂、提取温度和提取时间，获得了最高的提取效率，制备得到的紫丁香苷纯化率较低。综上所述，传统的工艺存在着条件苛刻、成本高、周期长、选择性小等缺点，因此急需一种简单、廉价、快速的纯化方法。
固相萃取(SPE)是近年来新兴的一种分离技术，在分离纯化方面尤其具有特殊的优势，将其应用于天然产物的提取和分离，具有传统液液萃取无法比拟的优势。但是由于固相萃取中吸附剂对于目标化合物缺乏特异性的吸附，因此，其应用受到一定程度的限制加之实际样品的复杂性，因此很难获得更好的分离效果。如Noula等人在“Solid-phaseExtraction for Purification of Alkannin/Shikonin Samples and Isolation ofMonomeric and Dimeric Fractions”中采用固相萃取法纯化紫草素中的单体和二聚体，但所需设备复杂，且纯化成本较高。
分子印迹技术是合成具有预定选择性的固定相的新兴技术。该法结合了高分子科学、材料科学、生物医学等学科的优势，以目标分子作为模板，与功能单体、交联剂、引发剂等混合，合成一种对模板分子有特异性识别能力的聚合物。分子印迹聚合物作为一种订做的材料，其对于目标化合物有较强的的特异性的作用。如果以分子印迹聚合物做为固相萃取的吸附剂，将二者优点合二为一，则完全可以实现从粗提物中对于目标化合物的纯化分离。
低共熔溶剂是指由一定化学计量比的氢键受体(如季铵盐)和氢键供体(如酰胺、羧酸和多元醇等化合物)组合而成的两组分或三组分低共熔混合物，其凝固点显著低于各个组分纯物质的熔点。低共熔溶剂的研究和应用尚处于实验室研究阶段。作为一类新型溶剂，低共熔溶剂具有制备简便、成本低、毒性低、溶解性好、不易挥发等特点，因此在电沉积、萃取分离、催化反应、纳米材料制备等诸多领域展现出良好的发展前景。
发明内容
本发明的目的是，提供一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法，该方法以紫丁香苷为模板，加入聚乙二醇400、异丙醇和甲醇溶解模板，以低共熔溶剂氯化胆碱-衣康酸为功能单体，再加入交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，致孔剂1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和引发剂偶氮二异丁腈，进行聚合反应后得到具有选择性的紫丁香苷分子印迹整体柱。本发明所述方法中以低共熔溶剂氯化胆碱-衣康酸为功能单体，与传统功能单体4-乙烯基吡啶相比绿色环保，同时也降低了紫丁香苷的印迹成本，在不锈钢管柱中成功合成紫丁香苷印迹整体柱，以及空白对照柱并对其进行色谱条件优化。实验结果表明，印迹因子最大可以达到3.11。该方法制备简单，且紫丁香苷印迹整体柱的耐用性好，为紫丁香苷的分离纯化提供了一种节约成本的方法。
本发明所述的一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法，按下列步骤进行：
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷0.50-2.46％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.70-5.33％溶解于甲醇11.78-13.35％中，再加入偶氮二异丁腈0.45-0.51％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯13.40-23.59％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐52.87-59.92％，异丙醇2.34-2.65％和聚乙二醇400 3.20-3.60％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱。
通过本发明所述方法获得的紫丁香苷印迹整体柱，用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm,流速0.5ml/min,柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子最大为3.11。
当构成低共熔溶剂的其中一个组分含有碳碳双键时，称其为低共熔溶剂单体。与常规的功能单体相比，其具有成本低廉、可生物降解、合成过程简单、结构可设计等优势，同时具备优良的物化性质，在分离分析领域的应用前景日益受到研究者的关注。它作为新型功能单体制备MIPs,比传统的功能单体如丙烯酸和丙烯酰胺具有更好的MIPs性能。本发明以低共熔溶剂氯化胆碱-衣康酸为功能单体，与传统功能单体4-乙烯基吡啶相比绿色环保，同时也降低了紫丁香苷的印迹成本，在不锈钢管柱中成功合成紫丁香苷印迹整体柱，以及空白对照柱并对其进行色谱条件优化。实验结果表明，印迹因子最大可以达到3.11。该方法制备简单且紫丁香苷印迹整体柱的耐用性好，为紫丁香苷的分离纯化提供了一种节约成本的方法。
附图说明
图1为本发明紫丁香苷在紫丁香苷分子印迹整体柱及其空白对照柱上的色谱行为，其中1为空白整体柱，2为紫丁香苷分子印迹整体柱。
图2为本发明在以衣康酸为功能单体的紫丁香苷分子印迹整体柱及其空白对照柱的不同色谱行为，其中1为空白对照柱，2为紫丁香苷分子印迹整体柱。
图3为本发明在以氯化胆碱-衣康酸为功能单体的紫丁香苷分子印迹整体柱上紫丁香苷及其类似物的色谱保留图，其中1为紫丁香苷，2为胡萝卜苷，刺五加苷E，刺五加皂苷B。
图4为本发明在以氯化胆碱-衣康酸为功能单体的紫丁香苷空白对照柱上紫丁香苷及其类似物的色谱保留图，其中1为紫丁香苷，2为胡萝卜苷，刺五加苷E，刺五加皂苷B。
具体实施方式
下面结合具体实例，进一步详细阐述本发明。
实施例1
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷1.14％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.80％溶解于甲醇12.05％中，再加入偶氮二异丁腈0.46％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯21.84％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐54.09％，异丙醇2.38％和聚乙二醇400 3.25％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱；
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到2.72。
实施例2
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷0.50％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.84％溶解于甲醇12.13％中，再加入偶氮二异丁腈0.46％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯21.96％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐54.44％，异丙醇2.41％和聚乙二醇400 3.26％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱；
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到1.18。
实施例3
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷1.18％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸5.00％溶解于甲醇12.51％中，再加入偶氮二异丁腈0.48％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯18.83％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐56.16％，异丙醇2.49％和聚乙二醇400 3.36％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱；
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm,流速0.5ml/min,柱温为25℃，用体积比为9：1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到3.11。印迹效果见图1。
实施例4
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷2.46％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.74％溶解于甲醇11.89％中，再加入偶氮二异丁腈0.45％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯21.53％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐53.36％，异丙醇2.36％和聚乙二醇400 3.20％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱；
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到2.20。
实施例5
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷1.11％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.70％溶解于甲醇11.78％中，再加入偶氮二异丁腈0.45％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯23.59％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐52.87％，异丙醇2.34％和聚乙二醇400 3.17％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱；
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到1.19。
实施例6
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷1.26％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸5.33％溶解于甲醇13.35％中，再加入偶氮二异丁腈0.51％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯13.40％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐59.92％，异丙醇2.65％和聚乙二醇400 3.60％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱。
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到0.76。
实施例7
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷1.26％和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.80％溶解于甲醇12.03％中，再加入偶氮二异丁腈0.46％，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯21.80％，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐54.02％，异丙醇2.39％和聚乙二醇400 3.24％，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱。
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到1.24。
实施例8(对照)
将按质量百分比1.16％紫丁香苷和2.62％衣康酸溶解于12.33％的甲醇中，再加入0.47％的偶氮二异丁腈，然后加入22.32％的二甲基丙烯酸乙二醇酯，55.33％1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，2.45％异丙醇和3.32％聚乙二醇400，超声30min,使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后像该溶液中冲氮气，出去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度为60℃的水浴锅中反应12个小时；
将得到的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1mL/min逐渐升至0.5mL/min，冲够100整体柱。
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的印迹因子可以达到1.10。
实施例9(对照)
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将4.86％氯化胆碱-衣康酸(摩尔比为1.5:1)溶解于12.19％的甲醇中，再加入0.46％的自由基引发剂偶氮二异丁腈，然后加入22.08％二甲基丙烯酸乙二醇酯，54.71％1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，2.42％异丙醇和3.28％聚乙二醇400，超声30min,使各组分完全溶解混匀，得到一均相溶液，然后像该溶液中冲氮气，出去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度为60度的水浴锅中反应12个小时。
b、将步骤a得到的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以乙腈100mL的溶液冲洗整体柱，流速为0.5mL/min，冲洗完毕后就可以得到紫丁香苷空白对照柱。
用高效液相色谱法对紫丁香苷印迹整体柱进行色谱评价：设置波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷空白对照柱冲洗至基线水平，进样，测定紫丁香苷在印迹柱上的保留时间tR,用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式k＝(tR-t0)/t0，计算紫丁香苷在印迹柱上的保留因子可以达到1.21。保留效果见图2。
实施例10
紫丁香苷印迹整体柱及其空白对照柱的选择性评价：
紫丁香苷印迹整体柱选择性能评价设置紫外吸收波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷印迹整体柱冲洗至基线水平，分别进样胡萝卜苷,刺五加苷E，刺五加皂苷B，得到紫丁香苷的类似物在印迹整体柱上的色谱图，如图3所示，紫丁香苷印迹整体柱对紫丁香苷的保留较强，可以实现紫丁香苷与其结构类似物的有效分离；
空白对照柱选择性能评价设置紫外吸收波长260nm，流速0.5ml/min，柱温为25℃，用体积比为9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(pH 3.6,200mmol)将紫丁香苷空白对照柱冲洗至基线水平,分别进样胡萝卜苷，刺五加苷E，刺五加皂苷B，得到紫丁香苷的类似物在空白对照柱上的色谱图，如图4所示，空白对照整体柱柱不能实现紫丁香苷与其结构类似物有效分离。

Claims (1)

1.一种紫丁香苷印迹整体柱的制备方法，其特征在于，按下列步骤进行：
原位聚合法制备紫丁香苷印迹整体柱：
a、将氯化胆碱和衣康酸按摩尔比为1.5:1在温度90℃油浴加热60分钟，得到氯化胆碱-衣康酸；
b、按质量百分比将紫丁香苷0.50-2.46%和步骤a得到的氯化胆碱-衣康酸4.70-5.33%溶解于甲醇11.78-13.35%中，再加入偶氮二异丁腈 0.45-0.51%，然后加入二甲基丙烯酸乙二醇酯13.40-23.59%，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐 52.87-59.92%，异丙醇2.34-2.65%和聚乙二醇400 3.20-3.60%，超声30min，使各组分完全溶解混匀，得到均相溶液，然后在溶液中冲氮气，除去溶解中的氧气，待溶液澄清后，将溶液转移至不锈钢柱中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃的水浴锅中反应12小时；
c、将步骤b中的不锈钢柱从水浴锅取出，装上柱头，连接在HPLC的高压输液泵上，先用乙腈冲洗，除去整体柱中残留的致孔剂及可溶性物质，流速由0.1 mL/min逐渐升至0.5 mL/min，冲够100 mL后再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液冲洗整体柱，冲洗完毕后即得到紫丁香苷印迹整体柱。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113281431A (zh) * 2021-05-17 2021-08-20 佳木斯大学 低共熔溶剂的合成方法及提取和纯化刺五加苷b的方法
CN113372490A (zh) * 2021-06-07 2021-09-10 天津医科大学 苯甲酰化修饰富集的分子印迹整体柱及其制备方法和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101328198A (zh) * 2008-08-01 2008-12-24 陕西科技大学 一种紫丁香苷的提取分离方法
CN104209104A (zh) * 2014-09-28 2014-12-17 天津医科大学 西替利嗪分子印迹整体柱及其制备方法
CN104258832A (zh) * 2014-09-28 2015-01-07 天津医科大学 高单体含量的分子印迹整体柱与制备方法
CN106947021A (zh) * 2017-03-01 2017-07-14 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 聚合物整体柱、基于所述整体柱的固相萃取过滤器及其制备方法和用途
CN107321329A (zh) * 2017-07-27 2017-11-07 中国科学院新疆理化技术研究所 一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法
CN107417553A (zh) * 2017-05-23 2017-12-01 广州纽楷美新材料科技有限公司 可聚合低共熔溶剂
JP2019189758A (ja) * 2018-04-25 2019-10-31 Dic株式会社 樹脂組成物の製造方法、および前記樹脂組成物を用いた成形体の製造方法
EP3596241A1 (en) * 2017-03-15 2020-01-22 Fundación Tecnalia Research & Innovation Extraction of rare earth elements with deep eutectic solvents

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101328198A (zh) * 2008-08-01 2008-12-24 陕西科技大学 一种紫丁香苷的提取分离方法
CN104209104A (zh) * 2014-09-28 2014-12-17 天津医科大学 西替利嗪分子印迹整体柱及其制备方法
CN104258832A (zh) * 2014-09-28 2015-01-07 天津医科大学 高单体含量的分子印迹整体柱与制备方法
CN106947021A (zh) * 2017-03-01 2017-07-14 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 聚合物整体柱、基于所述整体柱的固相萃取过滤器及其制备方法和用途
EP3596241A1 (en) * 2017-03-15 2020-01-22 Fundación Tecnalia Research & Innovation Extraction of rare earth elements with deep eutectic solvents
CN107417553A (zh) * 2017-05-23 2017-12-01 广州纽楷美新材料科技有限公司 可聚合低共熔溶剂
CN107321329A (zh) * 2017-07-27 2017-11-07 中国科学院新疆理化技术研究所 一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法
JP2019189758A (ja) * 2018-04-25 2019-10-31 Dic株式会社 樹脂組成物の製造方法、および前記樹脂組成物を用いた成形体の製造方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG, R ET AL: "Solid phase microextraction with poly(deep eutectic solvent) monolithic column online coupled to HPLC for determination of non-steroidal anti-inflammatory drugs", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 *
ZHANG, X ET AL: "Preparation of gold nanorod-incorporated monolith for solid phase extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons", 《MICROCHIMICA ACTA》 *
刘严谨: "磁性低共熔溶剂印迹聚合物的制备及其对蛋白质识别性能的研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工 程科技Ⅰ辑》 *
徐凯佳: "低共熔溶剂应用于生物大分子的分离分析研究", 《中国博士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
王涎桦 等: "以低共熔溶剂为致孔剂制备分子印迹整体柱", 《第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集（第二分册）》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113281431A (zh) * 2021-05-17 2021-08-20 佳木斯大学 低共熔溶剂的合成方法及提取和纯化刺五加苷b的方法
CN113372490A (zh) * 2021-06-07 2021-09-10 天津医科大学 苯甲酰化修饰富集的分子印迹整体柱及其制备方法和应用
CN113372490B (zh) * 2021-06-07 2022-04-22 天津医科大学 苯甲酰化修饰富集的分子印迹整体柱及其制备方法和应用

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