CN112213493B - 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 - Google Patents
可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112213493B CN112213493B CN201910625065.8A CN201910625065A CN112213493B CN 112213493 B CN112213493 B CN 112213493B CN 201910625065 A CN201910625065 A CN 201910625065A CN 112213493 B CN112213493 B CN 112213493B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peste des
- petits ruminants
- des petits
- kit
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000007634 Peste-des-Petits-Ruminants Diseases 0.000 title claims abstract description 39
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 36
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title description 16
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title description 8
- 241001428894 Small ruminant morbillivirus Species 0.000 claims abstract description 42
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 18
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims description 4
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 claims description 4
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 13
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 12
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 3
- 101100366000 Caenorhabditis elegans snr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101000835860 Homo sapiens SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000711897 Rinderpest morbillivirus Species 0.000 description 2
- 102100025746 SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1 Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N Arg-Gly-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KXOPYFNQLVUOAQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXOPYFNQLVUOAQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QXOPPIDJKPEKCW-GUBZILKMSA-N Asn-Pro-Arg Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O QXOPPIDJKPEKCW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N Asp-Gln-Glu Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CGVWDTRDPLOMHZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OGMQXTXGLDNBSS-FXQIFTODSA-N Glu-Ala-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O OGMQXTXGLDNBSS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GRHXUHCFENOCOS-ZPFDUUQYSA-N Glu-Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N GRHXUHCFENOCOS-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N Gly-Glu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N Gly-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(=O)O WDEHMRNSGHVNOH-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- JRYQSFOFUFXPTB-RWRJDSDZSA-N Ile-Gln-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N JRYQSFOFUFXPTB-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 206010035742 Pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 1
- FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N Thr-Pro-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- CVUDMNSZAIZFAE-TUAOUCFPSA-N Val-Arg-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N CVUDMNSZAIZFAE-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 1
- CVUDMNSZAIZFAE-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Pro Natural products NC(N)=NCCCC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CVUDMNSZAIZFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010018691 arginyl-threonyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108010014614 prolyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010007513 prolyl-glycyl-prolyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒。本发明的检测试剂盒包括固相载体以及独立地连接于所述固相载体上的特定多肽组合。所述试剂盒被采用以用于区分受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物，或者用于从受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出受到小反刍兽疫疫苗免疫后又受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物。
Description
技术领域
本发明主要涉及兽用检测试剂盒。具体而言，该试剂盒可用于区分对象生物中的小反刍兽疫疫苗免疫和小反刍兽疫自然感染。
背景技术
小反刍兽疫(peste des petits ruminants，PPR)俗称羊瘟，又名小反刍兽假性牛瘟(pseudorinderpest)、肺肠炎(pneumoenteritis)、口炎肺肠炎复合症(stomatitis-pneumoenteritis complex)，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。
1942年本病首次在象牙海岸发生，其后，非洲的塞内加尔、加纳、多哥、贝宁等有本病报道，尼日利亚的绵羊和山羊中也发生了本病，并造成了重大损失。亚洲的一些国家也报道了本病，根据世界动物卫生组织(OIE)1993年《世界动物卫生》报道，孟加拉国的山羊有本病发生，印度德拉邦和马哈拉施特拉邦的部分地区绵羊中发生了类似牛瘟的疾病，最后确诊为小反刍兽疫，此后，泰米尔拉德邦也有受到感染报道。1993年，以色列第一次报道有小反刍兽疫发生，传染来源不明，为防止本病传播，以色列对其北部地区的绵羊和山羊接种了牛瘟疫苗。1992年，约旦的绵羊和山羊中发现了本病特异性抗体，1993年，有11个农场出现临诊病例，100多只绵羊和山羊死亡。1993年，沙特阿拉伯首次发现133个病例。2007年7月，该疫病首次传入我国西藏地区。
小反刍兽疫病毒属副黏病毒科麻疹病毒属。与牛瘟病毒有相似的物理化学及免疫学特性。病毒呈多形性，通常为粗糙的球形。病毒颗粒较牛瘟病毒大，核衣壳为螺旋中空杆状并有特征性的亚单位，有囊膜。病毒可在胎绵羊肾、胎羊及新生羊的睾丸细胞、Vero细胞上增殖，并产生细胞病变(CPE)，形成合胞体。
小反刍兽疫主要感染山羊、绵羊、美国白尾鹿等小反刍动物，发病动物死亡率高，为我国划定的一类动物疫病。
目前，尚无有效方法治疗小反刍兽疫，只能采取疫苗接种、疫情发生后扑杀及定期血清监测的方法来进行控制。因此，该病的血清学诊断及疫苗免疫效果的评估与监测显得尤为重要。
世界动物卫生组织推荐采用的小反刍兽疫病毒抗体检测方法主要有病毒中和试验(VNT)和酶联免疫测定(ELISA)。其中，病毒中和试验方法的检测结果准确，是检测小反刍兽疫病毒的金标准，但该方法检测时间长且不适于检测大量样本。与此相对，酶联免疫测定的特异性和敏感性较高、检测时间比病毒中和试验短且适合检测大量样品，因此，被广泛应用于小反刍兽疫病毒抗体的检测。
但是，疫苗免疫并非百分之百成功，会出现免疫失败、动物接受免疫后又发生自然感染现象。这些免疫后又被感染的动物可能成为动物群体中的传染源，增加动物群体性发病的风险。因此，尽快识别出这些免疫后又被感染的动物并将其扑杀是十分重要的。
另一方面，小反刍兽疫疫苗为减毒活疫苗，现有的小反刍兽疫病毒抗体检测方法无论是病毒中和试验(VNT)还是酶联免疫测定(ELISA)，都不能区分疫苗免疫和自然感染。
发明内容
鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种能够用于区分小反刍兽疫疫苗免疫和小反刍兽疫病毒自然感染的检测试剂盒。
发明人为解决上述技术问题进行了深入研究，结果发现通过将下述多肽组合1中的至少一条多肽(即一条、两条、三条、四条或全部多肽)是否对对象生物来源的生物样本有响应作为指标，能够区分对象生物是被小反刍兽疫疫苗免疫还是被小反刍兽疫病毒自然感染。从而，完成了本发明。
因此，本发明包括：
1.一种多肽组合，其包括：
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(N50)，以及
b.SEQ ID NO：2所示的多肽(N49)，以及
c.SEQ ID NO：3所示的多肽(N47)或SEQ ID NO：4所示的多肽(N46)。
2.根据项1所述的多肽组合，其中，所述多肽组合还包括：
d.SEQ ID NO：5所示的多肽(F10)。
在此，各序列为：
SEQ ID NO：1：SAEALFRLQAMAKILEDQEE。
SEQ ID NO：2：SSQNPREAQRSAEALFRLQA。
SEQ ID NO：3：GETPGPLLPEIMQEDELSRE。
SEQ ID NO：4：TKRTRSGKPRGETPGPLLPE。
SEQ ID NO：5：TKNVRPIQTLTPGRRTRRFV。
3.根据项1或2所述的多肽组合在制备小反刍兽疫检测试剂盒中的用途。
4.根据项3所述的用途，其中所述试剂盒被采用以用于区分受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物，或者用于从受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出受到小反刍兽疫疫苗免疫后又受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物。
在此，具体的区分方法是，以所述多肽组合中是否至少有一条多肽(即一条、两条、三条、四条或全部多肽)对来源于对象生物的生物样本有响应作为指标。出现上述响应则说明存在自然感染。
“响应”是指R值大于或等于0.3，其中，R＝SNR1/SNR0，SNR1测得的生物样本的SNR值，SNR0是测得的阳性标准品的SNR值。
5.根据项3所述的用途，其中，所述对象生物是小反刍动物。
6.根据项3所述的用途，其中，所述对象生物是山羊或绵羊。
7.根据项3所述的用途，其中，所述试剂盒的固相载体上连接有来自于小反刍兽疫病毒的蛋白。
8.一种小反刍兽疫检测试剂盒，其固相载体上连接有根据项1或2所述的多肽组合。
在此，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料的载体即可。多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载体的连接方法来进行。
9.根据项8所述的试剂盒，其固相载体上还连接有来自于小反刍兽疫病毒的蛋白。
10.根据项9所述的试剂盒，其中，所述来自于小反刍兽疫病毒的蛋白是N蛋白、F蛋白和/或H蛋白。
在此，N蛋白是指小反刍兽疫病毒的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)，H蛋白是指小反刍兽疫病毒的血凝素蛋白(Haemagglutinin protein)，F蛋白是指小反刍兽疫病毒的融合蛋白(Fusion protein)。
11.根据项8所述的试剂盒，其中，所述试剂盒被采用以用于区分受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物，或者用于从受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出受到小反刍兽疫疫苗免疫后又受到小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物。
12.根据项8所述的试剂盒，其中，所述对象生物是小反刍动物。
13.根据项8所述的试剂盒，其中，所述对象生物是山羊或绵羊。
在此，所述生物样本可以是对象生物的全血、血浆或血清。
即使在用小反刍兽疫疫苗为减毒活疫苗对动物群体中的对象生物进行免疫的情况下，使用本发明的小反刍兽疫检测试剂盒也能够区分疫苗免疫和自然感染。简单地讲，本发明能够取得这样的技术效果的原因是被疫苗免疫或自然感染时，对象生物产生的结合上述多肽的抗体存在一个在一段时间内产生又逐渐消失的过程。
具体实施方式
首先，本发明提供一种小反刍兽疫检测试剂盒，其包括固相载体，以及独立地连接于所述固相载体上的多肽组合。
所述多肽组合是
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(N50)，
b.SEQ ID NO：2所示的多肽(N49)，以及
c.SEQ ID NO：3所示的多肽(N47)。
或者是
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(N50)，
b.SEQ ID NO：2示的多肽(N49)，
c.SEQ ID NO：3所示的多肽(N47)，和
d.SEQ ID NO：5所示的多肽(F10)。
或者是
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(N50)，
b.SEQ ID NO：2示的多肽(N49)，和
c.SEQ ID NO：4所示的多肽(N46)。
或者是
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(N50)，
b.SEQ ID NO：2示的多肽(N49)，
c.SEQ ID NO：4所示的多肽(N46)，和
d.SEQ ID NO：5所示的多肽(F10)。
在本说明书中，固体载体可以是一个，也可以是多个，但优选为一个，即全部多肽独立地连接于同一固体载体上。在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料的载体即可。多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载体的连接方法来进行。
对于用小反刍兽疫疫苗(例如减毒活疫苗)免疫接种60天后的对象生物，如果采用病毒中和试验(VNT)和/或酶联免疫测定(ELISA)检测到其来源的生物样本为小反刍兽疫病毒抗体阳性，则可以确定该对象生物来源的生物样本中存在抗小反刍兽疫病毒的抗体，但无法判断该抗体是因疫苗免疫产生还是因病毒自然感染产生。即，现有的VNT和/或ELISA检测方法均不能从接受过小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出接受免疫后又被病毒自然感染的对象生物。
但是，对于上述VNT和/或ELISA检测阳性的生物样本，如果以所述多肽组合1中是否至少有一条多肽(即一条、两条、三条、四条或全部多肽)对来源于对象生物的生物样本有响应作为指标，则能够区分上述对象生物是被小反刍兽疫疫苗免疫还是被小反刍兽疫病毒自然感染。具体而言，当所述多肽组合中的任意一条或多条多肽对上述对象生物来源的生物样本有响应时，判定为该对象生物被小反刍兽疫病毒自然感染；反之，当所述多肽组合1中没有任何一条多肽对上述对象生物来源的生物样本有响应时，判定为该对象生物小反刍兽疫疫苗免疫、未被小反刍兽疫病毒自然感染。
因此，本发明还提供所述多肽组合在制备用于区分小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒中的用途。或者，本发明还提供所述多肽组合在制备试剂盒中的用途，该检测试剂盒用于从受到小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出受到小反刍兽疫疫苗免疫后又被小反刍兽疫病毒自然感染。
在本说明书中的上下文中，所述对象生物优选为小反刍动物，更优选为山羊或绵羊。
在本说明书中，所述生物样本可以是对象生物的全血、血浆或血清。
在本说明书中，信噪比(SNR)＝(多肽点信号值-阴性对照点信号值)/阴性对照点信号值。
在本说明书中，“响应”是指R值大于或等于0.3，其中，R＝SNR1/SNR0，SNR1测得的生物样本的SNR值，SNR0是测得的阳性标准品的SNR值。所述阳性标准品例如可以是小反刍兽疫疫苗免疫后14～28天采集的对象生物来源的生物样本。
实施例1.多肽的制备与确认
SEQ ID NO：1～5的多肽由吉尔生化(上海)有限公司合成，并通过质谱对其进行了确认。其中，
SEQ ID NO.1：SAEALFRLQAMAKILEDQEE。
SEQ ID NO.2：SSQNPREAQRSAEALFRLQA。
SEQ ID NO.3：GETPGPLLPEIMQEDELSRE。
SEQ ID NO.4：TKRTRSGKPRGETPGPLLPE。
SEQ ID NO.5：TKNVRPIQTLTPGRRTRRFV。
实施例2.试剂盒(检测芯片)1～3的制备
试剂盒1
采用常规方法在常规的ELISA用固相载体上点样上述SEQ ID NO：1～3所示的多肽的溶液，另外点样一个山羊IgG作为阳性质控点以及一个PB点作为阴性质控点，制备了检测芯片。所述检测芯片上还点样了重组表达的小反刍兽疫病毒N蛋白、F蛋白和H蛋白，用于确定样本中是否存在抗小反刍兽疫病毒的抗体。所述试剂盒还包括小反刍兽疫疫苗免疫后14～28天采集的山羊血清样本，作为阳性标准品。
试剂盒2
除了在固相载体上分别点样上述SEQ ID NO：1、2、4所示的多肽的溶液外，按照与上述试剂盒1相同的制备方法制备了检测芯片，即为试剂盒2。
试剂盒3
除了在固相载体上分别点样上述SEQ ID NO：1、2、3、5所示的多肽的溶液外，按与上述试剂盒1相同的制备方法制备检测芯片，即为试剂盒3。
试剂盒4
除了在固相载体上分别点样上述SEQ ID NO：1、2、4、5所示的多肽的溶液外，按与上述试剂盒1相同的制备方法制备检测芯片，即为试剂盒4。
实施例3.用试剂盒进行检测
检验步骤
(1)用纯化水将20×浓缩清洗液(TBST：0.4M Tris-HCl，2.74M NaCl，2％Tween20，pH7.2±0.2)按1:20进行稀释，得到清洗液。为使检测芯片表面完全浸润，用移液枪将约200μL清洗液加到检测芯片表面，并浸泡检测芯片一定时间。
(2)用样本稀释液(0.05MPBS，1％BSA，0.2％PVP，0.5％Tween20，pH7.2±0.2)将待测血清样本按照1:50稀释。所述待测血清样本是在小反刍兽疫疫苗(减毒活疫苗)免疫60天后采集的山羊血清样本(VNT和/或ELISA检测阳性)、以及所述阳性标准品。
(3)对于弃去了清洗液的检测芯片，在表面完全湿润的状态下，吸取200μL稀释后的血清样本加入到检测芯片上。
(4)在恒温摇床中以150转/分钟将检测芯片孵育30分钟，温度为室温。
(5)弃去血清样本，用清洗液清洗检测芯片的表面。
(6)清洗后，在检测芯片上加入200μL的酶标抗体溶液(兔抗山羊IgG-HRP，Sigma，A5420)，在恒温摇床中以150转/分钟将检测芯片孵育30分钟，温度为室温。
(7)弃去酶标抗体溶液，用清洗液将检测芯片表面清洗干净。
(8)清洗完成后，在检测芯片表面上均匀铺展20μL的发光底物液(Thermo，Prod#37074)。
(9)将用凝胶成像仪对检测芯片进行化学发光成像，并判定结果。
(10)结果判定：对于每一份血清，分别统计该试剂盒中的每一条多肽是否有响应(即R值是否大于等于0.3)，并进行判定。即，
对于上述试剂盒1，当检测到SEQ ID NO：1和/或2和/或3所示的多肽有响应时，判定为被小反刍兽疫病毒自然感染；反之，判定为未被小反刍兽疫病毒自然感染。
对于上述试剂盒2，当检测到SEQ ID NO：1和/或2和/或4所示的多肽有响应时，判定为被小反刍兽疫病毒自然感染；反之，判定为未被小反刍兽疫病毒自然感染。
对于上述试剂盒3，当检测到SEQ ID NO：1和/或2和/或3和/或5所示的多肽有响应时，判定为被小反刍兽疫病毒自然感染；反之，判定为未被小反刍兽疫病毒自然感染。
对于上述试剂盒4，当检测到SEQ ID NO：1和/或2和/或4和/或5所示的多肽有响应时，判定为被小反刍兽疫病毒自然感染；反之，判定为未被小反刍兽疫病毒自然感染。
对于从小反刍兽疫疫苗免疫接种60天后的山羊和绵羊采集的128份血清样本，采用上述试剂盒1、试剂盒2、试剂盒3或试剂盒4分别进行检测。检测结果均表明其中的两只山羊已被小反刍兽疫病毒自然感染。将这两只山羊扑杀并进行临床检验，检验结果证明其确已罹患小反刍兽疫。
尽管以上对本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。
序列表
<110> 中国兽医药品监察所
苏州工业园区强东医药科技有限公司
<120> 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒
<130> PC00437
<141> 2019-05-31
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Ser Ala Glu Ala Leu Phe Arg Leu Gln Ala Met Ala Lys Ile Leu Glu
1 5 10 15
Asp Gln Glu Glu
20
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 2
Ser Ser Gln Asn Pro Arg Glu Ala Gln Arg Ser Ala Glu Ala Leu Phe
1 5 10 15
Arg Leu Gln Ala
20
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 3
Gly Glu Thr Pro Gly Pro Leu Leu Pro Glu Ile Met Gln Glu Asp Glu
1 5 10 15
Leu Ser Arg Glu
20
<210> 4
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 4
Thr Lys Arg Thr Arg Ser Gly Lys Pro Arg Gly Glu Thr Pro Gly Pro
1 5 10 15
Leu Leu Pro Glu
20
<210> 5
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 5
Thr Lys Asn Val Arg Pro Ile Gln Thr Leu Thr Pro Gly Arg Arg Thr
1 5 10 15
Arg Arg Phe Val
20
Claims (10)
1.一种多肽组合，其包括：
SEQ ID NO：1所示的多肽，以及
SEQ ID NO：2所示的多肽，以及
SEQ ID NO：3所示的多肽或SEQ ID NO：4所示的多肽。
2.根据权利要求1所述的多肽组合，其中，所述多肽组合还包括：
SEQ ID NO：5所示的多肽。
3.根据权利要求1或2所述的多肽组合在制备小反刍兽疫检测试剂盒中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其中，试剂盒检测的对象是小反刍动物。
5.根据权利要求3所述的用途，其中，试剂盒检测的对象是山羊或绵羊。
6.一种小反刍兽疫检测试剂盒，其固相载体上连接有根据权利要求1或2所述的多肽组合。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其固相载体上还连接有来自于小反刍兽疫病毒的蛋白。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述来自于小反刍兽疫病毒的蛋白是N蛋白、F蛋白和/或H蛋白。
9.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，试剂盒检测的对象是小反刍动物。
10.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，试剂盒检测的对象是山羊或绵羊。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910625065.8A CN112213493B (zh) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910625065.8A CN112213493B (zh) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112213493A CN112213493A (zh) | 2021-01-12 |
| CN112213493B true CN112213493B (zh) | 2023-07-07 |
Family
ID=74048169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910625065.8A Active CN112213493B (zh) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112213493B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113238048B (zh) * | 2021-05-11 | 2024-03-15 | 抗码(苏州)生物科技有限公司 | 一种诊断标志物及其在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种中的应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102559707A (zh) * | 2011-12-27 | 2012-07-11 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 小反刍兽疫病毒h、f蛋白抗原表位基因片段及其表达、应用 |
| CN104558108A (zh) * | 2013-10-17 | 2015-04-29 | 上海市农业科学院 | 小反刍兽疫病毒n蛋白的线性抗原表位最小基序肽 |
| CN107216372A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-09-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种小反刍兽疫病毒hn蛋白抗原表位肽h362及其确定、制备方法和应用 |
| CN108101968A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-01 | 北京世纪元亨动物防疫技术有限公司 | 一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用 |
| CN109608552A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-12 | 杭州亿米诺生物科技有限公司 | 一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用 |
-
2019
- 2019-07-11 CN CN201910625065.8A patent/CN112213493B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102559707A (zh) * | 2011-12-27 | 2012-07-11 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 小反刍兽疫病毒h、f蛋白抗原表位基因片段及其表达、应用 |
| CN104558108A (zh) * | 2013-10-17 | 2015-04-29 | 上海市农业科学院 | 小反刍兽疫病毒n蛋白的线性抗原表位最小基序肽 |
| CN107216372A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-09-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种小反刍兽疫病毒hn蛋白抗原表位肽h362及其确定、制备方法和应用 |
| CN108101968A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-01 | 北京世纪元亨动物防疫技术有限公司 | 一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用 |
| CN109608552A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-12 | 杭州亿米诺生物科技有限公司 | 一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112213493A (zh) | 2021-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113009153B (zh) | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 | |
| CN111072774B (zh) | 抗非洲猪瘟p30蛋白单域抗体和检测非洲猪瘟病毒的elisa试剂盒 | |
| CN113009154B (zh) | 一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒及其应用 | |
| TW201102430A (en) | Hybridoma cell line producing monoclonal antibodies against the foot-and-mouth disease virus, the monoclonal antibodies therefrom, and reagent and ELISA kit comprising the same | |
| JP2021072781A (ja) | マーカー系、特にバキュロウイルス発現サブユニット抗原のためのマーカー系 | |
| CN108761077A (zh) | 禽病毒病蛋白芯片抗体检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| EP1745291A1 (en) | Detection of west nile virus | |
| KR20210106181A (ko) | 아프리카 돼지 열병 바이러스 감염 진단을 위한 항원 단백질 조성물 및 이의 용도 | |
| CN112213493B (zh) | 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 | |
| CN108101968A (zh) | 一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用 | |
| KR20120103882A (ko) | 돼지열병바이러스의 탐지용 항원, 이를 이용한 항체 검출 방법, 및 이를 포함하는 탐지키트 | |
| CN111537713B (zh) | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| KR101032956B1 (ko) | 수청바이러스 유래 뉴클레오캡시드 단백질을 이용하여 신증후출혈열 특이 ＩｇＭ과 ＩｇＧ를 검출하는 신속 진단 키트 | |
| CN110498845B (zh) | 小反刍兽疫诊断试剂盒 | |
| CN112321705B (zh) | 可用于诊断小反刍兽疫的单克隆抗体及诊断试剂盒 | |
| CN115160412A (zh) | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| CN110498842B (zh) | 小反刍兽疫诊断试剂盒 | |
| JPH11346768A (ja) | イヌジステンパーウイルスヌクレオカプシド蛋白質の抗原性を有する蛋白質及び抗イヌジステンパーウイルスヌクレオカプシド蛋白質抗体測定試薬 | |
| CN110501505B (zh) | 小反刍兽疫诊断试剂盒 | |
| CN110498843B (zh) | 小反刍兽疫诊断试剂盒 | |
| CN110488011B (zh) | 新城疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| KR102485291B1 (ko) | PEDV 유래 재조합 스파이크 단백질을 포함하는 PEDV 특이 IgA 검출 키트 | |
| CN113999293B (zh) | 一种特异性结合新型冠状病毒s蛋白的抗体及其应用 | |
| CN110488017B (zh) | 新城疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| CN110488010B (zh) | 新城疫病毒抗体检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |