CN115160412A - 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 - Google Patents
小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115160412A CN115160412A CN202210761074.1A CN202210761074A CN115160412A CN 115160412 A CN115160412 A CN 115160412A CN 202210761074 A CN202210761074 A CN 202210761074A CN 115160412 A CN115160412 A CN 115160412A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peste des
- petits ruminants
- des petits
- ruminants virus
- vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001428894 Small ruminant morbillivirus Species 0.000 title claims abstract description 42
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 208000007634 Peste-des-Petits-Ruminants Diseases 0.000 claims description 19
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 7
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 12
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 3
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 3
- 206010035742 Pneumonitis Diseases 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBWYUTNBYSSUIQ-HERUPUMHSA-N Ala-Asn-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N MBWYUTNBYSSUIQ-HERUPUMHSA-N 0.000 description 1
- DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N Ala-Phe-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 1
- FRMQITGHXMUNDF-GMOBBJLQSA-N Arg-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FRMQITGHXMUNDF-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N Asp-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- LZRMPXRYLLTAJX-GUBZILKMSA-N Gln-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZRMPXRYLLTAJX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LYSVCKOXIDKEEL-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYSVCKOXIDKEEL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CSQNHSGHAPRGPQ-YTFOTSKYSA-N Ile-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N CSQNHSGHAPRGPQ-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KPJJOZUXFOLGMQ-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Asn Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N KPJJOZUXFOLGMQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000282943 Odocoileus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1027—Paramyxoviridae, e.g. respiratory syncytial virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本专利申请公开了一种小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒。本发明的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒包括固体载体以及独立地连接于所述固体载体上的特定多肽组合。即使在使用小反刍兽疫病毒减毒活疫苗对动物群体中的对象生物进行免疫的情况下，使用本发明的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒也能够区分疫苗免疫和自然感染，而且无需了解所述对象生物是否接受过疫苗免疫、以及接受疫苗免疫的时间。
Description
技术领域
本发明主要涉及小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒。具体而言，该试剂盒可用于区分对象生物中的小反刍兽疫疫苗免疫和小反刍兽疫自然感染。
背景技术
小反刍兽疫(peste des petits ruminants，PPR)俗称羊瘟，又名小反刍兽假性牛瘟(pseudorinderpest)、肺肠炎(pneumoenteritis)、口炎肺肠炎复合症(stomatitis-pneumoenteritis complex)，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，主要感染山羊、绵羊、美国白尾鹿等小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征，发病动物死亡率高。
小反刍兽疫是国际动物卫生组织和中国农业部确定的一类动物疫病。
疫苗是实现疫病预防和控制的最经济、有效的手段，但单纯的使用疫苗不能根除动物疫病，根除动物疫病需要进行疫病净化。
疫病净化流程：第一步，对动物群体接种疫苗，使得大多数动物不感染野毒，实现免疫无疫(接种疫苗的条件下没有疫情爆发)；第二步，通过 DIVA(DifferentiatingInfected from Vaccinated Animals，从免疫群体中区分出野毒感染的个体)，挑出感染野毒的个体，隔离或扑杀，从而从群体中清除病原体；第三步，停止接种疫苗，实现非免疫无疫(未接种疫苗的条件下没有疫情爆发)。
从“免疫无疫”进入到“非免疫无疫”、即停打疫苗的时间点的确定是小反刍兽疫净化的难点——应进行DIVA，确认羊群中不存在携带小反刍兽疫病毒的羊只后才能停打疫苗。
但是，由于羊小反刍兽疫使用的是减毒活疫苗，其在结构上与野毒非常相近，两者在动物体内产生的抗体也非常相近，因此，传统的小反刍兽疫病毒抗体检测方法无论是病毒中和试验(VNT)还是酶联免疫测定 (ELISA)，都不能区分疫苗免疫和自然感染。
在此前的研究中，我们发明了基于抗原表位肽的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，对于小反刍兽疫疫苗(例如减毒活疫苗)免疫接种60天后的对象生物，采用该小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒能够确定其是否被小反刍兽疫病毒自然感染。但是，该小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒的使用需要清楚掌握对象生物的免疫信息，这对于管理规范的规模化养殖场而言是容易的，但对于缺乏规范管理的家庭养殖户(在非洲等经济不发达地区大量存在)而言却是相当困难的。参见中国专利申请公开CN112213493A。
因此，为了配合联合国粮食与农业组织、国际动物卫生组织《全球小反刍兽疫消灭计划(2015-2030)》的实施，需要即使免疫信息不明也能够进行DIVA的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒。
发明内容
鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种即使在免疫信息不明的情况下，也能够区分小反刍兽疫疫苗免疫和小反刍兽疫病毒自然感染的检测试剂盒。
发明人为解决上述技术问题进行了深入研究，结果发现了来自小反刍兽疫病毒的H蛋白的两条抗原表位肽，与这两条抗原表位肽结合的小反刍兽疫病毒抗体只有在自然感染中才能检出，而在疫苗免疫中不能检出。因此，这两条抗原表位肽能够用于区分小反刍兽疫疫苗免疫和小反刍兽疫病毒自然感染，且这种区分并不依赖免疫信息。
本发明包括：
1.一种多肽组合，其包括：
a.SEQ ID NO：1所示的多肽(H1)，以及
b.SEQ ID NO：2所示的多肽(H36)。
在此，各氨基酸序列为：
SEQ ID NO：1：MSAQRERINAFYKDNLHNKT。
SEQ ID NO：2：LSSHRGIIKDNEANWVVPST。
2.根据项1所述的多肽组合在制备小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒中的用途。
3.根据项2所述的用途，其中所述试剂盒用于区分小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物，或者用于从小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出小反刍兽疫疫苗免疫后又被小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物。
在此，具体的区分方法是：对于采用其它小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒确定为小反刍兽疫病毒抗体阳性的对象生物，采用本发明的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒进行检测，以所述多肽组合中是否至少有一条多肽 (即一条或两条)对来源于对象生物的生物样本有响应作为指标，出现上述响应则说明存在自然感染，否则说明只存在疫苗免疫。所述生物样本可以是血液、血浆或血清。
在本说明书中，“响应”是指用识读设备读取的阳性点的信号值显著大于阴性点的信号值。例如，识读设备读取的阳性点的信号值大于或等于10、优选大于或等于20、更优选大于或等于30；而识读设备读取的阴性点的信号值小于10、优选小于5、更优选小于1。所述识读设备例如可以是苏州艾比拓生物技术有限公司生产的微阵列芯片成像仪。
4.根据项3所述的用途，其中，所述对象生物是小反刍动物。
5.根据项3所述的用途，其中，所述对象生物是山羊或绵羊。
6.一种小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，其包括固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的上述的多肽组合。
在此，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料的载体即可，可以优选iPDMS膜。多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载体的连接方法来进行。
7.根据项6所述的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，其中，所述固体载体上还连接有其它用于检测小反刍兽疫病毒抗体的蛋白和/或多肽。
所述其它用于检测小反刍兽疫病毒抗体的蛋白可以是例如小反刍兽疫病毒的N蛋白、F蛋白和/或H蛋白；所述用于检测小反刍兽疫病毒抗体的多肽可以是例如来源于小反刍兽疫病毒的N蛋白、F蛋白和/或H蛋白的抗原表位多肽。
即使在使用小反刍兽疫病毒减毒活疫苗对动物群体中的对象生物进行免疫的情况下，使用本发明的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒也能够区分疫苗免疫和自然感染，而且无需了解所述对象生物是否接受过疫苗免疫、以及接受疫苗免疫的时间。简单地讲，本发明能够取得这样的技术效果的原因是：本发明的多肽组合中的多肽可能是对象生物小反刍兽疫病毒的抗原表位肽，且在野生病毒的自然感染中其引起的免疫效应较强，使得与之结合的抗体能被检测到；但是，在例如减毒活疫苗的免疫中其引起的免疫效应较弱，使得与之结合的抗体不能被检测到。
具体实施方式
实施例1.多肽的制备与确认
SEQ ID NO：1～2的多肽由南京金斯瑞合成，并通过质谱对其进行了确认。其中，
SEQ ID NO：1：MSAQRERINAFYKDNLHNKT。
SEQ ID NO：2：LSSHRGIIKDNEANWVVPST。
实施例2.试剂盒(检测芯片)1的制备
试剂盒1
采用常规方法在常规的ELISA用固体载体上点样上述SEQ ID NO：1、 2所示的多肽的溶液，另外点样一个山羊IgG作为阳性质控点以及一个PB 点作为阴性质控点，制备了检测芯片。所述试剂盒还包括小反刍兽疫疫苗免疫后14～28天采集的山羊血清样本，作为阳性标准品。
实施例3.用试剂盒1进行检测
检测步骤
(1)用纯化水将20×浓缩清洗液(TBST：0.4M Tris-HCl，2.74M NaCl， 2％Tween20，pH7.2±0.2)按1:20进行稀释，得到清洗液。为使检测芯片表面完全浸润，用移液枪将约200μL清洗液加到检测芯片表面，并浸泡检测芯片一定时间。
(2)用样本稀释液(0.05MPBS，1％BSA，0.2％PVP，0.5％Tween20， pH7.2±0.2)将待测血清样本按照1:50稀释。所述待测血清样本包括：
A组：小反刍兽疫疫苗(减毒活疫苗)免疫15～120天的不同时间点采集的山羊血清样本100份，使用市售羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒(竞争ELISA法)确认抗体阳性，所述山羊在无疫小区饲养，无自然感染发生；
B组：采集自小反刍兽疫疫苗(减毒活疫苗)免疫后又进行了野毒攻毒、并通过临床解剖确认已自然感染的山羊的血清样本20份，使用市售羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒(竞争ELISA法)确认抗体阳性；
C组：采集自未接种小反刍兽疫疫苗但进行了野毒攻毒、并通过临床解剖确认已自然感染的山羊的血清样本25份，使用市售羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒(竞争ELISA法)确认抗体阳性。
(3)对于弃去了清洗液的检测芯片，在表面完全湿润的状态下，吸取 200μL稀释后的血清样本加入到检测芯片上。
(4)在恒温摇床中以150转/分钟将检测芯片孵育30分钟，温度为室温。
(5)弃去血清样本，用清洗液清洗检测芯片的表面。
(6)清洗后，在检测芯片上加入200μL的酶标抗体溶液(兔抗山羊IgG-HRP，Sigma，A5420)，在恒温摇床中以150转/分钟将检测芯片孵育30分钟，温度为室温。
(7)弃去酶标抗体溶液，用清洗液将检测芯片表面清洗干净。
(8)清洗完成后，在检测芯片表面上均匀铺展20μL的发光底物液 (Thermo，Prod#37074)。
(9)将用凝胶成像仪对检测芯片进行化学发光成像，并判定结果。
(10)结果判定：对于每一份血清，分别统计该试剂盒中的每一条多肽是否有响应，并进行判定。即，使用苏州艾比拓生物技术有限公司生产的微阵列芯片成像仪识读信号，多肽点的信号值大于10为有响应，SEQ ID NO：1、2中的任一条多肽有响应，则判定为阳性，说明存在自然感染。
检测结果
对于A组的100份样本，检测结果为阳性9例，阴性91例，准确率 91％。
对于B组的20份样本，检测结果为阳性19例，阴性1例，准确率 95％。
对于C组的25份样本，检测结果为阳性21例，阴性4例，准确率 84％。
综合统计，总准确率为(91+19+21)/(100+20+25)＝90.3％
尽管以上对本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。
序列表
<110> 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所
<120> 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒
<130> 2022
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 1
Met Ser Ala Gln Arg Glu Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Leu
1 5 10 15
His Asn Lys Thr
20
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 2
Leu Ser Ser His Arg Gly Ile Ile Lys Asp Asn Glu Ala Asn Trp Val
1 5 10 15
Val Pro Ser Thr
20
Claims (7)
1.一种多肽组合，其包括：
a.SEQ ID NO：1所示的多肽，以及
b.SEQ ID NO：2所示的多肽。
2.根据权利要求1所述的多肽组合在制备小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述试剂盒用于区分小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物和小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物，或者用于从小反刍兽疫疫苗免疫的对象生物群体中区分出小反刍兽疫疫苗免疫后又被小反刍兽疫病毒自然感染的对象生物。
4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述对象生物是小反刍动物。
5.根据权利要求3所述的用途，其中，所述对象生物是山羊或绵羊。
6.一种小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，其包括固体载体，以及独立地连接于所述固体载体上的权利要求1所述的多肽组合。
7.根据权利要求6所述的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒，其中，所述固体载体上还连接有其它用于检测小反刍兽疫病毒抗体的蛋白和/或多肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210761074.1A CN115160412A (zh) | 2022-06-29 | 2022-06-29 | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210761074.1A CN115160412A (zh) | 2022-06-29 | 2022-06-29 | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115160412A true CN115160412A (zh) | 2022-10-11 |
Family
ID=83488642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210761074.1A Pending CN115160412A (zh) | 2022-06-29 | 2022-06-29 | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115160412A (zh) |
-
2022
- 2022-06-29 CN CN202210761074.1A patent/CN115160412A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jäckel et al. | Molecular and Serological Studies on the R ift V alley Fever Outbreak in M auritania in 2010 | |
| KR101785290B1 (ko) | 중증 열성 혈소판 감소 증후군 바이러스 감염 진단용 단클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 및 이 단클론항체를 사용하는 중증 열성 혈소판 감소 증후군 바이러스 감염 진단방법 | |
| CN102124029A (zh) | 诊断由分枝杆菌引起的感染的方法和针对其的试剂 | |
| US10035841B2 (en) | Monoclonal antibody against novel epitopes of foot-and-mouth disease virus protein 3ABC and uses thereof | |
| TW201102430A (en) | Hybridoma cell line producing monoclonal antibodies against the foot-and-mouth disease virus, the monoclonal antibodies therefrom, and reagent and ELISA kit comprising the same | |
| CN106596966B (zh) | 一种牛口蹄疫3abc抗体化学发光检测试剂盒 | |
| KR20180038261A (ko) | H7n9 조류 인플루엔자 바이러스 검출을 위한 효소면역 측정키트 | |
| KR20100134584A (ko) | 아비박테리움 파라갈리나룸 항체의 검출방법 및 키트 | |
| KR20210106181A (ko) | 아프리카 돼지 열병 바이러스 감염 진단을 위한 항원 단백질 조성물 및 이의 용도 | |
| KR20140064884A (ko) | 개선된 백신 진단 | |
| RU2555530C2 (ru) | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОЛИПЕПТИДОВ И БЕЛКОВ H.parasuis | |
| CN109239341A (zh) | 一种牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接elisa试剂盒及其应用 | |
| Chaubey et al. | Evaluation of ‘Recombinant secretary antigens’ based ‘Cocktail ELISA’for the diagnosis of Johne's disease and to differentiate non-infected, infected and vaccinated goats in combination with indigenous ELISA test | |
| CN110799646A (zh) | 变态反应的抗原及其表位 | |
| CN109320606A (zh) | 一种特异性结合口蹄疫非结构蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN112213493B (zh) | 可用于区分疫苗免疫和自然感染的小反刍兽疫检测试剂盒 | |
| KR20180124584A (ko) | 재조합 n 단백질에 대한 단클론항체를 이용한 아까바네바이러스 블러킹 효소결합면역측정법 | |
| CN115160412A (zh) | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| CN110346565B (zh) | 小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 | |
| CN111704661A (zh) | 日本血吸虫童虫高表达基因或其编码蛋白的应用 | |
| CN105754952B (zh) | 抗羊痘病毒k3l蛋白c末端的单克隆抗体及其应用 | |
| RU2640192C1 (ru) | Тест-система ИФА для серологической диагностики нодулярного дерматита крупного рогатого скота - Dermatitis nodularis bovum | |
| CN110498842B (zh) | 小反刍兽疫诊断试剂盒 | |
| CN109655610A (zh) | 一种伪狂犬病病毒的间接elisa检测试剂盒 | |
| CN114675025A (zh) | 可用于diva的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |