CN112168805A - 一种胎盘冻干粉胶囊制备方法 - Google Patents

一种胎盘冻干粉胶囊制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，涉及生物制品技术领域。本发明包括以下步骤：S1：将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中12小时；S2：取出胎盘清洗，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中3～4小时；S3：取出胎盘清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中3～4小时。本发明采用阶梯状浓度的生理盐水对胎盘浸泡三次，将胎盘清洗干净，利用低温机器匀浆和低温超声匀浆相结合和过渗破碎的方法获得胎盘活性物质，通过酵母粉处理掉腥味，最终冷冻干燥成粉，并形成胶囊制品，解决了现有的胎盘冻干粉生物制品对胎盘营养物质的提取不够完全，生物制品腥臭过大，服用后容易引起恶心、反胃等不良反应的问题。

Description

一种胎盘冻干粉胶囊制备方法
技术领域
本发明属于生物制品技术领域，特别是涉及一种胎盘冻干粉胶囊制备方法。
背景技术
胎盘作为一味中药，可用于辅助治疗支气管哮喘、肺结核病，胎盘富含多种抗体、干扰素、纤维蛋白溶酶元活化物、促性腺激素A和B、生长因子、氨基酸、维生素、微量元素、促甲状腺激素、多种甾体激素、溶菌酶、激肽酶、组氨酶等，具有提高造血功能、消除炎症、卵巢保健、促进泌乳、调节免疫和美容抗衰的功能。
冻干粉是采用冷冻干燥机的真空冷冻干燥法预先将药液里面的水分冻结，然后在真空无菌的环境下将药液里面被冻结的水分升华，从而得到冷冻干燥而成，冻干粉有助于修复因涂抹化妆品不当而受到损伤的皮肤，采用胎盘制备的冻干粉具有更好的抗衰老、活化机体功能、细胞新生等功效。
但是现有的胎盘冻干粉生物制品对胎盘营养物质的提取不够完全，生物制品腥臭过大，服用后容易引起恶心、反胃等不良反应，因此有必要对现有技术进行改进，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，采用阶梯状浓度的生理盐水对胎盘浸泡三次，将胎盘清洗干净，利用低温机器匀浆和低温超声匀浆相结合和过渗破碎的方法获得胎盘活性物质，通过酵母粉处理掉腥味，最终冷冻干燥成粉，并形成胶囊制品，解决了现有的胎盘冻干粉生物制品对胎盘营养物质的提取不够完全，生物制品腥臭过大，服用后容易引起恶心、反胃等不良反应的问题。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明为一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，包括以下步骤：
S1：将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中，2～8℃下保存12小时；
S2：取出胎盘，清洗除去血液等污渍，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中，2～8℃下保存3～4小时；
S3：取出胎盘，再对胎盘进行清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中，2～8℃下保存3～4小时；
S4：取出胎盘，将胎盘切碎，放入-80℃超低温冰箱冷冻24小时，然后依次进行低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理，得到胎盘浆；
S5：将S4中得到的胎盘浆与水按照质量体积1：2的比例混合，再添加少量的1％的酵母粉，通过超声波混匀，2～8℃下静置1～2h，低渗法获取胎盘细胞内活性因子，在4℃，1000转/分钟条件下搅拌提取1h，得组织液；
S6：向组织液中添加1％的酵母粉，再次除去胎盘组织液的腥味，然后通过微波加热至20～25℃，使得酵母粉完全溶解在组织液中，并通过超声波再次混匀；
S7：将S6中得到的胎盘组织液，用70um的滤膜负压过滤，得胎盘提取液，4℃静置保存，备用；
S8：将S7中得到的胎盘提取液，放入无菌的不锈钢托盘中，厚度1cm，快速置于冷冻干燥机隔板上，将样品冷冻至-40℃，然后，对冻干机进行抽真空，真空度小于20pa，干燥温度-35℃～25℃，保持时间18小时，使得含水量小于2％，得胎盘冻干粉；
S9：将S8中得到的胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊壳包装，得到胎盘冻干粉胶囊，胶囊壳可采用CAP材质。
进一步地，S4中胎盘切碎时通过切碎设备切成2～3cm3的小块。
进一步地，S4中低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理的具体步骤为：
a、通过组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成20％组织匀浆，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否大范围破碎，若没有则可延长匀浆时间；
b、通过超声粉碎机对经组织捣碎机匀浆的组织液进一步粉碎，采用超声波发生器以振幅14um超声处理1～2min使细胞破碎，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否完全破碎，若没有则可延长匀浆时间。
进一步地，S4中得到的胎盘浆的颗粒直径控制在70um以内。
进一步地，S5中与胎盘浆混合的水采用无菌超纯水。
进一步地，S5和S6中酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内，纳米级的酵母粉可迅速完全融入组织液中，去腥能力更佳。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明通过将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中12小时、浸泡在1.2％生理盐水中3～4小时、浸泡在1.5％生理盐水中3～4小时，采用阶梯状浓度的生理盐水对胎盘浸泡三次，可彻底将胎盘中的血液、筋膜等污渍清除干净，降低胎盘的腥味，提高冻干粉的制备质量。
2、本发明在对胎盘匀浆时采用低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理相结合的方式，使得匀浆能更加彻底，胎盘细胞能完全破碎，充分混匀生物组织，胎盘内的营养物质能充分完整取出，胎盘浆的颗粒直径能被控制在70um以内，提高后续的低渗法获取胎盘细胞内活性因子以及离心得组织液的效果。
3、本发明在步骤五和步骤六中均添加纳米级的酵母粉，二段添加酵母粉，且在超声、微波的作用下酵母粉能完全融入组织液内，可大大去除胎盘细胞的腥味，解决了现有的胎盘生物制品往往腥臭难闻，服用后容易引起恶心、反胃等不良反应的问题。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
本发明为一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，包括以下步骤：
S1：采集自然分娩的健康胎盘，将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中，2℃下保存12小时；
S2：取出胎盘，清洗除去血液等污渍，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中，2℃下保存3小时；
S3：取出胎盘，再对胎盘进行清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中，2℃下保存3小时；
S4：取出胎盘，将胎盘切碎成2～3cm3的小块，放入-80℃超低温冰箱冷冻24小时，然后依次进行低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理，得到胎盘浆，胎盘浆的颗粒直径控制在70um以内；
低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理的具体步骤为：
a、通过组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成20％组织匀浆，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否大范围破碎，若没有则可延长匀浆时间；
b、通过超声粉碎机对经组织捣碎机匀浆的组织液进一步粉碎，采用超声波发生器以振幅14um超声处理1～2min使细胞破碎，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否完全破碎，若没有则可延长匀浆时间；
S5：将S4中得到的胎盘浆与水按照质量体积1：2的比例混合，再添加少量的1％的酵母粉，通过超声波混匀，2℃下静置1h，低渗法获取胎盘细胞内活性因子，在4℃，1000转/分钟条件下搅拌提取1h，得组织液，其中，水采用无菌超纯水，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S6：向组织液中添加1％的酵母粉，再次除去胎盘组织液的腥味，然后通过微波加热至20℃，使得酵母粉完全溶解在组织液中，并通过超声波再次混匀，其中，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S7：将S6中得到的胎盘组织液，用70um的滤膜负压过滤，得胎盘提取液，4℃静置保存，备用；
S8：将S7中得到的胎盘提取液，放入无菌的不锈钢托盘中，厚度1cm，快速置于冷冻干燥机隔板上，将样品冷冻至-40℃，然后，对冻干机进行抽真空，真空度小于20pa，干燥温度-35℃～25℃，保持时间18小时，使得含水量小于2％，得胎盘冻干粉；
S9：将S8中得到的胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊壳包装，得到胎盘冻干粉胶囊。
实施例二
本发明为一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，包括以下步骤：
S1：采集自然分娩的健康胎盘，将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中，5℃下保存12小时；
S2：取出胎盘，清洗除去血液等污渍，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中，5℃下保存3.5小时；
S3：取出胎盘，再对胎盘进行清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中，5℃下保存3.5小时；
S4：取出胎盘，将胎盘切碎成2～3cm3的小块，放入-80℃超低温冰箱冷冻24小时，然后依次进行低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理，得到胎盘浆，胎盘浆的颗粒直径控制在70um以内；
低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理的具体步骤为：
a、通过组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成20％组织匀浆，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否大范围破碎，若没有则可延长匀浆时间；
b、通过超声粉碎机对经组织捣碎机匀浆的组织液进一步粉碎，采用超声波发生器以振幅14um超声处理1～2min使细胞破碎，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否完全破碎，若没有则可延长匀浆时间；
S5：将S4中得到的胎盘浆与水按照质量体积1：2的比例混合，再添加少量的1％的酵母粉，通过超声波混匀，5℃下静置1.5h，低渗法获取胎盘细胞内活性因子，在4℃，1000转/分钟条件下搅拌提取1h，得组织液，其中，水采用无菌超纯水，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S6：向组织液中添加1％的酵母粉，再次除去胎盘组织液的腥味，然后通过微波加热至22℃，使得酵母粉完全溶解在组织液中，并通过超声波再次混匀，其中，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S7：将S6中得到的胎盘组织液，用70um的滤膜负压过滤，得胎盘提取液，4℃静置保存，备用；
S8：将S7中得到的胎盘提取液，放入无菌的不锈钢托盘中，厚度1cm，快速置于冷冻干燥机隔板上，将样品冷冻至-40℃，然后，对冻干机进行抽真空，真空度小于20pa，干燥温度-35℃～25℃，保持时间18小时，使得含水量小于2％，得胎盘冻干粉；
S9：将S8中得到的胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊壳包装，得到胎盘冻干粉胶囊。
实施例三
本发明为一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，包括以下步骤：
S1：采集自然分娩的健康胎盘，将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中，8℃下保存12小时；
S2：取出胎盘，清洗除去血液等污渍，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中，8℃下保存4小时；
S3：取出胎盘，再对胎盘进行清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中，8℃下保存4小时；
S4：取出胎盘，将胎盘切碎成2～3cm3的小块，放入-80℃超低温冰箱冷冻24小时，然后依次进行低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理，得到胎盘浆，胎盘浆的颗粒直径控制在70um以内；
低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理的具体步骤为：
a、通过组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成20％组织匀浆，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否大范围破碎，若没有则可延长匀浆时间；
b、通过超声粉碎机对经组织捣碎机匀浆的组织液进一步粉碎，采用超声波发生器以振幅14um超声处理1～2min使细胞破碎，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否完全破碎，若没有则可延长匀浆时间；
S5：将S4中得到的胎盘浆与水按照质量体积1：2的比例混合，再添加少量的1％的酵母粉，通过超声波混匀，8℃下静置2h，低渗法获取胎盘细胞内活性因子，在4℃，1000转/分钟条件下搅拌提取1h，得组织液，其中，水采用无菌超纯水，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S6：向组织液中添加1％的酵母粉，再次除去胎盘组织液的腥味，然后通过微波加热至25℃，使得酵母粉完全溶解在组织液中，并通过超声波再次混匀，其中，酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内；
S7：将S6中得到的胎盘组织液，用70um的滤膜负压过滤，得胎盘提取液，4℃静置保存，备用；
S8：将S7中得到的胎盘提取液，放入无菌的不锈钢托盘中，厚度1cm，快速置于冷冻干燥机隔板上，将样品冷冻至-40℃，然后，对冻干机进行抽真空，真空度小于20pa，干燥温度-35℃～25℃，保持时间18小时，使得含水量小于2％，得胎盘冻干粉；
S9：将S8中得到的胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊壳包装，得到胎盘冻干粉胶囊。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (6)

1.一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：将胎盘浸泡在0.9％生理盐水中，2～8℃下保存12小时；
S2：取出胎盘，清洗除去血液等污渍，然后再将胎盘浸泡在1.2％生理盐水中，2～8℃下保存3～4小时；
S3：取出胎盘，再对胎盘进行清洗，然后再将胎盘浸泡在1.5％生理盐水中，2～8℃下保存3～4小时；
S4：取出胎盘，将胎盘切碎，放入-80℃超低温冰箱冷冻24小时，然后依次进行低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理，得到胎盘浆；
S5：将S4中得到的胎盘浆与水按照质量体积1：2的比例混合，再添加少量的1％的酵母粉，通过超声波混匀，2～8℃下静置1～2h，低渗法获取胎盘细胞内活性因子，在4℃，1000转/分钟条件下搅拌提取1h，得组织液；
S6：向组织液中添加1％的酵母粉，再次除去胎盘组织液的腥味，然后通过微波加热至20～25℃，使得酵母粉完全溶解在组织液中，并通过超声波再次混匀；
S7：将S6中得到的胎盘组织液，用70um的滤膜负压过滤，得胎盘提取液，4℃静置保存，备用；
S8：将S7中得到的胎盘提取液，放入无菌的不锈钢托盘中，厚度1cm，快速置于冷冻干燥机隔板上，将样品冷冻至-40℃，然后，对冻干机进行抽真空，真空度小于20pa，干燥温度-35℃～25℃，保持时间18小时，使得含水量小于2％，得胎盘冻干粉；
S9：将S8中得到的胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊壳包装，得到胎盘冻干粉胶囊。
2.根据权利要求1所述的一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于，S4中胎盘切碎时通过切碎设备切成2～3cm3的小块。
3.根据权利要求1所述的一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于，S4中低温机器匀浆处理和低温超声匀浆处理的具体步骤为：
a、通过组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成20％组织匀浆，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否大范围破碎，若没有则可延长匀浆时间；
b、通过超声粉碎机对经组织捣碎机匀浆的组织液进一步粉碎，采用超声波发生器以振幅14um超声处理1～2min使细胞破碎，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否完全破碎，若没有则可延长匀浆时间。
4.根据权利要求1所述的一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于，S4中得到的胎盘浆的颗粒直径控制在70um以内。
5.根据权利要求1所述的一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于，S5中与胎盘浆混合的水采用无菌超纯水。
6.根据权利要求1所述的一种胎盘冻干粉胶囊制备方法，其特征在于，S5和S6中酵母粉的颗粒直径控制在1000nm以内。
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