CN107519206A - 一种人胎盘冻干粉制剂及其制备方法 - Google Patents

一种人胎盘冻干粉制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种人胎盘冻干粉制剂的制备方法：取胎盘，清洗除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，将胎盘切碎，进行低温组织匀浆处理，得胎盘浆；与纯水混匀，低渗法获取组织和细胞内活性因子，搅拌提取，得组织液；添加0.8～2％的酵母粉发酵，去除产品中腥味；用30～70μm的滤膜过滤，得胎盘提取液；冷冻干燥，得胎盘冻干粉；用胶囊囊壳(HPMCAS或CAP)包装，即得人胎盘冻干粉制剂。本发明的制备方法，先经低渗匀浆处理，然后酵母发酵去腥，再冷冻干燥，获得胎盘活性物质冻干粉，并形成胶囊制品，具有营养物质提取充分完整，效率高，无腥味，生物活性成分易于被吸收等优点，为利用胎盘资源生产高附加值的营养保健品提供了切实可行的技术方法，具有产业化前景。

Description

一种人胎盘冻干粉制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种人胎盘冻干粉制剂及其制备方法。
背景技术
胎盘，又称紫河车、胞衣、胎衣等。中医历来将胎盘视为重要药物。中医认为紫河车味甘咸，气大温，无毒。为补阴阳两虚之药，有反本还元之功。用于治疗诸虚百损，血气赢瘦，劳热骨蒸，遗精盗汗，妇人血气不足，阳萎，不孕等病症。
现在医学检测发现胎盘富含包括多种抗体、干扰素、β-抑制因子、类似凝血因子Ⅷ的纤维蛋白稳定因子，尿激酶抑制物、纤维蛋白溶酶元活化物、促性腺激素A和B、催乳素、促甲状腺激素、催产素样物质、多种甾体激素、溶菌酶、激肽酶、组胺酶、催产素酶、生长因子、氨基酸、维生素、微量元素等。具有提高造血功能、消除炎症、卵巢保健、促进泌乳、调节免疫和美容抗衰老的功能。
目前胎盘的加方法主要包括有传统的烘、烤、焙干和冷冻干燥等；传统炮制工艺通常需要经过37℃以上的温度处理，然后将干燥物研磨成细粉，由于制造温度高，导致胎盘中的活性蛋白肽、激素和微小RNA等一些热敏性营养成分大量损失，大大降低了其实际应用功效。同时传统的炮制方法的产品，通常情况下腥臭难闻，服用后容易引起恶心、反胃等不良反应。
公开号为1142949的中国专利公开了一种羊胎盘冻干粉，但其未经有效成分提取处理，仅仅是冷冻成80～200目的颗粒。公开号为101658534的中国专利申请公开的方法是在胎盘中加入液氮，粉碎温度24～25℃，将胎盘浆进行酶解60分钟，耗时过长，而蛋白酶也水解上述活性物质。公开号为102488713A的中国专利公开的方法中，采用截留分子量为2000～10000Da的超滤方法浓缩提取，丢失了大量的小分子活性物质。公开号为104894201A的中国专利申请公开的冷冻干燥方法虽然通过酶解提高了有效成分，但终止过程仍然采取95℃高温，在终止酶的作用的同时也导致大量生物活性物质失去功效。另外，现有技术中大多直接将胎盘通过冷冻干燥方法直接冻成冻干粉，在食用时活性物质通过肠胃，大部分被消化吸收，也造成活性分子功效难以发挥。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种人胎盘冻干粉制剂，并提供了其制备方法。本发明先利用组织匀浆和过渗破碎的方法获得胎盘生物活性物质，然后通过酵母粉处理掉提取成分的腥味，最终冷冻干燥成粉，并形成胶囊制品，具有营养价值高(有效成分得到了有效的
提取，且最大程度地降低了损失)、无腥味、更有利于吸收和发挥功效的优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种人胎盘冻干粉制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将胎盘浸入生理盐水或PBS缓冲液中，4～20℃下保存，时间在24h以内；
(2)取出胎盘，清洗除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，取出；
(3)将胎盘切碎(切成约3～5cm3的小块)，进行低温(0～4℃)组织匀浆处理，得胎盘浆(颗粒直径5μm～70μm)；
(4)将上述胎盘浆与水(优选超纯水)按照质量体积比(g:ml)1:2～8的比例混匀，4℃下静置1h，低渗法获取组织和细胞内活性因子，在25℃～30℃、200～500转/分钟条件下搅拌提取0.5～1小时，得组织液；添加0.8～2％的酵母粉(重量百分数)，以去除腥味；
(5)上述组织液，用30～70μm的滤膜过滤，得胎盘提取液，4℃下静置保存，备用；
(6)上述胎盘提取液，放入无菌的不锈钢样品盘中，厚度0.5～2cm，快速置于真空冷冻干燥机隔板上，降温速度控制在1～2℃/min，20～35min内将样品冷冻至-40℃；然后，对冻干机进行抽真空，抽真空度为10～15pa；升华：温度-40℃～25℃；干燥：温度在-25℃～25℃，保持时间4～10小时，使含水量小于3％，得胎盘冻干粉；
(7)上述胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊囊壳(胶囊囊壳的材料为HPMCAS或CAP)包装，即得人胎盘冻干粉制剂。
本发明的人胎盘冻干粉制剂，以足月妊娠之健康胎盘为原料，先经低渗匀浆处理，然后酵母发酵去腥，再冷冻干燥，获得胎盘活性物质冻干粉，并形成胶囊制品，具有以下优点：
(1)本发明研究形成了一整套利用人胎盘：组织匀浆、低渗处理提取、真空冷冻干燥技术和肠溶性囊壳包被制备人胎盘冻干粉的优化工艺，为利用胎盘资源生产高附加值的营养保健品提供了切实可行的技术方法和检测方法，具有产业化前景。
(2)本发明的方法具有操作步骤简单实用，营养物质提取充分完整，效率高、健康安全无添加的特点。本发明的机理是：首先使用组织匀浆获得大部分细胞悬液，经超纯水低渗处理，使组织和细胞内部的水溶性激素、免疫因子、纤连蛋白、氨基酸、小分子RNA和微量元素等释放到纯水中。经发酵去除样品中的腥味，经过冷冻真空干燥，制备出胎盘冻干粉胶囊。该生产工艺既能完整提取胎盘组织和细胞各类提取物生物学活性，又避免引入酶等加工助剂，同时减少了处理步骤，避免微生物滋生的风险，并且通过肠溶性囊壳包被使胎盘冻干粉中的生物活性成分有效到达小肠部位，被人体直接吸收利用，减少消化系统的消化损失，达到对胎盘营养价值的最大化。
(3)本发明利用真空冷冻干燥技术，在高真空条件下，将原料中冻结的冰晶，由固态升华到气态，原料在很低的温度完成了干燥过程，因而对原料所具有的生物活性分子和营养物质损失非常小。本方法通过前处理方式，避免了整体或小块胎盘冻干后需要再次使用粉碎等方法，减少了操作步骤，并且使有效成分均一稳定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1 制备人胎盘冻干粉制剂
步骤如下：
(1)采集自然分娩、孕周不大于29周的健康胎盘，采集过程进行1000ml0.9％的生理盐水清洗胎盘；将清洗后的胎盘用75％的酒精进行表面消毒，而后用500ml生理盐水冲洗；将清洗消毒完毕后的的胎盘沥干后装入无菌采样袋中，并向采样袋中加入1000mlPBS缓冲液，然后将采样袋封口；将采集到的胎盘放入疫苗箱内，在4～20℃的条件下22h内运输到制备地点；
(2)取出胎盘，用4℃生理盐水冲洗和酒精消毒胎盘表面，除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，取出；
(3)将胎盘切碎(切成约3～5cm3的小块)，进行低温(4℃)组织匀浆处理，得胎盘浆(颗粒直径5μm～70μm)；
(4)将上述胎盘浆与超纯水按照质量体积比(g:ml)1:5的比例混匀，转移至4℃冰箱冷藏放置1小时，低渗法获取组织和细胞内活性因子，在25℃～30℃、400转/分钟条件下搅拌提取1小时，得组织液；添加1.5％的酵母粉，以去除腥味；
(5)上述组织液，迅速置于4℃冰箱冷藏放置1小时，然后用30～70μm的滤膜过滤，得胎盘提取液，4℃下静置保存，备用；
(6)上述胎盘提取液，放入无菌的不锈钢样品盘中，厚度1cm，快速置于真空冷冻干燥机隔板上，降温速度控制在1～2℃/min，30min内将样品冷冻至-40℃；然后，对冻干机进行抽真空，抽真空度为10pa；升华：温度-40℃～25℃；干燥：温度在-25℃～25℃，保持时间4小时，得胎盘冻干粉，含水量小于3％；
(7)上述胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊囊壳(胶囊囊壳的材料为HPMCAS)包装，即得人胎盘冻干粉制剂。
实施例2 制备人胎盘冻干粉制剂
步骤如下：
(1)采集自然分娩、孕周不大于29周的健康胎盘，采集过程进行1000ml0.9％的生理盐水清洗胎盘；将清洗后的胎盘用75％的酒精进行表面消毒，而后用500ml生理盐水冲洗；将清洗消毒完毕后的的胎盘沥干后装入无菌采样袋中，并向采样袋中加入1000mlPBS缓冲液，然后将采样袋封口；将采集到的胎盘放入疫苗箱内，在4～20℃的条件下22h内运输到制备地点；
(2)取出胎盘，用4℃生理盐水冲洗和酒精消毒胎盘表面，除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，取出；
(3)将胎盘切碎(切成约3～5cm3的小块)，进行低温(4℃)组织匀浆处理，得胎盘浆(颗粒直径5μm～70μm)；
(4)将上述胎盘浆与超纯水按照质量体积比(g:ml)1:2的比例混匀，转移至4℃冰箱冷藏放置1小时，低渗法获取组织和细胞内活性因子，在25℃～30℃、200转/分钟条件下搅拌提取1小时，得组织液；添加0.8％的酵母粉，以去除腥味；
(5)上述组织液，迅速置于4℃冰箱冷藏放置1小时，然后用70μm的滤膜过滤，得胎盘提取液，4℃下静置保存，备用；
(6)上述胎盘提取液，放入无菌的不锈钢样品盘中，厚度1cm，快速置于真空冷冻干燥机隔板上，降温速度控制在1～2℃/min，30min内将样品冷冻至-40℃；然后，对冻干机进行抽真空，抽真空度为10pa；升华：温度-40℃～25℃；干燥：温度在-25℃～25℃，保持时间4小时，得胎盘冻干粉，含水量小于3％；
(7)上述胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊囊壳(胶囊囊壳的材料为CAP)包装，即得人胎盘冻干粉制剂。
实施例3 制备人胎盘冻干粉制剂
步骤如下：
(1)采集自然分娩、孕周不大于29周的健康胎盘，采集过程进行1000ml0.9％的生理盐水清洗胎盘；将清洗后的胎盘用75％的酒精进行表面消毒，而后用500ml生理盐水冲洗；将清洗消毒完毕后的的胎盘沥干后装入无菌采样袋中，并向采样袋中加入1000mlPBS缓冲液，然后将采样袋封口；将采集到的胎盘放入疫苗箱内，在4～20℃的条件下22h内运输到制备地点；
(2)取出胎盘，用4℃生理盐水冲洗和酒精消毒胎盘表面，除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，取出；
(3)将胎盘切碎(切成约3～5cm3的小块)，进行低温(4℃)组织匀浆处理，得胎盘浆(颗粒直径5μm～70μm)；
(4)将上述胎盘浆与超纯水按照质量体积比(g:ml)1:8的比例混匀，转移至4℃冰箱冷藏放置1小时，低渗法获取组织和细胞内活性因子，在25℃～30℃、500转/分钟条件下搅拌提取0.5小时，得组织液；添加2.0％的酵母粉，以去除腥味；
(5)上述组织液，迅速置于4℃冰箱冷藏放置1小时，然后用30μm的滤膜过滤，得胎盘提取液，4℃下静置保存，备用；
(6)上述胎盘提取液，放入无菌的不锈钢样品盘中，厚度1cm，快速置于真空冷冻干燥机隔板上，降温速度控制在1～2℃/min，30min内将样品冷冻至-40℃；然后，对冻干机进行抽真空，抽真空度为10pa；升华：温度-40℃～25℃；干燥：温度在-25℃～25℃，保持时间4小时，得胎盘冻干粉，含水量小于3％；
(7)上述胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊囊壳(胶囊囊壳的材料为HPMCAS)包装，即得人胎盘冻干粉制剂。

Claims (6)

1.一种人胎盘冻干粉制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将胎盘浸入生理盐水或PBS缓冲液中，4～20℃下保存，时间在24h以内；
(2)取出胎盘，清洗除去筋膜与血管，置于质量浓度为10％的NaCl溶液中，浸泡5h，取出；
(3)将胎盘切碎，进行低温组织匀浆处理，得胎盘浆；
(4)将上述胎盘浆与水按照质量体积比1:2～8的比例混匀，4℃下静置1h，低渗法获取组织和细胞内活性因子，在25℃～30℃、200～500转/分钟条件下搅拌提取0.5～1小时，得组织液；添加0.8～2％的酵母粉，以去除腥味；
(5)上述组织液，用30～70μm的滤膜过滤，得胎盘提取液，4℃下静置保存，备用；
(6)上述胎盘提取液，放入无菌的不锈钢样品盘中，厚度0.5～2cm，快速置于真空冷冻干燥机隔板上，降温速度控制在1～2℃/min，20～35min内将样品冷冻至-40℃；然后，对冻干机进行抽真空，抽真空度为10～15pa；升华：温度-40℃～25℃；干燥：温度在-25℃～25℃，保持时间4～10小时，使含水量小于3％，得胎盘冻干粉；
(7)上述胎盘冻干粉，在无菌条件下，用胶囊囊壳包装，即得人胎盘冻干粉制剂。
2.根据权利要求1所述的人胎盘冻干粉制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将胎盘切碎，切成3～5cm3的小块。
3.根据权利要求1所述的人胎盘冻干粉制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，胎盘浆中的颗粒直径在5μm～70μm。
4.根据权利要求1所述的人胎盘冻干粉制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中，所述水选自超纯水。
5.根据权利要求1所述的人胎盘冻干粉制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(7)中，所述胶囊囊壳的材料为HPMCAS或CAP。
6.利用权利要求1～5所述的人胎盘冻干粉制剂的制备方法制备得到的人胎盘冻干粉制剂。
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