CN103330048A - 一种羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法，羊胎盘多肽粉的制备方法包括：对羊胎盘原料进行预处理，进行组织匀浆；在匀浆液内加入

蛋白酶和风味蛋白酶，酶解、脱腥脱苦和灭酶；离心除杂，得到羊胎盘多肽溶液；浓缩干燥得到羊胎盘多肽干粉。可溶性颗粒剂的制备方法，将羊胎盘多肽干粉与菊糖或木糖按1：2的比例混匀，制成颗粒剂。本发明通过添加木糖、菊糖等将羊胎盘多肽制成一种可溶性颗粒，降低了羊胎盘多肽粉的吸水性、提高了羊胎盘多肽粉的水溶性、并且有效改善了产品风味。颗粒剂营养丰富、易于吸收、风味口感良好、并具有抗疲劳、调节免疫、美容养颜的功能。其制备方法工艺合理、制作简单、操作性强、适合于规模化生产。

Description

一种羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及一种羊胎盘多肽可溶性颗粒。特别是涉及一种将羊胎盘酶解为相对分子质量在1000以下的小分子活性多肽或游离氨基酸的混合物羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法。

背景技术

从古至今健康长寿，延续生命，青春永驻一直都是人类从不放弃的追求，随着人类社会的物质文明不断发展，科技水平不断提高，更激发了人们享受生活，探索生命奇迹的欲望。随之延缓衰老、增强体质、美容养颜的功能性食品应运而生，并且具有非常可观的经济价值。

人胎盘又名为紫河车，是一种常用的滋补强壮药，自古以来为历代名医所重用。一千多年前，唐代的陈藏器首先将人胎盘作为强壮剂记载进《本草拾遗》中。此后《本草纲目》《本经逢源》等医学古籍中对胎盘都有所记载，称：“性温无毒、入肺肝肾三经，主添精、助气、益血、扶虚、治男女虚劳、矢志恍惚等，对疲劳、消瘦、衰弱者有奇效，久服者耳聪目明、须发黑、延年益寿、有夺造化之功效”。在日本，人胎盘在各种汉方药中，普遍用于治虚劳、消瘦、慢性结核、神经衰弱、贫血、支气管哮喘、不孕症、生理不顺、防止流产、抗衰老等方面。现代医学也证明了人胎盘中含有丰富的免疫球蛋白(Ig)、活性多肽、生长因子、磷脂、多糖、氨基酸和矿物质、微量元素等活性物质。

目前人胎盘在医学上仍然有所应用，但因为伦理道德上的限制存在着广泛争议，欧洲已禁止使用人组织器官作为药物使用，中国也于2000年将人胎盘产品定义为不支持，因此未来势必落在了对动物胎盘的开发利用上。在中国虽然猪的胎盘量很多，但要牵扯到宗教中的一些问题，不利于产品的推广；而羊胎盘的营养组成与人胎盘基本一致，营养结构最接近人胎盘，成为动物胎盘的首选种类。另外羊胎盘不会感染肝炎病毒，不会与人类产生交叉感染，其他动物胎盘(包括人胎盘)很可能带有这种病毒，使用羊胎盘，相对较安全。羊胎盘原料来源丰富也为羊胎盘的深入研究和开发提供了前提条件。

胎盘制品的制备方法有多种，包括烘干法、冻干法、反复冻融法、酶解法、酸或碱水解法、有机溶剂提取法、超临界抽提法等，其中用于提取羊胎盘多肽的方法主要有反复冻融法、酸或碱水解法、酶解法、。

反复冻融法的工艺流程为：胎盘预处理→剪碎→匀浆→反复冻融→离心→微滤→超滤。其中反复冻融是整个制备工艺中最关键的一步，要求将胎盘匀浆液于-30℃左右的环境下冷冻24-48h，并且需反复冻融3-4次。该法生产周期长、成本高、产品得率较低，不易于羊胎盘多肽的大批量生产制备。

酸或碱水解法的主要原理是通过酸或碱调节PH值，使蛋白质在过酸或过碱条件下发生变性、降解，从而产生多肽或游离氨基酸。该法由于使用了强酸、强碱可造成胎盘中某些活性物质的损失，如酸解法可造成全部色氨酸、部分丝氨酸和酪氨酸的损失；碱法可使氨基酸发生消旋作用，使苏氨酸、精氨酸等大部分失活。而且该法腐蚀性强、可操作性差、并产生大量废液，可造成一定的环境污染。

酶水解法就是利用酶的特异性，在特定条件下选择性地作用于蛋白质中的某些肽键，使之降解成易于溶解和吸收的小分子多肽。该法反应条件温和、生产周期短、成本低、得率高，并能有效保留羊胎盘中的活性物质，是一种高效、环保、健康的新型技术。

目前，国内胎盘类制品主要有：胎盘多肽注射液、羊胎盘软胶囊、羊胎盘胶囊、羊胎盘口服液、羊胎盘护肤液、羊胎盘保湿滋养霜等。

我国是一个畜牧业大国，每年都有大量羊胎盘产生，然而大部分羊胎盘没有得以充分的开发利用，造成了极大的资源浪费。从一只羊胎盘中提取出的生物活性物质的价值远远大于一只羊本身的价值，如对羊胎盘进行综合开发利用，不但能改善当地农牧民的收入，增加地方财政税收，还可提高我国国民整体健康素质，这将会产生巨大的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种易于吸收、风味口感良好羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法。

本发明所采用的技术方案是：一种羊胎盘多肽粉的制备方法，包括如下阶段：

1）对羊胎盘原料进行预处理，进行组织匀浆；

2）在匀浆液内加入

蛋白酶和风味蛋白酶，酶解、脱腥脱苦和灭酶；

3）离心除杂，得到羊胎盘多肽溶液；

4）浓缩干燥得到羊胎盘多肽干粉。

阶段1）所述的羊胎盘原料预处理包括：选取新鲜羊胎盘为原料，对新鲜羊胎盘进行清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入所述新鲜羊胎盘重量0.5～1.0倍纯水组织匀浆。

阶段2）包括如下步骤：

（1）将阶段1）得到的匀浆液在90℃温度下加热10～15分钟后，调节温度至50～55℃；

（2）按每1kg新鲜羊胎盘加入5～20ml的

蛋白酶及1～5ml的风味蛋白酶的量，在步骤（1）得到的匀浆液内加入

蛋白酶和风味蛋白酶，并控制温度为50～55℃，酶解4小时；

（3）将步骤（2）得到的酶解液温度调节至30～35℃；

（4）按每1kg新鲜羊胎盘加入1.0～1.5g活性干酵母粉的量，在步骤（3）得到的酶解液内加入活性干酵母粉，培养60～90分钟；

（5）将步骤（4）得到的酶解液在90℃下加热10分钟，进行灭酶。

阶段3）所述的离心除杂，是将阶段（2）得到的酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10分钟去除水不溶物，得到澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

阶段4）所述的浓缩干燥是，将阶段3）得到的羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，得到羊胎盘多肽干粉。

所述的羊胎盘多肽干粉要满足以下条件：

（1）羊胎盘多肽干粉中多肽含量大于等于50%；

（2）羊胎盘多肽干粉中相对分子质量低于1000的羊胎盘多肽干粉要大于等于总水解物的80%。

一种羊胎盘多肽干粉的可溶性颗粒剂的制备方法，将羊胎盘多肽干粉与菊糖或木糖按1：2的比例混匀，制成颗粒剂。

本发明的一种羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法，通过添加木糖、菊糖等将羊胎盘多肽制成一种可溶性颗粒，降低了羊胎盘多肽粉的吸水性、提高了羊胎盘多肽粉的水溶性、并且有效改善了产品风味。本发明的颗粒剂营养丰富、易于吸收、风味口感良好、并具有抗疲劳、调节免疫、美容养颜的功能。本发明制备方法工艺合理、制作简单、操作性强、适合于规模化生产。

附图说明

图1是凯式定氮仪装置的结构示意图；

图中

1：电炉              2：水蒸气发生器（2L平底烧瓶）

3：螺旋夹            4：小漏斗及棒状玻塞

5：反应室            6：反应室外层

7：橡皮管及螺旋夹    8：冷凝管

9：蒸馏液接收瓶

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的一种羊胎盘多肽粉的制备方法及其可溶性颗粒的制备方法做出详细说明。

一般认为，影响酶解效果的因素有以下七种：pH、温度、时间、酶用量、底物浓度、抑制剂、激活剂。抑制剂、激活剂虽然能影响酶解速度，但一般会引入不确定的因素，使后期处理困难，出于成本及食品安全性的考虑，本发明不对这两个因素进行探索。文献中报道蛋白质酶解过程中肽键的打开会导致水解液pH值下降，因此在水解过程需不断外加碱液以维持水解液的pH值，确保酶始终处在其最适PH范围内，从而提高多肽的得率。但是因加碱液产生的大量盐会直接影响产品的离子强度和口感，增加了产品后期脱盐处理的难度，不利于降低产品成本。另外碱性条件下蛋白质的营养价值会有所降低。因此本发明中所有酶解都是在不调PH值状态下进行的。

本发明的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，包括如下阶段

1）对羊胎盘原料进行预处理，进行组织匀浆包括：选取新鲜羊胎盘为原料，对新鲜羊胎盘进行清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入所述新鲜羊胎盘重量0.5～1.0倍纯水组织匀浆；

2）酶解、脱腥脱苦和灭酶，包括如下步骤：

（1）将阶段1）得到的匀浆液在90℃温度下加热10～15分钟后，调节温度至50～55℃；

（2）按每1kg新鲜羊胎盘加入5～20ml的

蛋白酶及1～5ml的风味蛋白酶的量，在步骤（1）得到的匀浆液内加入蛋白酶和风味蛋白酶，并控制温度为50～55℃，酶解4小时；

（3）将步骤（2）得到的酶解液温度调节至30～35℃；

（4）按每1kg新鲜羊胎盘加入1.0～1.5g活性干酵母粉的量，在步骤（3）得到的酶解液内加入活性干酵母粉，培养60～90分钟；

（5）将步骤（4）得到的酶解液在90℃下加热10分钟，进行灭酶，即，将阶段（2）得到的酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10分钟去除水不溶物，得到澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液；

3）离心除杂，得到羊胎盘多肽溶液；

4）浓缩干燥得到羊胎盘多肽干粉，将阶段3）得到的羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，得到羊胎盘多肽干粉。

本发明所得到的羊胎盘多肽干粉要满足以下两个条件：

（1）采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪测定羊胎盘多肽干粉中酸溶蛋白质含量和游离氨基酸含量从而计算出羊胎盘多肽干粉中多肽含量大于等于50%；

（2）采用高效凝胶过滤色谱法对羊胎盘多肽干粉相对分子质量分布进行测定，羊胎盘多肽干粉中相对分子质量低于1000的羊胎盘多肽干粉要大于等于总水解物的80%。

本发明的采用羊胎盘多肽干粉的可溶性颗粒剂的制备方法，是将羊胎盘多肽干粉与菊糖或木糖按1：2的比例混匀，然后按下述常规方法制成颗粒剂。

混合→制软材→制粒→干燥→整粒与分级→包装。

本发明的实施例中：

所述的蛋白酶采用帝斯曼食品配料(上海)有限公司出的产品；

所述的风味蛋白酶采用诺维信中国生物技术有限公司出的产品；

所述的活性干酵母粉采用安琪酵母股份有限公司出的产品。

一、下面给出多肽含量的测定方法

1、原理

高分子蛋白质在酸性条件下易被沉淀，相对分子质量较小的蛋白质水解物（酸溶蛋白质）可溶于酸性溶液（其中包含肽及游离氨基酸）。样品经酸化后，滤液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为肽含量。

2、酸溶蛋白质含量的测定

2.1仪器与设备

凯式定氮仪装置如图1所示。

2.2操作步骤

2.2.1准确称取样品1.000g（精确至0.001g）,加入15%三氯乙酸（TCA）溶液溶解并定容至50mL,混匀并静置5min,过滤，去除初滤液，滤液作为备用液。

2.2.2吸取10.00mL～25.00mL滤液，移入干燥的100mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部碳化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h～1h。取下放冷，小心加20mL水。放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。

2.2.3测定：按图装好凯式定氮仪，于水蒸气发生瓶内装水至三分之二处，加入数粒玻璃珠，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

2.2.4向接收瓶内加入10mL硼酸溶液（20g/L）及1滴～2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下，准确吸取10mL试样处理液由小漏斗流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏5min。移动接受瓶，滴加指示剂，以硫酸或盐酸标准滴定溶液（0.05mol/L）滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时准确吸取10mL试剂空白消化液按同样步骤操作。

2.2.5试样中蛋白质的含量按下式进行计算。

$X_1=\frac{(V_1-V_2)\×c\×0.0140}{m\×10/100}\×F\×100$

式中：

X₁—试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；

V₁—试样中消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）；

V₂—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）；

C—硫酸或盐酸标准滴定液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

0.0140—1.0mL硫酸[c(1/2H₂SO₄)=0.0500mol/L]或盐酸[c(HCl)=0.0500mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g）；

m—试样的质量或体积，单位为克或毫升（g或mL）；

F—氮换算为蛋白质的系数，取6.25。

计算结果保留三位有效数字。

2.2.6重复性：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过两次测定结果算术平均值的10%。

3游离氨基酸含量的测定

3.1仪器与设备

3.1.1高效液相色谱仪：配四元梯度泵，紫外检测器，自动进样器和化学工作站软件及在线脱气机。

3.1.2分析天平：感量0.0001g。

3.1.3pH计。

3.2操作步骤

3.2.1称取样品0.5g，精确至0.0001g，于25mL容量瓶中，加5%三氯乙酸10mL沉淀2h，定容摇匀，过滤，于10000r/min离心15min，取上清液上机，采用外标法进行测定。

3.2.2色谱条件：分析柱：Hypersil AA-ODS,5μm，200mm×2.1mm（内径）。流动相：A液：含0.018%三乙胺（TEA）的20mmol/L乙酸钠缓冲液，用稀乙酸调至pH7.2，加0.3%四氢呋喃（THF）；B液：20%的100mmol/L乙酸钠缓冲液，用稀乙酸调至pH7.2,加40%乙腈和40%甲醇。梯度洗脱程序：0min时A液为100%，在17min内B液由0%至60%；18min时B液为100%，并保持至24min；25min时B液回到0%。流速：18.1min前为0.45mL/min；18.5min升至0.8mL/min,并保持至23.9min；24min降回至0.45mL/min。紫外检测；测定一级氨基酸用338nm，二级氨基酸用262nm（15min后）。荧光检测：测定一级氨基酸激发波长340nm，发射波长450nm；14.5min后将波长切换到266nm（激发）和305nm（发射）进行二级氨基酸的测定。

4试样中多肽的含量按下式进行计算。

X₁=X₂-X₃

式中：

X₁—样品中多肽含量（以干计算），%；

X₂—样品中酸溶蛋白质含量（以干计算），%；

X₃—样品中游离氨基酸含量（以干计算），%。

5重复性：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过两次测定结果算术平均值的12%。

二、下面给出高效凝胶过滤色谱法对羊胎盘多肽干粉相对分子质量分布进行测定的方法：

1原理

采用高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为固定相，依据样品组分相对分子质量大小的差别进行分离，在肽键的紫外吸收波长220nm条件下检测，使用凝胶色谱法测定相对分子质量分布的专用数据处理软件（即GPC软件），对色谱图及其数据进行处理，计算得到羊胎盘多肽的相对分子质量大小及分布范围。

2仪器和设备

2.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站或积分仪。

2.2流动相真空抽滤脱气装置。

2.3超声波振荡器。

2.4电子天平：分度值0.0001g。

3操作步骤

3.1色谱条件与系统适应性实验（参考条件）

3.1.1色谱柱:TSKgelG2000SWXL300mm×7.8mm(内径)或性能与此相近的同类型其他适用于测定蛋白质和肽的凝胶柱。

3.1.2流动相:V(乙腈)∶V(水)∶V(三氟乙酸)=20∶80∶0.1。

3.1.3检测波长:UV220nm。

3.1.4流速:0.5mL/min。

3.1.5柱温:30℃。

3.1.6进样体积：10μL。

3.1.7为使色谱系统符合检验要求，规定在上述色谱条件下，凝胶色谱柱效即理论塔板数（N）按三肽标准品（乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸）峰计算不低于10000。

3.2相对分子质量标准曲线制作

分别用流动相配制成质量浓度为1mg/mL的上述不同相对分子质量肽标准品溶液，按一定比例混合后，用孔径0.2μm～0.5μm有机膜过滤后进样，得到标准品的色谱图。以相对分子质量的对数对保留时间作图或作线性回归得到相对分子质量校正曲线及其方程。

3.3样品处理

准确称取样品10mg于10mL容量瓶中，加入少许流动相，超声振荡10min，使样品充分溶解混匀，加流动相稀释至刻度，用孔径0.2μm～0.5μm有机膜过滤，滤液按3.1的色谱条件进行分析。

4相对分子质量分布的计算

将3.3制备的样品溶液在3.1色谱条件下分析后，用GPC数据处理软件，将样品的色谱数据代入校正曲线3.2中进行计算，即可得到样品的相对分子质量及其分布范围。用峰面积归一法可计算得到不同肽段相对分子质量的分布情况，按下式进行计算：

式中：

X—试样中某相对分子质量肽段所占总肽段的质量分数，%；

A—某相对分子质量肽段的峰面积；

A总—各相对分子质量肽段的峰面积之和，A总=（其中n表示样品相对分子质量段数）。

计算结果保留小数点后一位。

5重复性

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过两次测定结果算术平均值的15%。

三、下面给出小分子羊胎盘肽对小鼠负重游泳时间的影响及与大豆多肽的比较：

1、动物分组和灌胃剂量的设计

小鼠给药前分别进行负重游泳，然后依据小鼠的负重游泳时间进行分组，并使各组间小鼠负重游泳时间无明显差异。各组分别作为羊胎盘多肽组（灌胃剂量为500mg/kg/d）、大豆多肽组（灌胃剂量为500mg/kg/d）、空白对照组（等体积的生理盐水）。适应性饲养3天后开始灌胃。每天观察小鼠的饮食、精神、毛发和大小便等状况。连续给予受试物15天，每隔一周测定一次游泳时间。

2、小鼠体重的测定

小鼠在给药前，后每三天测一次体重，算出每次称重的各组平均值，作记录。

3、负重游泳实验

在末次给予受试物30min后，给小鼠尾部绑上其体重7%重量的保险丝,，将小鼠放于水深为30cm，水温为25±1℃的游泳池内游泳。记录自游泳开始至头部全部沉入水中10秒不能浮出水面的时间作为小鼠负重游泳时间。

结论

从空白对照组和实验组小鼠给药前后负重游泳时间可以看出，空白对照组和实验组的小鼠负重游泳时间总体上都呈增长趋势，但实验组较空白对照组增加幅度大。对给药两周后小鼠负重游泳时间进行t检验，结果表明空白对照组、大豆肽组、羊胎盘肽组之间有显著性差异（P＜0.05）。以上结果表明羊胎盘肽对小鼠负重游泳时间有显著性增长作用，由此推测出羊胎盘肽具有一定的抗疲劳活性。

羊胎盘肽对小鼠负重游泳时间的影响

四、小分子羊胎盘多肽的质量标准

1原料要求

1.1蛋白酶应符合GB/T23527的规定。

1.2羊胎盘原料应符合相应食品安全标准的规定。

2感官要求

感觉要求应符合表1的规定。

表1感官要求

项目	要求
		色泽	呈白色或淡黄色，色泽均匀。
滋味、气味	具有本品固有的滋气味，无异味。
		组织形态	为松散粉末状、无结块，无肉眼可见外来杂质。

3理化指标

理化指标应符合表2规定。

表2理化指标

项目	指标
		总氮（以干基计），％                       ≥	14.5
多肽（以干基计），%                        ≥	50.0
		相对分子量小于1000的蛋白质水解物所占比例，％≥	80.0
干燥失重，%                               ≤	10.0

4污染物指标

污染物指标应符合表3的规定。

表3污染指标

项目	指标
		无机砷，mg/kg           ≤	0.5
铅，mg/kg               ≤	0.5
		镉，mg/kg               ≤	0.1
总汞（以汞计），mg/kg    ≤	0.05

5微生物指标

微生物指标应符合表4规定。

表4微生物指标

项目	指标
		菌落总数，cfu/g          ≤	5000
大肠菌群，MPN/100g       ≤	30
		霉菌，cfu/g              ≤	25
酵母菌，cfu/g            ≤	25
		致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌）	不得检出

6净含量

应符合国家《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。

五、实例：

实施例1：

1）羊胎盘原料预处理：选取新鲜羊胎盘为原料，清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入羊胎盘重量0.5倍纯水进行组织匀浆。

2）酶解及脱腥脱苦：将上述匀浆液于90℃温度下加热10min，调节温度至50℃，尔后每1kg新鲜羊胎盘加入5ml的蛋白酶及1ml的风味蛋白酶，控制温度为50℃，酶解4h。然后将酶解液温度调节至30℃，再加入1.0g的活性干酵母粉培养60分钟。最后将酶解液于90℃加热10min，进行灭酶。

3）离心除杂：将上述酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10min，去除水不溶物得澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

4）浓缩干燥：将羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，即成羊胎盘多肽干粉。

5）羊胎盘多肽的质量控制：①采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪定总氮量和游离氨基酸含量从而计算出多肽含量，本产品的多肽含量不得低于50%；②采用高效凝胶过滤色谱法对多肽相对分子质量分布进行测定，本产品中相对分子质量低于1000的多肽不得低于总水解物的80%。

6）可溶性颗粒剂的制备：将羊胎盘多肽干粉及菊糖按1:2的比例混匀，然后按常规方法制成颗粒剂。

实施例2：

1）羊胎盘原料预处理：选取新鲜羊胎盘为原料，清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入羊胎盘重量1.0倍纯水进行组织匀浆。

2）酶解及脱腥脱苦：将上述匀浆液于90℃温度下加热15min，调节温度至55℃，尔后每1kg新鲜羊胎盘加入20ml的

蛋白酶及5ml的风味蛋白酶，控制温度为55℃，酶解4h。然后将酶解液温度调节至35℃，再加入1.5g的活性干酵母粉培养90分钟。最后将酶解液于90℃加热10min，进行灭酶。

3）离心除杂：将上述酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10min，去除水不溶物得澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

4）浓缩干燥：将羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，即成羊胎盘多肽干粉。

5）羊胎盘多肽的质量控制：①采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪测定总氮量和游离氨基酸含量从而计算出多肽含量，本产品的多肽含量不得低于50%；②采用高效凝胶过滤色谱法对多肽相对分子质量分布进行测定，本产品中相对分子质量低于1000的多肽不得低于总水解物的80%。

6）可溶性颗粒剂的制备：将羊胎盘多肽干粉及木糖按1:2的比例混匀，然后按常规方法制成颗粒剂。

实施例3：

1）羊胎盘原料预处理：选取新鲜羊胎盘为原料，清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入羊胎盘重量0.7倍纯水进行组织匀浆。

2）酶解及脱腥脱苦：将上述匀浆液于90℃温度下加热13min，调节温度至52℃，尔后每1kg新鲜羊胎盘加入10ml的

蛋白酶及2ml的风味蛋白酶，控制温度为52℃，酶解4h。然后将酶解液温度调节至32℃，再加入1.2g的活性干酵母粉培养70分钟。最后将酶解液于90℃加热10min，进行灭酶。

3）离心除杂：将上述酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10min，去除水不溶物得澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

4）浓缩干燥：将羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，即成羊胎盘多肽干粉。

5）羊胎盘多肽的质量控制：①采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪测定总氮量和游离氨基酸含量从而计算出多肽含量，本产品的多肽含量不得低于50%；②采用高效凝胶过滤色谱法对多肽相对分子质量分布进行测定，本产品中相对分子质量低于1000的多肽不得低于总水解物的80%。

6）可溶性颗粒剂的制备：将羊胎盘多肽干粉及菊糖按1:2的比例混匀，然后按常规方法制成颗粒剂。

实施例4：

1）羊胎盘原料预处理：选取新鲜羊胎盘为原料，清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入羊胎盘重量0.9倍纯水进行组织匀浆。

2）酶解及脱腥脱苦：将上述匀浆液于90℃温度下加热14min，调节温度至54℃，尔后每1kg新鲜羊胎盘加入15ml的

蛋白酶及4ml的风味蛋白酶，控制温度为54℃，酶解4h。然后将酶解液温度调节至34℃，再加入1.4g的活性干酵母粉培养80分钟。最后将酶解液于90℃加热10min，进行灭酶。

3）离心除杂：将上述酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10min，去除水不溶物得澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

4）浓缩干燥：将羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，即成羊胎盘多肽干粉。

5）羊胎盘多肽的质量控制：①采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪测定总氮量和游离氨基酸含量从而计算出多肽含量，本产品的多肽含量不得低于50%；②采用高效凝胶过滤色谱法对多肽相对分子质量分布进行测定，本产品中相对分子质量低于1000的多肽不得低于总水解物的80%。

6）可溶性颗粒剂的制备：将羊胎盘多肽干粉及木糖按1:2的比例混匀，然后按常规方法制成颗粒剂。

实例5

1）羊胎盘原料预处理：选取新鲜羊胎盘为原料，清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入羊胎盘重量0.3倍纯水进行组织匀浆。

2）酶解及脱腥脱苦：将上述匀浆液于90℃温度下加热12min，调节温度至53℃，尔后每1kg新鲜羊胎盘加入17ml的

蛋白酶及3ml的风味蛋白酶，控制温度为54℃，酶解4h。然后将酶解液温度调节至31℃，再加入1.3g的活性干酵母粉培养80分钟。最后将酶解液于90℃加热10min，进行灭酶。

3）离心除杂：将上述酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10min，去除水不溶物得澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

4）浓缩干燥：将羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，即成羊胎盘多肽干粉。

5）羊胎盘多肽的质量控制：①采用凯氏定氮仪和高效液相色谱仪测定总氮量和游离氨基酸含量从而计算出多肽含量，本产品的多肽含量不得低于50%；②采用高效凝胶过滤色谱法对多肽相对分子质量分布进行测定，本产品中相对分子质量低于1000的多肽不得低于总水解物的80%。

6）可溶性颗粒剂的制备：将羊胎盘多肽干粉及木糖按1:2的比例混匀，然后按常规方法制成颗粒剂。

Claims (7)

1.一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，包括如下阶段：

1）对羊胎盘原料进行预处理，进行组织匀浆；

2）在匀浆液内加入蛋白酶和风味蛋白酶，酶解、脱腥脱苦和灭酶；

3）离心除杂，得到羊胎盘多肽溶液；

4）浓缩干燥得到羊胎盘多肽干粉。

2.根据权利要求1所述的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，阶段1）所述的羊胎盘原料预处理包括：选取新鲜羊胎盘为原料，对新鲜羊胎盘进行清洗干净，去除杂质，沥水，称重，加入所述新鲜羊胎盘重量0.5～1.0倍纯水组织匀浆。

3.根据权利要求1所述的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，阶段2）包括如下步骤：

（1）将阶段1）得到的匀浆液在90℃温度下加热10～15分钟后，调节温度至50～55℃；

（2）按每1kg新鲜羊胎盘加入5～20ml的

蛋白酶及1～5ml的风味蛋白酶的量，在步骤（1）得到的匀浆液内加入

蛋白酶和风味蛋白酶，并控制温度为50～55℃，酶解4小时；

（3）将步骤（2）得到的酶解液温度调节至30～35℃；

（4）按每1kg新鲜羊胎盘加入1.0～1.5g活性干酵母粉的量，在步骤（3）得到的酶解液内加入活性干酵母粉，培养60～90分钟；

（5）将步骤（4）得到的酶解液在90℃下加热10分钟，进行灭酶。

4.根据权利要求1所述的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，阶段3）所述的离心除杂，是将阶段（2）得到的酶解液使用6000转每分钟的高速低温离心机进行离心10分钟去除水不溶物，得到澄清透明的淡黄色液体，即羊胎盘多肽溶液。

5.根据权利要求1所述的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，阶段4）所述的浓缩干燥是，将阶段3）得到的羊胎盘多肽溶液在真空状态下浓缩至原体积的1/2，然后喷雾干燥，得到羊胎盘多肽干粉。

6.根据权利要求1所述的一种羊胎盘多肽粉的制备方法，其特征在于，所述的羊胎盘多肽干粉要满足以下条件：

（1）羊胎盘多肽干粉中多肽含量大于等于50%；

（2）羊胎盘多肽干粉中相对分子质量低于1000的羊胎盘多肽干粉要大于等于总水解物的80%。

7.一种权利要求1～6任一项所述的羊胎盘多肽干粉的可溶性颗粒剂的制备方法，其特征在于，将羊胎盘多肽干粉与菊糖或木糖按1：2的比例混匀，制成颗粒剂。

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