CN103393102B - 一种胶原多肽口服液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胶原多肽口服液的制备方法，特点是包括以下步骤：将牛皮胶原蛋白溶液中酶解得到牛皮胶原多肽溶液的步骤；将牛皮胶原多肽溶液中加入活性炭，25-35℃，脱色处理25-35min后，过滤除去活性炭得到无色透明牛皮胶原多肽溶液的步骤；然后将混合发酵剂按0.5-1.5%的比例，添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，25-45℃，发酵2.5-3h得到无腥苦味牛皮胶原多肽溶液的步骤；将原料按以下质量百分数添加到蒸馏水中：无腥苦味牛皮胶原多肽溶液20%，蜂蜜2%，柠檬酸0.6%，甘氨酸0.6%，白砂糖8%；然后在得到的混合液中加入稳定剂得到胶原多肽口服液的步骤，优点是营养丰富，口感佳且制备工艺简单。

Description

一种胶原多肽口服液的制备方法

技术领域

本发明涉及一种营养口服液的制备方法，尤其是涉及一种胶原多肽口服液的制备方法。

背景技术

牛胶原蛋白是一种重要的功能性蛋白质，与细胞增生、分化、运动、免疫、关节润滑、伤口愈合等密切相关，直接或间接地影响着我们人体的生长、衰老以及健康等。此外，胶原蛋白由于抗原性较弱，生物相容性较好，而被广泛应用于医药、食品、日用化工、生物合成等多个工业领域，如保健品、医用胶囊、外科手术材料、食用明胶、照相明胶、化妆品等。

从动物组织中提取的胶原蛋白，虽然营养十分丰富，但是其独特的三股超螺旋结构，使之性质十分稳定，不能被一般的加工工艺彻底破坏，导致其消化吸收困难，无法被人体充分利用。然而将胶原蛋白进一步水解成胶原多肽后能够显著改善其消化吸收、营养及功能特性等。目前，牛胶原蛋白降解主要是利用酸碱降解蛋白质，虽然成本较低，但是反应条件过于剧烈，蛋白质的降解产物多肽或者氨基酸结构破坏严重，产物难以控制甚至产生有毒物质；生物酶法水解由于反应条件温和、过程容易控制，安全可靠对环境无污染，对产物氨基酸的破坏小，而且酶的专一性高而得到越来与广泛的应用。

随着人们对健康的要求不断提高，胶原多肽类的产品越来越受到广大群众的青睐，使其在食品保健、化妆品、医用材料等领域都有很大的发展空间。胶原多肽口服液具有易被人体消化吸收、提高骨骼强度、保护胃黏膜、抗高血压、抗衰老和美容护肤等生理功能

目前，国内外没有公开任何关于利用牛胶原蛋白酶解产物制备功能性多肽口服液的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种营养丰富，口感佳且制备工艺简单的胶原多肽口服液的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种胶原多肽口服液的制备方法，具体包括以下步骤

（1）牛皮胶原多肽制备

将木瓜蛋白酶和胰蛋白酶同时添加到质量分数为5-10%的牛皮胶原蛋白溶液中，在pH为6.5-7.5，温度为45-55℃的条件下酶解4-8h，离心后取上清液得到牛皮胶原多肽溶液；

（2）活性炭脱色处理

将活性炭按添加量1.5-2.5%的质量体积比添加到牛皮胶原多肽溶液，在温度为25-35℃的条件下，脱色处理25-35min后，过滤除去活性炭得到无色透明牛皮胶原多肽溶液；

（3）发酵脱腥、脱苦处理

将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为4.5-6.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量0.5-1.5%的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为25-45℃的条件下，发酵2.5-3h得到无腥苦味牛皮胶原多肽溶液；

（4）调制

将无腥苦味牛皮胶原多肽溶液、蜂蜜、柠檬酸、甘氨酸和白砂糖按以下质量百分数添加到蒸馏水中：多肽液20%，蜂蜜2%，柠檬酸0.6%，甘氨酸0.6%，白砂糖8%；然后在得到的混合液中加入稳定剂后得到胶原多肽口服液。

将步骤（1）得到牛皮胶原多肽溶液进行柱层析分离纯化，所述的柱层析分离纯化过程为采用SephadexG-50作为填充剂，蒸馏水作为洗脱剂，控制流速为2mL/15min，收集三个洗脱峰的洗脱液浓缩10-12倍体积后得到得到纯度较高的牛皮胶原多肽溶液，再用于进行活性炭脱色处理。将牛皮胶原多肽溶液进行纯化处理，有效分离除去牛皮胶原多肽溶液的杂质成分，有利于后续处理的进行。

步骤（3）中所述的活性酵母和所述的嗜热链球菌的混合质量比为1:4。按该质量比混合牛皮胶原多肽溶液脱腥脱苦效果达到最佳。

步骤（3）中将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为5.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量1%的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为37-40℃的条件下，发酵2.5h得到无腥苦味牛皮胶原多肽溶液。嗜热链球菌最适温度为40℃左右，活性酵母的最适温度为32-37℃，因此发酵温度优选为37-40℃。

步骤（4）中所述的稳定剂为黄原胶、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na），所述的黄原胶的添加量为混合液质量的0.06%，所述的羧甲基纤维素钠的添加量为混合液质量的0.06%，所述的乙二胺四乙酸二钠的添加量为混合液质量的0.3%。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种胶原多肽口服液的制备方法，以牛皮胶原蛋白为原料，采用复合酶酶解制备小分子胶原多肽，并对得到的多肽混合物进行脱色脱腥脱苦，最后经调制得到功能性保健品——胶原多肽口服液，该口服液营养丰富，含有的17中氨基酸以及其他蛋白不具有的羟脯氨酸，且羟脯氨酸占总氨基含量的比例高达10%左右，同时口感佳，制备工艺简单。牛皮胶原多肽混合物进行脱色脱腥脱苦后，经冷冻真空干燥，测得其水解液游离氨基酸结果如下表1所示。

表1牛皮胶原多肽冻干粉的氨基酸组成及含量

附图说明

图1为活性炭不同添加量对脱色效果的影响结果图；

图2为活性炭不同脱色时间对脱色效果的影响结果图；

图3为活性炭不同脱色温度对脱色效果的影响结果图；

图4为牛皮胶原多肽溶液SephadexG-200和G-50柱层析结果图；

图5为牛皮胶原多肽溶液采用不同洗脱剂的柱层析结果图；

图6为牛皮胶原多肽溶液采用不同流速的柱层析结果，流速1：1mL/15min；流速2：1mL/10min；流速3:2mL/15min。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

一、试验方法

1、水解度测定

采用甲醛电位滴定法测定水解度，测定原理：甲醛可以固定氨基酸的碱基，使其羧基显示酸性，从而可以用酸度计测定电位的变化情况，然后根据显示的pH值判断和控制滴定终点，最终根据滴定过程消耗氢氧化钠的量计算水解度，按以下公式计算：

2、脱色率的测定

准确量取20ml一定浓度的牛皮胶原多肽稀释液至于100mL锥形瓶中，加入一定质量体积分数的活性炭粉末，置于一定温度水浴锅中处理一定时间，脱色结束后置于离心机中以3000r/min离心5min，离心结束后抽滤取下层脱色液待测；以蒸馏水作空白组，不添加活性炭的多肽溶液作为对照组，在最大吸收波长下测定活性炭处理前后的吸光度，计算脱色率，脱色率计算按以下公式计算：

脱色率(%)=（脱色前吸光值-脱色后吸光值）/脱色前吸光值×100%

3、肽损失率的测定

将活性炭脱色处理后的多肽液移取4mL置于纳式比色管中，加入1mL四氯化碳溶液然后用双缩脲试剂准确稀释至25ml，震荡10min，静置1h。取上层清液于离心机中以4000r/min的速度离心5min，离心结束后取紫色透明液于纳式比色皿中，在最大吸收波长下测定双缩脲法处理后的吸光度，以蒸馏水代替多肽液进行双缩脲比色法，做空白组。肽损失率计算按以下公式计算：

肽损失率(%)=（脱色前吸光值-脱色后吸光值）/脱色前吸光值×100%

4、感官评定方法

1）挑选5名嗅觉和味觉较敏感的感官评定员，采用先闻后尝的方式，分别给试验样品的腥/苦味评分。以去离子水为对照（分值为0分），分值越大，腥味、苦味越重，最高分各为5分，总分10分，感官评定指标如表2，

表2发酵脱腥和脱苦感官评定表

2）口服液感官评价见表3。综合评分=色泽×0.2+组织×0.3+气味×0.2+味道×0.3

表3口服液感官评价综合评分表

二、具体实施例

实施例1

本发明一种胶原多肽口服液的制备方法，具体包括以下步骤

（1）牛皮胶原多肽制备

将木瓜蛋白酶和胰蛋白酶同时添加到质量分数为5-10%的牛皮胶原蛋白溶液中，在pH为6.5-7.5，温度为45-55℃的条件下酶解4-8h，离心后取上清液得到牛皮胶原多肽溶液（其中木瓜蛋白酶的添加量为450U/mL，胰蛋白酶的添加量为150U/mL）；

（2）活性炭脱色处理

将活性炭按添加量2%的质量体积比添加到牛皮胶原多肽溶液，在温度为30℃的条件下，脱色处理30min后，过滤除去活性炭得到无色透明牛皮胶原多肽溶液；

（3）发酵脱腥、脱苦处理

将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为5.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量1%的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为38℃的条件下，发酵2.8h得到无腥苦味牛皮胶原多肽溶液，其中活性酵母和嗜热链球菌的混合质量比为1:4；

（4）调制

将无腥苦味牛皮胶原多肽溶液、蜂蜜、柠檬酸、甘氨酸和白砂糖按以下质量百分数添加到蒸馏水中：多肽液20%，蜂蜜2%，柠檬酸0.6%，甘氨酸0.6%，白砂糖8%；然后在得到的混合液中加入稳定剂后得到胶原多肽口服液，其中稳定剂为黄原胶、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na），黄原胶的添加量为混合液质量的0.06%，羧甲基纤维素钠的添加量为混合液质量的0.06%，乙二胺四乙酸二钠的添加量为混合液质量的0.3%。

实施例2

同上述实施例1，其区别在于：

步骤（2）中将活性炭按添加量1.5%的质量体积比添加到牛皮胶原多肽溶液，在温度为35℃的条件下，脱色处理25min；

步骤（3）中将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为4.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量1.5%的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为25℃的条件下，发酵3h。

实施例3

同上述实施例1，其区别在于：

步骤（2）中将活性炭按添加量2.5%的质量体积比添加到牛皮胶原多肽溶液，在温度为25℃的条件下，脱色处理35min；

步骤（3）中将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为6.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量0.5%的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为37℃的条件下，发酵2.5h；

实施例4

同实施例1，其区别在于：将步骤（1）得到牛皮胶原多肽溶液进行柱层析分离纯化，该柱层析分离纯化过程为采用SephadexG-50作为填充剂，蒸馏水作为洗脱剂，控制流速为2mL/15min，收集三个洗脱峰的洗脱液浓缩10-12倍体积后得到得到纯度较高的牛皮胶原多肽溶液，再用于进行活性炭脱色处理。

三、对比试验

1、牛皮胶原多肽的脱色处理

由于水解胶原蛋白得到的多肽溶液含有一定量的色素和腥味，是胶原多肽在应用上收到很大的限制，所以酶解液必须进行脱色处理。

活性炭具有发达的空隙结构，粉末活性炭比表面积（800-2000m²/g），当被脱除的有色物质分子直径小于或等于活性炭孔的入口直径时，可被活性炭吸附，起到脱色作用。活性炭高效能、快速地吸附蛋白质酶解液中的色素和腥味，但酶解液脱色液存在多肽损失率高等问题。

本试验以粉末状活性炭为脱色剂，脱色率、多肽损失率为综合指标，采用单因素试验和正交试验，对脱色工艺条件进行对比分析，确定了脱色工艺显著性影响因素的大小和脱色最佳工艺条件。

1.1活性炭添加量的确定

准确量取20ml一定浓度的牛皮胶原多肽稀释液6份，置于100mL锥形瓶中，依次按质量体积分数（g/100mL）加入0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的活性炭粉末，然后置于30℃的水浴锅中，震荡30min，脱色结束后置于离心机中以3000r/min的转速离心5min，过滤取下层脱色液测定脱色率和肽损失率；同样以蒸馏水为空白实验组，以不添加活性炭粉末的多肽溶液作为对照组。试验结果表明如图1所示：随着活性炭添加量的增大，脱色率逐渐增高，但同时肽的损失率也相应增大。活性炭用量为3.00%时，脱色率达98.19%，其肽损失率达47.24%。然而肽损失率必然不可以过大，所以综合考虑，在肽损失率的允许范围内，1.5-2.5%为活性炭添加量比较合适的区间。

1.2脱色时间的确定

准确量取20ml一定浓度的牛皮胶原多肽稀释液6份，置于100mL锥形瓶中，均按质量体积分数（g/100mL）加入1.5%的活性炭粉末，然后置于30℃的水浴锅中，依次震荡10min、20min、30min、40min、50min和60min，脱色结束后置于离心机中以3000r/min的转速离心5min，过滤取下层脱色液测定脱色率和肽损失率；同样以蒸馏水为空白实验组，以不添加活性炭粉末的多肽溶液作为对照组。试验结果表明如图2所示：随着脱色时间延长，脱色率逐步增高，但同时肽损失率也相应增大。当脱色时间超过40min时，脱色率变化不是很大，而多肽损失率继续增大。综合考虑，25-35min为比较合适的脱色时间区间。

1.3脱色温度的确定

准确量取20mL一定浓度的牛皮胶原多肽稀释液6份，置于100mL锥形瓶中，均按质量体积分数（g/100mL）加入1.5%的活性炭粉末，依次置于20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和45℃水浴锅中，震荡30min，脱色结束后置于离心机中以3000r/min的转速离心5min，过滤取下层脱色液测定脱色率和肽损失率；同样以蒸馏水为空白实验组，以不添加活性炭粉末的多肽溶液作为对照组。试验结果表明如图3所示：随着脱色温度升高增大，脱色率逐渐增大，同时肽损失率也相应增大。当温度设置在30℃以上时，肽损失率明显升高，而脱色率增大不是很明显。综合考虑，25-35℃为比较合适的脱色温度区间。

1.4活性炭脱色处理的正交试验

在单因素试验的基础上，选择活性炭添加量、脱色温度和脱色时间三个因素的优化区间，以脱色率和肽损失率为综合指标采用正交试验对脱色工艺进行优化，其因素与水平见表4，按L9（3⁴）正交表进行正交试验结果见表5。

表4正交试验因素水平表

表5正交试验的结果与分析

由表中极差分析（R值）可得，三个因素对活炭脱色效果的影响依次为：活性炭添加量＞＞脱色温度＞脱色时间，并结合实际情况，确定了活性炭脱色处理的最佳工艺条件为：活性炭的添加质量体积比为2.0%，脱色温度为30℃，脱色时间为20min，此条件下脱色率和肽损失率分别为：65.04%和30.37%。

2、牛皮胶原多肽脱腥脱苦条件的确定

将活性炭脱色处理后的牛皮胶原多肽液调节至pH5.5，添加适量的混合发酵菌剂（活性酵母和嗜热链球菌的混合质量比为1:4），置于适当温度培养箱中发酵一定时间，以感官评定为指标确定最佳的发酵脱腥、脱苦条件（单因素和正交实验方法同述活性炭脱色条件确定）。

2.1混合发酵剂添加量的确定

取5个干净的锥形瓶，各加入10mL的脱色处理后的胶原多肽溶液，然后依次按质量体积比为0.5%、0.75%、1.0%、1.25%、1.5%的混合发酵剂，置于35℃的水浴锅中，发酵2.5h。发酵结束后置于离心机中以3000r/min，离心5min，过滤后取滤液进行感官评定。由实验结果可知，当发酵温度和时间一定时，发酵剂添加量越大，感官评定分值越低，也就表示脱腥、脱苦效果越好。但当混合发酵剂添加量达1.25%及以上时，容易使液体变得浑浊。故选择发酵剂添加量为1.0%。

2.2发酵脱腥、脱苦时间的确定

取5个干净的锥形瓶，各加入10mL的脱色处理后的胶原多肽溶液，加入1.0%的混合发酵剂，置于35℃水浴锅中，依次发酵1.5h、2.0h、2.5h、3.0h和3.5h。发酵结束后置于离心机中以3000r/min，离心5min，过滤后取滤液进行感官评定。由实验结果可知，当混合发酵剂添加量和发酵温度一定时，发酵时间越长，感官评定分值越小，即表示脱腥、脱苦效果越好。但当发酵时间达3h及以上时，外加酵母腥味变得明显，并容易使液体变得浑浊。故选择发酵时间为2.5h。

2.3发酵脱腥、脱苦温度的确定

取5个干净的锥形瓶，各加入10mL的脱色处理后的胶原多肽溶液，加入0.8%的混合发酵剂，依次置于25℃、30℃、35℃、40℃和45℃水浴锅中，发酵2.5h。发酵结束后置于离心机中以3000r/min，离心5min，过滤后取滤液进行感官评定。由实验结果可知，当发酵剂添加量和发酵时间一定时，发酵温度越高，感官评定分值越小，即脱腥、脱苦效果越好。但当发酵温度达40℃及以上时，酵母腥味变得明显，故选择发酵温度为35℃。

2.4牛皮胶原多肽脱腥、脱苦正交试验

在混合发酵剂发酵脱腥、脱苦的单因素试验基础上，以感官评定为指标采用正交试验对脱腥、脱苦工艺进行优化，其因素与水平见表6，按L9（3⁴）正交表进行正交试验结果见表7。

表6正交试验因素与水平

表7正交试验的结果与分析

由表7可知，以腥味、苦味的感官评分为综合指标，分值越大，表示腥味、苦味越重。由极差分析（R值）可得，三个因素对胶原多肽溶液脱腥、脱苦效果的影响依次为：A＞B＞C，优化所得条件为：A₂B₃C₁，即混合发酵剂添加量为1.0%，发酵时间为3h，发酵温度35℃。按照此条件对胶原多肽溶液脱腥、脱苦，腥苦味明显减弱，且有微量的乳酸清香味。

3、胶原多肽口服液最佳配方的确定

确定影响胶原多肽口服液的胶原多肽液、风味调配物（蜂蜜）、脱苦物质（柠檬酸、甘氨酸和白砂糖）的添加量，采用L16（4⁵）的正交试验法，以感官评定为指标，确定最佳配方，其因素与水平见表8，按L16（4⁵）正交表进行正交试验结果见表9。

表8正交试验因素水平表

表9正交试验的结果与分析

由表9极差分析可知，五种风味调配物对口服液的口感影响依次为：B＞E＞A＞C＞D，优化所得最佳配方为：B₁E₄A₁C₂D₁，即多肽液添加量为20%，蜂蜜添加量为2%，柠檬酸添加量为0.6%，甘氨酸添加量为0.6%，白砂糖添加量为8%。按照此配方重新进行风味调配，制得的口服液口感较好。

4、胶原多肽口服液的稳定性研究

以稳定效果（4000r/min，离心10min，观察其底部的沉淀层厚度，以mm计）为评分标准，确定稳定剂中黄原胶、CMC-Na、EDTA-2Na的添加比例和添加量。以稳定效果为判断依据，试验得出，当黄原胶、CMC-Na、EDTA-2Na按不同比例添加的沉淀层厚度如表10所示。

表10稳定剂添加比例对口服液沉淀层的影响

由表10可知，当黄原胶、CMC-Na、EDTA-2Na按0.06%、0.06%和0.30%（m/v）的比例添加时，口服液的稳定效果最佳。

5、胶原多肽口服液质量指标检测

胶原多肽口服液微生物的检测参照GB4789.21；蛋白质含量的测定参照GB/T5009.5-2003，结果如表11所示。

表11口服液质量指标检测结果

从表10可知，胶原多肽口服液的各项质量指标均达到了国家标准。

6、牛皮胶原多肽分离纯化条件的确定

多肽因其分子量不同会具有不同的生理活性及功能，所以为了能更有效得利用各组分的多肽物质，需对胶原蛋白酶解液进行分离纯化，得到分子量单一的组分，以便提高胶原多肽利用率。

取酶解液各5mL，分别上SephadexG-200和G-50凝胶柱层析，依次选择pH7.0的蒸馏水和生理盐水作为不同的洗脱剂，在不同的流速下收集洗脱液，并在紫外检测波长λ=230nm下测定其吸光度，以吸光度对管数绘制洗脱曲线，研究不同洗脱剂和洗脱速度对洗脱效果的影响，从而确定最适分离条件，同时将洗脱效果最佳的不同溶液峰收集冷冻干燥备用。

2.1葡聚糖凝胶型号对分离效果的影响

将胶原多肽混合液分别上SephadexG-200和SephadexG-50凝胶柱，以蒸馏水为洗脱剂，控制流速为2mL/15min，收集洗脱组分并测定吸光度，洗脱曲线如图4所示。由图4可知，多酶复合制备得到的牛皮胶原多肽混合液经SephadexG-200和G-50柱层析可收集三个组分，其中经SephadexG-200柱层析后三个组分并没有完全分开，不能很好的收集三个组分，而经过SephadexG-50柱层析后三个组分基本完全分离，可以分别收集三个组分。相比较之下，SephadexG-50对胶原多肽的分离效果更好，故选择SephadexG-50对牛皮胶原多肽混合液进行分离。

2.2柱层析洗脱剂对分离效果的影响

选择SephadexG-50对胶原多肽液进行柱层析，控制流速2mL/15min，分别以蒸馏水和生理盐水作为洗脱剂，收集不同的洗脱组并测定吸光度，洗脱曲线如图5。由图5可知，以蒸馏水作为洗脱剂时对胶原多肽的分离效果比以生理盐水作为洗脱剂时的分离效果要好，可以清楚的收集到三个组分，故选择蒸馏水作为胶原多肽柱层析的洗脱剂。

2.3柱层析流速对分离效果的影响

选择SephadexG-50对胶原多肽液进行柱层析，以蒸馏水作为洗脱剂，分别控制流速为2mL/15min、1mL/15min、1mL/10min，收集不同的洗脱组分并测定吸光度，洗脱曲线如图6所示。由图6可知，当流速为2mL/15min时，胶原多肽组分的分离效果最佳，相较于其它流速可以清楚的收集三个组分。故选择2mL/15min作为最佳的葡聚糖凝胶柱层析流速。

用G-50作为填充剂，蒸馏水作为洗脱剂，控制流速为2mL/15min时，柱层析的分离效果最佳，采用甲醛滴定法测定柱层析各组分溶液游离氨基态氮，可以得到三个溶液峰多肽含量依次为43.90%，34.15%和13.17%，总多肽回收率为91.22%。采用SDS-PAGE方法进行分子量测定，测得其分子量依次为3.0KDa，6.0KDa和10.0KDa，与多肽混合液的分子量分布吻合。

上述实施例是对本发明的进一步说明，但本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (1)

1.一种胶原多肽口服液的制备方法，其特征在于包括以下步骤 

(1)牛皮胶原多肽制备 

将木瓜蛋白酶和胰蛋白酶同时添加到质量分数为5-10％的牛皮胶原蛋白溶液中，在pH为6.5-7.5，温度为45-55℃的条件下酶解4-8h，离心后取上清液得到牛皮胶原多肽溶液；将牛皮胶原多肽溶液进行柱层析分离纯化，所述的柱层析分离纯化过程为采用Sephadex G-50作为填充剂，蒸馏水作为洗脱剂，控制流速为2mL/15min，收集三个洗脱峰的洗脱液浓缩10-12倍体积后得到纯度较高的牛皮胶原多肽溶液，再用于进行活性炭脱色处理； 

(2)活性炭脱色处理 

将活性炭按添加量1.5-2.5％的质量体积比添加到牛皮胶原多肽溶液，在温度为25-35℃的条件下，脱色处理25-35min后，过滤除去活性炭得到无色透明牛皮胶原多肽溶液； 

(3)发酵脱腥、脱苦处理 

将无色透明牛皮胶原多肽溶液pH调整为5.5，将由活性酵母和嗜热链球菌组成的混合发酵剂按添加量1％的质量体积比添加到透明无色牛皮胶原多肽溶液中，在温度为37-40℃的条件下，发酵3h得到无腥苦味牛皮胶原多肽溶液；所述的活性酵母和所述的嗜热链球菌的混合质量比为1:4； 

(4)调制 

将无腥苦味牛皮胶原多肽溶液、蜂蜜、柠檬酸、甘氨酸和白砂糖按以下质量百分数添加到蒸馏水中：多肽液20％，蜂蜜2％，柠檬酸0.6％，甘氨酸0.6％，白砂糖8％；然后在得到的混合液中加入稳定剂后得到胶原多肽口服液，所述的稳定剂为黄原胶、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)，所述的黄原胶的添加量为混合液质量的0.06％，所述的羧甲基纤维素钠的添加量为混合液质量的0.06％，所述的乙二胺四乙酸二钠的添加量为混合液质量的0.3％。