CN112159835B - 一种通过探针捕获富集核酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种通过探针捕获富集核酸的方法,属于分子生物学检测技术领域。本发明公开了一种新型的核酸捕获探针组合,包括磁珠以及能够与磁珠相连的特异性寡核苷酸序列,所述特异性寡核苷酸序列能够与靶核酸通过碱基互补原理产生特异性结合。采用该核酸捕获探针组合,使其根据碱基互补原理与靶核酸特异性结合,形成靶核酸‑探针杂合体,然后经磁分离、洗涤,去除蛋白质和其他非特异核酸,能够得到富集纯化的靶核酸分子。本发明所述方法可以特异性地捕获目标基因,实现纯化和富集核酸目的,增加检测特异性和准确性,提高检测灵敏度,降低假阴性结果检出。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学检测技术领域,具体涉及一种核酸检测样本的富集方法。
背景技术
核酸检测法是通过查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的DNA和RNA,来判断是否被病毒感染的方法,是新型冠状病毒感染确诊的金标准。
目前新冠病毒检测通常方式是使用病毒RNA提取试剂盒来提取新冠病毒的RNA,再以提取的RNA为模板进行荧光定量PCR检测。病毒RNA提取试剂盒的起始样本使用量是200μL,然后与反应缓冲液结合后经过树脂柱(或者磁珠)吸附方式分离样本中的RNA,经过洗涤后,使用50-100μL无核酸酶水洗脱,这个过程中样本RNA损失40-60%,所以洗脱后收集的浓度与原始样本浓度相当。在新冠病毒检测中,临床医生反映核酸检测存在较高“假阴性”,一些有疑似症状病人通常需要三到四次检测才能确诊为阳性。其中主要的一个方面是样本中的病毒载量很低.目前国内新冠病毒核酸检测试剂盒的最低检测限基本在300—1000拷贝/ML左右,而且对于处于如此低浓度的病毒载量的样本,检测结果经常CT值处于灰区,结果不好判读,需要重新进行检测。因此如果能够把新冠病毒核酸富集后作为扩增反应的模板将极大提高新冠病毒的检出率。
发明内容
针对上述不足,本发明设计了一种新型的核酸捕获探针组合,采用该核酸捕获探针组合,使其根据碱基互补原理与靶核酸特异性结合,形成靶核酸-探针杂合体,然后经磁分离、洗涤,去除蛋白质和其他非特异核酸,能够得到富集纯化的靶核酸分子。采用该方式可以特异性地捕获目标基因,实现纯化和富集核酸目的,增加检测特异性和准确性,提高检测灵敏度,降低假阴性结果检出。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种特异性的核酸捕获探针组合,包括磁珠以及能够与磁珠相连的特异性寡核苷酸序列。所述特异性寡核苷酸序列能够与靶核酸通过碱基互补原理产生特异性结合。作为可选方式,在上述核酸捕获探针组合中,所述磁珠通过活化羧基与所述特异性寡核苷酸序列相连。进一步的,选择通过EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)活化磁珠上的羧基,可以实现特异性寡核苷酸序列与磁珠的稳定结合,从而便于通过磁分离实现对靶基因的分离与纯化。
作为可选方式,在上述核酸捕获探针组合中,通过间接方式将特异性寡核苷酸序列交联到磁珠,例如通过链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用、主客体配位作用、静电吸附作用等,可以实现特异性寡核苷酸序列与磁珠的稳定结合,从而便于通过磁分离实现对靶基因的分离与纯化。
作为可选方式,在上述核酸捕获探针组合中,包括链霉亲和素磁珠和生物素标记的特异性寡核苷酸序列。利用链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用,可以实现特异性寡核苷酸序列与磁珠的稳定结合,从而便于通过磁分离实现对靶基因的分离与纯化。
作为可选方式,在上述核酸捕获探针组合中,上述特异性寡核苷酸序列与靶核酸结合的位点与核酸检测的靶点不同。所述特异性寡核苷酸序列与靶核酸的特异性结合不会对后续的核酸检测造成不利影响。
作为可选方式,被捕获的靶核酸为新冠病毒基因。
作为可选方式,在上述核酸捕获探针组合中,所述特异性寡核苷酸序列具体为以下序列中的一种或几种:
名称 | 序列 |
CP1 | 5’AGACTCATCAAATAAGTAGTATGTAGCCA3’ |
CP2 | 5’ACATTGGCTGCATTAACAAC3’ |
CP3 | 5’TGGAGGGTAGAAAGAACAATACATAT3’ |
CP4 | 5’ACATTCCGAAGAACGCTGAAG3’ |
CP5 | 5’TTATTCAGCAAAATGACTTGATCTT3’ |
CP6 | 5’CAGCATTGTTAGCAGGATTG3’ |
本发明还提供了一种通过探针捕获富集核酸的方法,其特征在于,采用上述核酸捕获探针组合,使其根据碱基互补原理与靶核酸特异性结合,形成靶核酸-探针杂合体,然后经磁分离、洗涤,去除蛋白质和其他非特异核酸,得到富集的靶核酸分子。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,再经60-100℃孵育1-5min洗脱,得到纯化的靶核酸分子。进一步的,采用65℃孵育2min对磁珠-探针-靶核酸复合体进行处理,使靶核酸-探针杂合体解离,再通过磁分离吸附磁珠,取上清即获得不含磁珠的靶核酸分子。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,具体包括以下步骤:
(1)将磁珠与特异性寡核苷酸序列混合,使磁珠与特异性寡核苷酸序列相连接,形成磁珠-探针复合物;
(2)将磁珠-探针复合物与样本混合,使特异性寡核苷酸序列与靶基因特异性结合,形成靶核酸-探针复合体;
(3)经磁分离、洗涤,去除蛋白质和其他非特异核酸,得到富集的靶核酸分子。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,具体包括以下步骤:
(1)将特异性寡核苷酸序列与样本混合,使特异性寡核苷酸序列与靶基因特异性结合,形成特异性寡核苷酸序列-靶核酸复合物;
(2)将特异性寡核苷酸序列-靶核酸复合物与磁珠混合,磁珠与特异性寡核苷酸序列相连接,形成靶核酸-探针杂合体;
(3)经磁分离、洗涤,去除蛋白质和其他非特异核酸,得到富集的靶核酸分子。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,还包括步骤(4):向步骤(3)中所得的富集纯化的靶核酸分子中加入无核酸酶水,60-100℃孵育1-5分钟后,进行磁分离,取上清,获得不含磁珠的靶核酸分子。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,具体包括以下步骤:
1)吸取1ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2mg玻璃珠的EP管中,用旋转混匀仪2000-3000转振荡5min;
2)吸取步骤1)中的上清液加入到新的EP管中,然后向其中加入120μl 10×BufferI和磁珠-探针组合,65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min,得到磁珠-探针-核酸复合体样本;
3)磁分离弃除上清,加入100μl 1×Buffer I,振荡混匀,磁分离弃除上清;
4)加入100μl Buffer II,振荡混匀,磁分离弃除上清。
在上述方法中,Buffer II比Buffer I盐浓度低些,避免用同样的低浓度洗两次可能导致靶核酸和探针复合体打开。也可以去掉步骤3),直接进行步骤4)清洗一次。
作为可选方式,还包括以下步骤:
5)加入5μl无核酸酶水,振荡混匀,65℃孵育2min;
6)磁分离,吸取上清作为PCR扩增模板。
作为可选方式,所述Buffer II中含[0.15M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mMEDTA],所述Buffer I中含[0.5M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mM EDTA],所述10×Buffer I中含[5M NaCl,200mM Tris-HCl(pH 7.5),10mM EDTA]。
作为可选方式,在所述步骤2)中为避免磁珠下沉,偶尔用手晃动一下。
作为可选方式,对步骤2)中的新冠病毒RNA捕获磁珠作如下预处理:取200μg新冠病毒RNA捕获磁珠加入到一个干净的无核酸酶的离心管中,加入100μl Buffer I振荡混匀磁珠,置于磁力架上磁分离30s,弃除上清,备用。
作为可选方式,在上述通过探针捕获富集核酸的方法中,具体包括以下步骤:
1)将生物素标记的探针用TE缓冲液稀释至100μM,再将其溶解于Buffer I中,使其工作终浓度为10μM;
2)吸取1ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2mg玻璃珠的EP管中,用旋转混匀仪低速振荡5min;
3)吸取步骤2)中的上清液加入到新的EP管中,然后向其中加入120μl 10×BufferI,再加入8μl步骤1)制备中的浓度为10μM的生物素探针溶液,振荡混匀,65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min,得到生物素探针-核酸复合体样本;
4)将步骤3)中得到的生物素探针-RNA复合体样本与200μg链霉亲和素磁珠混合,振荡混匀,室温反应5min;
5)磁分离弃除上清,加入100μl Buffer I,振荡混匀,磁分离弃除上清;
6)加入100μl Buffer II,振荡混匀,磁分离弃除上清。
作为可选方式,还包括以下步骤:
7)加入5μl无核酸酶水,振荡混匀,65℃孵育2min;
8)磁分离,吸取全部上清作为PCR扩增模板。
本发明还公开了一种上述的特异性的核酸捕获探针组合的应用,其特征在于,将其用于基因检测。进一步的,将其用于制备基因检测试剂盒。
本发明还公开了一种基因检测方法,其特征在于,检测之前先采用本发明所述的方法对样品中的核酸进行捕获和富集纯化。
作为可选方式,在上述基因检测方法中,采用PCR技术进行基因检测。
本说明书中公开的所有特征,或公开的所有方法或过程中的步骤,除了互相排斥的特征和/或步骤以外,均可以以任何方式组合。
本发明具有以下有益效果:
本发明通过探针捕获富集核酸的方法可以特异性地捕获目标基因,实现纯化和富集核酸目的,增加检测特异性和准确性,提高检测灵敏度,降低假阴性结果检出。
附图说明
图1是本发明所述特异性的核酸捕获探针组合的结构示意图;
图2是本发明实施例1所述基因检测结果图;
图3是本发明实施例2所述基因检测结果图;
图4是本发明实施例3所述基因检测结果图;
图5是本发明实施例4所述基因检测结果图;
图6是本发明实施例5所述基因检测结果图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明。有必要指出,以下实施例只用于对本发明作进一步说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,所属领域技术人员根据上述发明内容,对本发明做出一些非本质的改进和调整进行具体实施,仍属于发明保护的范围。
实施例1
准备特异序列的寡核苷酸序列:使用DNA合成仪通过固相亚磷酰胺三酯法合成以下几种特异序列的寡核苷酸序列:
名称 | 序列 |
CP1 | 5’AGACTCATCAAATAAGTAGTATGTAGCCA3’ |
CP2 | 5’ACATTGGCTGCATTAACAAC3’ |
CP3 | 5’TGGAGGGTAGAAAGAACAATACATAT3’ |
CP4 | 5’ACATTCCGAAGAACGCTGAAG3’ |
CP5 | 5’TTATTCAGCAAAATGACTTGATCTT3’ |
CP6 | 5’CAGCATTGTTAGCAGGATTG3’ |
准备羧基磁珠-探针组合
1)涡旋振荡重悬商品化羧基磁珠。取100μL磁珠到EP管中,磁分离后弃上清。
2)加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离后弃上清。
3)加入80μL偶联缓冲液中和5nmol特异序列的寡核苷酸CP1,在室温下孵育30分钟。
5)向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒,磁分离并吸弃上清。
7)向羧基磁珠加入500μL存储缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
偶联缓冲液:50mM MES[2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid],pH 6.0,0.01%Triton X-100;
EDC[1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide];
淬灭缓冲液:TBS(25mM Tris-Cl,130mM NaCl,2.7mM KCl),pH 8,0.01%TritonX-100;
保存缓冲液:TBS(25mM Tris-Cl,130mM NaCl,2.7mM KCl),pH 8,0.0.01%TritonX-100 0.1%BSA,0.1%proclin-300
准备以下试剂:
Buffer II[0.15M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mM EDTA]
Buffer I中[0.5M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mM EDTA]
10×Buffer I中[5M NaCl,200mM Tris-HCl(pH 7.5),10mM EDTA]
1)吸取1ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2mg玻璃珠的EP管中,用旋转混匀仪2000-3000转振荡5min;
2)取200μg新冠病毒RNA捕获磁珠加入到一个干净的无核酸酶的离心管中,加入100μl Buffer I振荡混匀磁珠,置于磁力架上磁分离30s,弃除上清,备用,
3)吸取步骤1)中的上清液加入到新的EP管中,然后向其中加入120μl 10×BufferI和新冠病毒RNA捕获磁珠,65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min,得到磁珠-探针-核酸复合体样本;
4)磁分离弃除上清,加入100μl Buffer I,振荡混匀,磁分离弃除上清;
5)加入100μl Buffer II,振荡混匀,磁分离弃除上清;
6)加入5μl无核酸酶水,振荡混匀,65℃孵育2min;
7)磁分离,吸取全部上清作为PCR扩增模板;
8)采用PCR扩增技术进行基因检测,采用新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)试剂盒。
对比例1
采用现有技术中的磁珠法病毒RNA提取试剂盒或者离心吸附柱方式病毒RNA提取试剂盒进行RNA提取获取核酸作为扩增模板。并采用与实施例1完全相同的PCR扩增方法进行基因检测。选择样本浓度及对应测试结果如下表所示:
实施例2
参照实施例1所述方法,其不同之处仅在于:直接将所述步骤5)中所得产物作为PCR扩增模板进行基因检测,而不再进行步骤6)和7)对应的处理,其余处理方式均匀实施例1完全相同。
结果如图3所示:采用本实施例所述方法取得与实施例1基本相同的效果,CT值基本一致,直接将所述步骤5)中所得产物作为PCR扩增模板进行基因检测时,检测到的荧光信号值(红色曲线)略低于经过步骤6)和7)对应的处理后作为扩增模板的信号值,。
实施例3
准备特异性寡核苷酸序列CP2:
参照实施例1所述方法,其不同之处仅在于:将特异性寡核苷酸序列1替换为特异性寡核苷酸序列2,其余处理方式均匀实施例1完全相同。
结果如图4所示:采用本实施例所述方法取得与实施例1基本相同的效果。
实施例4
准备特异性寡核苷酸序列CP3:
参照实施例1所述方法,其不同之处仅在于:将特异性寡核苷酸序列1替换为特异性寡核苷酸序列2,其余处理方式均匀实施例1完全相同。
结果如图5所示:采用本实施例所述方法取得与实施例1基本相同的效果。
实施例5
准备特异性寡核苷酸序列CP1:
准备特异性寡核苷酸序列CP2:
准备特异性寡核苷酸序列CP3:
参照实施例1所述方法,其不同之处仅在于:在步骤1)中同时加入三种特异性寡核苷酸序列,其余处理方式均匀实施例1完全相同。
结果如图6所示:采用本实施例所述方法取得与实施例1基本相同的效果。
实施例6
准备链霉亲和素磁珠,本实施例采用从New England Biolabs购买的商品化链霉亲和素磁珠
使用DNA合成仪通过固相亚磷酰胺三酯法合成特异性寡核苷酸序列并进行生物素标记,获得生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP4
准备以下试剂:
Buffer II[0.15M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mM EDTA]
Buffer I中[0.5M NaCl,20mM Tris-HCl(pH 7.5),1mM EDTA]
10×Buffer I中[5M NaCl,200mM Tris-HCl(pH 7.5),10mM EDTA]
PBS(0.01M,pH 7.2-7.4)
1)将生物素标记的探针用TE缓冲液稀释至100μM,再将其溶解于Buffer I中,使其工作终浓度为10μM;
2)吸取1ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2mg玻璃珠的EP管中,用旋转混匀仪低速振荡5min;
3)吸取步骤2)中的上清液加入到新的EP管中,然后向其中加入120μl 10×BufferI,再加入8μl步骤1)制备中的浓度为10μM的生物素探针溶液,振荡混匀,65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min,得到生物素探针-核酸复合体样本;
4)取200μg链霉亲和素磁珠加入到一个干净的无核酸酶的离心管中,加入100μlBuffer I振荡混匀磁珠,置于磁力架上磁分离30s,弃除上清,备用,将步骤3)中得到的生物素探针-RNA复合体样本与链霉亲和素磁珠混合,振荡混匀,室温反应5min;
5)磁分离弃除上清,加入100μl Buffer I,振荡混匀,磁分离弃除上清;
6)加入100μl Buffer II,振荡混匀,磁分离弃除上清;
7)加入5μl无核酸酶水,振荡混匀,65℃孵育2min;
8)磁分离,吸取全部上清作为PCR扩增模板;
9)采用PCR扩增技术进行基因检测,采用新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)试剂盒。
对比例2
采用现有技术中的磁珠法病毒RNA提取试剂盒进行RNA提取获取核酸,作为扩增模板。并采用与实施例1完全相同的PCR扩增方法进行基因检测。选择样本浓度及对应测试结果如下表所示:
结果显示103拷贝/ML的样本富集后检测CT值提前3-5之间,102拷贝/ML的样本未经过富集不能检出,经过富集后可以检测得到。另外磁珠-探针法富集核酸过程只是替代之前病毒RNA提取过程,处理时间没有增加。
实施例7
请参照实施例6的所述方法,其不同之处仅在于先将磁珠与探针混合再与核酸混合,最终各浓度的基因检测结果与实施例6基本一致。
实施例8
参照实施例6所述方法,其不同之处仅在于:直接将所述步骤6)中所得产物作为PCR扩增模板进行基因检测,而不再进行步骤7)和8)对应的处理,其余处理方式均匀实施例6完全相同。
结果显示:采用本实施例所述方法取得与实施例6基本相同的效果。
实施例9
准备生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP5:
参照实施例6所述方法,其不同之处仅在于:将生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP4替换为生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP5,其余处理方式均匀实施例6完全相同。
结果显示:采用本实施例所述方法取得与实施例6基本相同的效果。
实施例10
准备生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP6:
参照实施例6所述方法,其不同之处仅在于:将生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP4替换为生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP6,其余处理方式均匀实施例6完全相同。
结果显示:采用本实施例所述方法取得与实施例6基本相同的效果。
实施例11
准备生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP4:
准备生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP5:
准备生物素标记的特异性寡核苷酸序列CP6:
参照实施例6所述方法,其不同之处仅在于:在步骤1)中同时加入三种生物素标记的特异性寡核苷酸序列,其余处理方式均匀实施例6完全相同。
结果显示:采用本实施例所述方法取得与实施例6基本相同的效果。
上述实施例仅为本发明的优选实施方式,不应当用于限制本发明的保护范围,但凡在本发明的主体设计思想和精神上作出的毫无实质意义的改动或润色,其所解决的技术问题仍然与本发明一致的,均应当包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 北京吉检医疗科技有限公司
<120> 一种通过探针捕获富集核酸的方法
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agactcatca aataagtagt atgtagcca 29
<210> 2
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
acattggctg cattaacaac 20
<210> 3
<211> 26
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tggagggtag aaagaacaat acatat 26
<210> 4
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
acattccgaa gaacgctgaa g 21
<210> 5
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ttattcagca aaatgacttg atctt 25
<210> 6
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cagcattgtt agcaggattg 20
Claims (8)
1.一种非诊断目的的基因检测方法,其特征在于,其特征在于,具体包括以下步骤:
1)吸取1 ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2 mg玻璃珠的EP管中,用旋转混匀仪2000-3000转振荡5 min;
2)取200 μg特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合加入到一个干净的无核酸酶的离心管中,加入100 µl Buffer I振荡混匀磁珠,置于磁力架上磁分离30 s,弃除上清,备用;所述特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合包括磁珠和特异性寡核苷酸序列,所述特异性寡核苷酸序列与磁珠相连,所述特异性寡核苷酸序列能够与靶核酸通过碱基互补原理产生特异性结合,所述特异性寡核苷酸序列具体为以下序列中的一种或几种:
所述Buffer I包括:0.5 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA;
3)吸取步骤1)中的上清液加入到新的EP管中,然后向其中加入120μl10×Buffer I和新冠病毒RNA捕获磁珠,65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min,得到磁珠-探针-核酸复合体样本;
4)磁分离弃除上清,加入100 µl Buffer I,振荡混匀,磁分离弃除上清;
5)加入100 µl Buffer II,振荡混匀,磁分离弃除上清,所述Buffer II包括:0.15 MNaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA;
6)取步骤5)中所得产物作为PCR扩增模板,采用PCR扩增技术进行基因检测;
采用所述方法能够检测出102拷贝/ ML的样本。
2.根据权利要求1所述的非诊断目的的基因检测方法,其特征在于,在所述步骤5)之后包括以下步骤:
a)加入5 µl无核酸酶水,振荡混匀,65 ℃孵育2 min;
b)磁分离,吸取全部上清作为PCR扩增模板;
c)采用PCR扩增技术进行基因检测。
3.根据权利要求1或2所述的非诊断目的的基因检测方法,其特征在于,采用新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒通过荧光PCR法检测。
4.根据权利要求1所述的非诊断目的的基因检测方法,其特征在于,通过间接方式将特异性寡核苷酸序列交联到磁珠,所述间接方式包括链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用、主客体配位作用、静电吸附作用中的一种或几种。
6.根据权利要求5所述的核酸富集试剂盒,其特征在于,还包括Buffer I、Buffer II和10×Buffer I;所述Buffer I包括:0.5 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mMEDTA,所述Buffer II包括:0.15 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA;所述10×BufferI包括5 M NaCl, 200 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 10 mM EDTA。
7.根据权利要求5所述的核酸富集试剂盒,其特征在于,通过间接方式将特异性寡核苷酸序列交联到磁珠,所述间接方式包括链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用、主客体配位作用、静电吸附作用中的一种或几种。
8.一种基因检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求5或6或7所述的核酸富集试剂盒。
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