CN112159771B - 聚丙烯高效降解菌株licme 200610 wgh-6及其生产的菌剂和应用 - Google Patents

聚丙烯高效降解菌株licme 200610 wgh-6及其生产的菌剂和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH‑6及其生产的菌剂和应用,该菌株经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏时间为2020年8月13日,保藏编号为CGMCC No.20527。本发明经分离筛选获得聚丙烯降解菌株,可以有效用于生物降解聚丙烯,如聚丙烯塑料膜片、颗粒、粉末,采用本发明的菌株进行聚丙烯塑料降解,处理30天后聚丙烯膜片表面有明显的生物侵蚀孔洞,膜片亲水性显著提升,表面破损严重,该降解绿色环保,成本低,操作方便,适合治理自然环境中很难被降解的聚丙烯废弃物,对于保护生态环境、人体的身体健康具有重要意义。

Description

聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH-6及其生产的菌剂和 应用
技术领域
本发明涉及环境污染微生物修复,具体涉及一株可聚丙烯高效降解菌株LICME200610 WGH-6及其生产的菌剂和应用。
背景技术
塑料种类繁多、数量巨大、应用及其广泛。其中聚丙烯(Polypropylene,PP)是全球第二大最广泛生产和使用的塑料聚合物,仅次于聚乙烯。据报道,全球PP市场在2013年已达到约5500万吨,这相当于650亿美元的消费市场。除了作为纤维和塑料两种用途最广泛的聚合物之一,PP还能适应各种制造方式,具有广泛的应用价值。但传统的处理方式容易造成极大的环境压力,因此生物修复具有更佳的效益。而由于聚丙烯具有太高的分子量、太强的疏水性、太高的化学键能和太低的生物可及性,导致其在环境中很难被微生物降解。目前关于聚丙烯塑料生物降解的报道非常少。因此发掘新的微生物资源,并将其应用于聚丙烯塑料的生物修复依然任重道远。
发明内容
发明目的:针对现有技术存在的问题,本发明提供一株聚丙烯高效降解菌株LICME200610 WGH-6,经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。本发明的菌株LICME 200610 WGH-6可以有效用于生物降解聚丙烯,尤其是聚丙烯塑料,如废弃聚丙烯塑料膜片、聚丙烯塑料颗粒、聚丙烯塑料粉末等。
本发明的另一目的是提供所述聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH-6的分离筛选方法及其生产的菌剂;该菌株制备的降解菌剂可在短时间内降解环境中残留的废弃的聚丙烯塑料。本发明的降解菌剂可以用发酵工业通用发酵设备进行生产,具有生产成本低,使用方便,降解效果好的优点。
技术方案:为了实现上述目的,本发明所述的一株聚丙烯高效降解菌株LICME200610 WGH-6,经鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏地址:中国.北京.中国科学院微生物研究所,邮编:100101,保藏时间为2020年8月13日,保藏编号为CGMCC No.20527。该菌株是发明人从南京大型垃圾填埋场沉积物中分离得到。降解菌株LICME 200610 WGH-6主要生物学特性为:菌落亮绿色,形状为杆状,表面光滑湿润,边缘整齐,轮廓清晰。革兰氏染色显红色,呈阴性,能够利用聚丙烯为碳源和能源,对菌株16S rDNA基因序列进行了扩增测序,将所得的序列与NCBI数据库种已有的序列进行BLAST分析,结果显示,与Pseudomonas aeruginosa OIS 4.8.1的相似性为99%。
本发明所述的聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH-6,包括如下步骤:
将待分离样品通过接至以聚丙烯为唯一碳源的培养基中定向富集,营养琼脂划线分离,进而获得一株能够利用聚丙烯为碳源和能源的降解菌株。
其中,待分离样品为垃圾填埋场沉积物。
其中,所述的聚丙烯为唯一碳源的培养基组分为:K2HPO4 0.5g,KH2PO4 0.04g,NaCl 0.1g,CaCl2·2H2O 0.002g,(NH4)2SO4 0.2g,MgSO4·7H2O 0.02g,FeSO4 0.001g;将上述试剂溶解于1L去离子水中,调节pH至7.8,即为液体培养基。
本发明所述的菌株LICME 200610 WGH-6在生物降解聚丙烯中的应用,具体包括在各生态体系中生物降解各种状态聚丙烯塑料中的应用。
进一步地,所述菌株LICME 200610 WGH-6在降解环境中废弃聚丙烯塑料膜片、聚丙烯塑料颗粒、聚丙烯塑料粉末中的应用。
本发明所述的菌株LICME 200610 WGH-6生产的降解菌剂。
本发明所述的降解菌剂的制备方法,包括如下步骤:
(1)将菌株LICME 200610 WGH-6培养到对数期的试管液作为一级种子液,按体积比接种量不低于0.5%接种于发酵培养基,振荡培养至对数期,制得发酵菌种;
(2)将上述制得发酵菌种按体积比接种量不低于0.5%接种于种子罐的培养基中,培养至对数生长期,制得二级种子液;
(3)将二级种子液接种于生产罐的培养基中培养发酵,接种量不低于0.2%(体积比),培养过程中无菌空气的通气量不低于1:0.1,搅拌速度不低于50rpm,培养温度为18~50℃,培养时间不少于12h,发酵完成后的培养液出罐直接分装成液体剂,或通过干燥制成粉剂或者经分离纯化等步骤制备成高纯度制剂。
本发明所述的降解菌剂在生物降解聚丙烯中的应用。
进一步地,所述降解菌剂在降解聚丙烯塑料膜片、聚丙烯塑料颗粒、聚丙烯塑料粉中的应用。
有益效果:由现有技术相比较,本发明经分离筛选获得聚丙烯塑料高效降解菌株LICME 200610 WGH-6,可以用于生物降解聚丙烯,尤其是降解环境中废弃粉末状、片状、颗粒状聚丙烯塑料;本发明的菌株LICME 200610 WGH-6能以聚丙烯作为唯一碳氮源进行生长,所得菌株具有良好的聚丙烯降解特性,为环境中聚丙烯废弃物的生物修复提供了新资源和思路,应用前景广阔。
本发明的该菌株对塑料废弃物具有良好的降解效果,尤其是对于聚丙烯塑料的降解效果较好,采用本发明的菌株进行聚丙烯塑料降解,处理30天后聚丙烯膜片表面有明显的生物侵蚀孔洞,聚丙烯膜片亲水性显著提升,表面破损严重,该降解绿色环保,成本低,操作方便。
本发明的降解菌剂可以用发酵工业通用发酵设备进行生产,具有生产成本低,使用方便,降解效果好的优点,适合治理自然环境中很难被降解的聚丙烯废弃物;本发明对于保护生态环境,保护人体的身体健康具有重要的意义。
附图说明
图1为本发明提供的聚丙烯降解菌的菌落形态特征图;
图2为本发明提供的聚丙烯降解菌的生长曲线图;
图3为本发明提供的聚丙烯降解菌的系统发育树;
图4为本发明提供的聚丙烯降解菌降解30天后PP膜片在扫描电子显微镜(左图对照;右图接菌)下的形貌特征图;
图5为本发明提供的聚丙烯降解菌降解前后PP膜片的水接触角变化图(左图对照;右图接菌);
图6为本发明提供的聚丙烯降解菌降解前后PP膜片表面官能团变化图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明中的原料和试剂如无特殊说明,均为商业化市售。
实施例1
聚丙烯降解菌的分离筛选与鉴定
(1)聚丙烯降解菌的分离筛选
以从南京大型垃圾填埋场沉积物作为待分离样品进行分离筛选;
将采集到的塑料废弃物用无菌水冲洗后剪成小块,称取1g采集到的沉积物样品,放置于无菌的锥形瓶中,加入9mL质量分数0.9%的生理盐水,于恒温振荡培养箱中37℃、150rpm振荡培养3h,制备成菌悬液,按体积比梯度稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。将1ml梯度稀释菌悬液分别转接至无碳源矿物盐培养基中,加入已高温灭菌的聚丙烯粉末(2g/L)(聚丙烯粉,Mn 4000±500),37℃、150rpm振荡培养14d,设置3组平行。培养体系变浑浊后,挑取菌液于营养琼脂上,并多次划线纯化分离到的菌株。将分离到的单菌落菌株保存后,在无碳源矿物盐液体培养基上验证对聚丙烯的利用能力。无碳源矿物盐液体培养基中加入已灭菌的聚丙烯粉末2g/L,挑选生长迅速的菌株培养保存。
分离筛选的培养基为无碳源矿物盐培养基,其组分为:K2HPO4 0.5g,KH2PO40.04g,NaCl 0.1g,CaCl2.2H2O 0.002g,(NH4)2SO4 0.2g,MgSO4.7H2O 0.02g,FeSO4 0.001g。将上述试剂溶解于1L去离子水中,调节pH至7.8,添加聚丙烯为唯一碳源。通过上述的分离与筛选工作,多次分离纯化,获得一株能够利用聚丙烯为碳源和能源生长的菌株,将其命名为LICME 200610 WGH-6。该菌株在营养琼脂平板上菌落呈亮绿色,表面光滑湿润,边缘整齐(图1)。
(2)菌株的生理特征及分子生物学鉴定
LB培养基,以37℃、180rpm的条件培养,对培养至对数期的上述菌体进行革兰氏染色。
光学显微镜下,菌株经革兰氏染色显红色,呈阴性。在LB培养基中的生长曲线如图2所示,在LB培养基中生长迅速,4小时后进入对数期,9小时后进入稳定期。
用试剂盒提取上述分离获得的单一菌株的DNA,采用细菌通用引物27F、1492R作为扩增引物进行PCR扩增。
16S rDNA序列引物27F(SEQ ID NO.2):5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’,
1492R(SEQ ID NO.3):5’-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’。
对扩增产物进行电泳检测,委托擎科(南京)生物公司测序。将所得的序列与NCBI数据库中已有的序列进行BLAST分析,并选取同源性相近的菌株,采用MEGA 7.0软件构建系统发育树。
在NCBI上进行16S rDNA序列(SEQ ID NO.1)比对结果显示,与铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa OIS 4.8.1的相似性为99%,且在进化距离上相对较近,菌株LICME 200610 WGH-6的系统发育树如图3所示,结合菌株的生理生化特征,初步将鉴定为假单胞菌(Pseudomonas sp.),命名为假单胞菌LICME200610 WGH-6(Pseudomonas sp.LICME200610 WGH-6)。将该菌株LICME200610 WGH-6送交位于中国北京,中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC)保藏,保藏时间为2020年8月13日,保藏编号为CGMCC No.20527。
SEQ ID NO.1:
ACCGTCCCCCTTGCGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCAACCCACTCC CATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATTCACGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCAACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCCGAGGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTGTCTGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCAGCATGTCAAGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTATCGCGTTAGCTGCGCCACTAAGATCTCAAGGATCCCAACGGCTAGTCGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGTCCAGGTGGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTACCGTACTCTAGCTCAGTAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCCAACTTGCTGAACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTTGGTAACGTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTACTGCCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCATCCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTCGCCTTGGTAGGCCTTTACCCCACCAACTAGCTAATCCGACCTAGGCTCATCTGATAGCGTGAGGTCCGAAGATCCCCCACTTTCTCCCTCAGGACGTATGCGGTATTAGCGCCCGTTTCCGGACGTTATCCCCCACTACCAGGCAGATTCCTAGGCATTACTCACCCGTCCGCCGCTGAATTCAGGAGCAAGCTCCCTTCATCCGCTCGA
实施例2
聚丙烯降解菌对聚丙烯塑料膜片的降解实验:
为评估聚丙烯降解菌在实际生活中的应用潜力,选取生活中常见的聚丙烯塑料膜片进行降解实验;
将菌株LICME 200610 WGH-6接种至LB培养基中培养至对数生长期,聚丙烯塑料膜片裁剪成2*2cm2大小。250ml锥形瓶中加入50mL无碳源矿物盐培养基,加入聚丙烯塑料膜1片,灭菌,以10%(v/v)的接种量接种上述菌液。以不接菌处理为对照组,每种处理设置3个平行样。将锥形瓶放置于恒温振荡培养箱中37℃,150rpm培养,30天定期取样分析聚丙烯塑料膜片表面的形貌变化、官能团变化、质量损失及疏水性变化。
聚丙烯塑料膜片表面微观形貌变化按照如下流程处理:用无菌水冲洗表面多余的培养基,用质量分数2.5%戊二醛固定2h,再依次用体积分数30%、50%、70%、90%、100%乙醇梯度脱水,每次15min。再用叔丁醇置换2次,每次30min。将处理好的样品干燥,固定喷金后在扫描电子显微镜(SEM)下观察其微观形貌特征,结果图4所示,图4说明经过30d的培养,在扫描电镜下观察到接菌处理的膜片与对照组相比表面粗糙,出现明显的微生物侵蚀孔洞,表明存在微生物活动的迹象,证明菌株对聚丙烯塑料具有一定的腐蚀效应。
聚丙烯塑料膜片的质量变化按照下述流程处理:用质量分数2%SDS溶液振荡洗涤聚丙烯塑料膜片4h,超声15min,去除表面的生物膜,再用无菌水洗涤塑料3次,将洗涤后的聚乙烯塑料放置在干燥器中干燥48h后称重。
聚丙烯塑料膜片的质量衰减率(%)=(聚丙烯初始质量-降解后质量)/初始质量*100%。60天后,失重率是4.67±0.35%,而对照处理未发生变化,表明利用菌株LICME200610 WGH-6降解了聚丙烯。
用接触角测量仪测定接触角表征膜片表面疏水性变化,由图5可见,经接触角测量仪结果显示,接菌处理的聚丙烯塑料水接触角为76.3±0.3O,远低于对照处理的90.4±0.5O,表明接菌处理显著降低了聚丙烯塑料的疏水性,更容易被微生物附着侵蚀。
聚丙烯塑料膜片表面官能团的测定采用傅里叶红外光谱仪进行测定,清洗干净的膜片自然干燥后测定。扫描波长范围600-4000cm-1,分辨率4cm-1,扫描次数32次。图6结果显示,接菌处理的聚丙烯塑料出现了较为明显的新特征峰,在1753cm-1测到了羰基峰,羰基[—C=O—](1720cm-1左右)的出现表明氧化反应的发生,是聚丙烯塑料发生生物降解的基本标志,表明聚丙烯发生了生物降解。
实施例3
聚丙烯降解菌对聚丙烯塑料颗粒的降解实验:
为评估聚丙烯降解菌在实际生活中的应用潜力,选取生活中常见的聚丙烯颗粒进行降解实验;
将菌株LICME 200610 WGH-6接种至LB培养基中培养至对数生长期。250ml锥形瓶中加入50ml无碳源矿物盐培养基,加入聚丙烯塑料颗粒2g,灭菌,以10%(v/v)的接种量接种上述菌液。以不接菌处理为对照组,每种处理设置3个平行样。将锥形瓶放置于恒温振荡培养箱中37℃、150rpm培养,30天后取样分析聚丙烯颗粒表面的形貌变化、官能团变化、质量损失。
聚丙烯塑料颗粒表面微观形貌变化按照如下流程处理:用无菌水冲洗表面多余的培养基,用质量分数2.5%戊二醛固定2h,再依次用体积分数30%、50%、70%、90%、100%乙醇梯度脱水,每次15min。再用叔丁醇置换2次,每次30min。将处理好的样品干燥,固定喷金后在扫描电子显微镜(SEM)下观察其微观形貌特征。
聚丙烯塑料颗粒的质量变化按照下述流程处理:用2%SDS溶液振荡洗涤聚丙烯颗粒4h,超声15min,去除表面的生物膜,再用无菌水洗涤颗粒3次,将洗涤后的聚乙烯颗粒放置在干燥器中干燥48h后称重。
聚丙烯塑料颗粒的质量衰减率(%)=(聚丙烯初始质量-降解后质量)/初始质量*100%
聚丙烯颗粒塑料表面官能团的测定采用傅里叶红外光谱仪进行测定,清洗干净的膜片自然干燥后测定。扫描波长范围600-4000cm-1,分辨率4cm-1,扫描次数32次。
实施例3中聚丙烯降解菌对聚丙烯塑料颗粒的降解整体效果与实施例2的结果类似,本发明的菌株LICME 200610 WGH-6可以有效降解聚丙烯塑料颗粒,此外,本发明的菌株也可以降解聚丙烯塑料粉末。
实施例3中聚丙烯降解菌对聚丙烯塑料颗粒的降解整体效果与实施例2的结果类似,本发明的菌株LICME 200610 WGH-6可以有效降解聚丙烯塑料颗粒,此外,本发明的菌株也可以降解聚丙烯塑料粉末。
实施例4
菌株LICME 200610 WGH-6的降解菌剂的制备
(1)将菌株LICME 200610 WGH-6培养到对数期(LB)的一级种子液按1%的体积比接种于发酵培养基中,振荡培养至对数期,制得发酵菌种;
(2)将上述制得发酵菌种按10%体积比接种于种子罐的培养基中,培养至对数生长期,制得二级种子液;
(3)将二级种子液接种于生产罐的培养基中培养发酵,接种量5%(体积比),培养过程中无菌空气的通气量不低于1:0.5vvm,搅拌速度100rpm,培养温度为30℃,培养时间20h,发酵完成后的培养液出罐直接分装成液体剂。其中,所述发酵培养基、种子罐的培养基、生产罐的培养基配方相同,均为蛋白胨10g,牛肉粉3g,NaCl 5g,葡萄糖1g,水1000mL,pH7.5±0.2,高温高压灭菌处理。
实施例5
菌株LICME 200610 WGH-6的降解菌剂的制备
(1)将菌株LICME 200610 WGH-6培养到对数期(LB)的一级种子液按1.5%的体积比接种于发酵培养基中,振荡培养至对数期,制得发酵菌种;
(2)将上述制得发酵菌种按20%体积比接种于种子罐的培养基中,培养至对数生长期,制得二级种子液;
(3)将二级种子液接种于生产罐的培养基中培养发酵,接种量1%(体积比),培养过程中无菌空气的通气量不低于1:0.5vvm,搅拌速度150rpm,培养温度为28℃,培养时间30h,发酵完成后的培养液通过干燥制成粉剂。其中,所述发酵培养基、种子罐的培养基、生产罐的培养基配方相同,均为蛋白胨10g,牛肉粉3g,NaCl 5g,葡萄糖1g,水1000mL,pH 7.5±0.2,高温高压灭菌处理。
以本发明实施例4和5制备的菌剂,直接与聚丙烯塑料膜片、聚丙烯塑料颗粒、聚丙烯塑料粉末反应,同样可以有效降解聚丙烯塑料达到实施例2和3的效果。
序列表
<110> 南京师范大学
<120> 聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH-6及其生产的菌剂和应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1396
<212> DNA
<213> 假单胞菌(Pseudomonas sp.)
<400> 1
accgtccccc ttgcggttag actagctact tctggagcaa cccactccca tggtgtgacg 60
ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgtgaca ttctgattca cgattactag 120
cgattccgac ttcacgcagt cgagttgcag actgcgatcc ggactacgat cggttttatg 180
ggattagctc cacctcgcgg cttggcaacc ctttgtaccg accattgtag cacgtgtgta 240
gccctggccg taagggccat gatgacttga cgtcatcccc accttcctcc ggtttgtcac 300
cggcagtctc cttagagtgc ccacccgagg tgctggtaac taaggacaag ggttgcgctc 360
gttacgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac gacagccatg cagcacctgt 420
gtctgagttc ccgaaggcac caatccatct ctggaaagtt ctcagcatgt caaggccagg 480
taaggttctt cgcgttgctt cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg 540
tcaattcatt tgagttttaa ccttgcggcc gtactcccca ggcggtcgac ttatcgcgtt 600
agctgcgcca ctaagatctc aaggatccca acggctagtc gacatcgttt acggcgtgga 660
ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg cacctcagtg tcagtatcag 720
tccaggtggt cgccttcgcc actggtgttc cttcctatat ctacgcattt caccgctaca 780
caggaaattc caccaccctc taccgtactc tagctcagta gttttggatg cagttcccag 840
gttgagcccg gggatttcac atccaacttg ctgaaccacc tacgcgcgct ttacgcccag 900
taattccgat taacgcttgc acccttcgta ttaccgcggc tgctggcacg aagttagccg 960
gtgcttattc tgttggtaac gtcaaaacag caaggtatta acttactgcc cttcctccca 1020
acttaaagtg ctttacaatc cgaagacctt cttcacacac gcggcatggc tggatcaggc 1080
tttcgcccat tgtccaatat tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg accgtgtctc 1140
agttccagtg tgactgatca tcctctcaga ccagttacgg atcgtcgcct tggtaggcct 1200
ttaccccacc aactagctaa tccgacctag gctcatctga tagcgtgagg tccgaagatc 1260
ccccactttc tccctcagga cgtatgcggt attagcgccc gtttccggac gttatccccc 1320
actaccaggc agattcctag gcattactca cccgtccgcc gctgaattca ggagcaagct 1380
cccttcatcc gctcga 1396
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (8)

1.一株聚丙烯高效降解菌株LICME 200610 WGH-6,经鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.),已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏时间为2020年8月13日,保藏编号为CGMCC No.20527。
2.如权利要求1所述的菌株LICME 200610 WGH-6在生物降解聚丙烯中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述菌株LICME 200610 WGH-6在降解聚丙烯塑料中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述聚丙烯塑料包括聚丙烯塑料膜片、颗粒或者粉末。
5.一种利用权利要求1所述的菌株LICME 200610 WGH-6生产的降解菌剂。
6.一种权利要求5所述的降解菌剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将菌株LICME 200610 WGH-6培养到对数期的试管液作为一级种子液,按体积比接种量不低于0.5%接种于发酵培养基,振荡培养至对数期,制得发酵菌种;
(2)将上述制得发酵菌种按体积比接种量不低于0.5%接种于种子罐的培养基中,培养至对数生长期,制得二级种子液;
(3)将二级种子液接种于生产罐的培养基中培养发酵,接种量不低于0.2%(体积比),培养过程中无菌空气的通气量不低于1:0.1,搅拌速度不低于50 rpm,培养温度为18~50 ℃,培养时间不少于12 h,发酵完成后的培养液出罐直接分装成液体剂,或通过干燥制成粉剂或者经分离纯化等步骤制备成高纯度制剂。
7.一种权利要求5所述的降解菌剂在生物降解聚丙烯中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述降解菌剂在降解聚丙烯塑料膜片、颗粒或者粉末中的应用。
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