CN112143669B - 一株蓝菌藻及其培养方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株蓝菌藻及其培养方法和应用。本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO‑45682，其保藏编号为：CGMCC No.19697；该藻株可以在高碱、高盐、高pH条件下培养，生产胞内多糖和胞外多糖，可以作为蓝藻多糖的生产原料。

Description

一株蓝菌藻及其培养方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一株蓝菌藻及其培养方法和应用。
背景技术
蓝藻结构简单，繁殖速率快，环境适应性强，可以积累多种生物活性物质，如多糖、藻蓝蛋白、玉米黄质、β-胡萝卜素等。其中，蓝藻多糖作为一种用途广泛的生物活性物质，日益受到关注。因其具有抗辐射、抗病毒、调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、金属离子螯合等生物学活性和优良的流变学特性，以及生物相容性、生物可降解性等天然生物大分子的优良特性，蓝藻多糖在化妆品、护肤品等领域有着广泛的应用潜力。但目前国内外该领域的专利显示出以下问题：
(1)多数具有活性多糖生产潜力的藻株在户外开放式规模化培养过程中，容易遭受敌害生物的入侵。
(2)多数具有活性多糖生产潜力的藻株由于不具备广泛的极端环境适应性，难以在户外开放池中放大培养。
产多糖蓝藻产业化的实现首先依托于优良藻种的选育。目前，蓝藻的规模化培养主要依托于户外开放池和封闭式光生物反应器两种模式。其中，开放池构建简单、成本低廉、操作简便，是目前最为经济可行的模式，但因直接与外界环境接触，在敌害生物的污染防控等方面受到了较大制约。针对此问题，可在培养基中加入高浓度碳酸氢钠，既可作为碳源，又可在很大程度上抑制敌害生物的污染。因此，能适应开放池培养的藻种，必须能在高碱度、高盐度、高pH等选择性环境中快速生长，始终保持其优势种地位，不被外源物种所取代。目前，只有螺旋藻(Spirulina)等少数几种极端环境适应性强的蓝藻藻种实现了此模式下的产业化开发。另外，淡水资源的日益紧缺，使得优质藻种的海水培养成为趋势。产多糖蓝藻产业化的实现也依托于多糖的精准制备和深度开发。目前已被广泛应用的海藻多糖大多源自大型藻类，如褐藻海藻酸钠、多糖硫酸酯，红藻琼脂、卡拉胶，绿藻石莼多糖等，关于蓝藻多糖的开发利用较少；且常见的产多糖蓝藻多为螺旋藻、蓝杆藻等，种类单一；产糖藻株存在退化问题，生长速率、生物质浓度和多糖含量下降，无法达到提取工艺对于生物质原料品质的要求；通过环境胁迫来诱导微藻富集多糖时，难以兼顾生物量与活性物质的积累；现有蓝藻多糖产物多为粗提物，目标产物及功能不精确，对于多糖化学结构及生物学活性机制方面的研究不够深入。总体来说，产多糖蓝藻的高效低成本培育和功能精准的蓝藻多糖的开发是蓝藻产业中两个关键的科学问题。
蓝菌藻Cyanobacterium aponinum在2007年被首次报道，多从温泉中分离获得，其富含的多糖、油脂、藻蓝蛋白、β-胡萝卜素、玉米黄质等活性物质受到关注。
其中，含有蓝菌藻C.aponinum的意大利Euganean温泉热泥具有一定的抗炎效果，这可能与蓝菌藻C.aponinum的糖脂成分有关。细胞实验证明，蓝菌藻C.aponinum分泌的胞外多糖可以促进人树突状细胞分泌IL-10，诱导CD4+T细胞的分化和抑制SYK和CLEC7A细胞因子的分泌，具有显著的免疫调节和抗炎作用，对银屑病患者有潜在的益处。由于具有优良的皮肤调理作用，蓝菌藻C.aponinum发酵物已被列入了国际化妆品辅料清单。另外，蓝菌藻C.aponinum可具有比模式蓝藻——集胞藻更强的甘油葡萄糖苷合成能力和环境适应能力，在盐胁迫时只合成甘油葡萄糖苷这一种相容性物质，可作为甘油葡萄糖苷的工业化生产菌株。甘油葡萄糖苷是一类由甘油和葡萄糖通过糖苷键结合形成的大分子物质，具有保湿功能，能消除洁面后皮肤的紧绷感，可作为化妆品添加剂使用；同时作为稳定剂，能抑制细菌、真菌生长，可用于蛋白药物等的长期保存；此外，具有一定的降血糖、减肥、治疗过敏性呼吸系统疾病等功能，可用作保健品的原料。优化条件下，蓝菌藻C.aponinum还具有较高的油脂、藻蓝蛋白、β-胡萝卜素及玉米黄质含量，其中总脂含量可达干重的45％，这在蓝藻中比较罕见；藻蓝蛋白含量可达干重的15.8％，与螺旋藻相当(16％DW左右)。
目前已公开的相关专利中，尚未发现涉及海水蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682藻种保护、藻种特性和通过高碱培养提高多糖产量的专利，相关专利也数量较少。现对代表性专利描述如下：
(1)一种利用碳酸氢钠作为碳源的杜氏藻培养基及其应用(专利申请号：CN201810283248.1)。该发明公开了一种利用NaHCO3(浓度2.1-42g/L)作为唯一碳源的杜氏藻培养基，可以在保证杜氏藻生长的同时，提高盐生杜氏藻中β-胡萝卜素的积累。另外，可以通过形成缓冲体系使培养体系中的pH维持在有利于盐生杜氏藻生长的范围内，以提高其生长速度，且不至于因pH过高而导致藻细胞死亡。该发明证明NaHCO3可以在为杜氏藻提供充足碳源的同时，起到很好的溶液缓冲作用。该发明获得最大生物量时的NaHCO3添加浓度为16.8g/L，高于本发明蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的8.4g/L；该发明采用平板反应器摇床晃动培养的方式，不同于本发明锥形瓶静止培养的模式。这些因素均增加了培养成本。
(2)利用高浓度豆腐废水培养小球藻L166生产多糖和油脂的优化方法(专利申请号：CN201810444804.9)。该发明公开了一种利用高浓度豆腐废水培养小球藻生产多糖和油脂的优化研究方法，包括小球藻接种、废水预处理、小球藻培养及小球藻中多糖和油脂的测定等步骤。小球藻L166的多糖生产率达2.86mg/(L·d)，油脂生产率达7.22mg/(L·d)，具有同步废水利用和生物质生产的双重作用。但是，微藻对污水中COD的去除效果往往较差；经污水培养后的微藻回收成本高，限制了该技术的应用。
(3)利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法(专利申请号：CN201810444805.3)。该发明本发明公开了一种利用牛奶厂高浓度有机废水培养绿藻A.dimorphus制取脂质和多糖的方法，包含废水预处理，绿藻A.dimorphus的培养、脂质含量的测定和多糖含量测定等步骤。这种方法有助于降低牛奶废水处理的成本，同时制取高值化学品。经过培养，A.dimorphus中含有约25％的脂质和30％的多糖，它们可以分别进一步转化成生物柴油和生物酒精。该专利所采用的养殖废水经过滤后置于4℃冷藏保存，不进行任何稀释或灭菌处理，虽节约了成本，但培养基中营养盐浓度及藻菌共生体系类型等变量较多；有可能因废水来源的不同导致绿藻多糖产量的差异，这在一定程度上限制了该技术的推广应用。
(4)一种提高微藻生物量及其生理活性产物产量的方法(专利申请号：CN200510080859.9)。该发明采用超声波处理来提高紫球藻、蔷薇藻、微绿球藻的生物量及其生理活性产物产量。该发明所采用的超声波处理处理方法可使微藻生物量、胞外多糖、藻胆蛋白和不饱和脂肪酸等生理活性产物的产量提高10％-60％。但是，超声波可在细胞表面造成微伤，使细胞壁局部破裂并改变细胞膜的通透性，不利于微藻的连续培养；另外，超声波处理对工程设备的要求较高，如容器壁的厚度及容器放置位置等，限制了其大规模生产和使用。
(5)一种具有抗氧化活性的小球藻胞外多糖(专利申请号：CN201911155787.8)。本发明的小球藻胞外多糖由盐胁迫协同光-暗交替模式液体培养的小球藻分泌和分离纯化得到。该发明首次从小球藻发酵培养基环境中分离出分泌于胞外的多糖，所得小球藻胞外多糖对DPPH自由基、超氧阴离子、羟基自由基、ABTS自由基的清除效果均呈现明显的剂量效应。本发明虽可通过环境胁迫诱导微藻分泌胞外多糖，但可能难以兼顾微藻生物量的增长，从而限制了胞外多糖产量的提高。
通过对上述专利的分析，尚未发现涉及海水蓝菌藻C.aponinum藻种保护和通过高碱培养提高其多糖产量的专利。
现有技术的缺点主要为：
(1)多数具有活性多糖生产潜力的藻株在户外开放池培养过程中，容易遭受敌害生物的入侵。
(2)多数具有活性多糖生产潜力的藻株不具备广泛的极端环境适应性，在极端培养条件下生长缓慢，难以积累较高的生物量，不适宜户外规模化培养。
(3)多数具有活性多糖生产潜力的藻株在极端培养条件下多糖产量下降，无法达到提取工艺对于藻粉或湿藻泥活性物质含量的要求。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述缺点，提供一株蓝菌藻及其培养方法和应用。
本发明的一株具有高碱、高盐、高pH等广泛适应性的产多糖海洋单细胞蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682，经16S rDNA与ITS rDNA系统发育学鉴定，其为Cyanobacterium sp.属的新种或蓝菌藻Cyanobacterium aponinum的新株系。
本发明提供一株可耐受高碱(16.8g/L NaHCO3)、高盐(120‰)、高pH(11.0)培养条件的海水蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682，该培养条件可抑制杂藻及原生动物等敌害生物的入侵。
本发明提供一株同时具有高碱、广盐/高盐、高pH、高温、弱光等极端环境适应性的海水蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682，其在高碱培养条件下可以积累较高的生物量(2.5g/L)和多糖含量(49.1％DW)，可满足提取工艺对于活性物质产量的要求，有望作为目前规模化养殖中的替代藻株。
因此，本发明的第一个目的是提供一株蓝菌藻，其保藏编号为：CGMCC No.19697。
本发明第二个目的是提供所述的蓝菌藻的培养方法，以f/2培养基为基础培养基，添加NaHCO3至终浓度为1.0-16.8g/L，盐度为：0-120‰，pH为：7.0-11.0；光照强度为：5-150μmol photons/(m2·s)。
所述的f/2培养基含有NaHCO3 0.50g/L，NaNO3 0.40g/L，NaH2PO4·2H2O 20mg/L，Na2EDTA·2H2O 4.4mg/L，FeCl3·6H2O 3.2mg/L，MnCl2·4H2O 0.18mg/L，ZnSO4·7H2O 22μg/L，CoCl2·6H2O 10μg/L，CuSO4·5H2O 9.8μg/L，Na2MoO4·2H2O 6.3μg/L，余量为水。
本发明第三个目的是提供所述的蓝菌藻在制备多糖中的应用。
优选，所述的多糖为蓝藻多糖。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682可积累胞内多糖和胞外多糖。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682在添加8.4g/L NaHCO3培养条件下的生物量可以达到2.5g/L。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682在添加16.8g/L NaHCO3培养条件下的胞内总糖含量可达49.1％DW。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682在添加16.8g/L NaHCO3培养条件下，胞外多糖浓度为92.6mg/L。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682可作为蓝藻多糖的生产原料。
本发明的海水蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682蓝菌藻藻株，具有以下优点：
(1)具有极高的高碱和高pH适应特性,利用这一特性，本发明使用的培养基中加入了浓度NaHCO3(16.8g/L)，并以此控制培养基保持较高的pH(9-10)，可在户外开放池养殖过程中抑制敌害生物的入侵。
(2)高浓度NaHCO3培养条件可以显著提高藻细胞的生物量和比生长速率，有望作为优良的生产藻株。
(3)高浓度NaHCO3培养条件可显著提高藻细胞的多糖含量及胞外多糖产量。胞内水溶性多糖可通过热水浸提法进行提取，胞外多糖可直接将培养基离心进行收集，无需价格昂贵的设备及繁琐的操作步骤，可进一步降低生产成本。
本发明提供一种具备优良高碱、高pH适应性的海水Cyanobacterium SCSIO-45682藻株，可耐受16.8g/L NaHCO3及高盐、高pH、弱光等极端环境，高碱培养可促使其生物量及多糖的积累。高碱度在抑制敌害生物污染的同时，可以起到良好的缓冲作用，减轻微藻培养过程中“pH漂移”现象带来的危害。以该藻株作为替代藻株用于微藻多糖的规模化生产，具有较大的潜力。
本发明的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682藻株于2020年05月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General MicrobiologicalCulture Collection Center，简称CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏编号为：CGMCC No.19697。
附图说明
图1是蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的细胞形态。
图2是基于蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682及其他相关藻株的16S rDNA序列采用最大相似性算法构建的系统发育进化树。
图3是基于蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682及其他相关藻株的ITS rDNA序列采用最大相似性算法构建的系统发育进化树。
图4是不同NaHCO3浓度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682生长曲线。
图5是不同NaHCO3浓度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682多糖含量及产率。
图6是不同NaHCO3浓度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682胞外多糖分泌曲线。
图7是不同盐度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682生长曲线。
图8是不同pH下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682生长曲线。
图9是不同光照强度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682生长曲线。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
一、藻株鉴定:
藻株采样自海南省三亚市天涯镇(E109°19′38″,N18°18′31″)。由平板分离法(f/2固体培养基)得到单藻落。
形态学特征：
该藻为单细胞，浅蓝绿色，卵圆柱形，无鞭毛，长度2-3μm，直径1-2μm，呈游离或二分裂状态(图1)。
分子生物学鉴定：
提取该藻的DNA，PCR扩增获得16S rDNA与ITS rDNA片段然后基因测序，将测得16SrDNA序列(其序列如SEQ ID NO.1所示)采用最大相似性算法构建的系统发育进化树(图2)，测得ITS rDNA序列(其序列如SEQ ID NO.2所示)采用最大相似性算法构建的系统发育进化树(图3)，该藻株与Cyanobacterium aponinum PCC 10605具有非常高的序列相似度(NCBI网站BLAST比对结果：16S rDNA:99.6％；ITS rDNA:98.7％)。经16S rDNA与ITS rDNA系统发育学鉴定，其为Cyanobacterium sp.属的新种或蓝菌藻Cyanobacterium aponinum的新株系，命名为蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682。
二、蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高碱培养
1.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高碱培养方法
(1)试验藻株采样自海南省三亚市天涯镇(E109°19′38″,N18°18′31″)。由平板分离法(f/2固体培养基)得到单藻落后，接种至f/2液体培养基进行预培养。f/2培养基配方为：NaHCO3(0.50g/L)；NaNO3(0.40g/L)；NaH2PO4·2H2O(20mg/L)；Na2EDTA·2H2O(4.4mg/L)；FeCl3·6H2O(3.2mg/L)；MnCl2·4H2O(0.18mg/L)；ZnSO4·7H2O(22μg/L)；CoCl2·6H2O(10μg/L)；CuSO4·5H2O(9.8μg/L)；Na2MoO4·2H2O(6.3μg/L)。
(2)培养至指数期，将藻液3000rpm离心10min后，去上清，用少量无NaHCO3的f/2液体培养基冲洗后重悬浮。按照初始OD750＝0.1接种于不同处理组的锥形瓶中(1200mL/2000mL)，处理组NaHCO3浓度分别为1)0.0g/L；2)1.0g/L；3)2.1g/L；4)4.2g/L；5)8.4g/L；6)16.8g/L；相应pH分别为7.63，8.29，8.41，8.46，8.43，8.33。静止置于培养架上，培养温度25℃，光照强度150μmol photons/(m2·s)，每天定时摇瓶6次，随机调换位置1次。本发明中所有图表所示的平均值和标准偏差均由3个生物学重复和3个测定重复计算获得。
(3)隔天测定藻液OD750、干重和pH。
(4)隔天取一定体积藻液，8500rpm离心10min收集上清，置于500Da透析袋中对10倍水透析3天，测定胞外多糖浓度。
(5)培养第14天，8500rpm离心10min收集藻泥，去离子水清洗后冻干，于-20℃冰箱中保存。用于测定多糖等生化物质含量。
2.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高碱培养生长测定
(1)OD750：取1mL藻液，置于玻璃比色皿中，在722S可见分光光度计(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)中测定750nm波长下的OD750值，以灭菌培养基作为空白调零。在第14天，8.4g/L NaHCO3处理组的OD750可达2.5(图4a)。
(2)生物量：准确移取一定体积藻液(以藻细胞干物质质量不少于10mg计)，用已在80℃下烘干至恒重的水系混合纤维滤膜(Φ50mm,0.45μm)抽滤，去离子水冲洗藻细胞，再置于烘箱中80℃下烘干至恒重，取出后密封放于干燥器中冷却至室温后称重，差减法得藻细胞干重(DW)(图4b)。由此计算平均比生长速率、最大比生长速率、生物量产率。计算公式如下：
Figure BDA0002671664250000071
Figure BDA0002671664250000072
其中，μ为比生长速率(d-1)；Nt为培养第t天的生物量(g/L)；N0为培养第t0天的生物量(g/L)；Δt为时间间隔(d)；Poverall为生物量产率(mg/(L·d))；ΔN为Δt时间间隔内的生物量变化(g/L)
在第14天，8.4g/L NaHCO3处理组的DW可达2.5g/L(图4b，其中0，1.0，2.1，4.2，8.4，16.8g/L NaHCO3处理组的生物量分别为：0.2，0.8，1.1，1.5，2.5，1.8g/L)。
另外，8.4g/L NaHCO3处理组的平均比生长速率、最大比生长速率和生物量产率分别可达0.32μ-1,0.49μ-1,和0.175g/(L·d)(表1)。
(3)pH：由DELTA320型pH计(瑞士Mettler Toledo公司)测定获得。图4c是培养0-14天藻液pH情况。
表1不同NaHCO3浓度下的蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682生长参数
Figure BDA0002671664250000081
3.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高碱培养多糖测定
(1)细胞总糖：称取约10mg冻干藻粉，加入5mL 0.5M硫酸，80℃水浴提取1.5h，室温下8500rpm离心10min，吸取上清至50mL容量瓶中，重复抽提3次，合并上清，定容，摇匀，即得细胞总糖提取液。苯酚-硫酸测定。以试剂空白为参照，以D-葡萄糖作为基准，通过标准曲线得到细胞总糖含量。随着NaHCO3浓度的升高，蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682总糖含量呈上升趋势，16.8g/L NaHCO3处理组总糖含量可达49.1％DW(图5)，其中，在第14天0，1.0，2.1，4.2，8.4，16.8g/L NaHCO3处理组的细胞总糖含量分别为：7.4，10.5，14.2，19.3，44.9，49.1％DW)，在第14天8.4g/L NaHCO3处理组的细胞总糖产率可达79.4mg/(L·d)(图5)。
(2)胞外多糖：使用苯酚-硫酸法测定。以D-葡萄糖作为基准，标准曲线法测得胞外多糖浓度。随着NaHCO3浓度的升高，胞外多糖浓度呈上升趋势，第14天16.8g/L NaHCO3处理组胞外多糖浓度达92.6mg/L(图6)，其中，第14天0，1.0，2.1，4.2，8.4，16.8g/L NaHCO3处理组的胞外多糖产量分别为：39.5，49.3，65.0，61.6，75.4，92.6mg/L)。
4.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高盐培养方法及生长测定
将在f/2培养基中培养至指数期的藻液3000rpm离心10min后，去上清，用少量新鲜f/2培养基冲洗后重悬浮。按照初始OD750≈0.06接种于不同处理组的锥形瓶中(150mL/250mL)。处理组以f/2培养基为基础培养基，添加不同浓度的NaCl至终盐度分别为1)60‰；2)120‰；3)240‰。静止置于培养架上，培养温度25℃，光照强度150μmol photons/(m2·s)，每天定时摇瓶6次，随机调换位置1次，培养周期8天。每天测定藻液OD750，测定方法同上。培养第8天60‰、120‰盐度组的OD750分别为0.615，0.244(图7)。
5.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的高pH培养方法及生长测定
将在f/2培养基中培养至指数期的藻液3000rpm离心10min后，去上清，用少量新鲜f/2培养基冲洗后重悬浮。按照初始OD750≈0.1接种于不同处理组的锥形瓶中(150mL/250mL)。处理组以f/2培养基为基础培养基，滴加0.1mol/LNaOH至初始pH分别为1)9；2)11。静止置于培养架上，培养温度25℃，光照强度150μmol photons/(m2·s)，每天定时摇瓶6次，随机调换位置1次，培养周期8天。每天测定藻液OD750，测定方法同上。培养第8天pH＝9、pH＝11处理组的OD750分别为0.503，0.331(图8)。
6.蓝菌藻Cyanobacterium sp.SCSIO-45682的弱光培养方法及生长测定
将在f/2培养基中培养至指数期的藻液(光照强度60μmol photons/(m2·s))3000rpm离心10min后，去上清，用少量新鲜f/2培养基冲洗后重悬浮。按照初始OD750≈0.1接种于含有f/2培养基的锥形瓶中(150mL/250mL)，静止置于培养架上，培养温度25℃。不同处理组的光照强度分别为1)1μmol photons/(m2·s)；2)5μmol photons/(m2·s)；3)20μmolphotons/(m2·s)，每天定时摇瓶6次，随机调换位置1次，培养周期8天。隔天测定藻液OD750，测定方法同上。培养第8天光照强度为1，5，20μmol photons/(m2·s)处理组的OD750分别为0.314，0.601，0.975(图9)。
序列表
<110> 中国科学院南海海洋研究所
南方海洋科学与工程广东省实验室（广州）
<120> 一株蓝菌藻及其培养方法和应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1410
<212> DNA
<213> 蓝菌藻SCSIO-45682(Cyanobacterium sp. SCSIO-45682)
<400> 1
gcgtgcgtag cctacacatg cagtcgaacg ggctcttcgg agctagtggc ggacgggtga 60
ggaacgcgtg agaacctgcc tcaaggtcgg ggacaacagt tggaaacgac tgctaatacc 120
ggatgagccg aataggtaaa agatttatcg cctagagagg ggctcgcgtc tgattagcta 180
gatggtgagg taaaggctta ccatggcgac gatcagtagc tggtctgaga ggatgagcag 240
ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaattttcc 300
gcaatgggcg aaagcctgac ggagcaatac cgcgtgaggg aggaaggctc ttgggttgta 360
aacctcaaaa cttagggaag aaaaaaatga cggtacctaa tgtaagcatc ggctaactcc 420
gtgccagcag ccgcggtaat acggaggatg caagcgttat ccggaatcat tgggcgtaaa 480
gagtccgtag gtggcacttc aagtctgctt tcaaagaccg aagctcaact tcggaaaggg 540
agtggaaact gaagagctag agtatagtag gggtagaggg aattcctagt gtagcggtga 600
aatgcgtaga gattaggaag aacaccagtg gcgaaggcgc tctactgggc atatactgac 660
actgagggac gaaagctagg ggagcgaaag ggattagata cccctgtagt cctagcggta 720
aacgatggat actaggcgta gtgctgttag aaggactgtg ccgaagctaa cgcgttaagt 780
atcccgcctg gggagtacgc acgcaagtgt gaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca 840
caagcggtgg agtatgtggt ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc aaggcttgac 900
atcctgcgaa tcttagagaa atctgagagt gcctaaggga acgcagagac aggtggtgca 960
tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct 1020
cgtccttagt tgccagcatt aagttgggga ctctagggag accgccgggg agaactcgga 1080
ggaaggtggg gatgacgtca agtcagcatg ccccttacgt cttgggctac acacgtacta 1140
caatggttgg gacaaagggg agcgaaaccg cgaggtggag cgaatctcat caaacccagc 1200
cacagttcag attgcaggct gaaactcgcc tgcatgaagg aggaatcgct agtaatcgca 1260
ggtcagcata ctgcggtgaa tccgttcccg ggtcttgtac acaccgcccg tcacaccatg 1320
gaagttggtc acgcccgaag tcgttattct aacccaagtg gaaggagacg ccgaaggtgg 1380
gactagtgac tggggtgaag tcgaacaagg 1410
<210> 2
<211> 438
<212> DNA
<213> 蓝菌藻SCSIO-45682(Cyanobacterium sp. SCSIO-45682)
<400> 2
acgccgaagg tgggactagt gactggggtg aagtcgtaac aaggtagccg taccggaagg 60
tgtggctgga tcacctcctt taagggagac ttcgagaaga agtcagcaag gaaatgggga 120
gggctagaaa aataaagaaa gaggtgttgg ggctattagc tcaggtggtt agagcgcacc 180
cctgataagg gtgaggtccc tggttcaagt ccaggatggc ccattggggg tatagctcag 240
ttggtagagc gcctgctttg caagcaggat gtcagcggtt cgagtccgct tacctccaga 300
agaacgagtt tagcacggtg aggtgtcact actgctgaac gaaaagttca gtgagaacct 360
tgaaaactgc atagaaaata gggaagatta aggtcaagaa aagaagggcc gatggtggat 420
acctaggcaa cacagaga 438

Claims (5)

1.一株蓝菌藻（Cyanobacteriumsp.），所述的蓝菌藻于2020年05月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，所述的蓝菌藻保藏编号为：CGMCC No. 19697。
2.权利要求1所述的蓝菌藻的培养方法，其特征在于，以f/2培养基为基础培养基，添加NaHCO3至终浓度为16.8 g/L，盐度为：120‰，pH为：7.0-11.0。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，培养温度为：20-45℃，光照强度为：5μmol photons/(m2·s)。
4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述的f/2培养基含有NaHCO3 0.50 g/L，NaNO3 0.40 g/L，NaH2PO4·2H2O 20 mg/L，Na2EDTA·2H2O 4.4 mg/L，FeCl3·6H2O 3.2mg/L，MnCl2·4H2O 0.18 mg/L，ZnSO4·7H2O 22 μg/L， CoCl2·6H2O 10 μg/L，CuSO4·5H2O9.8 μg/L，Na2MoO4·2H2O 6.3 μg/L，余量为水。
5.权利要求1所述的蓝菌藻在制备多糖中的应用，所述的多糖为蓝藻多糖。
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铝对海洋固氮蓝藻Crocosphaera watsonii生长及固氮速率的影响;刘甲星等;《热带海洋学报》;20170315;第36卷(第02期);第12-18页 *

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