CN108004271B - 一种具有溶藻活性的链霉菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种具有溶藻活性的链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170及其应用，该菌的保藏号为CGMCC No.13635，该菌的气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，孢子丝为链状，孢子椭圆形，灰白色，表面光滑，该菌的菌丝体、孢子和胞外产物均具有较强的溶藻活性，可以应用于抑制蓝藻水华。
Description
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，尤其涉及一种具有溶藻活性的链霉菌及其应用。
背景技术
随着全球水体富营养化的加剧，有害蓝藻水华爆发日趋频繁，中国是蓝藻水华的重灾区。蓝藻水华造成了严重的环境问题和巨大的经济损失，并严重威胁了人类健康，因此，蓝藻水华的防治引起了人们广泛重视。虽然长期控制污染源是水华防治的最有效方法，但由于经济原因，对绝大部分国家尤其是发展中国家来说，该方法不切实际，因此，有必要开发蓝藻水华短期防治技术。
目前水华防治方法包括物理方法、化学方法和生物方法三种。物理方法主要有黏土等吸附法、机械除藻法和超声波法等，但物理除藻法处理藻的能力有限，且工作量大、能耗高、可能具有潜在的二次污染风险，只能作为蓝藻水华的辅助性防治方法。化学除藻法主要是利用包括硫酸铜等金属盐和除草剂等杀藻，虽然快速高效，但它们选择性差，对其它水生生物均有较大的毒性，且在水环境中容易富集，因此二次污染问题严重。在这些常规蓝藻水华防治方法不甚理想的情况下，寻找高效环保的蓝藻水华防治技术势在必行。
利用溶藻微生物防治蓝藻水华具有高效、特异性强和环境友好等优点，因此近年来引起了越来越多的关注，是传统化学防治方法的潜在替代者，也是今后蓝藻水华防治策略发展的主流方向之一。微生物主要是通过分泌各种天然溶藻活性成分发挥抑藻或杀藻作用（即间接溶藻作用），也有一些微生物可直接杀死和溶解与之接触的藻细胞（即直接溶藻作用），甚至兼有直接和间接溶藻两种作用方式。
放线菌是生理活性物质的主要产生菌，研究表明，水陆等各种环境中均存在大量溶藻放线菌，目前文献报道的主要是其中的链霉菌，这些溶藻链霉菌能够分泌各种天然溶藻化合物，发挥抑藻、杀藻和溶藻作用。天然溶藻化合物对水华蓝藻的选择毒性强，容易降解，不易造成二次污染，是硫酸铜等传统化学杀藻剂的潜在替代者。由于放线菌是生理活性物质的最大产生菌，因此筛选能够分泌高效溶藻化合物的放线菌，并利用它们或它们产生的高效溶藻化合物研制高效、环境友好的杀藻剂具有巨大潜力。
因此，本领域的研究人员致力于筛选能够分泌具有高溶藻活性的化合物的微生物，以及具有高效直接触杀蓝藻的微生物，以开发微生物源的高效环保的天然产物杀藻剂和微生物活菌杀藻剂，用以安全和高效地控制蓝藻水华。
铜绿微囊藻（Microcystis aeruginosa）是最常见和危害最大的水华蓝藻藻种，以该藻种为指示藻，筛选高效溶藻链霉菌，对蓝藻水华的有效治理具有重要的实践价值。
发明内容
本发明的目的是要提供溶藻链霉菌及富集高效溶藻化合物，并利用它们研制高效环保的杀藻剂，用以高效和安全地控制蓝藻水华。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一株具有溶藻活性的链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170，该菌在高氏1号和ISP2培养基上生长良好，气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，孢子丝为链状，孢子椭圆形，灰白色，表面光滑，生长温度10-42℃（最适28℃）。经16S rRNA基因序列分析和同源性比较，得知其与链霉菌Streptomyces luridiscabiei NRRL B-24455相似性最高（99.9%），但后者孢子黄白色，且未见溶藻活性报道，因此菌株JXJ 0170与S. luridiscabiei NRRLB-24455是不同的链霉菌菌株，命名为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170，该菌种的16SrRNA基因在GenBank中的登录号是的KY613504，具体请见SEQ ID NO:1。
上述具有溶藻活性的链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13635，保藏日期为2017年01月17日。保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：86-10-64807355。
本发明还提供一种链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液的制备方法：将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的保藏菌种接种于斜面培养基，25-32 ℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，25-32 ℃、120-200 rpm摇床培养1-3 d后接入发酵培养基，于25-32 ℃、120-200 rpm摇床培养4-9 d，即得链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液，此发酵液包括具有杀藻活性的活菌丝体和该菌分泌的溶藻活性成分。
其中，斜面培养基配方为（质量比）：葡萄糖0.2-0.6 %，麦芽浸膏粉0.3-0.7 %，酵母浸膏粉0.2-0.6 %，琼脂1-2 %，水补余至100 %，pH7.4左右，121 ℃灭菌30 min后摆斜面。
其中，液体种子培养基配方为（质量比）：葡萄糖0.2-0.6 %，麦芽浸膏粉0.3-0.7%，酵母浸膏粉0.2-0.6 %，水补余至100 %，pH7.4左右，121℃灭菌30 min。
其中，发酵培养基配方为（质量比）：葡萄糖1-2 %，大豆豆粕粉0.5-1.5 %，酵母浸粉0.1-0.3 %，淀粉0.5-1.5 %，蛋白胨0.1-0.3 %，麦芽浸粉0.1-0.3 %，NaCl 0.3-0.5 %，K2HPO4 0.04-0.06 %，MgSO4•7H2O 0.04-0.06 %，水补余至100 %，pH7.8，定容调pH后，再加CaCO3 0.1-0.3 %g，121℃灭菌30 min。
本发明还提供一种链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170活干菌丝体杀藻剂的制备方法，将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170按照上述条件发酵3-8 d后，在4500 rpm的条件下离心，得到的菌丝体进行真空冷冻干燥处理，得到具有较强溶藻活性的活菌丝体杀藻剂。
本发明还提供一种链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170孢子粉杀藻剂制备方法，将溶藻链霉菌的孢子接种于ISP2等固体培养基上，待产生的大量孢子成熟后，即可采用加热或真空冷冻干燥，除去固体培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。
试验表明，溶藻链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的菌丝体、孢子和发酵上清液均具有较强的溶藻活性，特别是对危害最大的水华蓝藻——微囊藻属的藻种，诸如铜绿微囊藻、惠氏微囊藻和水华微囊藻等。在野外人工水华池塘中对水华的防治效率达到75.8-93.8 %。链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的菌丝体、孢子和全发酵液均可用于蓝藻水华的防治。
说明书附图
图1为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170不同发酵时间的发酵上清液对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率。
图2为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的发酵上清液和菌丝体对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率。其中1-3，分别为1 %-5 %的发酵上清液；4-7，分别是湿重为0.5、1.0、1.5和2.0 g的菌丝体。**表示试验组与对照组在P＜0.01水平上差异显著。
图3为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的孢子在铜绿微囊藻藻平板上萌发生长、溶藻并产生溶藻圈。其中，a为孢子加在藻平板上15 d后的情况，b为30 d的情况。图中灰白色物质为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的气生菌丝或孢子。
图4为不同温度处理后的发酵上清液的溶藻效率。**表示试验组与对照组在P＜0.01水平上差异显著，（*）和（**）分别表示未处理组与处理组在P<0.05和P＜0.01水平上差异显著。
图5为不同pH值处理后的发酵上清液的溶藻效率。**表示试验组与对照组在P＜0.01水平上差异显著；（*）和（**）分别表示未处理组与处理组在P<0.05和P＜0.01水平上差异显著。
图6 试验组和对照组水面水样比较。
图7为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170在野外水华防治试验中对藻类叶绿素a的控制。
具体实施方式
实施例1 直接溶藻链霉菌的筛选
固体平板筛选：将土样、湖泊或池塘水样及泥样等各种环境的样品，采用稀释涂布法分离其中的链霉菌，将获得纯培养的链霉菌孢子接到铜绿微囊藻藻平板上，在25 ℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12 h:12 h（光照:黑暗），光照强度为30-50 μmol photon/m²/s，每天观察链霉菌孢子萌发生长情况，链霉菌菌落周围是否出现溶藻圈，孢子萌发生长快、在菌落周围形成明显溶藻圈的链霉菌，是可直接杀藻的链霉菌，链霉菌（Streptomycessp.）JXJ 0170的孢子在藻平板上2-3 d即可萌发生长，并产生溶藻圈，因此被选择为进一步研究的菌株。
培养基组成：NaNO3 496 mg，KH2PO4 39 mg，MgSO4•7H2O 75 mg，CaCl2•2H2O 36mg，Na2SiO3•9H2O 58 mg，土壤提取液3 ml，PIV金属盐溶液3 ml（Na2-EDTA 75 mg，FeCl3•6H2O 9.7 mg，MnCl2•4H2O 4.1 mg，ZnCl2 0.5 mg，CoCl2•6H2O 0.2 mg，Na2MoO4•2H2O 0.4mg，蒸馏水100 ml），琼脂20 g（液体培养基不要琼脂），蒸馏水994 ml，pH 8-8.5。
铜绿微囊藻藻平板制备：在灭菌并冷却至45-50 ℃的HGZ固体培养基中，加入30 %（v/v）左右的铜绿微囊藻藻液（藻细胞密度约为5×107 CFU/ml），混匀后迅速倒入无菌培养皿中，置于光照培养箱中培养，培养温度25 ℃，时间7-10 d，光暗周期比为12 h:12 h（光照:黑暗），光照强度为30-50 μmol photon/m²/s。
液体溶藻活性筛选：将固体藻平板上溶藻活性好的菌株采用液体发酵，先将链霉菌的孢子接种于ISP2液体培养基中，在25-32 ℃、120-200 rpm条件下培养1-3 d，再按照3-10 %（v/v）的接种量接入发酵培养基中（配方：葡萄糖15 g，大豆豆粕粉10 g，酵母浸粉2 g，淀粉10 g，蛋白胨2 g，麦芽浸粉2 g，NaCl 4 g，K2HPO4 0.5 g，M gSO4•7H2O 0.5g，CaCO3 2g，H2O 1000 ml，pH7.8，定容调pH后，再加CaCO3），28 ℃、120-200 rpm条件下培养6-7 d后，在4500 rpm条件下离心20 min，取上清液，并在铜绿微囊藻FACHB-905藻液（藻细胞密度为5×106 CFU/ml）中加入3 %（v/v）链霉菌发酵上清液，培养3 d后计算其溶藻效率。对照组加入3%（v/v）的无菌水。选择溶藻效率高的菌株进一步研究。
藻液培养条件：用HGZ液体培养基培养铜绿微囊藻FACHB-905，置于25 ℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h:12h（光照:黑暗），光照强度为30-50 μmol photon/m²/s，光照培养4 h和8 h各振荡1次，每次30 s。
溶藻效率计算方法：溶藻效率（%）=100×（对照组藻细胞密度或叶绿素a含量-试验组藻细胞密度或叶绿素a含量）/（对照组藻细胞密度或叶绿素a含量），其中藻细胞密度采用血球计数板测定，叶绿素a含量采用热乙醇方法测定。
实施例2 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的鉴定
用形态观察、染色、生理生化反应、16S rRNA基因序列分析等方法对溶藻活性好的菌株JXJ 0170进行鉴定，该菌革兰氏染色阳性，丝状微生物，气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，产生水溶性淡黄色色素，孢子丝为链状，孢子椭圆形，灰白色，生长温度10-42 ℃（最适28 ℃）。经16S rRNA基因序列分析和同源性比较，得知其与链霉菌Streptomycesluridiscabiei NBRC 13047T相似性最高（99.9%），而后者孢子为黄白色，且未见溶藻活性报道，因此，菌株JXJ 0170与S. luridiscabiei NBRC 13047T是不同的链霉菌菌株，命名为链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170。该菌已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13635，保藏日期为2017年01月17日。保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：86-10-64807355。
实施例3 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的发酵时间
采用液体溶藻活性的筛选条件，对链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170进行培养，培养期间每24 h取样1次，连续取样8次，样品在4500 rpm条件下离心，取3 %（v/v）的发酵上清液加入铜绿微囊藻藻液中（藻细胞密度为5×106 CFU/ml），再采用上述藻液培养方法培养3 d后检测发酵上清液的溶藻效率，根据溶藻效率确定菌株的发酵时间。所有试验重复3次，试验数据表示成平均值±标准差的形式。试验结果（图1）表明，5-6 d后发酵上清液对铜绿微囊藻的溶藻效率达到91%以上，此后没有明显变化，因此，确定发酵时间为5-6 d。
实施例4 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液的制备
将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的保藏菌种接种于斜面培养基，28 ℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28 ℃、160 rpm摇床培养2 d后接入发酵培养基，于28 ℃、160 rpm摇床培养5-6 d，即得链霉菌（Streptomycessp.）JXJ 0170发酵液，此发酵液中包括具有杀藻活性的活菌丝体和该菌分泌的溶藻活性成分。
斜面培养基配方为：葡萄糖4 g，麦芽浸膏粉5 g，酵母浸膏粉4 g，琼脂18 g，水1000 ml，pH7.4左右，121 ℃灭菌30 min后摆斜面。
液体种子培养基配方：葡萄糖4 g，麦芽浸膏粉5 g，酵母浸膏粉4 g，水1000 ml，pH7.4左右，121 ℃灭菌30 min。
发酵培养基配方：葡萄糖15 g，大豆豆粕粉10 g，酵母浸粉2 g，淀粉10 g，蛋白胨2g，麦芽浸粉2 g，NaCl 4 g，K2HPO4 0.5 g，M gSO4•7H2 O 0.5g，CaCO3 2 g，自来水1000ml，pH7.8，定容调pH后，再加CaCO3，121 ℃灭菌30 min。
实施例5 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的发酵上清液、菌丝体和孢子的溶藻活性
链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的发酵上清液、菌丝体的溶藻活性：将采用上述条件制备的链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液离心，分别收集上清液和菌丝体备用。在藻液（细胞密度为5×106 CFU/ml）中加入1 %、3 %和5 %（v/v）的发酵上清液，培养3 d后镜检藻细胞密度。将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170菌丝体以无菌水洗涤3次，除去胞外产物，再称取0.5 g、1.0 g、1.5 g和2.0 g菌丝体（湿重）分别加入100 ml藻液（细胞密度为5×106 CFU/ml）中，培养3 d后镜检藻细胞密度。以空白藻液为对照组。试验结果（图2）表明，发酵上清液具有良好的溶藻效果，且呈剂量效应，在藻液中加入1 %（v/v）的上清液，培养3 d后，溶藻效率为78.6 %；当使用剂量增加到5 %时，溶藻效率达到96.7 %；菌丝体具有较好的溶藻效率，且呈剂量效应，当使用剂量为0.5 g/100 ml时，溶藻效率为50.4%，在2.0 g/100 ml藻液时，溶藻效率达到93.4 %。
链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170孢子的溶藻活性：将成熟孢子用无菌竹签接种到生长良好的铜绿微囊藻藻平板上，置于25 ℃的光照培养箱中培养，光暗周期比为12h:12h（光照:黑暗），光照强度为30-50 μmol photon/m²/s，每天观察一次。结果表明，链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的孢子在藻平板上2-3 d即萌发生长并形成溶藻圈，且随培养时间的延长，溶藻圈越来越大（图3）。由于HGZ培养基是不含有机碳的组合培养基，异养微生物一般不能在其上萌发生长并形成溶藻圈，因此这说明放线菌链霉菌（Streptomycessp.）JXJ 0170的孢子能够在萌发时直接溶解杀死藻细胞，并利用溶解的藻细胞作为进一步生长的营养成分。
实施例6 温度和不同pH处理对发酵上清液溶藻活性的影响
将实施例5中的发酵上清液分别进行以下2个处理：（1）置于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃和100℃等温度水浴处理2 h后，冷却至室温；（2）用1 mol/L的NaOH和盐酸溶液，将样品pH值分别调至3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0和12.0，静置24 h后再将pH值调至原始值。取各处理样品2 mL加入100 mL铜绿微囊藻藻液（细胞浓度为5×106CFU/mL）中，对照组加入2 mL无菌水，每组试验做3个平行样，培养3 d后测溶藻效率。结果表明在处理温度≤70℃时，放线菌发酵上清液的溶藻活性没有显著变化，溶藻效率在90.2%以上，达到未处理组溶藻效率的98.6%以上（图4），因此发酵上清液中的溶藻活性成分对高温处理具有较好的稳定性；在处理pH为7-8时，溶藻活性最强，当处理pH≤7时，发酵上清液的溶藻效率随pH值的增加而增加，当处理pH≥8时，发酵上清液的溶藻效率随pH值的增加而降低，但处理pH为3或12时，样品溶藻效率依然在80%以上（图5），这说明发酵液的主要溶藻活性成分对不同pH处理均具有较好的稳定性。
实施例7 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液野外水华防治试验
试验池塘位于江西省九江市郊区农村，面积约为1660 m2，平均水深约为1.5 m，试验前从池塘中间筑坝，将池塘一分为二。两个分区水中分别于2016年4月15日和7月15日投放硝酸钠和复合肥各50 kg，增加水中氮磷等元素含量，试验组投放20 L链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液，对照组投放20 L无菌发酵培养基，每月15号和30号于水面15-20 cm处取样一次，取样点3个，采用热乙醇法测样品的叶绿素a含量。试验时间：2016年4月15日至2016年9月15日。结果表明，在试验期间，试验组池塘中的水没有出现明显的颜色变化，而对照组池塘水的颜色逐渐变绿，最终水面漂浮一层蓝绿色的浮膜，其水面水样深蓝绿色，不透明，而试验组水面水样虽然有悬浮颗粒存在，但基本无色透明（图6）。水面15-20 cm下的水样，对照组叶绿素a含量在试验期间，由起始0.0088 mg/L逐渐增加到0.126mg/L，而试验组叶绿素a含量为0.0058-0.024 mg/L（图7），只有对照组的6.2-24.2 %，对水华的防治效率为75.8-93.8 %。
实施例8 链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170活菌粉杀藻剂及孢子粉杀藻剂的制备
链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170活干菌粉杀藻剂的制备，将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170发酵液离心，将得到的菌丝体进行真空冷冻干燥处理，即得到具有较强溶藻活性的活菌丝体干粉杀藻剂。
链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170孢子粉杀藻剂制备，将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的孢子接种于ISP2等固体培养基上，待产生的大量孢子成熟后，即可采用加热或真空冷冻干燥，除去固体培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的溶藻放线菌孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
SEQ ID NO:1
<110>九江学院
<120>一种具有溶藻活性的链霉菌JXJ 0170及其应用
<210>1
<211>1535
<212>RNA基因序列
<213>链霉菌JXJ 0170
CTGCCCTTCA GAGTTTGATC CTGGCTCAGG ACGAACGCTG GCGGCGTGCT TAACACATGC 60
AAGTCGAACG ATGAAGCCTT TCGGGGTGGA TTAGTGGCGA ACGGGTGAGT AACACGTGGG 120
CAATCTGCCC TTCACTCTGG GACAAGCCCT GGAAACGGGG TCTAATACCG GATAACACTC 180
TGTCCCGCAT GGGACGGGGT TAAAAGCTCC GGCGGTGAAG GATGAGCCCG CGGCCTATCA 240
GCTTGTTGGT GGGGTAATGG CCTACCAAGG CGACGACGGG TAGCCGGCCT GAGAGGGCGA 300
CCGGCCACAC TGGGACTGAG ACACGGCCCA GACTCCTACG GGAGGCAGCA GTGGGGAATA 360
TTGCACAATG GGCGAAAGCC TGATGCAGCG ACGCCGCGTG AGGGATGACG GCCTTCGGGT 420
TGTAAACCTC TTTCAGCAGG GAAGAAGCGA AAGTGACGGT ACCTGCAGAA GAAGCGCCGG 480
CTAACTACGT GCCAGCAGCC GCGGTAATAC GTAGGGCGCA AGCGTTGTCC GGAATTATTG 540
GGCGTAAAGA GCTCGTAGGC GGCTTGTCAC GTCGGATGTG AAAGCCCGGG GCTTAACCCC 600
GGGTCTGCAT TCGATACGGG CTAGCTAGAG TGTGGTAGGG GAGATCGGAA TTCCTGGTGT 660
AGCGGTGAAA TGCGCAGATA TCAGGAGGAA CACCGGTGGC GAAGGCGGAT CTCTGGGCCA 720
TTACTGACGC TGAGGAGCGA AAGCGTGGGG AGCGAACAGG ATTAGATACC CTGGTAGTCC 780
ACGCCGTAAA CGTTGGGAAC TAGGTGTTGG CGACATTCCA CGTCGTCGGT GCCGCAGCTA 840
ACGCATTAAG TTCCCCGCCT GGGGAGTACG GCCGCAAGGC TAAAACTCAA AGGAATTGAC 900
GGGGGCCCGC ACAAGCAGCG GAGCATGTGG CTTAATTCGA CGCAACGCGA AGAACCTTAC 960
CAAGGCTTGA CATATACCGG AAAGCATCAG AGATGGTGCC CCCCTTGTGG TCGGTATACA 1020
GGTGGTGCAT GGCTGTCGTC AGCTCGTGTC GTGAGATGTT GGGTTAAGTC CCGCAACGAG 1080
CGCAACCCTT GTTCTGTGTT GCCAGCATGC CCTTCGGGGT GATGGGGACT CACAGGAGAC 1140
TGCCGGGGTC AACTCGGAGG AAGGTGGGGA CGACGTCAAG TCATCATGCC CCTTATGTCT 1200
TGGGCTGCAC ACGTGCTACA ATGGCCGGTA CAATGAGCTG CGATGCCGCG AGGCGGAGCG 1260
AATCTCAAAA AGCCGGTCTC AGTTCGGATT GGGGTCTGCA ACTCGACCCC ATGAAGTCGG 1320
AGTTGCTAGT AATCGCAGAT CAGCATTGCT GCGGTGAATA CGTTCCCGGG CCTTGTACAC 1380
ACCGCCCGTC ACGTCACGAA AGTCGGTAAC ACCCGAAGCC GGTGGCCCAA CCCCTTGTGG 1440
GAGGGAGCTG TCGAAGGTGG GACTGGCGAT TGGGACGAAG TCGTAACAAG GTAGCCGTAC 1500
CGGAAGGTGC GGCTGGATCA CCTCCTAAGG GCAGC 1535
Claims (6)
1.一种具有溶藻活性的链霉菌，其特征在于：所述的链霉菌命名为链霉菌（Streptomyces sp. ）JXJ 0170，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13635，保藏日期为2017年01月17日。
2.如权利要求1所述的链霉菌在抑制蓝藻水华中的应用。
3.一种制备如权利要求1所述的链霉菌的发酵液的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：将链霉菌（Streptomyces sp.）JXJ 0170的保藏菌种接种于斜面培养基，25-32℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，25-32 ℃、120-200 rpm摇床培养1-3 d后接入发酵培养基，于25-32 ℃、120-200 rpm摇床培养4-9 d，即得链霉菌（Streptomyces sp. ）JXJ 0170发酵液。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述斜面培养基各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6 %，麦芽浸膏粉0.3-0.7 %，酵母浸膏粉0.2-0.6 %，琼脂1-2 %，水补余至100%，pH7.4；所述液体种子培养基各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6 %，麦芽浸膏粉0.3-0.7%，酵母浸膏粉0.2-0.6 %，水补余至100 %，pH7.4；所述发酵培养基各组分的质量比为：葡萄糖1-2 %，大豆豆粕粉0.5-1.5 %，酵母浸粉0.1-0.3 %，淀粉0.5-1.5 %，蛋白胨0.1-0.3 %，麦芽浸粉0.1-0.3 %，NaCl 0.3-0.5 %，K2HPO4 0.04-0.06 %，MgSO4•7H2O 0.04-0.06 %，CaCO3 0.1-0.3 %g，水补余至100 %，pH7.8。
5.一种制备如权利要求1所述的链霉菌的活干菌丝体杀藻剂的方法，其特征在于：将链霉菌（Streptomyces sp. ）JXJ 0170发酵液在4500 rpm的条件下离心，得到的菌丝体在真空冷冻条件下干燥，即得到活干菌丝体杀藻剂。
6.一种制备如权利要求1所述的链霉菌的孢子粉杀藻剂的方法，其特征在于：先将链霉菌（Streptomyces sp. ）JXJ 0170接种在固体培养基上，待孢子大量形成后，采用加热或真空冷冻法除去培养基中的水分，即得到孢子粉杀藻剂。
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