CN115011486A - 一株淡紫拟青霉及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物病害生物防治技术领域，提供了一株淡紫拟青霉及其应用。一株淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）DZ910，保藏编号为CGMCC No.40079。该菌株对辣椒叶斑病，桃褐斑病，大葱紫斑病，大白菜炭疽病和马铃薯早疫病均有较好的防效。本发明的淡紫拟青霉菌DZ910分离自田间土壤，未经任何基因修饰，因此将其释放到自然界中不会在成任何生态的、环境的隐患，是非常安全的生物防治介体；本发明的淡紫拟青霉DZ910同时对多种蔬菜病害具有防治作用，显示出该菌有较大的潜力开发成商品化的生物农药。

Description

一株淡紫拟青霉及其应用
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域，具体涉及一株淡紫拟青霉及其应用。
背景技术
目前在农业生产过程中，土传病害已经成为制约蔬菜等产业发展的的主要病害。土传病害一般是指发生在植物根部或茎部以土壤为传播媒介的侵染性病害。蔬菜等作物发生土传病害后，其危害巨大，传播迅速，防治困难，易造成农作物的品质下降，从而造成严重减产。我国是农业生产大国，目前主要通过使用化学药剂开展植物土传病害防控，农药使用持续期长，用量大。而化学农药的大量应用不仅容易造成高抗性病原菌的产生，而且对土壤等生态环境也会造成污染。
化学农药的长期使用和单一蔬菜的长期种植，植株残体上的病原菌随残体进入土壤，造成特异病原菌在土壤中的大量积累，从而使蔬菜病虫害发生越来越重。作物往往会出现生育状况变差、产量下降、品质变劣的现象。而由于长期施用化肥导致土壤的有机质减少，土壤微生物生态遭受破坏，使得土传病害连年加重，严重影响农业生产。土壤是一个非常复杂的生态环境，施用有益微生物可有效抑制有害病原菌，减少病害的发生。
淡紫拟青霉是目前研究及应用较多的一类生防微生物，其孢子产生量大，使用方便且对多种病原物均有抑制作用，高学彪等报道，淡紫拟青霉在对南方根结线虫卵的寄生率达60%-70%的基础上，还能在发酵过程中产生类似吲哚乙酸的产物，有效促进植株生长。
发明内容
针对北方果蔬病害防控中化学农药应用量大等问题，本发明提供一种病害防控范围广的淡紫拟青霉DZ910菌株，对辣椒叶斑病，桃褐斑病，大葱紫斑病，大白菜炭疽病和马铃薯早疫病菌效果好。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一株淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）DZ910，保藏编号为CGMCC No.40079。
一种包含上述淡紫拟青霉DZ910的农药或肥料。
优选地，所述农药或肥料的施用对象选自辣椒，桃，大葱，大白菜或马铃薯。
所述农药的防治对象为辣椒叶斑病菌，桃褐斑病菌，大葱紫斑病菌，大白菜炭疽病菌和马铃薯早疫病菌。
本发明具有以下优点：
本发明的淡紫拟青霉DZ910分离自田间土壤，未经任何基因修饰，因此将其释放到自然界中不会在成任何生态的、环境的隐患，是非常安全的生物防治介体；本发明的淡紫拟青霉菌DZ910同时对多种蔬菜病害具有防治作用，显示出该菌有较大的潜力开发成商品化的生物农药。
生物保藏信息
淡紫拟青霉菌（Paecilomyces lilacinus）DZ910，于2022年02月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为中国北京，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 40079。
附图说明
图1是DZ910菌株在PDA培养基上的形态（25℃，7天）；
图2是淡紫拟青霉DZ910分别与辣椒叶斑病菌、桃褐斑病菌、马铃薯早疫病菌和大蒜白斑病菌对峙培养结果。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1 DZ910菌株的分离及鉴定
1. DZ910菌株的分离
选择辣椒病害较为严重的地块，在相对未发生病害的植株周围取土：去除地表浮土，取根际3-10厘米左右的土样10克。将采集的土壤装入灭菌的三角瓶中，加入100 mL灭菌水，充分摇匀后静置10分钟，吸取上部液体做浓度梯度稀释，吸取100 μL不同稀释后的稀释液均匀涂布于PDA固体培养基上，于25℃培养3-5天，待长出菌落后。挑取菌落进行扩大培养，并以辣椒叶斑病菌（Alternaria alternata）为对象用平板对峙法进行筛选：将叶斑病菌接种于固体PDA培养基的一侧四分之一处，另一侧用无菌牙签接种待筛菌株，7天后观察对峙培养效果，测量抑菌圈直径，根据抑菌效果筛选获得最高效的防治菌种，编号为DZ910，将其以滤纸片法在50%甘油中保存于-80℃冰箱。
2. DZ910菌株的鉴定
将筛选得到的菌株DZ910接种于PDA培养基，25℃培养7天，观察显示，该菌株初始菌落呈白色，培养一周后呈浅粉红色，分生孢子呈椭圆形或纺锤形。
收集菌体，提取基因组DNA，采用引物ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)和ITS5(5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’)进行PCR扩增，将PCR产物回收后送至上海生物工程有限公司进行测序。测序结果在NCBI进行BLAST比对。经MEGA和ClustalW系统进化分析，并结合菌体形态观察，确定该菌株为淡紫拟青霉菌（Paecilomyces lilacinus），于2022年02月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No.40079。
实施例2 淡紫拟青霉DZ910对多种植物病害的抑制
将保存的淡紫拟青霉DZ910滤纸片取出，接种于PDA培养基上，于25℃培养7天后作为菌种。
以辣椒叶斑病菌（Alternaria alternata）、桃褐斑病菌（Alternaria tenuissima）、大葱紫斑病菌（Alternaria alternata）、大白菜炭疽病菌（Colletotrichum truncatum）、马铃薯早疫病菌（Alternaria alternata）、梨黑斑病菌（Alternaria porri）、葡萄黑霉病菌（Nigrospora sphaerica）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）和大蒜白斑病菌（Stemphylium eturmiunum）为防治对象，采用平板菌落对峙培养的方法检测淡紫拟青霉DZ910对上述植物病害的抑制效果：将淡紫拟青霉菌DZ910菌株接种于固体PDA培养基的一侧四分之一处，另一侧接种待试病原菌，每处理重复3次，25℃，培养7天后，测量对照的菌落直径（mm）和对峙培养菌落直径（mm）并计算抑制率。抑制率（%）=（对照菌落直径-对峙培养菌落直径）/对照菌落直径×100%。
表1 淡紫拟青霉DZ910对多种植物病原菌的抑制率（means±sd）
供试病原菌 抑制率（%）
辣椒叶斑病菌 95.2±1.1 a
桃褐斑病菌 87.9±4.3 b
大葱紫斑病菌 78.3±3.1 c
大白菜炭疽病菌 79.2±3.7 c
马铃薯早疫病菌 75.8±3.1 c
梨黑斑病菌 36.7±1.8 e
葡萄黑霉病菌 24.6±1.9 e
番茄灰霉病菌 21.2±3.3 e
大蒜白斑病菌 8.2±3.8 f
表中同列数据后不同小写字母表示在P < 0.05水平差异显著。
由表1可以看出，淡紫拟青霉菌株DZ910对辣椒叶斑病，桃褐斑病，大葱紫斑病，大白菜炭疽病和马铃薯早疫病菌的抑制率均高于70%，对以上病害均具有较强的抑制能力。但是对梨黑斑病、葡萄黑霉病、番茄灰霉病和大蒜白斑病的抑制率均低于30%，效果较差。
由图2可以看出，淡紫拟青霉DZ910与辣椒叶斑病菌，桃褐斑病菌和马铃薯早疫病菌对峙培养后，病原菌几乎没有生长或菌落很小，淡紫拟青霉DZ910几乎布满培养皿，说明防控效果较好；然而与大蒜白斑病菌对峙培养后，大蒜白斑病菌的生长几乎未受抑制，说明其对大蒜白斑病菌的抑制效果差。

Claims (4)

1.一株淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）DZ910，保藏编号为CGMCC No. 40079。
2.一种包含权利要求1所述淡紫拟青霉DZ910的农药或肥料。
3.根据权利要求2所述的农药或肥料，其特征在于，其施用对象选自辣椒，桃，大葱，大白菜或马铃薯。
4.根据权利要求2所述的农药或肥料，其特征在于，其防治对象为辣椒叶斑病菌，桃褐斑病菌，大葱紫斑病菌，大白菜炭疽病菌和马铃薯早疫病菌。
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