CN111803528A - 一种冠突散囊菌制品及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种冠突散囊菌制品,所述冠突散囊菌制品包括冠突散囊菌和药学上可接受的辅料。本发明还提供了所述冠突散囊菌制品在制备预防、治疗脑血栓的药物中的应用;以及所述冠突散囊菌制品在降低血液中总胆固醇含量、三酰甘油含量、丙二醛含量、血液粘度、脑血管的通透性、或提高超氧化物歧化酶活性中的应用。本发明的冠突散囊菌制品能够抑制血栓的形成,使血液中的总胆固醇和三酰甘油的含量、血液粘度、脑血管的通透性及丙二醛水平降低,提高超氧化物歧化酶活性活性,对脑血栓具有一定的预防或者治疗作用。与现有技术相比,无毒副作用,见效快,疗效好,为脑血栓疾病提供了一种新的治疗思路,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物菌剂技术领域,具体地,涉及一种冠突散囊菌制品及其应用。
背景技术
脑血栓作为一种严重的缺血性脑血管疾病,是导致人类死亡的三大杀手之一,对人类健康造成致命的威胁。据流行病学数据显示,脑血栓发病率约占脑血管疾病发病总数的80%以上。近百年来,全国的脑血栓发病率和死亡率一直呈现递增趋势。脑血栓形成是一种常见的脑部疾病,主要由于脑动脉主干或皮质支动脉粥样硬化导致血管管壁增厚、管腔狭窄、闭塞,或者在此基础上形成血栓,使脑局部血流减少,供血中断,脑组织缺血缺氧、软化坏死而出现病变。脑血栓的尽早治疗对于降低中老年人病死率、减少并发症后遗症及恢复自身身体各项功能具有重要意义。因此如何有效的预防、治疗脑血栓疾病一直是医学界关注的焦点。
目前,临床上治疗脑血栓疾病一般采用溶栓疗法,主要通过溶栓来解除梗死。现有的治疗药物作用单一,往往需要多个药物联合使用才能治疗,但质量难控,用药风险高,更易引起脑出血等症状。而高疗效药物伴随不良毒副作用,存在安全性风险;保证安全性的药物又存在疗效不佳、见效慢等缺点。另外由于该病的复杂性与特殊性,治疗的疗程长,时间久,使其在市场上的应用具有一定的局限性。因此,开发一种新型的、安全有效的预防或治疗脑血栓疾病的药物迫在眉睫。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明提供一种冠突散囊菌制品,其能够抑制血栓的形成,使血液中的总胆固醇和三酰甘油的含量、血液粘度、脑血管的通透性及丙二醛水平降低,提高超氧化物歧化酶活性活性,对脑血栓具有一定的预防或者治疗作用。
具体来说,本发明涉及如下技术方案:
1.一种冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌制品包括冠突散囊菌和药学上可接受的辅料。
2.根据项1所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌的分类命名为Eurotium cristatum,其保藏编号为CGMCC NO.15398。
3.根据项1所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌为茯茶来源的冠突散囊菌。
4.根据项1-3中任一项所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌为冠突散囊菌菌丝和冠突散囊菌孢子中的一种或两种的组合。
5.根据项4所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌菌丝为破壁状态,所述冠突散囊菌孢子为破壁状态。
6.根据项1-5中任一项所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌制品是口服剂或注射剂。
7.根据项6所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述口服剂是片剂、胶囊剂或冲剂。
8.根据项6所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述药学上可接受的辅料包括药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。
9.项1-8中任一项所述的冠突散囊菌制品在制备预防、治疗脑血栓的药物中的应用。
10.项1-8中任一项所述的冠突散囊菌制品在降低血液中总胆固醇含量、三酰甘油含量、丙二醛含量、血液粘度、脑血管的通透性、或升高超氧化物歧化酶活性中的应用。
本发明的冠突散囊菌制品能够抑制血栓的形成,使血液中的总胆固醇和三酰甘油的含量、血液粘度、脑血管的通透性及丙二醛水平降低,提高超氧化物歧化酶活性活性,对脑血栓具有一定的预防或者治疗作用。与现有技术相比,无毒副作用,见效快,疗效好,为脑血栓疾病提供了一种新的治疗思路,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明,应当理解,实施例仅用于进一步说明和阐释本发明,并非用于限制本发明。
除非另外定义,本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料,本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下,以本说明书包括其中定义为准,另外,材料、方法和例子仅供说明,而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但不用来限制本发明的范围。
本发明提供一种冠突散囊菌制品,所述冠突散囊菌制品包括冠突散囊菌和药学上可接受的辅料。
在一个具体的实施方案中,所述冠突散囊菌的分类命名为Eurotium cristatum,其于2018年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.15398,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
在一个具体的实施方案中,所述冠突散囊菌为茯茶来源的冠突散囊菌。
在一个具体的实施方案中,本发明制品中所述冠突散囊菌为冠突散囊菌菌丝和冠突散囊菌孢子中的一种或两种的组合。即可以为冠突散囊菌菌丝,也可以为冠突散囊菌孢子,也可以由冠突散囊菌菌丝和冠突散囊菌孢子以任意的配比构成。
冠突散囊菌菌丝和冠突散囊菌孢子可以是经过物理、生物或化学方法处理的破壁状态,也可以是不处理的非破壁状态。在一个优选的实施方案中,所述冠突散囊菌菌丝为破壁状态,所述冠突散囊菌孢子为破壁状态。所述的物理、生物、化学方法处理破除细胞壁是指本领域技术人员所经常采用的破壁方法,如:高压匀浆、超声波破壁、生物酶法破壁及酸碱破壁等。
所述药学上可接受的辅料包括药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。它们与活性成分相容。所述药学上可接受的辅料是本领域技术人员所公知的,例如可以为硬脂酸镁、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素或羧甲淀粉钠。
在一个具体的实施方案中,所述所述冠突散囊菌制品是口服剂或注射剂。所述的口服剂是硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊、糖衣片、粉剂、冲剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液;所述的注射剂为溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉。
在一个优选的实施方案中,所述突散囊菌制品是口服剂。再进一步优选的实施方案中,所述口服剂是片剂、胶囊剂或冲剂。
本发明还提供上述的冠突散囊菌制品在制备预防、治疗脑血栓疾病的药物中的应用。
本发明还提供上述的冠突散囊菌制品在降低血液中总胆固醇含量、三酰甘油含量、丙二醛含量、血液粘度、脑血管的通透性、或升高超氧化物歧化酶活性中的应用。
本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述,在下面的实施例中,如果无其他特别的说明,%表示wt%,即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规试剂产品或者常规的实验仪器。
以下是本发明的具体实施,所述的实施例是为了便于进一步理解本发明,而不限制本发明的权利要求和核心内容。
实施例1冠突散囊菌的菌丝和孢子的制备
本实施例采用的冠突散囊菌的分类命名为Eurotium cristatum,其于2018年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.15398,它也从是茯茶中分离得到的。
(1)冠突散囊菌菌丝制备
按照8%-10%的接种量将冠突散囊菌接种于含有10L富锌液体深层发酵培养基的发酵罐中,其中,培养基按质量体积比为:葡萄糖25g/L、蛋白胨2g/L、玉米浆干粉2.5g/L、酵母粉10g/L、KH2PO4 2g/L、MgSO4·7H2O 4.1g/L、(NH4)2SO4 5g/L、亚锌酸钠33.3mg/L,培养温度为28-30℃,pH 5.0-5.5,通气量为5-20L/min,培养96h,收集发酵产物中的菌丝,将其置于60-65℃环境下干燥48h,即得。
(2)冠突孢子的制备
将冠突散囊菌接种于PDA(葡萄糖马铃薯琼脂)培养基上,待长至培养基被金黄色孢子完全覆盖(培养96h),收集固体培养基上的孢子,置于冻干机中冻干后即为冠突孢子粉。
(3)冠突散囊菌破壁菌丝或破壁孢子制备
将制备得到的冠突散囊菌菌丝或孢子用无菌水配制成混悬液后置于高压匀浆机上,以1500bar的压力匀浆2个循环,即为破壁菌丝或孢子悬液,置于冻干机中冻干后即为冠突破壁菌丝或孢子粉。
实施例2冠突散囊菌制品的制备-胶囊
使用实施例1制备的冠突散囊菌的菌丝和孢子按照不同的比例制备冠突散囊菌制品的胶囊形式。具体的,按照不同的配比制备如下5种不同的胶囊。
(1)按照表1的配比制成胶囊(1000粒,冠突散囊菌含量200mg/粒)。
表1冠突散囊菌胶囊的组分配比
(2)按照表2的配比制成胶囊(1000粒,冠突散囊菌含量200mg/粒)。
表2冠突散囊菌胶囊的组分配比
(3)按照表3的配比制成胶囊(1000粒,冠突散囊菌含量200mg/粒)。
表3冠突散囊菌胶囊的组分配比
(4)按照表4的配比制成胶囊(1000粒,冠突散囊菌含量200mg/粒)。
表4冠突散囊菌胶囊的组分配比
(5)按照表5的配比制成胶囊(1000粒,冠突散囊菌含量200mg/粒)。
表5冠突散囊菌胶囊的组分配比
具体的在制备时,将上述主药和辅料分别过80目筛,充分混匀,采用75%乙醇为粘合剂,用16目筛网制粒,55-60℃干燥,14目筛网整粒,灌胶囊,每粒0.45g。
实施例3冠突散囊菌制品的制备-片剂
按照表6的配比制成片剂(1000片,冠突散囊菌含量200mg/片)。
表6冠突散囊菌的组分配比
具体的在制备时,将上述主药和辅料分别过80目筛,充分混匀,采用75%乙醇为粘合剂,用16目筛网制粒,55-60℃干燥,14目筛网整粒,压片,每片0.3g。
实施例4冠突散囊菌制品的制备-冲剂
按照表7的配比制成冲剂(1000袋,冠突散囊菌含量300mg/袋)。
表7冠突散囊菌的组分配比
具体的在制备时,将上述主药和辅料分别过80目筛,充分混匀,采用75%乙醇为粘合剂,用16目筛网制粒,55-60℃干燥,14目筛网整粒,装袋,每袋0.6g。
实施例5冠突散囊菌制品治疗脑血栓体内动物学实验
1.实验材料
1.1药品与试剂
本实施例选择的是实施例2制备的冠突散囊菌胶囊,其有效成分含量为200mg/片。阿司匹林片购自上海康朗生物科技有限公司。伊文思蓝购于中国医药上海化学试剂公司。总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)测试盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2仪器
多功能酶标仪(美国康宁生物科技有限公司),7150型全自动生化分析仪(日本日立公司)。
1.3动物
Wistar雄性大鼠,体重约220~300g,购买于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。于SPF级条件下饲养,自由饮食,温度25±2℃,湿度60±10%。
2.实验方法
2.1脑血栓模型建立
将100只雄性大鼠适应性饲养一周后,随机挑选10只作为正常组(不做任何处理,空白对照),其余均经腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg),全部麻醉。按照文献提供的方法,在右眼外眦到右外耳道连线的中点位置,将皮肤划开(长度约2cm)。沿颧弓下缘将咬肌和颞肌切断,分离切除下颌骨冠状突,使鳞状骨暴露,在颧骨和鳞状骨前内2mm处钻孔开颅,暴露大脑中动脉。放置大小合适的塑料薄膜保护血管周围组织。将小片滤纸吸附10μL 50%FeCl3溶液并敷在该段中动脉上30min,随之将其取出。作为对照,任意10只动物的大脑主动脉处敷上浸有10μL生理盐水的滤纸。最后将其局部组织用生理盐水反复冲洗并逐层缝合。24h后观察动物精神状态及活动情况。将动物提尾离开地面,若观察到左侧前肢紧贴胸壁或将两前肢置金属网上,亦或者观察到左侧前肢肌张力下降,出现上述症状之一,视为阳性,即为造模成功。实验过程中观察到对照组动物状态良好,未见任何异常症状。其余动物术后状态较差,大多数倦缩,嗜睡,几乎无活动,有些动物出现向一侧旋转的情况。根据上述判断标准,从中挑选出70只作为脑血栓模型大鼠。
2.2实验分组、给药及相关指标检测
除上述空白对照组(等量生理盐水)外,70只模型大鼠根据体重随机分组,即为模型组(等量生理盐水)、冠突散囊菌菌丝组(120mg/kg)、冠突散囊菌破壁菌丝组(120mg/kg)、冠突散囊菌孢子粉组(120mg/kg)、冠突散囊菌破壁孢子粉组(120mg/kg)、冠突散囊菌破壁菌丝+破壁孢子粉组(120mg/kg)、阿司匹林片组(25mg/kg)。以上组别均灌胃给药,每天1次,持续20天。第20天以后,将一半大鼠处死,并立即取脑,4℃匀浆,离心,测定TC、TG、SOD和MDA含量。另外一半大鼠于末次给药后,间隔2h,腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉,通过舌下静脉注射伊文思蓝(30mg/kg)。6h后将大鼠处死,立即取脑组织,置于0.5%Na2SO3-丙酮(体积比3:7)溶液中,捣碎并浸泡过夜,离心取上清,于650nm处测吸光度OD值,以吸光度OD值与脑组织重量的比值作为其伊文思蓝水平。该值越大,说明伊文思蓝通过血脑屏障渗入脑实质量增加,脑血栓越严重。
3.试验结果
3.1冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠脑血管通透性的影响
表8显示了冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠脑组织伊文思蓝水平的影响。与模型组相比,冠突散囊菌胶囊组和阿司匹林片组能明显降低脑组织中伊文思蓝水平,且表现出显著性差异(P<0.05)。和冠突散囊菌菌丝组和冠突散囊菌孢子粉组相比,冠突散囊菌破壁菌丝组、冠突散囊菌破壁孢子粉组及冠突散囊菌破壁菌丝+破壁孢子粉组表现出的效果更好。上述结果表明,冠突散囊菌胶囊能够降低脑血栓模型大鼠的脑血管的通透性,保护血脑屏障,抑制脑血栓形成。
表8冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠脑组织伊文思蓝水平的影响(x±s)
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
3.2冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠脑组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平的影响
表9显示了冠突散囊菌胶囊对脑组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平的影响。和空白组相比,模型组大鼠MDA水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),说明经造模后大鼠抗氧化能力减弱,脑血栓严重。与模型组相比,对于冠突散囊菌胶囊组和阿司匹林组,其MDA水平明显降低,SOD活性明显升高,表现出显著性差异(P<0.05)。和冠突散囊菌菌丝组和冠突散囊菌孢子粉组相比,冠突散囊菌破壁菌丝组、冠突散囊菌破壁孢子粉组及冠突散囊菌破壁菌丝+破壁孢子粉组表现出更明显的效果。上述结果表明冠突散囊菌胶囊在降低MDA水平和提高SOD活性方面具有良好的效果。
表9冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠血清SOD活性和MDA水平的影响(x±s)
与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较:△P<0.05;△△P<0.01
3.3冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的影响
表10显示了冠突散囊菌胶囊对模型大鼠总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的影响。和空白对照组相比,模型组大鼠TC和TG含量显著提高(P<0.01),说明经造模后的大鼠血浆粘度增加,加速了血管内壁动脉粥样硬化的形成。与模型组相比,对于冠突散囊菌胶囊组和阿司匹林组,其TC和TG含量明显降低(P<0.05)。和冠突散囊菌菌丝组和冠突散囊菌孢子粉组相比,冠突散囊菌破壁菌丝组、冠突散囊菌破壁孢子粉组及冠突散囊菌破壁菌丝+破壁孢子粉组表现出的效果更好。上述结果表明冠突散囊菌胶囊在降低TC和TG含量方面具有良好的效果。
表10冠突散囊菌胶囊对脑血栓模型大鼠总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的影响
与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较:△P<0.05;△△P<0.01
上述实施例表明,本发明提供的茯茶金花益生菌冠突散囊菌能够抑制脑血栓的进一步形成,使TC和TG的含量、血液粘度、脑血管的通透性和MDA水平降低,提高SOD活性,对脑血栓疾病具有明显的保护或者治疗作用。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明作其它形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌制品包括冠突散囊菌和药学上可接受的辅料。
2.根据权利要求1所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌的分类命名为Eurotium cristatum,其保藏编号为CGMCC NO.15398。
3.根据权利要求1所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌为茯茶来源的冠突散囊菌。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌为冠突散囊菌菌丝和冠突散囊菌孢子中的一种或两种的组合。
5.根据权利要求4所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌菌丝为破壁状态,所述冠突散囊菌孢子为破壁状态。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述冠突散囊菌制品是口服剂或注射剂。
7.根据权利要求6所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述口服剂是片剂、胶囊剂或冲剂。
8.根据权利要求6所述的冠突散囊菌制品,其特征在于,所述药学上可接受的辅料包括药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。
9.权利要求1-8中任一项所述的冠突散囊菌制品在制备预防、治疗脑血栓的药物中的应用。
10.权利要求1-8中任一项所述的冠突散囊菌制品在降低血液中总胆固醇含量、三酰甘油含量、丙二醛含量、血液粘度、脑血管的通透性、或提高超氧化物歧化酶活性中的应用。
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