CN102885841B - 安石榴苷的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中医药领域，公开了安石榴苷的新应用具体的说是公开了安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发疾病的药物中的应用。试验表明安石榴苷具有抑制EV71的复制和病变作用，可以提高EV71毒株感染10日龄ICR模型小鼠的生存率，达到治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的目的。因此本发明提供了安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物中的应用。

Description

安石榴苷的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体的说是涉及安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发疾病的药物中的应用。

背景技术

肠道病毒71型（Human enterovirus 71，EV71）属于小RNA病毒科（Picornaradae）肠道病毒属（Enterovirus）的成员，归属于人类肠道病毒A。1974年Schmidt等人首次报道从美国加利福尼亚暴发的表现为神经系统症状疾病（1969～1973年）的患者中分离到EV71，随后，世界上许多国家相继报道了EV71病毒在不同地区的流行情况，EV71病毒已在世界范围内引起多次暴发与流行，人们逐渐认识到EV71病毒是手足口病的主要病原。目前已知EV71主要感染6岁以下婴幼儿，可以导致手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎（asepic meningitis）、脑炎（encephalitis）和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病（poliomyelitis-like paralysis）等多种与神经系统相关的疾病。EV71可导致大范围的暴发流行，可伴有严重的CNS并发症或致死性肺水肿。近年来，EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势，1975年保加利亚大流行,共有705名患儿感染，死亡44例；1997年马来西亚大流行感染2628人，死亡30多人；1998年，台湾地区暴发EV71的大流行，约有12万以上的人被感染，死亡78人。目前，对于EV71感染尚没有公认的特效药物或疫苗。

石榴（Punica granatum L.）为石榴科石榴属植物的果实，别名安石榴、海榴。石榴全身是宝，果皮、根、花皆可入药。石榴果皮中含有苹果酸、鞣质、生物碱等成分，据有关实验表明，石榴皮有明显的抑菌和收敛功能，能使肠黏膜收敛，使肠黏腊的分泌物减少，所以能有效地治疗腹泻、痢疾等症，对痢疾杆菌、大肠杆菌有较好的抑制作用。另外，石榴的果皮中含有碱性物质，有驱虫功效。石榴花则有止血功能，且石榴花泡水洗眼，还有明目的效果。石榴汁含有多种氨基酸和微量元素，有助消化、抗胃溃疡、软化血管、降血脂和血糖，降低胆固醇等多种功能，可防止冠心病、高血压，可达到健胃提神、增强食欲、益寿延年之功效，对饮酒过量者，解酒有奇效。近年来，国内外研究发现石榴中最具医疗特性的化学成分是鞣花酸、鞣花单宁（包括安石榴苷）、石榴酸、类黄酮、花青素和类酮类物质等，其中安石榴苷为石榴中的主要活性成分。

安石榴苷为多酚类化合物，分子式为C₄₈H₂₈O₃₀，分子量为1084.72，结构如下：

安石榴苷水溶性很好，人体容易吸收。现代药理研究表明，安石榴苷具有多种生物活性，包括抗氧化、抗肿瘤、肝保护、免疫抑制和抗疱疹病毒复制等活性，然而，还未见安石榴甙在对EV71的抑制作用方面的相关研究报道。

发明内容

本发明提供了安石榴苷的新应用，即安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发疾病的药物中的应用。

首先，本发明通过EV71感染人横纹肌瘤细胞的模型检测安石榴苷在细胞中对EV71的复制的影响。结果显示，安石榴苷抑制半数细胞病变的浓度为15微克/毫升，表明在细胞内安石榴苷具有抑制EV71复制的作用。

进一步的，本发明通过EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型检测了不同药物处理对EV71感染小鼠的生存率影响。结果显示，每天给予0.4毫克/千克体重/天、1毫克/千克体重/天和5毫克/千克剂量的安石榴苷3次，持续给药3天，小鼠的死亡率分别降低到20%、40%和38%，而模型组小鼠死亡率为100%；并且给药组的小鼠症状减弱，体重下降和瘫痪特征明显变缓，14天后存活的小鼠恢复正常，表明安石榴苷可以抑制EV71在小鼠体内的病变，提高模型小鼠的生存率。

综上所述，安石榴苷在体外具有抑制EV71的复制和病变作用，可以提高EV71毒株感染10日龄ICR模型小鼠的生存率，达到治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的目的。因此本发明提供了安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物中的应用。

其中，本发明所述人类肠道病毒71型感染引发的疾病优选为手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、迟缓性麻痹、肺水肿或病毒性心肌炎。

本发明所述安石榴苷可以为安石榴苷单体、安石榴苷盐、安石榴苷水合物、安石榴苷光学异构体或安石榴苷前药中的一种或几种混合物。

本发明还提供了一种治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物制剂，由有效量的安石榴苷和药学上可接受的辅料组成。本领域技术人员可将所述安石榴苷直接或间接加入制备不同剂型时所需的药学上可接受的各种常用辅料，如崩解剂、润滑剂、乳化剂、粘合剂等，以常规药物制剂方法，制成治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的常用制剂如口服液、注射液、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、滴丸剂等。

附图说明

图1示实施例1安石榴苷在细胞中对EV71的复制的剂量-抑制曲线图；

图2示实施例2EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型中不同药物处理对EV71感染小鼠的生存率影响的统计结果图。

具体实施方式

本发明实施例公开了安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物中的应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1、安石榴苷抑制EV71在细胞中的复制

实验材料：EV71为中国大陆地区流行毒株，菌株名称FY0805，分离自安徽阜阳，基因序列在NCBI中存储号为HQ882182；安石榴苷购自中国药品生物制品检定所，HPLC检测含量>98%；细胞培养试剂购自Invitrogen公司。

实验方法：在EV71感染人横纹肌瘤细胞模型中，将新培养24小时人横纹肌瘤细胞接种至96孔板中，每孔细胞数量2×10⁴个。37℃孵箱中培养24小时后，开始接种EV71病毒。病毒接种细胞的剂量为100TCID₅₀，体积为98微升，继续在37℃孵箱中培养。

安石榴苷用生理盐水溶解，并在病毒感染细胞2小时后给药，药物体积为2微升，安石榴苷终浓度分别为0.1微克/毫升、0.5微克/毫升、1微克/毫升、2微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、200微克/毫升。观察2天内细胞病变，根据细胞病变的孔数计算药物的抑制曲线，结果见图1。

由图1的抑制曲线可见，安石榴苷抑制半数细胞病变的浓度为15微克/毫升。由此可见，安石榴苷可抑制EV71在细胞中的复制。

实施例2、安石榴苷对EV71感染小鼠的治疗效果

验证安石榴苷在小鼠体内对EV71治疗效果，所用模型为中国大陆地区流行EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型。毒株为临床分离株FY0805在小鼠体内的适应株，毒株名为MP10，基因序列在NCBI中存储号为HQ712020。以1×10⁷TCID₅₀剂量的MP10病毒经腹腔注射感染10日龄ICR小鼠后，可导致小鼠在4日内表现出后肢瘫痪和体重减轻症状，并于感染后10天内全部死亡。

应用上述模型，对安石榴苷的治疗效果进行体内评价。使用小鼠为SPF级ICR小鼠，10日龄，雌雄各半。分别设安慰剂组、利巴韦林组和安石榴苷组进行治疗，每组小鼠数量为10只。首先，经腹腔注射对小鼠进行病毒感染，感染2小时后开始经腹腔注射给药（安石榴苷用生理盐水溶解），安石榴苷设置剂量分别为0.4毫克/千克体重/天、1毫克/千克体重/天和5毫克/千克体重/天，每组每天给药3次，连续给药3天。自病毒感染之日起，持续观察14天，每天观察2次，记录小鼠的体重、症状和生存率，评价安石榴苷对EV71感染的治疗效果。实验重复两次，生存率结果见图2。

由图2结果可见，每天给予0.4毫克/千克体重/天、1毫克/千克体重/天和5毫克/千克剂量的安石榴苷3次，持续给药3天，小鼠的死亡率分别降低到20%、40%和38%，而模型组小鼠死亡率为100%；并且给药组的小鼠症状减弱，体重下降和瘫痪特征明显变缓，14天后存活的小鼠恢复正常。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的应用及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (3)

1.安石榴苷在制备治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人类肠道病毒71型感染引发的疾病为手足口病、疱疹性咽峡炎、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、迟缓性麻痹、肺水肿或病毒性心肌炎。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在治疗人肠道病毒71型感染引发的疾病的药物中所述安石榴苷以安石榴苷单体或安石榴苷盐中的一种或两者的混合物的形式存在。

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