CN102342961A - 羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用 - Google Patents
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Abstract
羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用,包括以羊肚菌为原料,与药物中允许的辅料或辅助性成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功能的口服药物,和/或与食用原料和/或食品添加成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功效的功能食品。所说的羊肚菌可包括羊肚菌的子实体,以及以液体发酵方式培养得到的菌丝体或菌丝体与发酵液的混合物等各种形式的发酵产物。实验结果显示,本发明以羊肚菌为原料的组合物对多种因素引起的胃粘膜损伤均具有显著的保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及的是羊肚菌的新用途,更具体讲是羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用。
背景技术
胃溃疡是一种常见和多发的病症,可由多种致病因素引起,其作用机制和作用特点各不相同,一般可包括:
1、非甾体抗炎药物引起胃损伤
包括阿司匹林、消炎痛等具有抗炎、解热、镇痛作用的非甾体抗炎药物(Nonsteridalanti-inflammatory drugs,NSA1D)可引起胃损伤。一般认为其可通过破坏胃粘膜屏障,改变细胞膜的通透性,影响粘膜血流和细胞再生,抑制前列腺素等机制损伤胃粘膜。
2、酒精引起的胃损伤
酒精可增强细胞膜的通透性,破坏胃粘膜屏障而致溃疡,另外酒精可以刺激胃剧烈蠕动,引起机械性胃损伤。
3、应激性引起胃损伤
有资料表明,应激状态下胆碱能神经元功能亢进造成的平滑肌强烈收缩,可致胃粘膜屏障功能下降和粘膜缺血而导致溃疡。
4、幽门螺杆菌(HP)引起胃损伤
幽门螺杆菌分泌一些毒素及潜在的毒性酶例如:细胞毒素、尿素酶、粘蛋白酶、脂多糖、脂酶和磷脂酶A,溶血素等都对胃粘膜有直接或间接的损伤作用。另外,幽门螺杆菌还能诱发一些如粘膜侵入、嗜中性粒细胞的激活、单核及巨噬细胞的激活、白细胞移动抑制、血小板活化因子(Pa1)、自身免疫反应、嗜酸粒细胞浸润和脱颗粒等一些胃粘膜炎症反应,引起胃损伤。
羊肚菌是属于子囊菌亚门(Ascomycotina),盘菌纲(Discomycetes),盘菌目(Pezizales),羊肚菌科(Morchellaceae),羊肚菌属(Morchella)的一类菌类植物,以其菌盖表面生有许多小凹坑,外观极似羊肚而得名,是一种野生名贵食/药用菌,肉质脆嫩可口。羊肚菌子实体和菌丝体中均含有丰富的营养成分,包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、粗纤维、核黄素、烟酸、叶酸和维生素等多种成分。据我国传统中医记载,羊肚菌含有多种药用成分,性平、味甘,具有润胃健脾、化痰理气、益肠消食等功效。民间常用于消化不良、痰多气短及其它呼吸道疾病,疗效显著。现代医学研究表明,羊肚菌有降血脂、调节机体免疫力、抗疲劳、抗病毒、抑制肿瘤、减轻放化疗引起的毒副作用等功效。如,孙玉军等报道了对羊肚菌胞内多糖对小鼠肝脏的损伤具有明显的保护作用的研究(羊肚菌胞内多糖对小鼠急性肝损伤的影响[J].中国食用菌,2008,27(2):41-42,45)。孙晓明等报道了利用羊肚菌子实体研制了一种保健食品“羊肚菌胶囊”,具有免疫调节、抗疲劳保健等功能(新型保健食品-羊肚菌胶囊的研究[J].中国食用菌,2000,20(1):38-40)。吴映明等报道了对羊肚菌提取液具有加强小肠推进和促进排空功效的研究(羊肚菌对小鼠小肠推进功能的研究.广东教育学院学报.2005,25(3);羊肚菌对小鼠胃排空的影响[J].辽宁中医药大学学报.2007,9(4))。贾建会等报道了用羊肚菌液体发酵制品灌胃小鼠,表明羊肚菌发酵液能抑制小鼠肉瘤S-180(羊肚菌发酵制品保健机理初探[J].食用菌,1996,4:40-42)。
本发明人经长期的研究和大量实验证实,除上述的研究报道外,羊肚菌对胃溃疡也具有显著的预防和治疗功效。
发明内容
鉴于此,本发明的目的是提供一种羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用。
本发明所说的羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用,除可以直接单独使用外,特别还包括以羊肚菌为原料,与药物中允许的辅料或辅助性成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功能的口服药物,或以羊肚菌为原料,与食用原料和/或食品添加成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功效的功能食品等不同形式。例如,与药物制剂中常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料成分,共同制成为适合于临床使用的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体等口服型药物制剂;以羊肚菌为原料,或作为食品添加类成分,与食品生产中可以使用的粮食类原料和/或其它允许使用的食品添加成分,共同组成的相应功能性食品、保健品等。
在上述的组合物中,所说的羊肚菌,既可以采用目前已有报道的羊肚菌的子实体,也可以是目前已有报道/采用的由液体发酵方式培养得到的发酵产物,包括液体发酵产物中的羊肚菌菌丝体,或该羊肚菌菌丝体与发酵液的混合物等多种形式。
据文献记载,目前常见的羊肚菌,可包括有小顶羊肚菌(M.angusticeps);尖顶羊肚菌(M.conica);粗柄羊肚菌(M.crassipes);小羊肚菌(M.deliciosa);开裂羊肚菌(M.diatans)等多个羊肚菌种。实验表明,不同种的羊肚菌在本发明的应用中,均可具有保护胃粘膜的作用。
以12株不同的羊肚菌菌株,经液体发酵培养得到的菌丝体进行了保护胃黏膜作用的实验。其中,菌株YDJ1、YDJ2为小顶羊肚菌;YDJ3、YDJ4、YDJ5为尖顶羊肚菌;YDJ6、YDJ7为粗柄羊肚菌;YDJ8、YDJ9为小羊肚菌;YDJ10、YDJ11、YDJ12为开裂羊肚菌。
液体发酵培养的菌丝体制备方法为:在新鲜的斜面培养基中接入羊肚菌菌丝体,24℃培养,待菌丝长满斜面后,将斜面菌种接入装有250ml培养基的500ml三角瓶,于25℃、150转/分钟摇床中培养。摇瓶培养基的配方为:土豆200(克/升),葡萄糖20,蛋白胨2,KH2PO4 1.5,MgSO4 0.5,起始pH值6.5。摇床中培养168小时,过滤发酵液得到菌球冷冻干燥,干燥后的菌球粉碎后加水定容至1g/ml,得羊肚菌菌丝样品。
试验动物为18-22g昆明小鼠,试验采用乙醇致胃粘膜损伤模型。各组动物连续给药9天后,禁食不进水24小时,第10天给予无水乙醇0.1ml/10g,1小时后,脱臼处死,解剖取胃放入10%的福尔马林中浸泡10分钟,然后沿胃大弯剖开,按照Guth法测定胃粘膜损伤指数,计算胃黏膜损伤抑制率,计算公式:
胃黏膜损伤抑制率=(模型组损伤指数-给药组损伤指数)/模型组损伤指数×100%
试验结果如表1。试验结果表明,各个羊肚菌菌株对酒精引起的胃黏膜损伤均具有保护作用,其中以尖顶羊肚菌的保护作用最好。
注:n=10;与模型组相比**P<0.01;*P<0.05
以羊肚菌的子实体、由液体发酵得到的羊肚菌菌丝体,以及液体发酵后的菌丝体与发酵液的混合物等不同形式的羊肚菌,进行了对胃黏膜保护作用的对比试验,考察不同形式的羊肚菌原料对胃粘膜的保护作用。
其中,羊肚菌子实体样品:为野生采集的尖顶羊肚菌,40℃烘干并粉碎后,加水定容至1g/ml。羊肚菌菌丝体样品:取混合均匀的1000ml上述同样方式的发酵液,离心(5000r/min)10分钟,沉淀物用水洗涤三次,收集菌丝体,冷冻干燥后,粉碎,最后定容到2g/ml。发酵液与菌丝体的混合物样品:取混合均匀的1000ml同样发酵液,用匀浆机打碎,武火煮沸并浓缩至与菌丝相同的剂量。
试验采用乙醇致小鼠胃粘膜损伤模型。试验结果如表2所示。
结果表明,羊肚菌羊肚菌的子实体、羊肚菌的液体发菌丝体或液体发酵菌丝体与发酵液的混合物等不同形式的羊肚菌原料,对胃粘膜均具有保护作用。其中,羊肚菌的液体发菌丝体或液体发酵菌丝体与发酵液的混合物均保护作用相当,羊肚菌子实体的作用低于前两者。
组别 | 剂量(g/kg) | 溃疡指数 | 抑制率% |
模型组 | - | 55.33±13.76 | 0 |
子实体 | 2 | 39.77±7.72* | 28.12 |
菌丝体 | 2 | 27.78±8.81** | 49.80 |
混合物 | 2 | 30.22±7.64** | 44.15 |
注:n=10;与模型组相比**P<0.01;*P<0.05
本发明所说的对羊肚菌的菌丝体及菌丝体与发酵液的混合物等液体发酵产物,除采用上述形式的培养基制备得到外,其液体发酵培养基的成分,还可以选择目前已有报道/使用的各种适合羊肚菌液体发酵的培养基成分及其组合。例如,可以选择使用的目前已有文献报道的多种羊肚菌液体发酵培养基成分及组合形式有:
①麦麸4%,玉米粉2%,黄豆粉1%,MgSO4和KH2PO4各0.1%(王莹:羊肚菌深层发酵及动力学研究.吉林大学.2006),
②马铃薯(去皮)10%、蔗糖3%、蛋白胨0.1%、MgSO4·7H2O 0.05%、KH2PO4 0.05%、酵母浸膏5%(杨芳等:不同碳、氮源对羊肚菌生长与胞内多糖的影响[J].食品科学.2008.11(28):396-400),
③麸皮200g,葡萄糖30g,NHNO31g,KH2PO42g,MgSO4·7H2O1.5g(李娟等:产胞外多糖泰山羊肚菌液体培养条件的优化[J].食品与发酵工业.2005.1(31):80-82),
④蔗糖4%、麸皮2%、NH4NO30.3%、KH2PO40.15%、MgSO40.15%和酵母膏0.5%(武秋立等:羊肚菌的液体深层培养[J].食品与发酵工业.2004.2(30):72-76),
⑤淀粉4.5%,豆饼粉1.2%,酵母膏0.1%(赵良启等:羊肚菌液态发酵的研究[J].菌物系统.1999.18(1):94~99),
⑥蔗糖4%,胰蛋白胨0.4%,酵母粉0.15%,天门冬酰胺0.08%,KH2PO40.145%,MgSO40.05%,NaH2PO4.2H2O0.048%,VB10.0025%,CaCl20.0013%(邢增涛等:尖顶羊肚菌液体培养条件的研究[J].食用菌学报.2004.11(4)38-43),
⑦玉米粉4.0%,葡萄糖1.0%,黄豆粉2.0%,酵母粉0.3%,KH2PO40.2%,MgSO40.1%,CaSO40.1%(欧超等:羊肚菌液体深层发酵条件[J].食品与生物技术学报.2007.2(26):80-86),
⑧麦麸5%煮汁,酵母膏0.2%,蛋白胨0.1%,MgSO40.1%,KH2PO40.1%,葡萄糖2%(李峻志等:羊肚菌子囊果栽培工艺研究[J].食用菌.2001(4):23-26),
⑨麦麸4%煮汁,黄豆粉1%煮汁,MgSO40.1%,KH2PO40.1%,葡萄糖2%(李峻志等:羊肚菌子囊果栽培工艺研究[J].食用菌.2001(4):23-26)。
以上述不同组成形式的液体发酵培养基,选用YDJ5尖顶羊肚菌,按上述制备方法得到相应的羊肚菌菌丝体,以及同样的动物实验方法,进行了不同培养基对羊肚菌的胃粘膜保护作用影响的试验。试验结果如表3所示。
试验结果表明,由不同培养基制备得到的羊肚菌液体发酵物,对胃黏膜均具有较好的保护作用。
表3不同培养基的羊肚菌对小鼠乙醇致胃粘膜损伤的保护作用
注:n=10;与模型组相比**P<0.01;*P<0.05
除上述羊肚菌可对小鼠乙醇致胃黏膜损伤具有保护作用的试验外,以同样的羊肚菌液体发酵产物对其它因素所致的胃溃疡所具有的保护作用,还进行了下述各项试验。
一、羊肚菌对大鼠幽门结扎胃黏膜损伤的作用
20只大鼠雌雄各半,按体重随机分为2组,即模型组、尖顶羊肚菌菌丝体水提液,大鼠自由饮食,灌胃给药每天一次,每组给药量1.5g/kg,模型组给等体积的水,共连续15天。给药第13天开始禁食不禁水,禁食48h后即第15天灌胃1h后,用乙醚麻醉,局部用碘伏消毒,打开腹腔,结扎幽门。术后18h解剖取胃,向胃腔内注射1%福尔马林溶液8ml,将胃浸入1%福尔马林溶液中,10min后沿胃大弯剪开胃,观察前胃部溃疡发生的情况,溃疡程度的评价可以计数前胃部溃疡的面积,以其总和分为5个溃疡等级:
溃疡面积(mm2):1-12 13-25 26-37 38-50 ≥50或穿孔
溃疡指数: 1 2 3 4 5
试验结果如表4所示。
组别 | 剂量(g/kg) | 溃疡指数 | 抑制率 |
模型组 | - | 4.25±1.03 | 0 |
羊肚菌菌丝体 | 1.5 | 2.87±0.64** | 32.35 |
注:n=10;与模型组相比**P<0.01
二、羊肚菌对大鼠乙酸灼烧胃黏膜损伤的作用
20只大鼠,雌雄各半,禁食24h后,乙醚麻醉后,打开腹腔,将胃轻轻拉出,将一内径为5mm、长30mm的玻璃管垂直放置于胃体部浆膜面上,向玻璃管中注入冰醋酸0.2ml,1.5min后用棉球蘸出冰醋酸,并用生理盐水冲洗,以大网膜包裹烧灼部位,缓缓将胃送入腹中,分层缝合,术后细心喂养。术后第2日将动物随机分成2组,每组10只,分别为模型组,尖顶羊肚菌菌丝体水提液组。各组给药剂量同(1),每天给药1次,连续10d。末次给药后1h放血处死动物,剖腹取胃,并将胃固定于1%甲醛中,测定溃疡面积,观察溃疡愈合程度,计算溃疡抑制率。试验结果如表5所示。
组别 | 剂量(g/kg) | 溃疡指数 | 抑制率% |
模型组 | - | 23.93±4.46 | 0 |
羊肚菌菌丝体 | 1.5 | 12.68±3.88** | 47.02 |
注:n=10;与模型组相比**P<0.01
三、羊肚菌对小鼠水浸应激胃黏膜损伤的作用
昆明种小鼠20只,雌雄各半,随机分为2组,即模型组,尖顶羊肚菌菌丝体水提液组,每天给药1次,每组给药量2g/kg,模型组给等体积的水,共连续15天。实验前禁食24h,自由饮水,然后将动物装入特制的铁丝笼中,垂直浸入23±0.5℃水中,浸入深度为小鼠剑突处,24h取出颈椎脱位处死,打开腹腔,结扎幽门和贲门,并经胃壁向胃腔注射1%的福尔马林溶液2ml,将胃取出浸入福尔马林溶液中,30min后沿胃大弯剪开计数前胃部出现的溃疡点数目,以其总和作为溃疡指数。试验结果如表6所示。
组别 | 剂量(g/kg) | 溃疡指数 | 抑制率 |
模型组 | - | 24.12±7.03 | 0 |
羊肚菌菌丝体 | 2 | 15.25±5.70* | 36.79 |
注:n=10;与模型组相比*P<0.05
四、羊肚菌对小鼠利血平胃黏膜损伤的作用
昆明种小鼠20只,雌雄各半,随机分为2组,即模型组,尖顶羊肚菌菌丝体水提液组,每天给药1次,每组给药量2g/kg,模型组给等体积的水,共连续15天。实验前禁食24h后经皮下注射10mg/kg利血平。6h颈椎脱位处死动物,解剖取胃,标本固定及腺胃部溃疡计数方法等同水浸应激性溃疡。试验结果如表7所示。
组别 | 剂量(g/kg) | 溃疡指数 | 抑制率 |
模型组 | - | 24.875±7.38 | 0 |
羊肚菌菌丝体 | 2 | 15.125±5.49* | 39.20 |
注:n=10;与模型组相比*P<0.05
上述的试验表明,羊肚菌对多种因素引起胃溃疡,均能具有显著的预防和治疗效果。
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明的范围内。
具体实施方式
实施例1羊肚菌菌丝体的制备
取按上述液体发酵方式发酵培养后混合均匀的羊肚菌发酵液,5000r/min离心10分钟,沉淀物用水洗涤三次,收集菌丝体,于500℃烘干至恒重,即得干燥的羊肚菌菌丝体。
实施例2羊肚菌菌丝体胶囊
原料:实施例1的羊肚菌菌丝体100g、淀粉60g。
制备:将羊肚菌菌丝体粉碎后与淀粉混合均匀后,用胶囊机装胶囊,共制成1000粒,得到每粒胶囊含羊肚菌菌丝体100mg的制剂。
实施例3羊肚菌菌丝片
原料:实施例1的羊肚菌菌丝体100g,淀粉30g,乳糖30g,硬酯酸镁10g。
制备:将羊肚菌菌丝体、淀粉、乳糖混匀,常规方法制粒后,加入硬酯酸镁整粒,压片,共制成1000片,得到每片含羊肚菌菌丝体100mg的制剂。
实施例4羊肚菌菌丝口服液
将实施例1的羊肚菌菌丝体加入20倍水,超声提取4次,每次1h。收集浓缩提取液,稀释至浓度为0.1g/ml,每支为10ml,相当于每支约含羊肚菌菌丝体1g。
实施例5羊肚菌子实体胶囊
原料:羊肚菌子实体100g、淀粉60g。
制备:将羊肚菌子实体粉碎后与淀粉混合均匀后,用胶囊机装胶囊,共制成1000粒,得到每粒胶囊含羊肚菌菌丝体100mg的制剂。
实施例6羊肚菌子实体片
原料:羊肚菌子实体100g,淀粉30g,乳糖30g,硬酯酸镁10g。
制备:将羊肚菌子实体、淀粉、乳糖混匀,常规方法制粒后,加入硬酯酸镁整粒,压片,共制成1000片,得到每片含羊肚菌子实体100mg的制剂。
实施例7羊肚菌子实体口服液
将羊肚菌子实体100加入20倍水,超声提取4次,每次1h。收集浓缩提取液,稀释至浓度为0.1g/ml,每支为10ml,相当于每支约含羊肚菌子实体1g。
实施例8羊肚菌发酵液和菌丝体混合物口服液
羊肚菌发酵液和菌丝体混合物1000ml,匀浆后浓缩至100ml,3000rpm离心取上清液,灭菌后分装,每支为10ml,相当于每只含羊肚菌发酵液和菌丝体混合物100ml。
实施例9羊肚菌发酵液和菌丝体混合物片
原料:羊肚菌发酵液和菌丝体混合物1000ml,糊精50g,乳糖30g,硬酯酸镁10g。
制备:羊肚菌发酵液和菌丝体混合物匀浆后浓缩至100ml,添加糊精,50℃烘干,粉碎后加入乳糖混匀,常规方法制粒后,加入硬酯酸镁整粒,压片,共制成500片。
实施例10羊肚菌发酵液和菌丝体混合物胶囊
原料:羊肚菌发酵液和菌丝体混合物1000ml,糊精50g。
制备:羊肚菌发酵液和菌丝体混合物匀浆后浓缩至100ml,添加糊精,50℃烘干,粉碎后用胶囊机装胶囊,共制成500粒。
实施例11羊肚菌糖果
称取羊肚菌菌丝体或者子实体干燥粉末100g、花生1000g、蔗糖1000g、豆油500ml,通过混合、化糖、熬糖、板料、压片、冷却等工艺,即得到羊肚菌花生糖。
此外,将羊肚菌菌丝体或者子实体与制作其它糖果、糕点的常规材料(面粉、蔗糖、牛奶等)混匀,分别按相应糖果(如奶糖、巧克力等)、糕点等的具体制作方法加工处理,可得到相应的功能食品。
实施例12羊肚菌饮料
将本发明羊肚菌发酵液和菌丝体混合物与常饮用水及饮料生产允许使用的辅料(蜂蜜、单糖浆、山梨酸、苯甲酸等)混合均匀后,分装灭菌,即可得羊肚菌饮料。
Claims (7)
1.羊肚菌在作为预防、治疗胃溃疡组合物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征是所说的组合物为以羊肚菌为原料,与药物中允许的辅料或辅助性成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功能的口服药物。
3.如权利要求1所述的应用,其特征是所说的组合物为以羊肚菌为原料,与食用原料和/或食品添加成分共同组成具有预防、治疗胃溃疡功效的功能食品。
4.如权利要求1至3之一所述的应用,其特征是所说的羊肚菌为羊肚菌的子实体。
5.如权利要求1至3之一所述的应用,其特征是所说的羊肚菌为以液体发酵方式培养得到的发酵产物。
6.如权利要求5所述的应用,其特征是所说的以液体发酵方式培养得到的发酵产物为羊肚菌菌丝体。
7.如权利要求5所述的应用,其特征是所说的以液体发酵方式培养得到的发酵产物为羊肚菌菌丝体与发酵液的混合物。
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