CN111793584A - 鼠李糖乳杆菌菌株d2及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鼠李糖乳杆菌菌株D2及其制备方法和用途，该鼠李糖乳杆菌菌株D2的保藏登记号为：CGMCC No:20158。该鼠李糖乳杆菌菌株D2在MRS液体培养基中，能耐受14％的酒精，且能产出20.03g/L的总酸(以乳酸计)、17.23g/L的乳酸、1.07g/L的苹果酸，具有良好的耐酒精性能和产酸能力。该菌株D2是从果醋生产过程中的醋醅经分离、筛选得到，适应果醋的生产发酵环境；将其用于果醋酿造，能使果醋原液的总酸含量提高到41.38g/L、乳酸含量达到5.02g/L、苹果酸达到0.45g/L；有效减少果醋酸味的刺激性，改善果醋口感。

Description

鼠李糖乳杆菌菌株D2及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及鼠李糖乳杆菌的菌株及其制备方法和用途。
背景技术
果醋是以水果(常用的为苹果、柿子、桃子)为主要原料，经微生物发酵 而成的一种酸性调味品。果醋富含多种矿物质、有机酸和人体必须氨基酸，兼 具水果和食醋的营养保健功能。现有的果醋制备(发酵)主要分为果酒发酵和果 醋发酵两个阶段.其中,果酒发酵阶段是利用酿酒酵母将水果汁中的糖分发酵 成酒精；果醋发酵阶段是利用醋酸菌将酒精转化成醋酸。这种方式生产的果醋 存在乳酸及苹果酸含量低，导致其酸味单一、口感刺激。研究表明：果醋中不 挥发酸的主要成分是乳酸，乳酸及苹果酸等不挥发酸一起能赋予果醋圆润和棉 柔的风味。
CN201910136386.1号专利申请从山西老陈醋的醋醅中分离的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC 15731菌株，该菌株能耐受10％的酒精， 在MRS乳酸菌液体培养基发酵液中能使乳酸含量最高达到6.73g/L；用于山西 老陈醋发酵可提高乳酸等有机酸和挥发性香气的含量，显著改善陈醋的口感和 风味。但这类从普通的粮食食醋生产过程中分离得到的菌株，适应粮食制醋的 发酵环境,而不适应水果发酵制果醋的发酵环境；因此,这类菌株不能够有效提 高果醋的乳酸及苹果酸含量。如何有效提高果醋中乳酸及苹果酸等不挥发性酸 的含量，从而减小果醋酸味的刺激性，改善果醋口感是果醋生产中的亟待解决 的难题。
发明内容
本发明的第一发明目的是提供一种用于果醋酿造的鼠李糖乳杆菌菌株D2； 该鼠李糖乳杆菌菌株D2适应果醋的生产发酵环境，其耐受酒精能力强、乳酸 及苹果酸生产能力强，能有效提高果醋中乳酸及苹果酸的含量，从而减小果醋 酸味的刺激性，改善果醋口感。
本发明实现其第一发明目的所采用的技术方案是，一种用于果醋酿造的鼠 李糖乳杆菌菌株D2，其保藏登记号为：CGMCC No:20158。
本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2，是申请人2017年11月在中国四川省达州 市，将桃果醋生产过程中的醋醅用无菌蛋白胨水溶液梯度稀释；随后取稀释液 200uL，滴在含有1％(w/v)碳酸钙的MRS平板培养基上，再用无菌涂布器涂布 均匀；然后，37℃培养至出现大量单菌落；选取具有明显溶钙圈的菌落，反复 划线，获得纯培养物；再进行耐受酒精能力和产乳酸能力筛选，最后得到一株 耐受酒精能力和产乳酸能力强的鼠李糖乳杆菌菌株，命名为鼠李糖乳杆菌菌株 D2。
本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2，其拉丁文学名为Lactobacillus rhamnosus D2，生物学分类属于细菌界、厚壁菌门、芽孢杆菌纲、乳杆菌目、 乳杆菌科、乳杆菌属、鼠李糖乳杆菌亚种。
其形态特征为：在MRS固体培养基培养48小时，显微镜下观察,呈短杆状、 单个或线性排列，大小为1.0-1.5uM。
其培养学特性为：菌落突起、表面光滑、边缘整齐、乳白色、不透明，菌 落大小为1-2mm。
该菌株D2已于2020年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心，保藏地址：北京是朝阳区北辰西路1号院3号，保藏登记号 为CGMCC No:20158，分类命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。
本发明的菌株D2的鉴定：
将1mL的菌株D2培养液，离心收集菌体送至生工生物工程(上海)股份 有限公司，采用细菌通用引物27F、1492R引物进行16S rDNA测序，获得16S rDNA 序列，其16S rDNA序列与鼠李糖乳杆菌标准菌株(JCM1136)相似性最高，相 似性为98.21％。
挑取1个单菌落到2mL无菌生理盐水制成菌悬液，采用海博生物HBI乳酸 菌生化鉴定条进行生化鉴定，发酵七叶苷、纤维二糖、麦芽糖、甘露醇、水杨 苷、山梨醇、蔗糖、菊糖和乳糖均为阳性，发酵棉籽糖为阴性，与鼠李糖乳杆 菌标准菌株(JCM1136)糖发酵能力一致。
通过以上DNA测序鉴定和生化鉴定，将本发明的D2菌株鉴定为鼠李糖乳 杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。
本发明的第二目的是提供上述菌株的制备方法。该制备方法的工艺过程简 单、培养周期短、投入低和易于保存，易于工业化生产。
本发明实现第二发明目的所采用的技术方案是，一种制备上述的鼠李糖乳 杆菌菌株D2的方法，其步骤是：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养 基，在35-39℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至25-50mL MRS液体培养基中，在35-39℃ 下培养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以1％-2％的体积比接种量接种到MRS液体 培养基中，35-39℃静置培养24-48小时，得到发酵液；将发酵液以3000-6000 转/分离心3-8分钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次3000-6000转/分 离心3-8分钟、收集菌体，最后用无菌水淋洗2次，即得。
本发明的鼠李糖乳杆菌的产乳酸能力强：经测定以上方法得到的发酵液， 其总酸(以乳酸计)含量达到20.03g/L，用高效液相色谱仪测定其乳酸含量达 到17.23g/L，苹果酸含量达到1.07g/L。
本发明鼠李糖乳杆菌的菌株D2耐酒精能力高：将鼠李糖乳杆菌D2以2％ (v/v)接种量接种到含8％、10％、12％、14％(v/v)乙醇的MRS液体培养基中， 37℃静置培养24小时，在上述所有酒精度均有生长。表明其在MRS液体培养 基中能耐受14％的酒精。
本发明的第三目的是提供上述菌株的用途。该用途能有效提高果醋中乳酸 的含量，从而减小果醋酸味的刺激性，改善果醋口感。
本发明实现第三发明目的所采用的技术方案是，一种上述的鼠李糖乳杆菌 菌株D2的用途，是在制备果醋的应用。
进一步，上述的鼠李糖乳杆菌菌株D2在制备果醋的应用的具体做法是： 将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：10的体积比配制成菌悬液，即 得菌株D2发酵剂；在制备果醋的果醋发酵阶段开始、在向果酒中接种醋酸菌 发酵剂时，还同时以8-12％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进 行果醋发酵。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
一、本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2具有良好的耐酒精性能和产酸能力： 在MRS液体培养基中：能耐受14％(v/v)的酒精，且能产出20.03g/L的总酸(以 乳酸计)、17.23g/L的乳酸、1.07g/L的苹果酸。
二、本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2是从果醋生产过程中的醋醅经分离、 筛选得到，适应果醋的生产发酵环境；将其用于果醋酿造，能显著提高不挥发 性有机酸乳酸和苹果酸的含量，改善果醋酸味单一、口感刺激的问题。实验表 明，将其用于果醋酿造，在制得的果醋原液中，挥发性酸和非挥发性酸的总酸 含量达到41.38g/L，乳酸含量达到5.02g/L、苹果酸含量达到0.45g/L，比仅 用醋酸菌发酵的果醋原液，其总酸含量提高13.15％、乳酸含量增加4.49g/L， 苹果酸含量增加0.20g/L。
三、鼠李糖乳杆菌是公知的无毒、无副作用的益生菌，已被列为《可用于 食品的菌种名单》。而通过DNA测序鉴定和生化鉴定，本发明的D2菌株为鼠李 糖乳杆菌，因此，该D2菌株用于果醋酿造，十分安全；能够迅速推广、实施。
下面结合附图和具体的实施方式对本发明作进一步的详细说明。
附图说明
图1是实施例一的发酵液的液相色谱检测图。
具体实施方式
实施例一
本发明的一种具体方式是：一种用于果醋酿造的鼠李糖乳杆菌菌株D2，其 保藏登记号为：CGMCC No:20158。
该鼠李糖乳杆菌菌株D2，是申请人2017年11月在中国四川省达州市，将 桃果醋生产过程中的醋醅用无菌蛋白胨水溶液梯度稀释；随后取稀释液200uL， -滴在含有1％(w/v)碳酸钙的MRS平板培养基上，再用无菌涂布器涂布均匀； 然后，37℃培养至出现大量单菌落；选取具有明显溶钙圈的菌落，反复划线， 获得纯培养物；再进行耐受酒精能力和产乳酸能力筛选，最后得到一株耐受酒 精能力和产乳酸能力强的鼠李糖乳杆菌菌株，命名为鼠李糖乳杆菌菌株D2。
制备本例的鼠李糖乳杆菌菌株D2的方法，其步骤是：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养 基，在37℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至30mL MRS液体培养基中，在37℃培 养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以1％的体积比接种量接种到MRS液体培 养基中，37℃静置培养48小时，得到发酵液；将发酵液以5000转/分离心5 分钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次5000转/分离心5分钟、收集菌 体，最后用无菌水淋洗2次，即得。
产酸能力测定：
取本例制备过程中的发酵液3mL，加入27mL超纯水，混匀；用0.05M的氢 氧化钠溶液滴定至pH为8.2，记录消耗氢氧化钠溶液体积。根据国家标准《食 品中总酸的测定》(GB/T12456-2008)计算发酵液中总酸含量；得出发酵液总 酸含量达到20.03g/L(以乳酸计,即假定总酸全部为乳酸,消耗测定量的氢氧化 钠所对应的乳酸量)。
取本例制备过程中的发酵液以10000转/分离心5分钟收集1mL上清夜， 用0.22μm虑膜过滤、上样，用安捷伦科技公司1260高效液相色谱仪，进样 量10ul，其色谱柱为：美国伯乐HPX-87H；采用流动相：0.005mol/L硫酸；流 速：0.6ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃的条件，进行发酵液中有机酸 含量的测定，得到发酵液的液相色谱检测图，见图1。测定结果表明，发酵液 中乳酸含量达到17.23g/L，苹果酸含量达到1.07g/L。
本例制备的鼠李糖乳杆菌菌株D2用途，是在制备果醋的应用，其具体做 法是：
将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：10的体积比配制成菌悬液， 即菌株D2发酵剂；在制备果醋的果醋发酵阶段开始、在向果酒中接种醋酸菌发 酵剂时，还同时以10％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进行果 醋发酵。
实施例二
本例的鼠李糖乳杆菌菌株D2的来源与实施例一相同。不同的是，鼠李糖 乳杆菌菌株D2的制备方法为：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养 基，在37℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至30mL MRS液体培养基中，在37℃培 养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以2％的体积比接种量接种到MRS液体培 养基中，37℃静置培养24小时；得到发酵液；将发酵液5000转/分离心5分 钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次5000转/分离心5分钟、收集菌体， 最后用无菌水淋洗2次，即得。
耐酒精实验：
将本例的二级扩大培养中的MRS液体培养基，分别替换为含8％、10％、12％、 14％(v/v)酒精的MRS液体培养基。在24小时的二级扩大培养后，所有酒精 度的MRS液体培养基中，均有菌体生长。表明本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2 在MRS液体培养基能耐受14％的酒精。
本例制备的鼠李糖乳杆菌菌株D2用途，是在制备果醋的应用，其具体做 法是：
将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：10的体积比配制成菌悬液， 即得菌株D2发酵剂；在制备果醋的果醋发酵阶段开始、在向果酒中接种醋酸 菌发酵剂时，还同时以11％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进 行果醋发酵。
经测定，将采用本例以上方法，鼠李糖乳杆菌菌株D2，应用于制备果醋， 在发酵5天时，果醋发酵液(果醋原液)的总酸含量达到41.38g/L、乳酸含量 为5.02g/L、苹果酸为0.45g/L；而未接种鼠李糖乳杆菌菌株D2的对照实验， 果醋发酵液的总酸含量为36.57g/L，乳酸含量为0.53g/L、苹果酸为0.25g/L； 鼠李糖乳杆菌菌株D2的应用，使果醋原液的总酸含量提高13.15％。乳酸含量 增加4.49g/L，苹果酸含量提高0.20g/L。
实施例三
本例的鼠李糖乳杆菌菌株D2的来源与实施例一相同。不同的是，鼠李糖 乳杆菌菌株D2的制备方法为：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养 基，在35℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至25mL MRS液体培养基中，在35℃下 培养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以2％的体积比接种量接种到MRS液体培 养基中，35℃静置培养24小时，得到发酵液；将发酵液以3000转/分离心8 分钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次3000转/分离心8分钟、收集菌 体，最后用无菌水淋洗2次，即得。
本例制备的鼠李糖乳杆菌菌株D2用途，是在制备果醋的应用，其具体做 法是：
将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：8的体积比配制成菌悬液， 即得菌株D2发酵剂；在制备果醋的果醋发酵阶段开始、在向果酒中接种醋酸 菌发酵剂时，还同时以8％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进 行果醋发酵。
实施例四
本例的鼠李糖乳杆菌菌株D2的来源与实施例一相同。不同的是，鼠李糖 乳杆菌菌株D2的制备方法为：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养 基，在39℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至50mL MRS液体培养基中，在39℃下 培养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以1.5％的体积比接种量接种到MRS液体 培养基中，39℃静置培养36小时，得到发酵液；将发酵液以6000转/分离心3 分钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次6000转/分离心3分钟、收集菌 体，最后用无菌水淋洗2次，即得。
本例制备的鼠李糖乳杆菌菌株D2用途，是在制备果醋的应用，其具体做 法是：
将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：12的体积比配制成菌悬液， 即得菌株D2发酵剂；在制备果醋的果醋发酵阶段开始、在向果酒中接种醋酸 菌发酵剂时，还同时以12％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进 行果醋发酵。
本发明中使用的MRS液体培养基为已有公知的培养基。其制备方法可以是： 蛋白胨10g，牛肉粉5g，酵母粉4g，葡萄糖20g，谷氨酸钠10g，乙酸钠5g， 磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温80 1mL， 蒸馏水1000mL，pH6.2；混匀、121℃灭菌15分钟。
本发明中MRS固体培养基也为已有公知的培养基，可以由MRS液体培养基 的所有成分，再添加1.5-2％(v/v)琼脂；混匀、121℃灭菌15分钟后，倾倒 于平板制成。
本发明的鼠李糖乳杆菌菌株D2，其16S rDNA序列如下：
AAGGAGGGCGGGTGCTATACATGCAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCT TGATTTAATTTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGA TAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATG GCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAA GGCAATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTC CTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAG TGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAAMTCCTGTTGTTGGAAGAAGAATGGTCGGCAGARTAACTGTTG TCGGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGGCCACGGGCTAWCTACGTGCCTAGCAGCCGCGGTAATAC GTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGAT GTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTG TCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTASATMCCCTGGTAGT CCATGCCGTAAACGATGAAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACSC ATTCAAGCATTCCGCCTGGGKAGTACRACCGCAAGGTTGAAWCTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGC ACAAGCRGTGGAGCATGTKGTTTTAATYCGAAGCAACGCGAAGAACCTTWYCAGGTCTTGAYATCTT TTTGRTCACCTTGAKACGMTCWGGTTCTCCCCTTCKGKGRCAAAATGACAGGTGGTKCATGGTTGTT CKTCTAKCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGC CAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCA AATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGA CCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACAC GAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACAC ACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAG CCGTCTAAGGTGACAAGTTGG
序列表
<110> 四川省农业科学院农产品加工研究所
<120> 鼠李糖乳杆菌菌株D2及其制备方法和用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1491
<212> DNA
<213> 鼠李糖乳杆菌菌株D2(Lactobacillus rhamnosus)
<400> 1
aaggagggcg ggtgctatac atgcagtcga acgagttctg attattgaaa ggtgcttgca 60
tcttgattta attttgaacg agtggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgccctt 120
aagtggggga taacatttgg aaacagatgc taataccgca taaatccaag aaccgcatgg 180
ttcttggctg aaagatggcg taagctatcg cttttggatg gacccgcggc gtattagcta 240
gttggtgagg taacggctca ccaaggcaat gatacgtagc cgaactgaga ggttgatcgg 300
ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc 360
acaatggacg caagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaaggctt tcgggtcgta 420
aaamtcctgt tgttggaaga agaatggtcg gcagartaac tgttgtcggg cgtgacggta 480
tccaaccaga aaggccacgg gctawctacg tgcctagcag ccgcggtaat acgtaggtgg 540
caagcgttat ccggatttat tgggcgtaaa gcgagcgcag gcggtttttt aagtctgatg 600
tgaaagccct cggcttaacc gaggaagtgc atcggaaact gggaaacttg agtgcagaag 660
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gcgaaggcgg ctgtctggtc tgtaactgac gctgaggctc gaaagcatgg gtagcgaaca 780
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ccgccccttc agtgccgcag ctaacscatt caagcattcc gcctgggkag tacraccgca 900
aggttgaawc tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc rgtggagcat gtkgttttaa 960
tycgaagcaa cgcgaagaac cttwycaggt cttgayatct ttttgrtcac cttgakacgm 1020
tcwggttctc cccttckgkg rcaaaatgac aggtggtkca tggttgttck tctakctcgt 1080
gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttatgacta gttgccagca 1140
tttagttggg cactctagta agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt 1200
caaatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc tacaatggat ggtacaacga 1260
gttgcgagac cgcgaggtca agctaatctc ttaaagccat tctcagttcg gactgtaggc 1320
tgcaactcgc ctacacgaag tcggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcac gccgcggtga 1380
atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gagagtttgt aacacccgaa 1440
gccggtggcg taaccctttt agggagcgag ccgtctaagg tgacaagttg g 1491

Claims (4)

1.一种鼠李糖乳杆菌菌株D2，其保藏登记号为：CGMCC No:20158。
2.一种制备权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌菌株D2的方法，其步骤是：
A、菌种活化：将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌种，划线接种到MRS固体培养基，在35-39℃下培养至出现单菌落；
B、一级扩大培养：挑取单菌落接种至25-50mL MRS液体培养基中，在35-39℃下培养24小时，得到液体培养物；
C、二级扩大培养：将液体培养物以1％-2％的体积比接种量接种到MRS液体培养基中，35-39℃静置培养24-48小时，得到发酵液；将发酵液以3000-6000转/分离心3-8分钟、收集菌体，将菌体用无菌水洗涤、再次3000-6000转/分离心3-8分钟、收集菌体，最后用无菌水淋洗2次，即得。
3.一种权利要求1或2所述的鼠李糖乳杆菌菌株D2的用途，是在制备果醋的应用。
4.根据权利要求3所述的鼠李糖乳杆菌菌株D2的用途，其特征在于：所述的在制备果醋的应用的具体做法是：
将鼠李糖乳杆菌菌株D2的菌体与无菌水按1：8-12的体积比配制成菌悬液，得到菌株D2发酵剂；在果醋发酵阶段开始,向果酒中接种醋酸菌发酵剂的同时，还以8-12％的体积比的接种量向果酒中接种菌株D2发酵剂，进行果醋发酵。
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