CN111729085A - 一种耐热疫苗及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种耐热疫苗的制备方法，包括以下步骤：S1.制备蚕丝球蛋白粉；S2.配置防冻保护剂；S3.将步骤S2的混合溶液降温至6～8℃，再按照将S1的溶液和疫苗按照体积比为(1～2)∶1的比例混合搅拌20～30min；S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。本发明制得的疫苗无菌安全，且性状稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低温冷冻、贮存不便等问题。本发明的耐热活疫苗常温下可以保存6个月以上。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种耐热疫苗的制备方法。
技术背景
疫苗的稳定性直接关系到其有效保护力的大小。现阶段，确保疫苗稳定的主要方法是低温保存，即利用低温来降低疫苗的变性或失活速度，从而提高他们的保质期。通常有4℃及-20℃两种保存温度，相应的为其产品的运输及保存而建立的冷链系统也占到了他们使用总成本的约80％左右。然而，即便如此，仍然无法保证疫苗在实际使用过程中不会因为温度的波动而降低其稳定性，并最终失去其应有的保护力。特别是在冷链系统欠缺或不完善的边远不发达区域等地。因此，如何能够减少疫苗及抗生素对冷链系统的依赖，如何保护疫苗在高于冷藏温度的情况下保持自身稳定性成为各大药物生产企业(特别是疫苗生产厂家)的一大难题。
目前，社会上已有的疫苗耐热保护剂约有20种左右，但均由超过3种以上的有机或无机成分根据特殊配比搭配而成。由于多种成分的使用，使得其耐热保护效果，与其成分的配比有较高联系，因而生产工艺相对复杂。同时，由于其中有一种、或多种成分是由化学合成或多重精炼而来，使得其使用成本相对较高，且部分化学成分对生物体存在一定毒性，其使用量和配比需要严格控制，并存在一定的潜在生物安全问题。并且，现阶段所存在的耐热保护剂绝大多数只能将疫苗的安全保存温度提高到4℃，而因此产生的成本增加却使其价格上升约200％。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的疫苗耐热保护剂配方复杂，制备得到的疫苗耐热性不好等技术问题，提供了一种耐热疫苗及其制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种耐热疫苗的制备方法，包括以下步骤：
S1.制备蚕丝球蛋白粉；
S2.配置防冻保护剂，其中防冻保护剂中溶质包括：所述步骤S1的蚕丝球蛋白45～55g/L、乳糖100～120g/L、葡聚糖15～40g/L、聚乙烯吡咯烷酮5～10g/L、谷氨酸25～30g/L；
S3.将步骤S2的防冻保护剂降温至6～8℃，再将步骤S2的溶液和疫苗按照体积比为(1～2)：1的比例混合搅拌20～30min；
S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。
通过对特殊筛选的蚕丝蛋白的重构，使得蚕丝蛋白分子能够形成良好的空间包裹结构，将疫苗病毒颗粒、抗原分子、药物分子等有效成份包裹起来，隔阻其与外界的酶等化学物的接触，降低被包裹颗粒变性或分解的速度，最终起到保护疫苗不受温度的升高而快速失活的作用，不但有耐热效果，同时还兼具一定的缓释作用。相比现有的疫苗耐热保护剂，本发明的制备工艺更为简单、成本更低。最重要的是，本发明中的保护剂原料只有一种成分，整个制备过程不使用任何有毒物质，安全简便，且包裹的蚕丝蛋白无毒、不引起免疫反应并能够100％被蛋白酶水解。从而也保障了本耐热疫苗在使用过程中对生物体的绝对安全性。
优选地，所述疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、载体疫苗、可食用的疫苗。
优选地，所述步骤S1中蚕丝球蛋白粉的制备方法具体包括以下步骤：
S11.将蚕茧和35～45倍体积的去离子水混合，在110～120℃条件下加热搅拌25～35min；
S12.将步骤S11的混合物冷却至40～48℃然后过滤，再将温度降至25～30℃；
S13.将步骤S12的混合物倒入冰浴中，然后置于-20～-15℃℃条件下冷冻20～28h；然后再在20～25℃条件解冻，将析出的絮状球蛋白微波干燥粉碎，即得。
优选地，所述步骤S11中，加热温度为115℃，加热时间为30min。
所述耐热疫苗的制备方法制备得到的耐热疫苗。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
本发明的耐热保护剂制备容易，适于大规模生产，对疫苗具有良好的保护功效。制得的疫苗无菌安全，且性状稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低温冷冻、贮存不便等问题。本发明的耐热疫苗常温下可以保存6个月以上。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例和对比例将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
除特殊说明，本实施例中所用的设备均为常规实验设备，所用的材料、试剂无特殊说明均为市售得到，无特殊说明的实验方法也为常规实验方法。
实施例1
一种耐热疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.制备蚕丝球蛋白粉；
S2.配置防冻保护剂，其中防冻保护剂中溶质包括：所述步骤S1的蚕丝球蛋白55g/L、乳糖100g/L、葡聚糖15g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、谷氨酸25g/L；
S3.将步骤S2的防冻保护剂降温至8℃，再将步骤S1的溶液和疫苗按照体积比为1∶1的比例混合搅拌30min；
S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。
上述述疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、载体疫苗、可食用的疫苗。
所述步骤S1中蚕丝球蛋白粉的制备方法具体包括以下步骤：
S11.将蚕茧和35～45倍体积的去离子水混合，在120℃条件下加热搅拌35min；
S12.将步骤S11的混合物冷却至40℃，然后过滤，再将温度降至25℃；
S13.将步骤S12的混合物倒入冰浴中，然后置于-20℃条件下冷冻28h；然后再在20℃条件解冻，将析出的絮状球蛋白微波干燥粉碎，即得。
所述耐热疫苗的制备方法制备得到的耐热疫苗。
实施例2
一种耐热疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.制备蚕丝球蛋白粉；
S2.配置防冻保护剂，其中防冻保护剂中溶质包括：所述步骤S1的蚕丝球蛋白45g/L、乳糖120g/L、葡聚糖40g/L、聚乙烯吡咯烷酮5g/L、谷氨酸30g/L；
S3.将步骤S2的防冻保护剂降温至6℃，再将步骤S1的溶液和疫苗按照体积比为2∶1的比例混合搅拌20min；
S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。
上述述疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、载体疫苗、可食用的疫苗。
所述步骤S1中蚕丝球蛋白粉的制备方法具体包括以下步骤：
S11.将蚕茧和35倍体积的去离子水混合，在110℃条件下加热搅拌25min；
S12.将步骤S11的混合物冷却至48℃，然后过滤，再将温度降至30℃；
S13.将步骤S12的混合物倒入冰浴中，然后置于-15℃条件下冷冻20h；然后再在25℃条件解冻，将析出的絮状球蛋白微波干燥粉碎，即得。
所述耐热疫苗的制备方法制备得到的耐热疫苗。
实施例3
一种耐热疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.制备蚕丝球蛋白粉；
S2.配置防冻保护剂，其中防冻保护剂中溶质包括：所述步骤S1的蚕丝球蛋白50g/L、乳糖110g/L、葡聚糖27g/L、聚乙烯吡咯烷酮7g/L、谷氨酸27g/L；
S3.将步骤S2的防冻保护剂降温至7℃，再将步骤S1的溶液和疫苗按照体积比为1.5∶1的比例混合搅拌25min；
S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。
上述述疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、载体疫苗、可食用的疫苗。
所述步骤S1中蚕丝球蛋白粉的制备方法具体包括以下步骤：
S11.将蚕茧和40倍体积的去离子水混合，在115℃条件下加热搅拌27min；
S12.将步骤S11的混合物冷却至45℃，然后过滤，再将温度降至38℃；
S13.将步骤S12的混合物倒入冰浴中，然后置于-18℃条件下冷冻24h；然后再在24℃条件解冻，将析出的絮状球蛋白微波干燥粉碎，即得。
所述耐热疫苗的制备方法制备得到的耐热疫苗。
实验例
选用检验合格的PRRSV-CH1R病毒抗原按照实施例3的方法获得耐热育苗。同时设蔗糖脱脂乳保护剂疫苗作为对照组。测定在25～20℃条件下，不同时间的TCID50/mL，结果如表1所示。
表1疫苗在15～20℃保存不同时间的TCID50/mL
从上表可以看出，本发明获得疫苗具有很好的耐热性，在15～20℃的条件下可以保持6个月以上。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (5)
1.一种耐热疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.制备蚕丝球蛋白粉；
S2.配置防冻保护剂，其中防冻保护剂中溶质包括：所述步骤S1的蚕丝球蛋白45～55g/L、乳糖100～120g/L、葡聚糖15～40g/L、聚乙烯吡咯烷酮5～10g/L、谷氨酸25～30g/L；
S3.将步骤S2的防冻保护剂降温至6～8℃，再将步骤S2的溶液和疫苗按照体积比为(1～2)∶1的比例混合搅拌20～30min；
S4.将步骤S3的混合液低温冻干，即得。
2.根据权利要求1所述耐热疫苗的制备方法，其特征在于，所述疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、载体疫苗、可食用的疫苗。
3.根据权利要求1所述耐热疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中蚕丝球蛋白粉的制备方法具体包括以下步骤：
S11.将蚕茧和35～45倍体积的去离子水混合，在110～120℃条件下加热搅拌25～35min；
S12.将步骤S11的混合物冷却至40～48℃，然后过滤，再将温度降至25～30℃；
S13.将步骤S12的混合物倒入冰浴中，然后置于-20～15℃条件下冷冻20～28h；然后再在20～25℃条件解冻，将析出的絮状球蛋白微波干燥粉碎，即得。
4.根据权利要求3所述耐热疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S11中，加热温度为115℃，加热时间为30min。
5.权利要求1至4任一项所述耐热疫苗的制备方法制备得到的耐热疫苗。
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