CN107937465A - 一种蛋白多肽的制备方法及获得的蛋白多肽 - Google Patents

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CN107937465A CN201711460049.5A CN201711460049A CN107937465A CN 107937465 A CN107937465 A CN 107937465A CN 201711460049 A CN201711460049 A CN 201711460049A CN 107937465 A CN107937465 A CN 107937465A
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江小元
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种蛋白多肽的制备方法及获得的蛋白多肽。本发明提供的蛋白多肽的制备方法是采用电流进行细胞和蛋白质降解，接着加入弹性蛋白进行酶解，可以制得分子量低于1000Da的蛋白多肽。本发明提供的蛋白多肽的制备方法具有工艺简单，易于控制，制备周期短，制备得到的蛋白多肽收率高，纯度高的优点。而且本发明制备得到的分子量低于1000Da的蛋白多肽对男性性功能具有显著的改善作用，为广大男性同胞带来福音。

Description

一种蛋白多肽的制备方法及获得的蛋白多肽
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种蛋白多肽的制备方法及获得的蛋白多肽。
背景技术
牡蛎，又称蚝、蛎黄、海蛎子，是一种双壳类软体动物，属软体动物门，瓣鳃纲，牡蛎科。牡蛎是全球的第一大养殖贝类，主要分布在温带和热带的各大洋沿岸，同时也是我国四大养殖贝类之一。《本草拾遗》记载牡多具有“煮食，主虚损于姜醋中生食之，主丹毒，酒后烦热，止渴”的功效。但由于牡蛎的生产季节强，且有较强的鱼腥味，限制其应用领域。
蚂蟥也称水蛭，作为一味传统中药，历史悠久，中医认为水蛭有破血、逐淤、通经等功效。自从二十世纪五十年代从医用水蛭中分离出具有抗凝作用的物质一水蛭素后，国内外已对其进行了广泛而深入的药理学研究。传統中药的服用也是用水煮分解并提取(干品)水蛭中的多肽物质，只是用水煮方式得到的水蛭多肽物质非常有限。
鹿血为鹿科动物梅花鹿和马鹿的血液，系名贵中药。鹿血在民间也广为流传，视为中药之上品。明代李时珍则对鹿血的医疗作用做了较为详细的研究，在《本草纲目》中记载为大补虚损，益精血，解痘毒、药毒等。近代，通过动物实验和临床研究证明了鹿血确实具有养颜容、治疗贫血，调节免疫，延缓衰老，改善记忆，抗疲劳，改善性功能等多项治疗保健作用。
牡蛎、水蛭和鹿血都是十分珍贵的药用原料，目前制成的保健品存在大量的大分子蛋白，不利于人体的吸收和利用，大大的降低了药效。为了使药物更易于人体吸收，一般会采用用酸、碱或者酶来进行大分子蛋白质的水解，用酸碱水解比较彻底，速度快，但水解程度不能控制，而且会对某些氨基酸造成破坏。虽然酶解不会破幻氨基酸，但是目前的复合蛋白水解时间较长，水解后的寡肽含量较低，还不能满足现代社会的需求。
因此，研究和开发出一种工艺简单，水解后寡肽分子含量多的蛋白多肽的制备工艺仍是当前研究的热点。
发明内容
为了解决现有技术中在制备蛋白多肽的过程中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种蛋白多肽的制备方法及获得的蛋白多肽，制备得到的蛋白多肽的分子量小于1000Da，易于人体吸收。
本发明提供了一种蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将牡蛎、鹿血、水蛭和水研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合浆液中通入交流电流，处理4～8min，切断电源，接着通入恒压反向电流处理10～20min后，通入恒压正向电流处理8～16min，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌20～30min，然后加入弹性蛋白酶，在中性温室条件下酶解1～2h后，升温至75～95℃灭酶，离心，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用陶瓷膜过滤，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩、冷冻干燥，即得。
进一步地，所述步骤1中的原料重量份数为：牡蛎10～20份、鹿血15份、水蛭5～10份和水30～40份。
进一步地，所述步骤2中交流电流的频率为8200～9500Hz，电压为2000～3000V。
进一步地，所述步骤2中的恒压反向电流和恒压正向电流的电压为500～600V。
进一步地，所述步骤3中弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.1～0.9‰。
进一步地，所述步骤3中的离心条件为：在转速为9000～10000rpm的条件下离心8～12min。
进一步地，所述步骤4中的陶瓷膜的孔径为20～50μm。
进一步地，所述步骤5中的冷冻干燥的条件为：在温度为-60℃～-70℃，真空度为15～20pa条件下冷冻2～4h，接着在温度为40～50℃干燥10～12h。
进一步地，所述步骤5中制备得到的蛋白多肽的分子量小于1000Da。
此外，本发明还提供了所述的蛋白多肽的制备方法制备得到的蛋白多肽。
目前，对于蛋白多肽的水解一般采用由内切酶与外切酶复配精制而成的复合蛋白酶进行酶切反应，但是酶解后的目标肽得率较低，副产物较多，而且复合酶的最适条件难以控制。本发明提供的蛋白多肽的制备方法是采用电流进行细胞和蛋白质的降解，接着加入弹性蛋白进行酶解，可以制得分子量低于1000Da的蛋白多肽，而且还具有产率高，纯度高的优点，是一种较为理想的蛋白多肽的制备方法。
细胞的基本结构是细胞膜、细胞质和细胞核。细胞膜是包围在细胞质外周的一层界膜，它将细胞质与外环境分隔开，使细胞形成一个相对独立而稳定的内环境。根据细胞的特性，发明人经大量的摸索试验发现，采用交流电流可以高效的分解细胞膜和蛋白质，在经交流电流处理后再通入恒压反向电流处理，接着通入恒压正向电流处理可以进一步的分解大分子蛋白质，得到含羧基的大分子多肽，最后加入弹性蛋白酶，进一步分解得到分子量小于1000Da的蛋白多肽。
究其原因是，细胞膜的两表面带有极性相反的自由电荷，蛋白质是两性物质，交流电流可以高效的分解细胞膜和蛋白质，接着先通入恒压反向电流处理再通入恒压正向电流可以破坏细胞膜和蛋白质的极性，形成含羧基的多肽键的大分子多肽，加入弹性蛋白酶内切酶，可以得到分子量小于1000Da的蛋白多肽。
另外，发明人还发现，将牡蛎、鹿血与水蛭按一定的比例混合制成的分子量小于1000Da的蛋白多肽粉对男性性功能具有显著的治疗作用。本发明还提供了将制备得到的蛋白多肽粉应用在辅助治疗提高男性性功能的保健品、食品以及药品中。
与现有技术相比，本发明提供的蛋白多肽的制备方法有益效果为：
(1)本发明提供的蛋白多肽的制备方法具有工艺简单，易于控制，制备时间短的优点，有利于工业化生产；
(2)本发明提供的蛋白多肽的制备方法制备得到的蛋白多肽分子量小，纯度高，无腥味、口感好，可作为蛋白营养补充剂直接食用，也可作为临床营养品、保健食品以及其他功能配料应用；
(3)本发明提供的蛋白多肽的制备方法制备得到的蛋白多肽在提高男性性功能方面具有显著的效果，为广大男性同胞带来福音。
具体实施方式：
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎10份、鹿血15份、水蛭6份和水30份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为8200Hz，电压为2000V，处理8min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理20min后，所述恒压反向电流的电压为500V，通入恒压正向电流处理16min，所述恒压正向电流的电压为500V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌20min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.3‰，在中性温室条件下1h后，升温至75℃灭酶，在转速为9000rpm的条件下离心12min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为30μm的陶瓷膜过滤，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-60℃，真空度为15pa条件下冷冻2h，接着在温度为40℃干燥10h，得分子量小于1000Da的蛋白多肽。
实施例2、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理15min后，所述恒压反向电流的电压为530V，通入恒压正向电流处理10min，所述恒压正向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得分子量小于1000Da的蛋白多肽。
实施例3、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎20份、鹿血15份、水蛭10份和水40份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9500Hz，电压为3000V，处理4min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理10min后，所述恒压反向电流的电压为600V，通入恒压正向电流处理16min，所述恒压正向电流的电压为600V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌30min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.8‰，在中性温室条件下2h后，升温至95℃灭酶，在转速为10000rpm的条件下离心12min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为50μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-70℃，真空度为20pa条件下冷冻4h，接着在温度为50℃干燥12h，得分子量小于1000Da的蛋白多肽。
对比例1、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、将步骤1得到的混合浆液置于室温搅拌25min，然后加入动物蛋白水解复合酶(购于广西南宁庞博生物工程有限公司)，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤3、将步骤2得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤4、将步骤3得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例2、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例3、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理15min后，所述恒压反向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例4、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通入恒压正向电流处理10min，所述恒压正向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例5、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通入恒压正向电流处理10min，所述恒压正向电流的电压为530V，通过恒压反向电流处理15min后，所述恒压反向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入弹性蛋白酶，所述弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例6、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理15min后，所述恒压反向电流的电压为530V，通入恒压正向电流处理10min，所述恒压正向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
对比例7、一种蛋白多肽的制备
步骤1、将牡蛎16份、鹿血15份、水蛭8份和水35份研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合液中通入交流电流，所述交流电流的频率为9000Hz，电压为2500V，处理6min，切断电源，接着通过恒压反向电流处理15min后，所述恒压反向电流的电压为530V，通入恒压正向电流处理10min，所述恒压正向电流的电压为530V，得混合液I；
步骤3、将步骤1得到的混合液I置于室温搅拌25min，然后加入胰蛋白酶，所述胰蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.5‰，在中性温室条件下1.5h后，升温至90℃灭酶，在转速为95000rpm的条件下离心10min，取上清，获得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用孔径为40μm的陶瓷膜除杂，获得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩，在温度为-65℃，真空度为18pa条件下冷冻3h，接着在温度为45℃干燥11h，得蛋白多肽。
试验例一、蛋白多肽的质量检测试验
1、试验材料：实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5、对比例6和对比例7制备得到的蛋白多肽。
2、试验方法：
检测实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5、对比例6和对比例7制备得到的蛋白多肽的收率和纯度。
2.1、蛋白多肽收率的测定
采用三氯乙酸(TCA)沉淀法与甲醛滴定法相结合进行测定。取10mL酶解液加10mL20％(g/g)TCA，搅匀静置半小时后在4800r/min下离心10min，所得的上清液记作上清液TCA，分别用凯氏定氮法和甲醛滴定法测定上清液中的总氮含量和氨态氮含量，则肽氮量和肽得率按下式进行计算：
上清液总肽氮量＝上清液TCA总氮量－上清液TCA总氨态氮量，
肽得率＝上清液总肽氮含量/原料总蛋白氮含量×100％。
2.2、蛋白多肽纯度的测定
以牛血清白蛋白(BSA)为标准品，制成不同浓度的BSA溶液。向7支试管中分别加入5mL考马斯亮蓝染色溶液染色5min。以第1支试管中的溶液为空白对照，测定其余6支试管中溶液在595nm处的吸光度。以蛋白质质量浓度(g·L-1)为横坐标，吸光度为纵坐标，进行线性回归分析。得到的线性回归方程为Y＝6.6224X+0.01(r＝0.998)，线性范围为0-100μg。结果表明，线性关系良好，可以用来进行蛋白质含量的测定。分别吸取实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5、对比例6和对比例7制备得到的蛋白多肽作为供试品，在595nm处测定吸光度，并根据标准曲线计算蛋白质含量，计算蛋白质质量分数/％。
3、试验结果
试验结果如表1所示。
表1蛋白多肽的质量检测试验
由表1可知，使用本发明提供的蛋白多肽的制备方法制备得到的分子量小于1000Da的蛋白多肽的收率大于81.27％，纯度大于80.55。而使用对比例1～7提供的蛋白多肽的制备方法制备得到的蛋白多肽的收率低于76.23％，纯度低于73.91％，说明本发明先采用交流电处理，再通入恒压反向电流，最后通入恒压正向电流的电流处理顺序可以有效提高蛋白多肽的收率和纯度。
试验例二、蛋白多肽的功效试验
1、试验材料：实施例2制备得到的蛋白多肽，24只雄性成熟小鼠，体重18～22g。
2、试验方法：
将24只雄性成熟小鼠随机分为2组，每组12只，分别为对照组和试验组，连续给药28d。
实验前48h，每只雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(0.02mg/只)，使雌鼠动情期相同，试验于晚上7～11时进行。末次给药30min后，将雄性小鼠单独放入笼中5min，使其适应环境，然后每笼加入1只雌鼠，观察记录下列指标：
①雌鼠投入至雄鼠第1次扑捉雌鼠的时间(捕捉潜伏期)；
②20min内雄鼠扑捉雌鼠或爬背的动作次数(扑捉次数)；
③20min内雄鼠扑捉雌鼠或爬背成功后出现舔阴茎的次数(射精次数)；
④自爬背成功出现舔阴茎的时间(射精潜伏期)。
⑤20min内各组的扑捉百分率和射精百分率。
捕捉百分率＝捕捉动物数/动物总数
射精百分率＝射精动物数/动物总数
数据处理：采用SPSS19.0软件对实验数据进行分析，每组实验数据均以均值表示，各组总体方差满足方差齐性条件时，多组间比较采用单因素方差分析；当各组总体方差不满足方差齐性条件时，多组间比较采用Welch法分析，以p＜0.05，判断差异具有显著性。
3、试验结果
试验结果如表2和表3所示。
表2雄性小鼠交配能力的影响(n＝12)
组别 剂量(g/kg) 捕捉次数 捕捉潜伏期(s) 捕捉百分率(％)
对照组 - 10.8±2.32 505±180 70％
试验组 0.02 10.30±1.23** 28.12±2.43** 100％
注：**示与对照组比较，P<0.01，
表3不同多肽样品对雄性小鼠交配能力的影响(n＝12)
组别 剂量(g/kg) 射精次数 射精潜伏期(s) 射精百分率(％)
对照组 - 1.56±1.12 1339.88±146.98 25％
试验组 0.02 6.25±0.30** 98.12±40.45** 100％
注：**示与对照组比较，P<0.01，
由表2和表3可知，与对照组相比，采用本发明提供的蛋白多肽的制备方法制备得到的分子量小于1000Da的蛋白多肽在捕捉潜伏期、射精潜伏期时间的间隔上与对照相比有极其显著性差异(P<0.01)，并明显提高扑捉百分率和射精百分率；且捕捉百分率、射精百分率高于对照组。
在本说明书的描述中，术语“一个实施例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或实例。而且，描述的具体特征、结构、材料或特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

Claims (10)

1.一种蛋白多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将牡蛎、鹿血、水蛭和水研磨得到混合浆液；
步骤2、往步骤1得到的混合浆液中通入交流电流，处理4～8min，切断电源，接着通入恒压反向电流处理10～20min后，通入恒压正向电流处理8～16min，得混合液I；
步骤3、将步骤2得到的混合液I置于室温搅拌20～30min，然后加入弹性蛋白酶，在中性温室条件下酶解1～2h后，升温至75～95℃灭酶，离心，取上清，得酶解粗液；
步骤4、将步骤3得到的酶解粗液用陶瓷膜过滤，得多肽精制液；
步骤5、将步骤4得到的多肽精制液浓缩、冷冻干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的原料重量份数为：牡蛎10～20份、鹿血15份、水蛭5～10份和水30～40份。
3.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的交流电流的频率为8200～9500Hz，电压为2000～3000V。
4.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的恒压反向电流和恒压正向电流的电压为500～600V。
5.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中弹性蛋白酶的添加量是混合液I总重量的0.1～0.9‰。
6.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3中的离心条件为：在转速为9000～10000rpm的条件下离心8～12min。
7.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤4中的陶瓷膜的孔径为20～50μm。
8.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤5中的冷冻干燥的条件为：在温度为-60℃～-70℃，真空度为15～20pa条件下冷冻2～4h，接着在温度为40～50℃干燥10～12h。
9.根据权利要求1所述的蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤5中制备得到的蛋白多肽的分子量小于1000Da。
10.根据权利要求1-9任一所述的蛋白多肽的制备方法制备得到的蛋白多肽。
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