RU2464991C1 - Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови - Google Patents
Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2464991C1 RU2464991C1 RU2011129512/15A RU2011129512A RU2464991C1 RU 2464991 C1 RU2464991 C1 RU 2464991C1 RU 2011129512/15 A RU2011129512/15 A RU 2011129512/15A RU 2011129512 A RU2011129512 A RU 2011129512A RU 2464991 C1 RU2464991 C1 RU 2464991C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- blood cells
- nuclear blood
- cells
- frost protection
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине и касается создания раствора для консервирования ядерных клеток крови при субумеренно низкой температуре и сохранения их в физиологически активном состоянии после отогрева. Раствор содержит глицерин, комаруман и трилон Б. Соотношение ингредиентов: глицерин 6,0%, комаруман 0,35-0,15%, трилон Б 0,1%, вода для инъекций до 100 мл. Его рН составляет 7,0-7,4. Смешивание лейкоконцентрата 1:1 с данным раствором, замораживание до -20°С, хранение при данной температуре в течение одних суток и отогрев позволяют сохранить 75,5±2,9% жизнеспособных лейкоцитов и 70,0±6,9% физиологически полноценных нейтрофильных клеток, 82,8±7,7% из которых способны к фагоцитозу. Использование заявленного хладоограждающего раствора обеспечивает сохранность высокого процента активных ядерных клеток крови. 3 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к созданию раствора для консервирования лейкоцитов, в частности, человека.
В качестве прототипа нами использована работа Н.Н.Абезгауза и В.А.Леонтовича «Замораживание белых клеток периферической крови для их длительного хранения при ультранизких температурах» (ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1966. - №9. - С.24-29). Существенным недостатком прототипа является то, что предложенный его авторами ограждающий раствор содержит глицерин в 15% концентрации и после отогрева требует отмывания, что дополнительно травмирует высокочувствительные к разного рода повреждающим факторам ядерные клетки крови. Кроме того, взамен используемого в прототипе дисахарида сахарозы нами применен полисахарид комаруман, обладающий рядом положительных эффектов в отношении лейкоцитов: экзоцеллюлярным, иммуномодулирующим и противовоспалительным.
С целью консервирования лейкоцитов при субумеренно низкой температуре в учреждениях криобиологического и медицинского профиля, обеспеченных электроморозильниками на -20°С, в предложенный протекторный раствор включены следующие ингредиенты: растительный полисахарид - комаруман, 1) обладающий как полисахарид (пектин) экзоцеллюлярным криопротекторным действием, что гармонично дополняет эндоцеллюлярное хладоограждающее влияние глицерина на клетки и делает комбинированный криоконсервант более полноценным, дающим при охлаждении лейкоцитов до -20°С выраженный криобиологический (технический) эффект и 2) оказывающий иммуномодулирующие и противовоспалительное действие на лейкоциты (Popov S.V., Popova G.Yu., Ovodova R.G., Ovodov Yu.S. Antiinflammatory acrivity of the pectic polysaccharide from Comarum palustre L. // Fitoterapia. 2005. Vol.76, №3-4. P.281-287; Попов С.В. Иммуномодулирующее действие пектиновых полисахаридов: Автореф. дис. док. биол. наук; Сыктывкар, 2010. - 37 с.), поэтому включение комарумана в криоконсервант усиливает и активизирует их фагоцитарную способность и способствует 70% их морфологической сохранности; глицерин высшего сорта - криопротектор эндоцеллюлярного действия (Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус А.М., Калугин Ю.В. Криопротекторы: Киев - Наукова думка, 1978. - с.5-64), используется в нетоксичной для клеток концентрации, поэтому не требует отмывания перед применением; антикоагулянт - трилон Б (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), имеющий широкое применение в производстве медицинских препаратов и при консервировании.
Криоконсервант имеет рН среды 7,0-7,4, самый благоприятный для клеток крови. Его ингредиенты тропны лейкоцитарным клеткам и производятся в Российской Федерации.
Пример использования средства
Консервирующий раствор, содержащий глицерин в концентрации 6%, комаруман - 0,25%, трилон Б - 0,1%, воду для инъекций до 100 мл и имеющий рН 7,0-7,4, смешивают в отношении 1:1 с концентратом лейкоцитов в полимерном контейнере «Компопласт». Смесь, выдержав 20 мин при комнатной температуре, охлаждают по экспоненциальной программе в электрическом морозильнике в 4-литровой ванне с этиловым 96% спиртом до -20°С в течение 9-14 минут. Затем замороженный лейкоконцентрат переносят в камеру электроморозильника, имеющую температуру -20°С. Термограмму записывают по термопаре, введенной в контейнер «Компопласт» с хладоограждающим раствором, в конечной концентрации. Размораживание проводят в 20-литровой водяной ванне при температуре +38°С в течение 35-50 секунд при покачивании контейнера 3-4 раза в сек. Температура оттаянного лейкоконцентрата в контейнере должна быть в пределах +2÷+4°С. Затем определяют морфологическую сохранность размороженных лейкоцитарных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - №9. - С.58-59). Расчет выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями клеток до замораживания.
Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий криофизиологии крови Института физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России».
Изучены три варианта консерванта для лейкоконцентрата, различающихся по концентрации входящих в них ингредиентов. Состав вариантов консерванта представлен в таблице 1.
Таблица 1 | ||||
Номер варианта криоконсерванта | Состав хладоограждающего раствора | |||
Комаруман в % | Глицерин в % | Трилон Б в % | Вода для инъекций в мл | |
1 | 0,35 | 6,0 | 0,1 | До 100 |
2 | 0,25 | 6,0 | 0,1 | До 100 |
3 | 0,15 | 6,0 | 0,1 | До 100 |
Конечная концентрация веществ, входящих в состав вариантов криоконсерванта №1, №2 и №3, после смешивания 1:1 с лейкоконцентратом оказывалась в 2 раза ниже исходной (таблица 2), рН среды не изменялась, оставаясь в пределах 7,0-7,4.
Таблица 2 | ||||
Номер варианта криоконсерванта | Конечная концентрация ингредиентов в различных вариантах криоконсерванта после смешивания с лейковзвесью | |||
Комаруман в % | Глицерин в % | Трилон Б в % | Вода для инъекций в мл | |
1 | 0,175 | 3,0 | 0,05 | До 200 |
2 | 0,125 | 3,0 | 0,05 | До 200 |
3 | 0,075 | 3,0 | 0,05 | До 200 |
Исследования лейкоцитов производили на морфологическую сохранность и функциональную активность (таблица 3).
Таблица 3 | |||
Вариант консервирующего раствора | Показатели в % к исходному уровню | ||
Жизнеспособность лейкоцитов | Морфологическая сохранность гранулоцитов | Фагоцитарная активность нейтрофилов | |
Верхний предел дозировок ингредиентов раствора | 76,8±4,9 (n=5) | 67,0±7,4 (n=5) | 61,2±4,6*(n=5) |
Оптимальное соотношение ингредиентов раствора | 75,5±2,9 (n=6) | 70,0±6,9 (n=6) | 82,8±7,7 (n=6) |
Нижний предел дозировок ингредиентов раствора | 36,0±4,1*(n=5) | 34,4±3,5*(n=5) | 19,2±2,3*(n=5) |
* - различие достоверное (р<0,05) |
Основным критерием оценки биологической полноценности лейкоцитов, прежде всего нейтрофилов, является определение их фагоцитарной активности. Этот тест, наиболее надежно характеризующий физиологические свойства клеток, был лучшим после охлаждения-отогрева при использовании криоконсерванта с оптимальным соотношением ингредиентов.
Готовый оптимальный вариант криоконсерванта прозрачен, с желтоватым оттенком, без запаха, рН=7,0-7,4, хорошо смешивается во всех соотношениях с лейкоцитным концентратом, не вызывает конгломерацию клеток и обеспечивает функциональную и морфологическую сохранность при положительной температуре до замораживания. Криоконсервант проявляет выраженное хладоограждающее свойство при замораживании лейкоцитов до -20°С.
Таким образом, разработанный криоконсервант при замораживании лейкоконцентрата до -20°С обеспечил сохранность высокого процента физиологически активных ядерных клеток крови. Он может быть применен в учреждениях медицинского и биологического профиля.
Claims (1)
- Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови, содержащий глицерин, комаруман, трилон Б и воду для инъекций при рН раствора 7,0-7,4 и следующем соотношении ингредиентов, %:
Глицерин 6,0 Комаруман 0,35-0,15 Трилон Б 0,1 Вода для инъекций До 100 мл
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011129512/15A RU2464991C1 (ru) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011129512/15A RU2464991C1 (ru) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2464991C1 true RU2464991C1 (ru) | 2012-10-27 |
Family
ID=47147269
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011129512/15A RU2464991C1 (ru) | 2011-07-15 | 2011-07-15 | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2464991C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530149C1 (ru) * | 2013-07-18 | 2014-10-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Криоконсервант для замораживания ядерных клеток крови |
RU2621295C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-06-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Раствор для консервирования клеточных взвесей |
RU2716574C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гекмодиолит |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU813844A1 (ru) * | 1979-07-06 | 1982-01-30 | Тбилисский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток | Состав дл низкотемпературного консервировани лейкоцитов |
RU2230454C2 (ru) * | 2002-05-24 | 2004-06-20 | Государственное учреждение Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре |
RU2240000C2 (ru) * | 2002-12-04 | 2004-11-20 | Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре |
RU2290808C2 (ru) * | 2004-12-06 | 2007-01-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре |
-
2011
- 2011-07-15 RU RU2011129512/15A patent/RU2464991C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU813844A1 (ru) * | 1979-07-06 | 1982-01-30 | Тбилисский Научно-Исследовательский Институт Вакцин И Сывороток | Состав дл низкотемпературного консервировани лейкоцитов |
RU2230454C2 (ru) * | 2002-05-24 | 2004-06-20 | Государственное учреждение Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре |
RU2240000C2 (ru) * | 2002-12-04 | 2004-11-20 | Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре |
RU2290808C2 (ru) * | 2004-12-06 | 2007-01-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СОЛОМИНА О.Н. и др. Криопротекторные свойства ряда Пектинов. Доклады Академии Наук. 2010, т.430, с.559-561. СВЕДЕНЦОВ Е.П. И др. Создание ограждающего раствора для консервирования лейкоцитов на основе препаратов желатина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007, т. 144, №10, с.445-447. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530149C1 (ru) * | 2013-07-18 | 2014-10-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Криоконсервант для замораживания ядерных клеток крови |
RU2621295C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-06-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Раствор для консервирования клеточных взвесей |
RU2716574C1 (ru) * | 2019-01-24 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гекмодиолит |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3165863B2 (ja) | 凍結保存溶液 | |
Khlifaoui et al. | Effects of glutamine on post-thaw motility of stallion spermatozoa: an approach of the mechanism of action at spermatozoa level | |
ES2762966T3 (es) | Procedimiento de crioconservación de células con objetivo terapéutico | |
CN106982821A (zh) | 脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物及其用途 | |
CN103548814B (zh) | 造血干细胞-80℃非程控降温冻存方法及保护剂 | |
RU2464991C1 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания ядерных клеток крови | |
Stoll et al. | Membrane stability during biopreservation of blood cells | |
CN110367242A (zh) | 凋亡小体保存液及凋亡小体的保存方法 | |
Jimenez-Marco et al. | Frozen and cold-stored platelets: reconsidered platelet products | |
RU2624214C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток | |
ES2949014T3 (es) | Uso de una disolución que comprende PEG para la conservación de células madre | |
CN105211052A (zh) | 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法 | |
CN103999849B (zh) | 一种哺乳动物睾丸组织冷冻保存的抗冻剂及冷冻-解冻方法 | |
RU2639892C1 (ru) | Способ криоконсервирования ядросодержащих клеток крови человека при температуре минус 80оС | |
ES2763030T3 (es) | Procedimiento de crioconservación de células con objetivo terapéutico | |
CA3107967A1 (en) | Compositions for transportation and/or cryopreservation of cells and/or tissues | |
RU2439877C2 (ru) | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) | |
RU2301524C1 (ru) | Криоконсервант для лейкоцитов | |
RU2290808C2 (ru) | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре | |
RU2621295C2 (ru) | Раствор для консервирования клеточных взвесей | |
RU2230454C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре | |
RU2477953C1 (ru) | Комбинированный криопротекторный раствор для замораживания тромбоцитов | |
RU2311027C1 (ru) | Раствор для консервирования лейкоцитов при околонулевой температуре | |
RU2240000C2 (ru) | Хладоограждающий раствор для замораживания лейкоцитов при субумеренно-низкой температуре | |
HEMPHILL et al. | Skin storage in tissue banking: a summary emphasizing low temperature methods of storage; and preliminary report of the use of antifreeze agents |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140716 |