CN110903408A - 一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，包括以下步骤：S1.得到猴头菇粉末；S2.超声破壁，提取液浸泡；S3.充入惰性气体至压力为4000‑5500kpa后，迅速回复至正常大气压，得猴头菇细胞悬液；S4.离心分离，上清经乙醇沉淀，得猴头菇多糖蛋白提取物，对猴头菇多糖蛋白提取均匀、彻底，提取速度快，操作简单便捷，对多糖蛋白的结构完整性进行了保护，提取率高，纯物理提取，无毒无害，成本低。

Description

一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法
技术领域
本发明涉及猴头菇领域，具体涉及一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法。
背景技术
猴头菇多糖蛋白具有较好的保健功能，具有治疗胃炎及胃溃疡、降低血糖，同时也具可抗辐射及提高免疫力、清除自由基、抗衰老、保肝护肝、健胃益脾等功能，可诱导肿瘤细胞凋亡，较强的抑制肿瘤细胞端粒酶的活性，可促进小鼠造血干细胞和祖细胞的生成，改善其造血功能，是较好的抗氧化剂，具有一定的抗氧化功能。
因此获得完整性、高纯度的的猴头菇多糖蛋白具有重要意义。
现有技术中，有多种方法提取猴头菇多糖，如利用热处理破坏细胞结构，促进胞内物质的释放和传递，从而提取出多糖，但是提取时间长、提取率低；而酸提取法、碱提取法是利用化学方法破坏细胞结构提取多糖的方法，在破坏细胞壁等结构的同时，也会破坏多糖的结构，因而不常用；随着酶制剂的推广，酶解法也逐渐应用于多糖的提取，主要是利用果胶酶等的酶解作用达到破坏细胞结构的目的，但由于其成本较高而受到限制。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，对猴头菇多糖蛋白提取均匀、彻底，提取速度快，操作简单便捷，对多糖蛋白的结构完整性进行了保护，提取率高，纯物理提取，无毒无害，成本低。
本发明的技术方案是，提供一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1.得到猴头菇粉末；
S2.超声破壁，提取液浸泡；
S3.充入惰性气体至压力为4000-5500kpa后，迅速回复至正常大气压，得猴头菇细胞悬液；
S4.离心分离，上清经乙醇沉淀，得猴头菇多糖蛋白提取物。
优选地，所述提取液包括0.5mol/L-1 mol/L的氯化钠溶液。
优选地，所述回复至正常大气压的时间为1-3min。
优选地，所述惰性气体包括氮气、二氧化碳中的一种或几种。
优选地，所述超声破壁频率为15KHz-20KHz，超声时间5-10min。
优选地，提取温度为30-45℃。
本方案中，先利用超声波具有能让细胞壁破损，细胞内的传质被提高的机械化学作用，使原料中有机物得到更好溶出，从而达到增加提取速率的目的，同时加入提取剂氯化钠溶液，在细胞壁破裂的瞬间，细胞膜内物质由于膜内外浓度不同，膜内物质会向膜外渗出，使内容物渗出，提高提取效率。
给容器加上高压力的惰性气体，使得细胞悬液内溶解大量惰性气体，突然减压后，惰性气体快速释放，涨破细胞，没有任何的摩擦，因此也没有任何的热效应，惰性气体的挥发还具有冷却的效果，同时挥发的惰性气体还可以形成保护层，使得提取物不会被氧化，不仅没有摩擦，它还可以避免摩擦，因为所有的细胞几乎都在一瞬间全部破碎，均匀一致性非常好，所以细胞之间不会发生剧烈摩擦，最大限度地保护了亚细胞结构，使得提取物更加完整。
本方案的有益效果在于：
1. 常温下，纯物理方法提取，不破坏葡聚糖链，保留猴头菇多糖结构的完整性；
2. 高压力的惰性气体使得细胞悬液内溶解大量惰性气体，然后突然减压，氮气快速释放，涨破细胞，提取多糖均一性高，没有任何的热效应，且惰性气体形成保护层，使提取物不被氧化；
3. 加入氯化钠溶液提取，在细胞壁破裂的瞬间，细胞膜内物质由于膜内外浓度不同，膜内物质会向膜外渗出，使内容物渗出，提高提取效率；
4. 使用无水乙醇对多糖蛋白复合物进行沉降，无毒无害；
5. 提取过程简单，速度快、效率高。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
称取猴头菇子实体100g，研磨粉末过80目筛，得猴头菇粉末，将所得猴头菇粉末超声破壁，超声频率为15KHz，超声时间5min，加入200ml 1mol/L的NaCl溶液溶解并于30℃提取，移入高压罐中，在高压罐中充入氮气，使高压罐压力为5500kPa，细胞悬液内溶解大量氮气，开启减压阀，使罐内压力在1-3min内降至正常大气压，取出猴头菇细胞悬液，5000r/min离心分离取上清，旋转蒸发浓缩至原体1/8，加入5倍体积无水乙醇4℃沉淀16h，5000r/min，离心20min，收集沉淀，50℃干燥获得猴头菇多糖蛋白复合物。
通过苯酚-硫酸法测定其中多糖含量为46%，通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量为13%。
实施例2
称取猴头菇子实体100g，研磨粉末过80目筛，得猴头菇粉末，将所得猴头菇粉末超声破壁，超声频率为20KHz，超声时间10min，加入200ml 0.5mol/LNaCl溶液溶解并于40℃提取，移入高压罐中，在高压罐中充入二氧化碳，使高压罐压力为4000kPa，细胞悬液内溶解大量二氧化碳，开启减压阀，使罐内压力在1-3min内降至正常大气压，取出猴头菇细胞悬液，5000r/min离心分离取上清，旋转蒸发浓缩至原体1/8，加入5倍体积无水乙醇4℃沉淀16h，5000r/min，离心20min，收集沉淀，50℃干燥获得猴头菇多糖蛋白复合物。
通过苯酚-硫酸法测定其中多糖含量为43%，通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量为15%。
实施例3
称取猴头菇子实体100g，研磨粉末过80目筛，得猴头菇粉末，将所得猴头菇粉末超声破壁，超声频率为20KHz，超声时间8min，加入200ml 0.8mol/LNaCl溶液溶解并于45℃提取，移入高压罐中，在高压罐中充入二氧化碳，使高压罐压力为4500kPa，细胞悬液内溶解大量二氧化碳，开启减压阀，使罐内压力在1-3min内降至正常大气压，取出猴头菇细胞悬液，5000r/min离心分离取上清，旋转蒸发浓缩至原体1/8，加入5倍体积无水乙醇4℃沉淀16h，5000r/min，离心20min，收集沉淀，50℃干燥获得猴头菇多糖蛋白复合物。
通过苯酚-硫酸法测定其中多糖含量为45%，通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量为12%。
实施例4
称取猴头菇子实体100g，研磨粉末过80目筛，得猴头菇粉末，加入200ml 0.8mol/L的NaCl溶液溶解并35℃提取，5000r/min离心分离取上清，取出猴头菇细胞悬液，5000r/min离心分离取上清，旋转蒸发浓缩至原体1/8，加入5倍体积无水乙醇4℃沉淀16h，5000r/min，离心20min，收集沉淀，50℃干燥获得猴头菇多糖蛋白复合物。
通过苯酚-硫酸法测定其中多糖含量为33%，通过考马斯亮蓝法测定蛋白含量为9%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (6)

1.一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.得到猴头菇粉末；
S2.超声破壁，提取液浸泡；
S3.充入惰性气体至压力为4000-5500kpa后，迅速回复至正常大气压，得猴头菇细胞悬液；
S4.离心分离，上清经乙醇沉淀，得猴头菇多糖蛋白提取物。
2.根据权利要求1所述的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，所述提取液包括0.5mol/L-1 mol/L的氯化钠溶液。
3.根据权利要求1所述的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，所述回复至正常大气压的时间为1-3min。
4.根据权利要求1所述的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，所述惰性气体包括氮气、二氧化碳中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，所述超声破壁频率为15KHz-20KHz，超声时间5-10min。
6.根据权利要求1所述的一种猴头菇多糖蛋白提取物的制备方法，其特征在于，提取温度为30-45℃。
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