CN111662833B - 沉底型球红冬孢酵母微生物制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

沉底型球红冬孢酵母微生物制剂、制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种沉底型球红冬孢酵母微生物制剂、制备方法及其应用。该微生物制剂包括以下质量百分比计的组分：20～30％球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥、15～20％葡萄糖、10～15％NaHCO3、10～15％沸石粉、19～44.5％麸皮粉和0.5～1.0％海藻糖。本发明提供的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂含有球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥，该球红冬孢酵母ZDFY1801具有高效降解养殖水体氨氮、澄清养殖水体、抑制养殖池弧菌病原增殖、促进养殖动物生长等多重功效，可应用于水产养殖，使用时，只需将压片成形的球红冬孢酵母制剂用手抛至养殖池需要的位置，制剂可自动快速沉降到池底，并逐渐释放发挥功效。

Description

沉底型球红冬孢酵母微生物制剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种沉底型球红冬孢酵母微生物制剂、制备方法及其应用。
背景技术
在水产养殖中通常通过大量换水排放养殖废物来解决氨氮超标和病原菌大量滋生问题，但这种方式不仅会造成养殖废物对环境的污染，也会因频繁进水引入病原造成病害爆发，此外大量的换水造成了水资源和电力的浪费。因此，以大量换水为特征的传统养殖方式正逐步失去发展空间，利用水产益生菌来调控水质，逐渐得到了广大养殖户的认可。目前市场上常见的水产益生菌种类包括：芽孢杆菌、乳酸菌、光合细菌、硝化细菌和酵母菌。一些复合EM菌虽标明含有酵母菌成分，但从未指明是何种酵母菌，市场上单一酵母菌成份微生物制剂产品，绝大多数来自于酿酒或面包酵母，这些酵母微生物制剂主要用作水产动物的饵料，未见有其它用途的报道。此外，当前市场上几乎所有的水产微生物制剂均为粉剂或液体状，这些制剂在投入水体中均匀分散于水体中，未见压制成形的可以快速沉降到池底酵母微生物制剂以及在水产养殖中应用的报道，而池底是残饵、粪便等有机物集中且病原菌大量滋生的最主要区域。
我们在前期的工作中分离筛选出一株海洋红酵母ZDFY1801(又名YLY01)，该菌株经18S rDNA基因扩增和测序，分子鉴定为球红冬孢酵母(Rhodosporium sphaerosporum)，菌株ZDFY1801具有高效去除模拟养殖水体中氨氮的能力、絮凝澄清水体、显著抑制养殖水体弧菌等功效(专利申请中)。但是并没有进行可商业化大规模应用的制剂开发。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种沉底型球红冬孢酵母微生物制剂，该微生物制剂包括以下质量百分比计的组分：20～30％球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥、15～20％葡萄糖、10～15％NaHCO3、10～15％沸石粉、19～44.5％麸皮粉和0.5～1.0％海藻糖；所述的球红冬孢酵母ZDFY1801为球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)，保藏编号为：GDMCC No:60679。
本发明的球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)，记为球红冬孢酵母ZDFY1801，又名为球红冬孢酵母YLY01。
优选，所述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂，包括以下质量百分比计的组分：25％球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥、18％葡萄糖、12％NaHCO3、12％沸石粉、32.2％麸皮粉和0.8％海藻糖。
本发明的第二个目的是提供一种制备上述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂的方法，该方法包括以下步骤：将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉和海藻糖按配方量进行预混，得到预混料；将配方量的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥和预混料混合，压片，得到沉底型球红冬孢酵母微生物制剂。将制得的球红冬孢酵母微生物制剂于4-10℃保存。
所述的压片的片剂直径为1-2cm，厚为3-6mm。
所述的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥的制备包括以下步骤：将球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液接种于发酵培养基中发酵100～120h，室温下静置6-12h，吸除上清液，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥。
优选，所述的菌种液的接种量为5％v/v，所述的发酵温度为30℃。
所述的发酵培养基的基质包括以下质量百分比计的组分：3～9％麸皮、8～20％豆粕、10～30％玉米粉、36.6～50.8％红糖、5～15％葡萄糖、1～3％硫酸铵、0.4～1.2％酵母粉、0.4～1.2％NaH2PO4、0.4～1.2％MgSO4、1～3％粗盐。
优选，所述的发酵培养基的基质包括以下质量百分比计的组分：6％麸皮、12％豆粕、20％玉米粉、48％红糖、8％葡萄糖、2％硫酸铵、0.8％酵母粉、0.6％NaH2PO4、0.6％MgSO4、2％粗盐。
所述的发酵培养基的制备步骤为：将配方量的麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到发酵培养基。
本发明的第三个目的是提供上述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂在水产养殖中的应用。
本发明还提供了一种沉底型球红冬孢酵母微生物制剂在水产养殖中应用的方法。将沉底型球红冬孢酵母微生物制剂取出直接用手抛至养殖池需要的位置，使用量为1-3公斤/亩(按平均1米水深算)。压片的微生物制剂由于重力原因可快速到达养殖池底，并逐渐释放。
与现有技术相比，本发明的创新性和有益效果在于：
(1)本发明的微生物制剂仅包含球红冬孢酵母ZDFY1801一种微生物，但是同时具有高效降解养殖水体氨氮、絮凝澄清养殖水体、抑制养殖池弧菌病原增殖、促进养殖动物生长等多重功效，这是目前任何一种单成份微生物制剂不能达到的效果。
(2)本微生物制剂可以快速沉降到达池底，而池底是残饵、粪便等有机物大量集中的区域，微生物制剂的中球红冬孢酵母ZDFY1801可快速就近分解利用有机物，同时也可以快速吸收利用其它微生物分解有机物产生的氨氮，因而从池底源头控制氨氮的产生和释放。
(3)利用池底有机物以及氨氮为作为营养源，大量增殖球红冬孢酵母ZDFY1801，其本身可作为养殖动物的鲜活饵料，达到了养殖废物原位资源化利用的目的。
(4)本发明的微生物制剂含有NaHCO3，可直达池底，可快速提高池底的碱度，为有益微生物包括球红冬孢酵母ZDFY1801的生长提供了重要条件，同时也可提升因池底球红冬孢酵母ZDFY1801大量繁殖下降的pH值。另一方面，也大量减少了以微生物调控为主的养殖中NaHCO3的使用量，节约了养殖成本。
(5)本发明的微生物制剂含有葡萄糖等有机碳源，可直达池底，提供了异常硝化细菌和本发明球红冬孢酵母ZDFY1801生长所需的碳源，解决了养殖池底可利用有机碳源不足，而病原菌容易滋生的问题。
(6)使用方便，不需要预发酵，不需要兑水，仅需用手抛洒，节省了劳力。
本发明的球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)于2019年6月3日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼，保藏编号为GDMCC No:60679。
附图说明：
图1为球红冬孢酵母ZDFY1801对模拟养殖水体氨氮去除效果。图注：CG：对照组，EG：实验组(加入球红冬孢酵母ZDFY1801)。
图2为加入球红冬孢酵母ZDFY1801(A)与未加入球红冬孢酵母ZDFY1801的对照(B)金鱼缸水质比较。
图3为球红冬孢酵母ZDFY1801对凡纳滨对虾生物安全性检验。图注：C-，空白对照组；C+，阳性对照组(加入哈氏弧菌E385)；E，实验组(加入球红冬孢酵母ZDFY1801)。
图4为球红冬孢酵母ZDFY1801对养殖水体弧菌数量抑制效果。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。所用的方法及技术如无特别说明均为常规的方法及技术。
实施例1：球红冬孢酵母ZDFY1801发酵培养基配制
球红冬孢酵母ZDFY1801的发酵培养基(RSM)的基质，按质量百分比计包括以下组分：6％麸皮、12％豆粕、20％玉米粉、48％红糖、8％葡萄糖、2％硫酸铵、0.8％酵母粉、0.6％NaH2PO4、0.6％MgSO4、2％粗盐。
配制：将上述配方量将麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到液体发酵培养基。
实施例2：球红冬孢酵母ZDFY1801发酵培养基配制
球红冬孢酵母ZDFY1801的发酵培养基(RSM)的基质，按质量百分比计包括以下组分：3％麸皮、18％豆粕、10％玉米粉、50.8％红糖、15％葡萄糖、1％硫酸铵、0.4％酵母粉、0.4％NaH2PO4、0.4％MgSO4、1％粗盐。
配制：将上述配方量将麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到液体发酵培养基。
实施例3：球红冬孢酵母ZDFY1801发酵培养基配制
球红冬孢酵母ZDFY1801的发酵培养基(RSM)的基质，按质量百分比计包括以下组分：9％麸皮、8％豆粕、30％玉米粉、36.6％红糖、6.8％葡萄糖、3％硫酸铵、1.2％酵母粉、1.2％NaH2PO4、1.2％MgSO4、3％粗盐。
配制：将上述配方量将麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到液体发酵培养基。
实施例4：球红冬孢酵母ZDFY1801发酵培养基配制
球红冬孢酵母ZDFY1801的发酵培养基(RSM)的基质，按质量百分比计包括以下组分：7％麸皮、20％豆粕、20％玉米粉、41.6％红糖、5％葡萄糖、2％硫酸铵、0.8％酵母粉、0.8％NaH2PO4、0.8％MgSO4、2％粗盐。
配制：将上述配方量将麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到液体发酵培养基。
实施例5：沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂制备
沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂的制备，包括以下步骤：
(1)取实施例1制得的灭菌后的液体发酵培养基，按5％v/v比例加入球红冬孢酵母ZDFY1801菌种液(即球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液)，采用常规酵母菌发酵的方式进行发酵，发酵时间为110h，发酵控制温度为30℃，发酵结束后，将发酵液于室温下静置10h，吸除上清液，保留剩下的酵母菌膏泥，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥；
(2)将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉、海藻糖按照质量比18：12：12：32.2：0.8的比例混合，形成预混料；
(3)将步骤(1)得到的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥按1：3的质量比与步骤(2)的预混料进行充分混合，得到混合料；
(4)采用压片机将混合料压制成药片状，使片剂的直径为1.5cm，厚为5mm，稍作晾干，即得到沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂。
实施例6：沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂制备
沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂的制备，包括以下步骤：
(1)取实施例1制得的灭菌后的液体发酵培养基，按5％v/v比例加入球红冬孢酵母ZDFY1801菌种液(即球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液)，采用常规酵母菌发酵的方式进行发酵，发酵时间为100h，发酵控制温度为30℃，发酵结束后，将发酵液于室温下静置12h，吸除上清液，保留剩下的酵母菌膏泥，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥；
(2)将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉、海藻糖按照质量比15：10：10：44.5：0.5的比例混合，形成预混料；
(3)将步骤(1)得到的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥按1：4的质量比与步骤(2)的预混料进行充分混合，得到混合料；
(4)采用压片机将混合料压制成药片状，使片剂的直径为2cm，厚为6mm，稍作晾干，即得到沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂。
实施例7：沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂制备
沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂的制备，包括以下步骤：
(1)取实施例1制得的灭菌后的液体发酵培养基，按5％v/v比例加入球红冬孢酵母ZDFY1801菌种液(即球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液)，采用常规酵母菌发酵的方式进行发酵，发酵时间为120h，发酵控制温度为30℃，发酵结束后，将发酵液于室温下静置6h，吸除上清液，保留剩下的酵母菌膏泥，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥；
(2)将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉、海藻糖按照质量比20：10：15：24：1的比例混合，形成预混料；
(3)将步骤(1)得到的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥按3：7的质量比与步骤(2)的预混料进行充分混合，得到混合料；
(4)采用压片机将混合料压制成药片状，使片剂的直径为1cm，厚为3mm，稍作晾干，即得到沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂。
实施例8：沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂制备
沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂的制备，包括以下步骤：
(1)取实施例1制得的灭菌后的液体发酵培养基，按5％v/v比例加入球红冬孢酵母ZDFY1801菌种液(即球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液)，采用常规酵母菌发酵的方式进行发酵，发酵时间为110h，发酵控制温度为30℃，发酵结束后，将发酵液于室温下静置10h，吸除上清液，保留剩下的酵母菌膏泥，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥；
(2)将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉、海藻糖按照质量比20：15：15：19：1的比例混合，形成预混料；
(3)将步骤(1)得到的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥按3：7的质量比与步骤(2)的预混料进行充分混合，得到混合料；
(4)采用压片机将混合料压制成药片状，使片剂的直径为1.5cm，厚为5mm，稍作晾干，即得到沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂。
实施例9：球红冬孢酵母ZDFY1801对模拟养殖水体氨氮的去除效果
取养殖水样加(NH4)2SO4调节水体氨氮浓度至10±0.2mg/L，加入葡萄糖至终浓度1g/L，0.2μm滤膜过滤除菌后分装150mL到灭菌的250mL锥形瓶中，实验组和对照组各三个重复。取用YPD培养基过夜培养的球红冬孢酵母ZDFY1801菌液2mL用灭菌海水清洗2次后悬浮成2mL，实验组分别加入悬浮ZDFY1801菌液500μL，对照组加入等量灭菌海水，于超净台取0h、3h、6h、9h、12h、24h、36h、48h水样。以便携式水质分析仪(奥克丹，无锡)进行氨氮及亚硝酸盐含量检测，测定不同时间点氨氮和亚硝酸盐含量，各时间点氨氮浓度见图1。
如图1所示，初始氨氮浓度为9.8mg/L的养殖水样，加入球红冬孢酵母ZDFY1801培养48h后，氨氮浓度降为1.3mg/L，氨氮去除效率达到86.7％。数据表明球红冬孢酵母ZDFY1801对养殖水中高氨氮具有非常强的去除能力。为了证明氨氮是被吸收同化，而非硝化过程去除，氨氮检测过程中同时对0h、12h、24h、48h各样品亚硝酸盐含量进行了检测，结果发现各组样品都未检测到亚硝酸盐存在，表明氨氮并没有转化为亚硝酸盐。由于本样品中以及上述实施例的培养基中，除了硫酸铵提供氮源，并无其它物质大量提供氮源生长。这些结果可以确定球红冬孢酵母ZDFY1801降氨氮过程为异养氨同化作用，氨氮被直接吸收去除。
实施例10：球红冬孢酵母ZDFY1801对养殖水体的净化
在二个塑料金鱼缸(A、B)中分别加入2L曝气24h的自来水，每个金鱼缸随机分配放入3尾金鱼(体长约4-6cm)，A缸加入用YPD培养基过夜培养的球红冬孢酵母ZDFY1801至终浓度约为1×104CFU/mL，每天正常投喂饲料，不换水，不吸污。B缸作为对照，不加任何菌液，其余做法与实验缸相同。72h后观察水质，记录金鱼生存状况，各取1mL养殖水，测量水体的光密度值(OD600nm)。通过观察二个金鱼养殖缸的水质，发现加入球红冬孢酵母ZDFY1801的金鱼养殖缸(A)在72h后的水质明显要比不加入球红冬孢酵母ZDFY1801的金鱼养殖缸(B)的水质清澈，而缸底有大量的颗粒明显的沉积物(图2)。对A、B缸中水体的光密度检测表明，A缸中养殖水的光密度值为0.18，B缸中养殖水的光密度值0.54，表明A缸中悬浮的微细颗粒物和细菌数量明显要少于B缸。观察及测量结果证明球红冬孢酵母ZDFY1801具有很强的絮凝净化水体的作用。此外，在72h的实验期内，未发现对照和实验缸内的金鱼活力有明显差别。
实施例11：球红冬孢酵母ZDFY1801生物安全性评价
选用健康且活力好的凡纳滨对虾(4±1cm)，随机分配到经二氧化氯消毒集装箱中，每个箱内装有40L海水。实验分为加入菌株ZDFY1801的实验组、加入灭菌海水的空白对照组和加入哈维氏弧菌E385的阳性对照组，每组10只虾，每组3个重复。取用YPD培养基过夜培养的菌株ZDFY1801和哈维氏弧菌E385，用PBS缓冲液3000rpm离心5min，洗涤2次去除培养基成分，用灭菌海水悬浮，调节至OD600nm＝1.0(约5×108CFU/mL)。实验组每个桶中加入10mL悬浮的ZDFY1801菌液，水体中菌量约为5×105CFU/mL；阳性对照组每个桶中加入10mL悬浮的哈维氏弧菌E385菌液，水体中菌量约为5×105CFU/mL；空白对照组每个桶中加入10mL的灭菌海水。实验期间，对虾正常喂养且每天对每个组的水体进行更换，换水后按上述方法重新加入菌液和灭菌海水到实验组和对照组的每个桶中，每天相同的时间点记录下每个组中存活的对虾数量，持续一周。各组对虾存活情况见图3。
图3数据显示，正常养殖一周后，实验组对虾存活率为96.7％，远高于空白对照组的86.7％和阳性对照组的40％，考虑到菌株的加入量约5×105CFU/mL，远大于哈维氏弧菌E385的致病剂量(1×104CFU/mL)，因此可以初步判断该菌株ZDFY1801对凡纳滨对虾具有较高的生物安全性。另外，实验过程中，还观察到养殖一周后，实验组对虾的水质情况明显好于两对照组。
实施例12：球红冬孢酵母ZDFY1801对养殖水体弧菌抑制
取养殖水样100μL，稀释102倍，取100μL涂布TCBS平板，于恒温培养箱中30℃过夜培养，对平板上的菌落进行计数，初步确定水样中弧菌含量。取30℃过夜培养的酵母ZDFY1801菌液10mL，3000rpm离心5min，弃上清，再用灭菌海水1mL重悬并洗涤2次，以去除培养基成分，加入灭菌海水调节细胞密度至OD600nm＝1.0(约2×107CFU/mL)。取上述养殖水样950mL，加入20g/L的葡萄糖溶液50mL，分装150mL加入到250mL的灭菌锥形瓶中。实验组和对照组各三个重复。根据上述计算的水样中弧菌含量，在实验组中加入等量的酵母ZDFY1801细胞，对照组中加入与实验组酶母悬液等体积的灭菌海水，置于摇床(150rpm)中30℃的培养。取培养48h后的实验组和对照组水样各100μL，稀释102倍涂布TCBS平板，置于恒温培养箱中30℃过夜培养，计数平板上弧菌菌落数量，并换算为弧菌的含量。
结果表明：在48h内，实验组弧菌的数量由最初的4.6×104CFU/mL下降至6.8×103CFU/mL，仅为初始数量的15％。对照组中弧菌的数量由最初的4.6×104CFU/mL稍降至3.8×104CFU/mL。48h后实验组中弧菌的数量仅为对照组的弧菌数量的18％(图4)。这一结果表明：在加入1g/L葡萄糖作为碳源的情况下，菌株ZDFY1801对养殖水样中的弧菌的生长及存活具有明显的抑制作用。
实施例13：球红冬孢酵母ZDFY1801菌株主要营养成分的测定
类胡萝卜素提取及测定采取有机溶剂提取法和分光光度测定法。粗蛋白含量测定采用凯氏法，脂肪酸含量测定采用布莱染色法，酵母多糖测定采用原酶消化和酒精沉淀法。氨基酸组成测定采用氨基酸分析仪分析。球红冬孢酵母ZDFY1801主要营养成分见表1。
表1球红冬孢酵母ZDFY1801主要营养成分含量列表
Figure BDA0002537085980000121
分析表明其蛋白质含量占干重的30.3％。总脂肪酸含量为3.24％，表明酵母ZDFY1801的脂肪酸含量较高，值得注意的是酵母ZDFY1801不饱和脂肪酸占总脂肪酸比例高达的85.2％。酵母ZDFY1801粗多糖占细胞干重的16.8％，类胡萝卜素含量为1.2mg/g干重，同时酵母ZDFY1801还检测出含有丰富的B族维生素。
酵母ZDFY1801的氨基酸组成见表2。
表2球红冬孢酵母ZDFY1801氨基酸组成分析
Figure BDA0002537085980000122
Figure BDA0002537085980000131
由表2可见，酵母ZDFY1801水解产生16种氨基酸，其中甲壳动物必须氨基酸有9种，占氨基酸总量的50.2％，6种呈味氨基酸占氨基酸总量的39％，超过其平均值37.5％。
这些具体实施例分析表明，球红冬孢酵母ZDFY1801菌株可高效去除养殖水体的氨氮，澄清养殖水体，显著抑制养殖水体中的弧菌，具有高度的生物安全性，且具有丰富的营养成分，因此具有在用于水产养殖中废水处理以及开发成水产养殖饵料或饲料添加剂的巨大潜力。
实施例14：沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂使用
取出实施例5制得的沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂，直接用手抛至池塘中需要的位置，使用量为2公斤/亩(按平均1米水深算)。压片的微生物制剂由于重力原因可快速到达养殖池底，并逐渐释放。投放球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂48小时后检测实验对虾塘(加入球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂)和对照对虾塘(未加球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂)氨氮含量和弧菌数量，结果发现：实验对虾塘和对照虾塘氨氮含量分别为0.05mg/L和0.6mg/L，水体中弧菌含量分别为3.5×102cfu/mL、6.3×103cfu/mL。表明沉底型球红冬孢酵母ZDFY1801微生物制剂发挥了明显的去除养殖池氨氮和抑制弧菌生长的效果。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种沉底型球红冬孢酵母微生物制剂，其特征在于，包括以下质量百分比计的组分：20～30％球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥、15～20％葡萄糖、10～15％NaHCO3、10～15％沸石粉、19～44.5％麸皮粉和0.5～1.0％海藻糖；所述的球红冬孢酵母ZDFY1801为球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)，保藏编号为：GDMCC No:60679。
2.权利要求1所述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂，其特征在于，包括以下质量百分比计的组分：25％球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥、18％葡萄糖、12％NaHCO3、12％沸石粉、32.2％麸皮粉和0.8％海藻糖。
3.一种制备权利要求1或2所述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：将葡萄糖、NaHCO3、沸石粉、麸皮粉和海藻糖按配方量进行预混，得到预混料；将配方量的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥和预混料混合，压片，得到沉底型球红冬孢酵母微生物制剂。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥的制备包括以下步骤：将球红冬孢酵母(Rhodosporidium sphaercarpum)YLY01(ZDFY1801)菌种液接种于发酵培养基中发酵100～120h，室温下静置6-12h，吸除上清液，得到球红冬孢酵母ZDFY1801发酵膏泥。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基的基质包括以下质量百分比计的组分：3～9％麸皮、8～20％豆粕、10～30％玉米粉、36.6～50.8％红糖、5～15％葡萄糖、1～3％硫酸铵、0.4～1.2％酵母粉、0.4～1.2％NaH2PO4、0.4～1.2％MgSO4、1～3％粗盐。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基的基质包括以下质量百分比计的组分：6％麸皮、12％豆粕、20％玉米粉、48％红糖、8％葡萄糖、2％硫酸铵、0.8％酵母粉、0.6％NaH2PO4、0.6％MgSO4、2％粗盐。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基的制备步骤为：将配方量的麸皮、豆粕、玉米粉、红糖、葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、NaH2PO4、MgSO4、粗盐混合，得到培养基基质，将培养基基质按15wt％的比例加入到水中，搅拌溶解，灭菌，得到发酵培养基。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的菌种液的接种量为5％v/v，所述发酵的发酵温度为30℃。
9.权利要求1或2所述的沉底型球红冬孢酵母微生物制剂在水产养殖中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将沉底型球红冬孢酵母微生物制剂取出直接用手抛至养殖池需要的位置，按平均1米水深算的使用量为1-3公斤/亩。
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